名古屋市で飼育されている犬猫の Capnocytophaga canimorsus C. cynodemi の保有状況調査はじめにヒトにおけるCapnocytophaga canimorsus 感染症は犬猫からの咬傷や掻傷からヒトへ感染が起こり発症した場合急性敗血症が起こり致死率の高い疾病

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まいえやすこ
5 years ago
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1 名古屋市で飼育されている犬猫の Capnocytophaga canimorsus C. cynodemi の保有状況調査はじめにヒトにおけるCapnocytophaga canimorsus 感染症は犬猫からの咬傷や掻傷からヒトへ感染が起こり発症した場合急性敗血症が起こり致死率の高い疾病であることが報告されている原因菌であるC. canimorsus は犬や猫の口腔内に高率に保菌されていることが報告されておりズーノーシス予防のための観点から名古屋市における本菌の犬猫における保菌状況を把握することが求められているそこで犬猫の口腔内に保菌されているとされるC. canimorsus およびC. cynodemi の保菌状況を調査した ( 参考資料 :Suzuki, M., 2010) 調査材料および調査方法 1 調査施設名古屋市内に施設を持つ名古屋市獣医師会会員病院 18 施設に採材を依頼した 2 調査期間調査期間は平成 23 年 8 月 22 日から平成 23 年 9 月 27 日とした 3 調査材料各調査施設に来院した飼犬及び飼猫の口腔ぬぐい液犬猫各 48 検体 4 調査方法検査は日本獣医生命科学大学獣医微生物学教室 ( 片岡康氏 ) に依頼した 1) 細菌学的検査 1 口腔ぬぐい液を5% 馬脱線維血液加ハートインフュージョン寒天培地に塗抹し 37 5%CO 2 で48 時間培養した 2 培養後 Capnocytophaga に類似した集落を滅菌楊子にて釣菌し 5% 馬脱線維血液加ハートインフュージョン寒天培地に純培養した培養は37 5%CO 2 で48 時間行った 3 各検体より純培養された分離株についてグラム染色性カタラーゼ試験オキシダーゼ試験を行い Capnocytophaga と考えられる菌株 ( グラム陰性桿菌カタラーゼ陽性オキシダーゼ陽性 ) をスクリーニングした

4 各検体より純培養され Capnocytophaga と考えられる菌株について硝酸塩還元試験インドール産生アルギニン加水分解運動性各種糖分解を調べた 5 分離株は最終的に PCR により菌種同定した 2) PCR 1 口腔ぬぐい液をハートインフュージョンブロス3.0 ml に接種し 37 5%CO 2 24 時間培養した 2 培養後菌液 1.

2 4 各検体より純培養され Capnocytophaga と考えられる菌株について硝酸塩還元試験インドール産生アルギニン加水分解運動性各種糖分解を調べた 5 分離株は最終的に PCR により菌種同定した 2) PCR 1 口腔ぬぐい液をハートインフュージョンブロス3.0 ml に接種し 37 5%CO 2 24 時間培養した 2 培養後菌液 1.0 ml をエッペンチューブに入れ 8,000rpm 5min 遠心し集菌した 3 遠心上清を捨て沈渣に200μlTris-EDTA buffer(ph8.0) を加え 95 15min 加熱処理をしテンペレートDNA を抽出した 4 12,000rpm 5min 遠心し上清をテンペレートDNA とした 5 PCR tempelate DNA 10 μl Taq DNA polymerase 0.125μl 10 PCR buffer 2.5μl dntp mixture 2.0μl 25mM MgCl 2 1.5μl primer-f 0.5μl primer-r 0.5μl D.W μl Capnocytophaga 属の同定および菌種同定に使用したプライマー ( 参考文献 :Suzuki, M. et al., 2010) 6 PCR スケジュールは以下の通りとした 95 5 min s 58 1 min 35 cycles 72 1 min 72 7 min 7 PCR 産物をアガロース電気泳動により確認した 1) 3% NuSieve 3:1 Agarose を0.5 TBE に溶解した

3 2) 10mg/mL エチジウムブロマイドを1/10,000 添加し 100V で電気泳動した 3) 紫外線下で写真撮影した調査対象件の環境調査 1 飼育動物 1 品種 2 性別オスメス 3 年齢歳 4 健康状態 ( 参考文献 :Suzuki, M. et al., 2010) 2 飼育状況 1 飼育場所室内屋外自由 2 他の動物の飼育状況 3 飼育者の住居

4 1 住居区 ( 名古屋市区 ) 2 住居 ( 一戸建マンションアハートその他 ) 結果 1. 細菌学的検査成績直接分離培養し純培養した菌株 ( 計 297 株 ) および増菌培養後分離培養した菌株 ( 計 122 株 ) は生化学的性状検査ならびにPCR 検査によりすべてCapnocytophaga 属の菌ではなかった 2. PCR 口腔ぬぐい液培養液よりCapnocytophaga 属を同定するPCR を行ったところ 48 検体中犬で33 検体 (68.8%) 猫で39 検体 (81.3%) よりCapnocytophaga 属特異的遺伝子断片 (124bp) が検出された Capnocytophaga 属が同定された計 72 検体について C. canimorsus およびC. cynodemi 同定用 PCR を行ったところ C. canimorsus は犬で13 検体 (27.1%) 猫で16 検体 (33.3%) より分離されたまた C. cynodemi は犬で26 検体 (54.2%) 猫で32 検体 (66.7%) から分離された検体結果と飼育状況および環境に関する調査結果は別表に示した考察カプノサイトファーガ属菌は表 1 のように現在 7 種が知られておりそのうち犬や猫の口腔内の常在菌とされているのが今回調査した 2 菌種であるこの 2 菌種は遺伝学的にも近い関係にあり正常も類似しているがヒトにおける重症例や死亡例の大半は C. canimorsus 感染が原因で発生している現在わが国で報告されている C. canimorsus の感染症例は 6 例の死亡例を含む 18 症例が報告されている患者の年齢は 40~90 歳代の中高齢が多くほとんどで自らが家庭で飼育する犬猫からの感染である発症例は極めてまれであるがその一方で発症した患者の致死率が比較的高いこの感染症の原因菌が一般家庭で多く飼育されている犬猫の常在菌であることは非常に重要な点である 2004 年 ~2007 年の 4 年間に鈴木らが行った調査の結果では C. canimorsus は犬で 74% ネコで 57% が保有しまた C. cynodemi は犬で 86% 猫で 84% が保有していると報告されているまた山口県の調査では C. canimorsus は犬で 78.4% 猫で 45.8% が保有しまた C. cynodemi は犬で 86.3% 猫で 68.8% が保有していると報告されているそこで今回名古屋市内の動物病院において同様な調査を行い C. canimorsus は犬で 27.1% 猫で 33.3% が保有しまた C. cynodemi は犬で 54.2% 猫で 66.7% が保有し

5 ているという結果となった今回の調査結果は鈴木らが行った調査や山口県の調査結果と大きく異なり C. canimorsus C. cynodemi ともに保菌率が低率であったこの理由として第一に検体を採取してから検査を行うまでに要した時間が影響していることが考えられた今回の調査では各調査施設で採取された検体を一度一施設に集め検査依頼書等の確認を行った後に日本生命科学大学へ宅配便で送付するという方式で行った為検体採取から検査までに最長で 3 日を擁している保存用培地を使用し菌数の減少をできるだけ少なくするよう努めたがこの送付時間の長さが検査結果に影響を与えた要因として考えられた第二に口腔ぬぐい液には多量の唾液成分が付着をしている唾液成分中には種々の酵素類が含まれておりこれらの酵素が採取した検体に影響を与えた可能性もあると考えられたまた培養検査がすべて陰性結果であった理由として口腔内常在菌の増殖速度が大きく影響し発育速度の遅い C. canimorsus C. cynodemi の集落を覆い隠してしまうことが大きく影響をしていた今後 C. canimorsus C. cynodemi のみを選択分離できる選択培地が開発されたならば培養検査結果も保菌率と相関するのではないかと考えられた今回我々は菌の保有状況と同時に飼育環境の調査も行ったが犬猫各 48 頭中犬では 47 頭 ( 約 98%) 猫においても 43 頭 ( 約 90%) が室内飼育であったこのことが保菌率の低値と直接関係があるかどうかは室外飼育の頭数が極端に少ないので比較はできないが近年犬や猫などのペットと我々との関係は以前に比べより親密になり家族同様に扱われることによりペットの衛生管理さらには歯磨きなどの口腔衛生管理が行われるようになったことが関係しているかもしれないまた約半数の家庭で複数の動物を飼育していたがこれと今回の結果との関係性は見いだせなかったその他年齢や性別等についても同様であった犬や猫は我々の最も身近な動物であり舐められたり咬まれたりすることも珍しいことではない今回の調査から保菌率は調査前の予想よりも低かったがそれでも Capnocytophaga 属菌としての保菌率はイヌで約 70% 猫で約 80% という結果であり我々は身近なペットが感染源になるという危険性を認識し飼い主には犬や猫と触れ合った後の手洗い等の衛生管理や咬傷時の消毒などを指導していく必要があると感じた参考資料 1. Michio Suzuki, Masanobu Kimura, Koichi Imaoka, Akio Yamada Prevalence of Capnocytophaga canimorsus and Capnocytophaga cynodegmi in dogs and cats determined by using a newly established species-specific PCR. Veterinary Microbiology, 2. DON J. BRENNER, DANNIE G. HOLLIS, G. RICHARD FANNING AND ROBERT E. WEAVER Capnocytophaga canimorsus sp. nov. (Formerly CDC Group DF-2), a Cause of Septicemia following Dog Bite, and C. cynodegmi sp. nov., a Cause of Localized

6 Wound Infection following Dog Bite. JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, 27: 鈴木道雄イヌネコ咬傷掻傷 Capnocytophaga canimorsus 感染症. モダンメディア, 56:71-77.

7 飼育状況ならびに環境に関する調査一覧 ( 犬 ) 飼育犬飼育者結果 ( C. Canimorsus/cynodemi) 種類性別年齢健康状態基礎疾患飼育場所他の動物住居区住居分離培養 PCR 1 T プードルオス 9か月良なし室内なし千種一戸建陰性 2 ボストンテリアオス 3 歳良なし室内なし千種アパートマンション陰性陰性陽性 3 パピヨンオス 7 歳良アレルギー性皮膚炎室内犬 1 千種一戸建陰性陽性陽性 4 マルチーズメス 11 歳良なし室内犬 1 東一戸建陰性陽性陽性 5 チワワメス 8 歳良なし室内犬 1 東一戸建陰性陽性陽性 6 雑種メス 10 歳良副腎皮質機能亢進症室内なし東一戸建陰性陰性陽性 7 M ダックスオス 10 歳良なし室内フェレット1 インコ1 東一戸建陰性 8 チワワメス 1 歳良なし室内なし北アパートマンション陰性 9 パグオス 11 歳良なし室内なし北一戸建陰性陰性陽性 10 バーニーズオス 4 歳良なし室外犬 1 猫 2 西一戸建陰性陰性陽性 11 T プードルメス 5 歳良なし室内猫 4 西一戸建陰性陰性陽性 12 シーズーオス 10 歳良乾性角結膜炎室内なし西一戸建陰性 13 M ダックスメス 12 歳良副腎皮質機能亢進症室内なし西一戸建陰性陰性陰性 14 M ダックスメス 1 歳良妊娠中室内なし中村一戸建陰性陽性陽性 15 ポメラニアンメス 14 歳良僧帽弁閉鎖不全症室内犬 1 中一戸建陰性陰性陽性 16 フレンチブルドッグオス 11 歳良なし室内なし中アパートマンション陰性 17 パグオス 7ヶ月良アレルギー性皮膚炎室内なし中一戸建陰性陰性陽性 18 T プードルオス 1 歳良なし室内なし中アパートマンション陰性陽性陽性 19 雑種オス 10 歳良なし室内なし昭和一戸建陰性陰性陽性 20 チワワオス 7 歳良なし室内なし昭和アパートマンション陰性陰性陰性 21 M ダックスオス 9 歳良なし室内なし瑞穂一戸建陰性陽性陽性 22 雑種メス 16 歳不良なし室内猫 4 瑞穂一戸建陰性陽性陰性 23 M ダックスオス 11 歳良なし室内犬 1 瑞穂一戸建陰性陰性陰性 24 柴オス 2 歳良なし自由猫 2 犬 1 瑞穂一戸建陰性陽性陰性 25 M ダックスオス 6ヶ月良なし室内猫 1 熱田一戸建陰性 26 シーズーオス 4 歳良なし室内犬 3 熱田一戸建陰性陰性陽性 27 チワワオス 1 歳良なし室内猫 1 熱田アパートマンション陰性陰性陽性 28 M ピンシャーオス 3 歳良なし室内犬 3 中川アパートマンション陰性陽性陽性 29 雑種メス 13 歳良なし室内犬 2 中川一戸建陰性 30 T プードルオス 11 歳良甲状腺機能低下症室内なし中川アパートマンション陰性陽性陽性 31 マルチーズメス 16 歳良僧帽弁閉鎖不全症室内なし中川アパートマンション陰性 32 T プードルオス 1 歳良なし室内なし港一戸建陰性 33 チワワメス 1 歳良なし室内猫 6 南一戸建陰性陰性陽性 34 M ダックスメス 2 歳良なし室内なし南アパートマンション陰性 35 パグメス 2 歳良なし室内犬 1 南一戸建陰性陰性陽性 36 パグメス 2 歳良なし室内犬 1 南一戸建陰性 37 M ダックスオス 8 歳良なし室内なし守山一戸建陰性陽性陽性 38 W コーギーメス 8 歳良なし室内なし守山一戸建陰性陰性陰性 39 M ダックスメス 8 歳良なし室内なし守山一戸建陰性陰性陽性 40 マルチーズオス 10 歳良なし室内なし守山一戸建陰性 41 M シュナウザーオス 14 歳良高脂血症室内犬 1 守山一戸建陰性 42 ダックスオス 13 歳不良なし室内なし緑一戸建陰性陰性陰性 43 M ダックスメス 13 歳良なし室内犬 5 緑一戸建陰性陰性陽性 44 柴オス 7 歳良なし室内なし名東一戸建陰性陽性陽性 45 チワワオス 4 歳良肝臓疾患室内なし名東アパートマンション陰性 46 シェルティーオス 5 歳良なし室内なし天白一戸建陰性陽性陽性 47 M ダックスオス 9 歳良なし室内猫 1 天白一戸建陰性 48 M ダックスメス 8 歳良なし室内なし天白一戸建陰性陰性陽性陽性数陽性率 0% 27.1% 54.2% ( 空白は Capnocytophaga 属菌陰性 )

8 飼育状況ならびに環境に関する調査一覧 ( 猫 ) 飼育猫飼育者結果 ( C. Canimorsus/cynodemi) 種類性別年齢健康状態基礎疾患飼育場所他の動物住居区住居分離培養 PCR 1 雑種オス 3ヶ月良なし室内猫 4 千種アパートマンション陰性陰性陽性 2 雑種メス 4 歳良なし室内犬 4 千種一戸建陰性陽性陽性 3 アメリカンショートヘアオス 7 歳良なし室内なし千種アパートマンション陰性 4 雑種メス 1ヶ月良なし室内なし東一戸建陰性陰性陰性 5 雑種メス 4ヶ月良なし自由なし東一戸建陰性 6 ペルシャメス 11 歳良なし室内なし東一戸建陰性陰性陽性 7 雑種メス 10 歳不良なし室外猫 1 北アパートマンション陰性陽性陽性 8 スコティッシュフォールドメス 6 歳良なし室内猫 5 北一戸建陰性陽性陽性 9 雑種メス 2ヶ月良なし室内なし北一戸建陰性陽性陽性 10 雑種メス 6 歳良なし室内なし西一戸建陰性陽性陽性 11 雑種オス 12 歳良なし室内なし西一戸建陰性陰性陽性 12 雑種メス 1 歳良なし室内なし西アパートマンション陰性陰性陽性 13 雑種オス 1 歳良なし室内猫 1 犬 2 中村一戸建陰性陰性陽性 14 雑種オス 16 歳良甲状腺機能亢進症室内猫 20 中村一戸建陰性陰性陽性 15 雑種オス 18 歳良慢性腎不全室内猫 20 中村一戸建陰性陰性陽性 16 雑種メス 1 歳良なし室内なし中一戸建陰性 17 雑種メス 20 歳良慢性腎不全室内なし昭和アパートマンション陰性 18 雑種メス 10 歳良なし室内なし昭和一戸建陰性陰性陽性 19 雑種オス 5 歳良なし室内犬 5 昭和一戸建陰性陽性陰性 20 スコティッシュフォールドオス 14 歳良なし室内猫 10 瑞穂アパートマンション陰性 21 アメリカンショートヘアメス 4 歳良なし室内猫 10 瑞穂アパートマンション陰性陰性陽性 22 雑種メス 8 歳良なし室内なし瑞穂アパートマンション陰性陰性陰性 23 雑種オス 7 歳良なし室内なし瑞穂アパートマンション陰性陰性陰性 24 雑種オス 13 歳良なし自由猫 2 犬 1 瑞穂一戸建陰性陰性陰性 25 スフィンクスオス 7 歳不良糖尿病室内猫 2 熱田アパートマンション陰性陽性陽性 26 雑種オス 14 歳良なし室内犬 1 熱田アパートマンション陰性陰性陽性 27 雑種メス 5 歳良なし室内猫 1 熱田一戸建陰性陰性陰性 28 雑種メス 3ヶ月良なし室内猫 5 熱田一戸建陰性 29 ソマリオス 6ヶ月良なし室内なし熱田アパートマンション陰性陰性陰性 30 雑種メス 10 歳良なし室内なし中川アパートマンション陰性陰性陽性 31 雑種メス 10 歳良なし室内猫 2 中川アパートマンション陰性陰性陽性 32 雑種オス 5ヶ月良なし室内なし中川アパートマンション陰性陽性陽性 33 雑種メス 5 歳良なし室内犬 1 中川一戸建陰性陽性陽性 34 雑種メス 5 歳良なし室内なし港一戸建陰性陰性陽性 35 雑種オス 4 歳良なし室内なし港一戸建陰性 36 雑種オス 3 歳良なし室内なし南アパートマンション陰性陽性陽性 37 雑種メス 9 歳良なし自由犬猫多数守山一戸建陰性陽性陽性 38 雑種メス 5 歳良なし室内猫 2 守山一戸建陰性陽性陽性 39 ソマリメス 10 歳良なし室内なし守山一戸建陰性陽性陽性 40 雑種オス 13 歳良なし室内なし守山アパートマンション陰性陽性陽性 41 雑種オス 20 歳良なし室内猫 5 守山一戸建陰性 42 雑種メス 8 歳良なし自由なし緑アパートマンション陰性陰性陽性 43 雑種オス 4 歳良なし室内猫 1 緑アパートマンション陰性 44 ペルシャオス 6 歳良なし室内猫 2 緑一戸建陰性陽性陽性 45 雑種メス 9 歳良なし室内なし名東アパートマンション陰性陰性陽性 46 雑種オス 2 歳良なし室内なし天白アパートマンション陰性陽性陽性 47 雑種メス 2 歳良なし室内なし天白一戸建陰性陰性陽性 48 雑種メス 10 歳良なし室内なし天白アパートマンション陰性陰性陽性陽性数陽性率 0% 33.3% 66.7% ( 空白は Capnocytophaga 属菌陰性 )

ものと考え P.multocidaの選択培地を用いて以下のようにして分離培養した 1 選択培地は Knightらが報告しているModified Knight mediumを用いた Modified Knight medium heart infusion agar(bbl) 5% defibrin

ものと考え P.multocidaの選択培地を用いて以下のようにして分離培養した 1 選択培地は Knightらが報告しているModified Knight mediumを用いた Modified Knight medium heart infusion agar(bbl) 5% defibrin 名古屋市で飼育されているネコの Pasteurella multocida の保有状況調査はじめにイヌやネコに咬まれ咬傷から侵入した病原体による感染症のなかで最も患者数が多いと考えられているのがパスツレラ症である P.multocida をはじめとする Pasteurella 属の菌は約 75% のイヌおよびほぼ 100% のネコの口腔内上気道消化管に常在しておりヒトへの咬掻傷や口元をなめられるなどの接触により局所感染症