2 試薬 3 同時再現性 JSCC 標準化対応法試薬には G7 を基質とするシ L-コンセーラ I EX II EX 日水製薬 リクイ カフィット AMY-G7 関東化学 本試薬または G7- チェック尿化学コントロール I II バイオ ラッ K および AMY-EL セロテック 5) α-(2-

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1 技術論文 シカフィット AMY-G7 の検体種別 血清 尿 および外部精度管理試料の反応性に関する検証 今駒 憲裕 1) 西尾美紀子 1) 1) 福岡市医師会臨床検査センター 福岡県福岡市早良区百道浜 要 旨 患者検体 血清および尿 を用い 4,6 エチリデン-4-ニトロフェニル-α-D-マルトヘプタオシド Et-G7-PNP を基質と するアミラーゼ AMY の JSCC 標準化対応法試薬 シカフィット AMY-G7 の JCCLS-SOP に対する反応性比較を行った 結果 シカフィット AMY-G7 は 膵型および唾液型アイソザイム構成比 あるいは検体種別 血清および尿 に関わら ず JCCLS-SOP とよく一致した 一方 α-(2-クロロ-4-ニトロフェニル)-β-d-ガラクトピラノシルマルトサイド Gal-G2CNP および 2-クロロ-4 ニトロフェニル-α-D-マルトトリオシド G3-CNP では 血清検体と尿検体の相関性試験で傾き の異なる回帰直線が得られ 本試薬と同じ Et-G7-PNP を基質に用いた他社キットでは血清検体で高値傾向が認められた 外部精度管理試料の反応性試験では シカフィット AMY-G7 以外の市販キットは ヒト遺伝子組換え体 リコンビナン ト AMY の添加により JCCLS-SOP とは反応性が変化することが確認された 具体的には Et-G7-PNP を基質に用いた他社 キットでやや高値 G3-CNP でやや低値 共に目標値±5%以内 Gal-G2-CNP で許容下限値を下回る結果となった キーワード シカフィット AMY-G7 JSCC 標準化対応法 JCCLS-SOP リコンビナント AMY 反応性 α-アミラーゼ AMY EC は澱粉 及び における施設間差縮小が可能となった しかし 実 類多糖類 中の α-1,4-グルコシド結合を加水分解し 際にはアイソザイム比率が P 型あるいは S 型優位と グルコースを生成する酵素である ヒト体液中には なる検体では 基質の違いによる測定値の差が存在 膵型 P-AMY と唾液腺型 S-AMY の 2 種類のア することが報告されている 4) また 外部精度管理 イソザイムが存在する これまで AMY 測定試薬 等で使用される試料においても基質により差を生じ として様々な合成基質が市販されており 基質によ ることがある り活性値が異なる結果 施設間差が生じていた そ 今回 SOP と同じ測定原理を用いた シカフィッ のため基準となる勧告法の制定が望まれていたが ト AMY-G7 の基本性能評価を行うにあたり SOP 1998 年 国際臨床化学連合 IFCC より 4,6 エチ を比較対照法とする各種 JSCC 標準化対応法試薬の リデン-4-ニトロフェニル-α-D-マルトヘプタオシド 反応性評価を実施し 反応性の違いに関する原因解 Et-G7-PNP: G7 を基質とする勧告法が公表され 1) 析を行った 24 年には日本臨床検査標準協議会 JCCLS が IFCC 勧告法を JCCLS-標準操作法 SOP として認 I 材料および方法 証した さらに 25 年 1 月 同基質を用いた方 2) 法が日本臨床化学会 JSCC により 勧告法として 承認された これにより 検量用 ERM で校正する 3) ことで基質による測定値の差が是正され AMY 測定 1 測定装置 LABOSPECT 8 日立ハイテクノロジーズ を使 用した 平成 27 年 4 月 17 日受付 平成 27 年 6 月 17 日受理 医学検査 Vol.64 No

2 2 試薬 3 同時再現性 JSCC 標準化対応法試薬には G7 を基質とするシ L-コンセーラ I EX II EX 日水製薬 リクイ カフィット AMY-G7 関東化学 本試薬または G7- チェック尿化学コントロール I II バイオ ラッ K および AMY-EL セロテック 5) α-(2-ク ド およびヒトプール血清を用い 2 重複測定した ロロ-4-ニトロフェニル)-β-D-ガラクトピラノシルマ 各試料の平均値±標準偏差 SD および CV%を求 ルトサイド G2 を基質とするシカリキッド-N AMY めた 関東化学 6) 2-クロロ-4-ニトロフェニル-α- 4 日差再現性 D-マルトトリオシド G3 を基質とするシカリキッ L-コンセーラ I EX II EX リクイチェック尿化学 ド AMY 関東化学 7)を使用した また 比 コントロール I II を用いた 初日のみキャリブレー 較対照試薬として SOP を用いた なお 各試料のア ションを実施し その後はブランク補正のみで各試 イソザイム比率を求めるため P-AMY の SOP 暫定 料 1 日 2 回 1 ヵ月間測定を行い 各試料の平均値 法 P-AMY 暫定法 8)を使用した 検量は JSCC 標準 ±SD および CV%を求めた 化対応法試薬では各社専用酵素キャリブレーターを 5 検出限界 SOP および P-AMY 暫定法では JSCC 常用参照標準 約 1 の AMY 試料を生理食塩水で 1 段階希 物質 JCCLS CRM-1c を使用した 釈した希釈系列試料について 1 重測定を行った 生 3 測定条件 理食塩水と希釈系列試料の測定値の平均値±2SD が 各社指定の分析パラメータを適用した 4 試料 患者血清および尿は検査終了後の廃棄検体を連結 不可能匿名化して用いた 外部精度管理試料については ベース血清にヒト 重ならない最小濃度の平均値を 最小検出限界とし た 6 希釈直線性 高値直線性試料を 1 段階希釈し各 2 重測定の平 均値が計算値の±3%以内となる最大濃度を直線性 プール血清を用いた平成 25 年度九州精度管理調査 上限とした 試料 3 濃度 試料 但し 試料 1 および試 7 共存物質の影響 料 2 にはヒト膵型 AMY 遺伝子組換え体 Rec.AMY 干渉チェック A プラス シスメックス および およびヒト唾液由来 AMY を添加 福岡県月例サー アスコルビン酸 1 容を 2 濃度 低濃度と高濃度 の ベイ試料 2 濃度 Lot15 および Lot35 但し Lot15 プール血清の各 9 容と混合し 濃度添加を含む 6 には Rec.AMY およびヒト唾液由来 AMY を添加 段階希釈系列を作成した それぞれ 2 重測定を行い 福岡県検討用試料 2 濃度 S41-2 および S42-2 ただ 添加 濃度の値に対し±5%以内を許容範囲内とし し S41-2 にはヒト尿 AMY を添加 を使用した た なお 各共存物質の最大濃度は ヘモグロビン 5 本試薬の基本性能 が 487 mg/dl ビリルビン C が 2.9 mg/dl ビリル 以下の方法で本試薬の基本性能評価を行った 9 ) ビン F が 19.5 mg/dl 乳びが 1,41 ホルマジン濁度 なお 精密さの評価基準としては AMY の精密さの アスコルビン酸が 5 mg/dl とした 許容誤差限界 CVA を用いた 1) 6 相関性試験 1 正確性 1 SOP との相関分析 JCCLS CRM-1c を 5 重測定し認証値との比較を 患者血清 325 例 患者尿 341 例を用い 各キット 行った について SOP を比較対照法 x とする相関分析を 2 精密性 ランダマイズ 2 回測定 行い 相関係数 r および直線回帰式を求めた 患者血清 5 検体を用いたランダマイズ 2 回測定 なお 標準化残差 残差を残差標準偏差 Syx 法により本試薬の精密性を確認した 分散分析によ で割ったもの SR の±3 ±3SR を超えたものを る標準偏差の期待値 σ^ を求め 全検体の測定値 乖離検体とした の平均値で割り 変動係数 CV% を求めた 2 P/T 比が 4 6%である検体の相関分析 アイソザイムの偏りによる SOP との反応性の乖離 592 医学検査 Vol.64 No.5 215

3 を排除するため 全相関検体について AMY に対す る P-AMY の比率 P/T% を求め 健常者に多い P/T% 4 6%の検体を抽出し相関分析を行った 11) 3 アイソザイム比率による反応性の検証 相関性試験の検体について P/T%を求め AMY の 6 希釈直線性 3, まで原点を通る直線性を認めた 7 共存物質の影響 ヘモグロビン ビリルビン C ビリルビン F 乳 び アスコルビン酸のいずれについても 最大添加 各キットと SOP の測定値の差との関係を検証し 濃度まで影響は認められなかった た 12) 2 相関性試験 7 外部精度管理試料の反応性 1 SOP との相関分析 平成 25 年度九州精度管理調査試料 3 濃度 福岡県 SOP x に対する各法の r および回帰式を Figure 1 月例サーベイ試料 2 濃度 福岡県検討用試料 2 濃度 に示した SOP に対して では血清で について各 3 重測定し 正確さの許容範囲を SOP の 低値傾向 尿で高値傾向となったが その傾向は特 目標値±5%として 各キットの測定値の分布を確認 に において顕著であった および した 13), 14) その際 各試料の P/T%についても計算した は血清 尿ともにほぼ一致した結果となった G2K において血清 A 血清 B 尿 C の乖離が認 II 結 果 められた 一方 では血清 B のみ乖離 が認められ 尿検体では乖離は認められなかった 1 本試薬の基本性能評価 1 正確性 2 P/T 比が 4 6%である検体の相関分析 相関分析結果を Figure 2 に示した では血 JCCLS CRM-1c の 5 重測定の平均値±95%信頼 清で傾きが小さく.96 かつ切片が他に比べ大 区間は ± 1.78 で CRM の認証値±拡張不 きい 5.5 傾向が認められ 尿は全体的に高値 確かさ 348 ± 9 の範囲内であったことから 傾向であった および は血清 尿 正確性は許容された ともにほぼ一致した結果となった 2 精密性 ランダマイズ 2 回測定 3 基質別のアイソザイム比率に対する SOP との相 σ^は CV%として 1.5%であり AMY の精密さの許 容誤差限界 CVA 4.2% 以下であった 3 同時再現性 対差%との関係 は P 型優位になるほど高値となる傾向が認 められ 回帰式の周りのばらつきも大きかった G3- 各試料の平均値±SD CV%は L-コンセーラ IEX K でも同様の傾向が認められたが その程度は G2-1.2 ±.69,.69% L-コンセーラ II EX K より小さかった G7 基質では が血清で高値 ± 1.31,.54% 尿化学コントロール I 6.4 ± 傾向が認められたのに対し ではほぼ一致し.49,.82% 尿化学コントロール II ± ており SOP との収束性が際立っていた Figure 3.93,.53% およびヒトプール血清 72.5 ±.33 4 乖離検体の解析,.45% であり いずれも AMY の精密さの許 Figure 1 で乖離がみられた血清 2 検体と尿 1 検体 容誤差限界 CVA 4.2% 以下であった をセルロースアセテート膜電気泳動法で確認した結 4 日差再現性 果 血清 2 検体はいずれもマクロ AMY が疑われた 各試料の平均値±SD CV%は L-コンセーラ IEX また 尿 1 検体では P-2 から + 側にかけてブ 99.7 ± 1.11, 1.11% L-コンセーラ II EX ロードなバンドが認められ 同様にマクロ AMY の ± 2.39, 1.% 尿化学コントロール I 57.4 ± 可能性が示唆された Figure 4.91, 1.59% 尿化学コントロール II ± 3 外部精度管理試料の反応性 1.92, 1.15% であり いずれも AMY の精密さ 各種外部精度管理試料の測定値について SOP 値 の許容誤差限界 CVA 4.2% 以下であった を基 準 と し て 各キ ッ ト 測 定 値 を比 較 し た も の を 5 検出限界 Figure 5 に示した 最小検出限界は 1 であった 医学検査 Vol.64 No

4 Serum n = 325 y =.914x + 8. r = CicaLiquid AMY CicaLiquid-N AMY 4 Serum n = 325 y =.962x r = Urine n = 341 Urine n = 341 y = 1.43x +.7 r = Serum n = 325 y =.981x r = y =.992x -.7 r = Serum n = 325 y = 1.1x r = Urine n = 341 Urine n = AMY-EL CicaFit AMY-G7 y = 1.26x -.1 r =.9988 y = 1.11x -.6 r = Figure 1 Correlation of serum and urinary AMY measured by the JSCC transferable method using dedicated reagents from different suppliers and the 1 平成 25 年度九州精度管理調査用試料 2 福岡県月例サーベイ試料 SOP 測定値を目標値 1% としたとき Rec.AMY Rec.AMY を添加した Lot15 では SOP の目標値に を添加した試料 1 2 では G7 基質では 1.5 対し および は %と近似した 12.5%だったが で % では 結果となった は 96.9%とやや低値となったが %と低値傾向を示した 一方 Rec.AMY SOP 目標値±5%以内であった 一方 は 9.7% を添加していない試料 3 では と大きく低値となった Rec.AMY を添加していない で各 12.2% 14.3% 13.2% 15.4%と若干 Lot 35 では 殆ど差がなかったが が 14.5% 高めの傾向となった 試料 2 は試料 1 と試料 3 の等 が 14.1%と若干高めであった なお 各試料 量混合物であることから Rec.AMY の添加量が増加 の P/T%は %であった Figure 5, B-1 B-2 するにつれて で活性値の低下傾向が確 3 福岡県検討用試料 認された なお 各試料の P/T%は %で あった Figure 5, A-1 A ヒト尿由来 AMY を添加した S41-2 と AMY の添 加を行っていない S42-2 では基質の種類に関わらず 医学検査 Vol.64 No.5 215

5 Serum n = 11 y =.96x r = CicaLiquid AMY CicaLiquid-N AMY 4 2 Serum n = 11 y =.988x r = Urine n = 125 Urine n = 125 y = 1.13x +.4 r =.9994 y = 1.22x -.1 r = Serum n = 11 y =.991x +.7 r = Urine n = 125 AMY-EL 3 CicaFit AMY-G Serum n = 11 y = 1.17x r =.9995 Urine n = 125 y =.99x -.5 r =.9996 y = 1.8x -. r = Figure 2 Correlation of serum and urinary AMY (P-AMY/T-AMY 1: 4 6%) measured by the JSCC transferable method using dedicated reagents from different suppliers and the 1 ± 5%以内であったものの が他法に比べて Figure 3 に示すとおり P 型優位に反応することが明 14.8%と若干高めであった なお 各試料の P/T% らかとなり その傾向は で顕著であった し は %であった Figure 5, C-1 C-2 たがって 急性膵炎等により血清中の AMY が P 型 優位となる場合 あるいは耳下腺炎等で S 型優位と III 考 察 なる検体ではそれらの基質では SOP と乖離すること が示唆された 検体種別の面から検証するとき G3- は 日常検査法として重要な正確性 精密 K と に お け る P/T% と SOP の 差 の 相 関 図 性 直線性 共存物質の影響等において十分な基本 Figure 3 の血清検体のプロットおよび尿検体のプ 性能を備えていた 特に SOP との相関性および正 ロットは比較的重なっており 血清および尿検体に 確性において 血清 尿の検体種別および P-AMY おける P/T%による反応性の差はさほどないように S-AMY の構成比に係らず極めてよく一致した 見受けられる しかし Figure 1 に示すように実際 一方 SOP とは異なる G3 および G2 基質では 医学検査 Vol.64 No には相関の回帰式の傾きは検体種別で異なっており 595

6 y =.27x Urine y =.268x Proportion of P-AMY P/T% 1 3 Serum y =.1x Urine y =.8x Proportion of P-AMY P/T% 1 The relative percentage difference of AMY measurement values % Serum 5 The relative percentage difference of AMY measurement values % The relative percentage difference of AMY measurement values % The relative percentage difference of AMY measurement values % 6 6 Serum 5 y =.111x Urine y =.116x Proportion of P-AMY P/T% 1 3 Serum y =.13x Urine y =.1x Proportion of P-AMY P/T% 1 Figure 3 The relative percentage difference of AMY measurement values between commercial reagent kits and JCCLS-SOP against proportion of P-AMY (P/T%) in serum and urine samples X: Proportion of P-AMY (P/T%) = p-amy(j)/t-amy(j) 1 Y: The relative percentage difference of AMY measurement values = {T-AMY(K) T-AMY(J)}/T-AMY(J) 1 T-AMY(J): total-amy values using JCCLS-SOP, p-amy(j): p-amy values using JCCLS-SOP, T-AMY(K): total-amy values using commercial kits. - JCCLS-SOP P/T % 42% 3? P/T % 72% JCCLS-SOP? + - P/T % 81% JCCLS-SOP Figure 4 AMY zymogram of deviated samples against JCCLS-SOP in correlation 特に で顕著であった このことは次のように 減期が S-AMY よりも早いため 先に尿に排泄され 推察される ることにより 血清中の AMY はやや S 型優位であ 通常 検体中のアイソザイム比率は P-AMY の半 596 り尿中の AMY はやや P 型優位となっている 従っ 医学検査 Vol.64 No.5 215

7 Figure 5 Results of seven samples for three EQA obtained using reagent kits from different suppli Rec.AMY: Recombinant human AMY て,アイソザイムに 対 する 反 応 性 が S 型 優 位 とされ る G7 基 質 に 対 し,P 型 優 位 の 性 質 を 有 する, では, 検 体 種 別 により 回 帰 式 に 差 が 生 じるこ とになる 4 ) 一 方,G7 基 質 である および は,いず れも SOP と 近 似 した 反 応 性 を 示 したが,P/T%と SOP との 差 の 相 対 %を 比 較 すると 明 らかに の 収 束 性 が 良 かった また, 検 体 種 別 の 反 応 性 については, 血 清 および 尿 AMY の P/T%が 5%のときの SOP と の 差 の 相 対 % を Figure 3 の 各 回 帰 式 に 代 入 して 求 め,キット 毎 の 血 清 検 体 と 尿 検 体 の 差 を 計 算 したと ころ, 同 じ G7 基 質 ではあるが の 3.6%( 血 清 : 4.2%, 尿 :.6%)に 対 し では 1.2%( 血 清 :.2%, 尿 : 1.4%)と 小 さかった この 理 由 につい てはキットに 添 加 されている 界 面 活 性 剤 が 関 与 して いる 可 能 性 がある 他 の 各 酵 素 項 目 では SOP におい て 自 動 分 析 装 置 の 特 性 を 考 慮 し, 特 に 精 密 性 の 向 上 を 目 的 として TritonX-1 等 の 使 用 が 認 められてい るが,AMY のみ 反 応 性 を 変 化 させるため 界 面 活 性 剤 の 使 用 が 記 載 されていない 2 ) 今 回 の 検 討 結 果 か ら, 界 面 活 性 剤 による 影 響 は 尿 AMY ではほとんど なく, 血 清 AMY で 認 められる 現 象 と 推 察 される および において 差 が 認 められたのは, 使 用 する 界 面 活 性 剤 の 違 いによるものと 思 われる 4 ) また, と で 見 られた 乖 離 検 体 3 例 ( 血 清 2 例, 尿 1 例 )および および で 見 られ た 乖 離 検 体 1 例 では,いずれもマクロ AMY が 疑 わ れた マクロ AMY は 糖 鎖 の 短 い 基 質 に 対 し 親 和 性 が 高 いとも 言 われており,G7 基 質 に 比 べて お よび の 活 性 が 高 値 を 示 したのは,そのような 理 由 によるものと 考 えられる しかし,マクロ AMY の 反 応 性 は 必 ずしも 毎 回 同 じ 傾 向 を 示 すとは 限 らず, 医 学 検 査 Vol.64 No

8 尿検体では逆に低値に乖離しており および あっても試料の反応性を事前確認しておく必要があ では血清マクロ AMY の 1 例で共に乖離がみら ると思われた れる等 マクロ AMY は不明な点が多い マクロ AMY は病態との関連性は少なく 臨床的意義も確 立していない 今回 外部精度管理試料の反応性に関する検討を 行ったが 九州地区では外部精度管理試料を独自に 調製しており その際マトリックス効果を回避する ためベース血清にはヒトプール血清を用いている Rec.AMY 添加の影響について検証した結果 では Rec.AMY の添加量が増加するにつれて 低値傾向を示した G2 < G3 < G7 = SOP 先述の通 り その 2 種類の基質はヒト血清では P/T%が偏っ たヒト血清で乖離する傾向にあった しかし Figure 5 の A-2 と C-2 の結果から明らかなように P/T%がほ ぼ同じであるにも係らず と は全く異な る挙動を示したことから Rec.AMY 添加試料におけ る反応性の違いは P/T%によるものではない また G7 基質のキットの反応性はヒト血清と同等であった が が SOP とほぼ一致した結果が得られたの に対し では高値傾向が認められたことから 同じ基質であってもキットにより反応性が異なる場 合があることが示された したがって 外部精度管 理においては 結果の評価が特定の方法に不利益と ならないよう あらかじめ反応性を事前確認してお くべきと考える IV 結 語 本試薬は日常検査法として十分な基本性能を有 し SOP との相関性および反応性についても 検体 種別や Rec.AMY 添加の有無に係らずよく一致して いた AMY は基質により反応性が異なることは知られ ていたが 同じ基質を用いたキットであっても検体 種別 血清 尿 Rec.AMY 添加試料では反応性が 異なる場合があることが判明した 外部精度管理においては 様々な基質のキットが 謝辞 本検討にあたり ご指導下さいました福岡大学筑 紫病院 篠原克幸技師長に深謝致します 本論文の要旨は第 63 回日本医学検査学会にて発 表した 文献 1) Gerhard S et al.: IFCC primary reference procedures for the measurement of catalytic activity concentrations of enzymes at 37 C, Clin Chem Lab Med, 26; 44: ) JCCLS 認証委員会標準物質小委員会 WG 酵素標準物質 ERM Lot 4 の設定概要 日本臨床検査標準協議会会誌 24; 19: ) 日本臨床化学会酵素 試薬専門委員会 ヒト血清中酵素活 性測定の勧告法 α-アミラーゼ 臨床化学 25; 34: ) 白井 秀明 各社アミラーゼ JSCC 標準化対応法試薬のアイ ソザイムに対する反応性の検証 医学と薬学 28; 59: ) 出口 松夫 他 オリゴ糖を基質とするアミラーゼ活性測定 法の比較 臨床検査機器 試薬 1991; 14: ) 高笠 信之 2-Chloro-4-nitrophenyl-4-galactopyranosylmaltoside Gal-G2-CNP を基質とした新しいアミラーゼおよび膵型ア ミラーゼ測定法 THE CHEMICAL TIMES 26; 21: ) Gella FJ et al.: Determination of total and pancreatic alphaamylase in human serum with 2-chloro-4-nitrophenyl-alpha-Dmaltotrioside as substrate, Clin Chim Acta, 1997; 259: ) 日本臨床化学会酵素 試薬専門委員会膵型アミラーゼ活性常 用基準法開発プロジェクト 臨床検査用標準物質の研究開発 平成 18 年度成果報告 独立行政法人産業技術総 合研究所 独立行政法人新エネルギー 産業技術総合開発機 構 神奈川 27. 9) 日本臨床検査自動化学会化学技術専門委員会 日常検査法 の性能試験法マニュアル 日本臨床検査自動化学会 22; 27: ) 日本臨床化学会クオリティマネジメント専門委員会 生理 的変動に基づいた臨床化学検査 36 項目における測定の許容 誤差限界 臨床化学 26; 35: ) 白井 秀明 桑 克彦 アミラーゼ活性測定の反応性評価法 検査と技術 25; 33: ) 白井 秀明 桑 克彦 自動分析法による酵素の反応性評価の 方法 日本臨床検査自動化学会会誌 24; 29: ) 新井 堅仁 外部精度管理試料における AMY の反応性 第 1 回熊本県精度保証研修会抄録集 213: ) 福岡県医師会 臨床検査精度管理調査 検査値標準化マニュ アル 第 2 版 参加することになるため 添加物質が Rec.AMY で 598 医学検査 Vol.64 No.5 215

9 Technical Article Verification of the activity of amylase in serum, urine and EQA samples measured using CicaFit AMY-G7 Norihiro IMAKOMA 1) Mikiko NISHIO 1) 1) Fukuoka City Medical Association, Clinical Laboratory Center (1-6-9, Momochihama, Sawara-ku, Fukuoka-shi, Fukuoka 814-1, Japan) Summary CicaFit AMY-G7 is a reagent kit that was designed as a transferable method proposed by the Japan Society of Clinical Chemistry (JSCC) for the measurement of amylase (AMY) using 4,6-ethylidene-4-nitrophenyl-α-Dmaltoheptaoside (Et-G7-PNP) as a substrate. The values of AMY activity in patient serum and urine measured using CicaFit AMY-G7 were compared with those obtained by the Standard Operating Procedure for the measurement of the catalytic concentration of AMY established by the Japanese Committee for Clinical Laboratory Standards (JCCLS- SOP). The results obtained using CicaFit AMY-G7 were in good agreement with those determined by the JCCLS-SOP, regardless of variations in the proportion of pancreatic and salivary isoenzymes (P/T%) in each sample or sample type (serum or urine). For assays using α-2-chloro-4-nitrophenyl-β-d-galactopyranosylmaltoside (Gal-G2-CNP) and 2- chloro-4-nitrophenyl-α-d-maltotrioside (G3-CNP) as substrates, correlation analysis revealed a marked difference in the slopes of regression lines between serum and urine samples. Other kits employing the same substrate, namely, Et- G7-PNP, tended to give higher values for serum samples. The values of AMY activity in external quality assessment (EQA) samples measured using other kits differed from those obtained by the JCCLS-SOP when recombinant human AMY was added to the samples. Other kits using the Et-G7-PNP substrate gave slightly higher values and those using the G3-CNP substrate provided slightly lower values (within ± 5% of the target value for both), while those using the Gal-G2-CNP substrate gave values that were below the permissible lower limit. Key words: CicaFit AMY-G7, the transferable method proposed by the Japan Society of Clinical Chemistry, The Japanese Committee for Clinical Laboratory Standards-standard operating procedure, recombinant human AMY, reactivity of amylase (Received: April 17, 215; Accepted: June 17, 215) 医 学 検 査 Vol.64 No

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