ウイルス 感染症研究 実験特集 不可能を可能にする NanoLuc テクノロジー NanoLuc テクノロジーをご利用のウイルス 感染症研究に携わるユーザー 4 名の方に最新の 研究成果についてご寄稿頂きました プロメガが開発した NanoLuc は 19 KDa の低分子の発光酵素であり 従来のホタルルシフェラーゼの 1/3 の分子量であるにもかかわらず 発 光レベルは 1 倍にも達します この 小さくて明るい という特性は これまで困難であった生体分子の解析につながる大きなポテンシャル を秘めています さらに NanoLuc を 11 アミノ酸 SmBiT または HiBiT と 18KDa の LgBiT に分断した NanoBiT テクノロジーでは 小さなペプ チドを付加するだけで 下記の全く異なる 2 つの実験系に使用することができます 下図 NanoBiT HiBiT 参照 1. 目的タンパク質の定量化 高親和性のペプチド HiBiT を使用 2. タンパク質 - タンパク質相互作用の定量化 低親和性のペプチド SmBiT を使用 また NanoLuc と HaloTag 蛍光リガンドを利用した NanoBRET 法により 高感度にタンパク間相互作用を定量化 スクリーニングに応用するこ とができます このようなレポーターとしての NanoLuc は そのサイズの小ささを生かし 特にウイルス 感染症分野の研究で すでに多く のユーザー様にご使用頂いております NanoLuc 融合 タンパク質の定量化 HiBiT 細胞内タンパク質 HiBiT 融合 細胞内タンパク質 NanoLuc Luciferase LgBiT LgBiT 含有試薬 全長 NanoLuc HiBiT 5 ページ目 国立国際医療研究センター 2 ページ目 大阪大学 福原 崇介 先生 3 ページ目 北海道大学 佐々木 道仁 先生 西辻 裕紀 先生 Y SmBiT NanoLuc NanoBRET Ligand Halo Tag Protein NanoLuc Luciferase LgBiT NanoBiT Y NanoBRET タンパク質 タンパク質相互作用 プロメガ株式会社 4 ページ目 横浜市立大学 宮川 敬 先生
RNA NanoLuc in vitro RNA RNA Firefly NanoLuc C C NanoLuc NanoLuc 2 HiBiT C A HiBiT フラビウイルス pr E ペスチウイルス p E rns N pro E E ウイルス E E p B HiBiT リコンビナント LgBiT A. N HiBiT Characterization of recombinant Flaviviridae viruses possessing a small reporter-tag, Tamura et al., J Virol, in press LgBiT B. HiBiT in vivo NanoLuc HiBiT 2
HiBiT Biosafety level-3 BSL3 Virus-like particle, VLP BSL-2 Sasaki, et al., Development of a rapid and quantitative method for the analysis of viral entry and release using a NanoLuc luciferase complementation assay. Virus Research 243: 69-74, 218 C HiBiT HiBiT VLP VLP-HiBiT 1 VLP HiBiT LgBiT Vero Vero-LgBiT VLP-HiBiT Nano-Glo Live Cell Assay 2 VLP-HiBiT Vero-LgBiT Vero-LgBiT 3 VLP VLP VLP-HiBiT 1. VLP-HiBiT HiBiT C E M Luminescence (RLU/s) 1 8 6 4 2 VLP-HiBiT Substrate only 1 2 3 Time (min) 2. VLP-HiBiT VLP-HiBiT LgBiT HiBiT C LgBiT 3. VLP-HiBiT LgBiT VLP-HiBiT HiBiT VLP-HiBiT VLP Biosafety level-2 HiBiT 3
NanoBRET HIV sirna CRISPR HIV Gag NanoBRET Gag Gag HIV Gag Gag FRET BiFC NanoBRET Gag Gag NanoBRET Gag Gag Miyakawa et al., The tumor suppressor APC promotes HIV-1 assembly via interaction with Gag precursor protein. Nature Communications. 8, 14259, 217 HIV Gag NanoBRET Gag Gag NanoBRET NanoBRET NanoBRET N HaloTag 4
NanoLuc HBV HepaRG HBV NTCP HepG2 Huh7 HBV HBV ELISA PCR High throughput NanoLuc HBV HBV 3.2kb DNA 4 ORF Core Polymerase Surface 1 HBV HBV HBV HBV ORF NanoLuc NanoLuc Firefly luciferase 1/3 1 NanoLuc Firefly luciferase ATP HBV Core Polymerase NanoLuc HBV phbv/nl 1 NanoLuc HBV HBV/ NLHBV/NL HepG2 NTCP HepG2/NTCP NanoLuc HepG2/NTCP NanoLuc 2A 17 FDA HBV HBV 2B Epsilon phbv pcore Core PreS/S Epsilon 図 1 Polymerase phbv/nl NanoLuc PreS/S Polymerase 1. HBV HBV/NL NanoLuc HBV Core Polymerase HBV/NL packaging signal Epsilon phbv/nl HepG2 NanoLuc HBV/NL cccdna Precore/core A Luminescence 4 3 2 1 HepG2 HepG2/NTCP B 3 2 Luminescence 1 図 2 DMSO 化合物 A 化合物 B 化合物 C 2. HBV/NL A HepG2 NTCP HepG2/NTCP HBV/NL 2%DMSO 4%PEG8 NanoLuc NTCP NanoLuc B HepG2/NTCP 96well 1well 5 24 1µM 24 HBV/NL 5 NanoLuc HBV NanoLuc 96well 384well ELISA PCR High Throughput HBV NanoLuc FDA 5