スライド 1

抗体検査結果解析 (HP 掲載用 ) その他検査法およびクロスマッチ 日本赤十字社中央血液研究所中島文明

その他検査法 ダイレクト クロスマッチ

定 義 その他抗体検査 FlowPRA, LABScreen, WAKFlow 以外の HLA 抗体検査において SH0~SH04 の 4 サンプルを対象としていること ダイレクト クロスマッチ, FCM, ICFAなどクロスマッチ可能な検査方法において SH0/HLA Class I を対象とし クロスマッチ入力シートに記入されていること 3

ダイレクト クロスマッチ実施内容 テーマ ダイレクトクロスマッチ 配布検体の一部を使用しクロスマッチを正確に行えること 仮想クロスマッチ 抗体とDNAの結果から正しく適合判定が行えること 実施方法 ダイレクト クロスマッチ 抗体サンプルはSH0を指定し HLAクラスⅠ領域を対象とする この抗体に反応する細胞と反応しない細胞を各施設準備する それぞれ 4細胞程度 反応する細胞だけでも良い 各施設で通常実施しているクロスマッチ方法で測定データをとる 方法は FCM ICFAなど液性免疫に関するクロスマッチとする 本入力ファイルのクロスマッチ シートに記入し 提出する 仮想クロスマッチ 抗体サンプルはSH04を指定し HLAクラスⅠ Ⅱ領域を対象とする DNAサンプルはH03 H04を指定し HLAクラスⅠ Ⅱ領域を対象とする それぞれの抗体特異性結果とタイピング結果で仮想クロスマッチを行う 本入力ファイルのクロスマッチ シートに記入し 提出する それぞれの抗体特異性結果とタイピング結果で仮想クロスマッチを行う 注意 これは組織適合性学会が実施するクロスマッチであり 移植学会が実施する全血クロスマッチ ではありません 4

HLA抗体検査方法の年次推移 施設数 参加施設数 H6 3 H7 44 H 39 H9 37 H0 36 H 36 H 4 H3 39 H4 37 H5 49 H6 55 H7 57 H 5 その他検査法 5

クロスマッチ試験方法の年次推移 施設数 参加施設数 H 9 H H3 9 H4 5 H5 H6 6 H7 7 H 7 6

Lab ID 輸血関連 臓器移植 造血細胞 その他 AHG その他検査法 クロスマッチ詳細 FCM ICFA 仮想クロス AHG ICFA MPHA Screen Quik/B SH0 SH0 SH03 SH04 SH0 SH0 SH03 SH04 参加部門クロスマッチ抗体検査 CLASS Ⅰ 抗体検出判定 CLASS Ⅱ その他 精製抗原試薬 S5 I I&II I WAKFlow S3 I I FlowPRA, LABScreen S I I FlowPRA, LABScreen S3 I I FlowPRA S0 I I FlowPRA S0 I I&II LABScreen, WAKFlow S09 I I&II LABScreen S I FlowPRA, LABScreen S4 I FlowPRA S0 I LABScreen, WAKFlow S3 I LABScreen, WAKFlow S7 I LABScreen, WAKFlow S I LABScreen, WAKFlow S0 I パネル LABScreen, WAKFlow S3 I LABScreen, WAKFlow S9 I I LABScreen, WAKFlow S03 I LABScreen, WAKFlow S45 I&II WAKFlow S04 LABScreen S06 FlowPRA, LABScreen S6 LABScreen S4 LABScreen S35 LABScreen S37 LABScreen S40 LABScreen S43 スクリーン FlowPRA, LABScreen S5 LABScreen, WAKFlow S36 スクリーンパネル S05 I&II 9 0 5 4 4 7 3 3 7 I HLAClass I I&II HLAClass I&II 7

解析方法 測定値 スコア 判定基準で解析し 手技や判定力を評価する MPHAは 同一パネルで括り 測定スコアでまとめる Quik/BScreenは 施設のみのため 特に解析しない FCMはFCSファイルから再解析する ICFAは Class I, Class I 両ビーズで解析する 各測定データの表記や表示方法を以下の条件で統一 抗原表記の整合 統一化 ex; 6 6,, etc. 特異性の段階的の色分定義 LABScreen Single Antigen: 参加4施設の平均値 SA cutoff color ( nmfi ) 0,000 5,000 3,000,000 <,000 FCM(SN比) ICFA(Index)の色分けとスコア化基準 FCM (S/N ratio) & ICFA (Index) cutoff color 0 5.0 3.0.0 <.0

, AHG 検査状況 検査法分類 測定条件 判定条件 Lab ID 検査方法 試薬 抗原形態 HLA クラス 次抗体 サブタイプ など 次抗体 ( メ カ / 品名 /Lot) 陰性血清 ( メ カ / 品名 /Lot) 具体的な判定基準 リンパ球 I S0 AHG リンパ球 I κ λ SIEMENS NA 抗血清 L 鎖 K 型 LOT77 SIEMENS NA 抗血清 L 鎖 L 型 LOT90 ONE LAMBDA Negative Control Reagent LOT095 I Mediun 対照 S リンパ球 スコア 以上 死細胞率 % 以上を陽性 II Medium 対照 S5 リンパ球 I 株式会社ヘレナ研究所 / AHG λ 抗ヒト遊離型 λ 血清 / 040J74 S3 リンパ球 I 新鮮凍結血漿 AB(+)/ 750394 OneLambda/Negative ControlReagent/097 スコア 4( 死細胞率 %~) 以上で陽性 スコア (% 死細胞以上 ) から陽性 S3 リンパ球 I GM 自家調整死細胞 %( スコア 4) 以上を陽性 9

測定結果 Lob ID Method Panel ID Cell HLAA HLAB 測定スコア HLAC SH0 SH0 SH0 SH03 SH04 反応抗原 S 06050 A3 B5 S 0604 4 A3 B46 B5 S 0605 4 6 B35 B59 S5 9 4 B60 B5 Cw0 Cw S3 4 B6 Cw Cw0 S3 A B5 B6 Cw4 Cw S3 3 4 6 B56 B6 Cw7 Cw5 4 S3 4 B6 B75 S3 A3 A33 B54 B6 S3 3 4 6 B35 B54 S3 4 4 B46 B5 S3 5 B54 B60 4 S3 6 4 B5 B7 S0 AHG 4 B6 B6 Cw Cw5 S5 AHG 03 凍結細胞 4 6 B39 B5 NT NT S5 AHG 37 凍結細胞 A 4 B7 B60 Cw7 S5 AHG 354 凍結細胞 4 6 B6 B54 Cw Cw0 S5 AHG 47 凍結細胞 A33 B6 B44 Cw0 S5 AHG 4395 凍結細胞 4 B35 B55 Cw Cw9 S5 AHG 4396 凍結細胞 A A3 B35 B5 Cw9 Cw4 クロス結果 クロス結果 0

測定結果 :SH0~04 SH0 Lob ID Method Cell Panel ID HLAA HLAB HLAC 測定スコア S3 S5 4 B6 B75 3 4 6 B35 B54 4 4 B5 B46 A3 A33 B54 B6 5 B54 B60 03 4 6 B5 B39 NT NT 37 4 A B7 B60 Cw7 354 4 6 B6 B54 Cw Cw0 4395 4 B35 B55 Cw Cw9 47 A33 B44 B6 Cw0 4396 A A3 B5 B35 Cw9 Cw4 SH03 Lob ID Method Cell Panel ID HLAA HLAB HLAC 測定スコア S3 S5 凍結細胞 5 B54 B60 4 B6 B75 4 4 B46 B5 3 4 6 B35 B54 A3 A33 B54 B6 03 4 6 B39 B5 NT NT 37 A 4 B7 B60 Cw7 4395 4 B35 B55 Cw Cw9 354 4 6 B6 B54 Cw Cw0 47 A33 B6 B44 Cw0 4396 A A3 B35 B5 Cw9 Cw4 SH04 Lob ID Method Cell Panel ID HLAA HLAB HLAC 測定スコア S3 S5 AHG AHG AHG 凍結細胞 凍結細胞 5 B54 B60 4 A3 A33 B54 B6 3 4 6 B54 B35 4 B6 B75 4 4 B46 B5 37 A 4 B7 B60 Cw7 354 4 6 B54 B6 Cw Cw0 4395 4 B55 B35 Cw Cw9 47 A33 B6 B44 Cw0 03 4 6 B39 B5 NT NT 4396 A A3 B35 B5 Cw9 Cw4 反応が予測される抗原 Cw7? は反応しない AHG でも反応しない では反応しない AHG では反応する この反応は何か??? 0

サンプル選定時 IgG Cq IgG Cq IgG Cq IgG Cq DR + + + + + DR0 + + + weak + + + DR4 + + + DR7 + + DR9 + + + DR53 + + + weak + DR DR5 + + DR3 DR5 DR6 DR DR5 Class I ( ) weak weak SH0 SH0 SH03 SH04 NT A9 A9 A9 Cw7 Cw7 Cw7 B40 B40 B40 A0 A0 Bw4 (Bw4) (Bw4) () B B (B) A9 A9 Cw7 Cw7 Cross Match JSHI_Direct JST JSHI_Virtual JST 4

MPHA, Quik/BScreen 検査状況 検査法分類 測定条件 判定条件 Lab ID 検査方法 試薬 抗原形態 HLA クラス 試薬 ロット 次抗体 サブタイ プなど 次抗体 ( メ カ / 品名 /Lot) 陰性血清 ( メ カ / 品名 /Lot) 測定機器 判定ソフト 血清 処理 具体的な判定基準 備考 S0 MPHA パネル I 507 F 感作時間 時間ひつじセル スクリーン 609 キット添付品キット添付品 S36 MPHA I 室温 時間 ひつじセル パネル 507 キット添付品キット添付品 S43 MPHA スクリーン I 54 G キット添付品キット添付品 MPHA 感作時間 ( 時間 ) ひつじセル ELISA S05 (ELISA) Quikk Screen & 精製糖 タンパク I 3006 キット添付品キット添付品 プレートリーダー ELISA キット説明書に準拠 キット説明書に準拠 BScreen II 300769 キット添付品キット添付品 プレート キット説明書に準拠 リーダー

MPHA 測定結果 Lob ID Reagent/Lot.No Panel ID nd Ab/Treatment HLAA HLAB HLAC 測定スコア SH0 SH0 SH03 SH04 S36 MPHAスクリーン / 609 IgG+ 未処理 S43 MPHAスクリーン / 54 IgG+ 未処理 S36 MPHAスクリーン / 609 IgG+ クロロキン 6 S36 MPHAスクリーン / 609 未感作 + 未処理 S36 MPHAスクリーン / 609 未感作 + クロロキン この相違が不明 抗原量の差が原因か? S0 MPHAパネル / 507 A IgG+ 未処理 4 B4 B5 Cw0 Cw S36 MPHAパネル / 507 A IgG+ 未処理 4 B4 B5 Cw0 Cw S0 MPHAパネル / 507 B IgG+ 未処理 A 4 B39 B55 Cw9 Cw7 S36 MPHAパネル / 507 B IgG+ 未処理 A 4 B39 B55 Cw9 Cw7 S0 MPHAパネル / 507 C IgG+ 未処理 A 6 B6 B5 Cw4 Cw4 6 S36 MPHAパネル / 507 C IgG+ 未処理 A 6 B6 B5 Cw4 Cw4 6 S0 MPHAパネル / 507 D IgG+ 未処理 4 B5 B54 Cw S36 MPHAパネル / 507 D IgG+ 未処理 4 B5 B54 Cw S0 MPHAパネル / 507 E IgG+ 未処理 B39 B54 Cw Cw7 6 S36 MPHAパネル / 507 E IgG+ 未処理 B39 B54 Cw Cw7 S0 MPHAパネル / 507 F IgG+ 未処理 4 B46 B5 Cw 6 S36 MPHAパネル / 507 F IgG+ 未処理 4 B46 B5 Cw S0 MPHAパネル / 507 G IgG+ 未処理 6 B35 B54 Cw Cw9 S36 MPHAパネル / 507 G IgG+ 未処理 6 B35 B54 Cw Cw9 S0 MPHAパネル / 507 H IgG+ 未処理 6 B35 Cw9 6 S36 MPHAパネル / 507 H未処理 IgG+ 未処理 4S0>S36 6 B35 Cw9 S0 MPHAパネル / 507 Aクロロキン処理 IgG+ S0<S36 4 B4 B5 Cw0 Cw S36 MPHAパネル / 507 A IgG+ 4 B4 B5 Cw0 Cw 6 S0 MPHAパネル / 507 B の傾向あり IgG+ クロロキン A 4 B39 B55 Cw9 Cw7 S36 MPHAパネル / 507 B IgG+ クロロキン A 4 B39 B55 Cw9 Cw7 6 S0 MPHAパネル / 507 C IgG+ クロロキン A 6 B6 B5 Cw4 Cw4 S36 MPHAパネル / 507 C IgG+ クロロキン A 6 B6 B5 Cw4 Cw4 S0 MPHAパネル / 507 D IgG+ クロロキン 4 B5 B54 Cw 6 S36 MPHAパネル / 507 D IgG+ クロロキン 4 B5 B54 Cw S0 MPHAパネル / 507 E IgG+ クロロキン B39 B54 Cw Cw7 6 S36 MPHAパネル / 507 E IgG+ クロロキン B39 B54 Cw Cw7 6 S0 MPHAパネル / 507 F IgG+ クロロキン 4 B46 B5 Cw 6 S36 MPHAパネル / 507 F IgG+ クロロキン 4 B46 B5 Cw S0 MPHAパネル / 507 G IgG+ クロロキン 6 B35 B54 Cw Cw9 6 S36 MPHAパネル / 507 G IgG+ クロロキン 6 B35 B54 Cw Cw9 S0 MPHAパネル / 507 H IgG+ クロロキン 4 6 B35 Cw9 S36 MPHAパネル / 507 H IgG+ クロロキン 4 6 B35 Cw9 6

FCM 検査状況 測定条件 判定条件 Lab ID 次抗体 サブタイプ など 次抗体 ( メ カ / 品名 /Lot) 陰性血清 ( メカ / 品名 /Lot) 測定機器判定ソフト具体的な判定基準 S0 検査状況未記入!! S0 G Jackson/FITCconjugated AffiniPure F(ab') Fragment Goat AntiHuman IgG,FcγFragment Specific/3 自家製 ( 健常人プール血清 ) BC CytomicsFC5 00MPL KALUZA サンプルの蛍光強度 xmed(median) 値が陰性 対象血清 ( プール血清 ) の.0 以上の場合陽性 とする S09 G Jackson/AntihumanIgGFITC 自家調製 BD BD FACSDiva NC の Geomean の 倍以上 Jackson/FITCconjugated S AffiniPure F(ab') Fragment Goat Antihuman IgG,FcγFragment Specific(minimal crossreaction to Bovine,Horse,and Mouse Serum Mediun 対照と ドナー血清陰性対照 BD FACSCanto II BD FACSDIVA v6..3 Sample Median/NC Median>.0 を陽性 Proteins)/ S 検査状況未記入!! S3 G Jackson/Goat F(ab')anti human IgG,FITC/ OneLambda/ NegativeControlSerum/ Navios Kaluza Sample Median/NC Median のカットオフ.0 以上陽性 S4 Jackson/FITCconjugated AffiniPure F(ab') Fragment Goat AntiHuman IgG,Fcγ Fragment Specific/74 One Lumbda/ Flow PRA Negative Control Serum/0 BC:FC500 CXP Analysis Sample Median/NC Median>.0 を陽性 3

解析条件統一 FCM 再解析方法 Kaluza Flow Cytometry Analysis v.5 [Beckman Coulter] Sample/NC Ratio_Median Compensation adjusted SH0 NC SH0 NC Cell count SN 比 7.59/.3 =74.0 4

FCM 再解析 ~ 測定結果 Lob ID Panel ID Cell Count MFI (Median) S/N 比判定スコア NC SH0 NC SH0 再解析 提出時 S0 9,430 9,4.3 7.59 74.0.7 P 6,674 6,755.53 5.04 9. 0. P,96 3,73.05 3.75 3. 0. P3,74 4,36. 40.5 34.3 40.0 S0 P4 9,4 0,5 0.93 6.45 7.7 0.6 P5,4,305 0.9.04.. P6 7,73 33,93 0.94 9.05 0.3 3.9 P7,09 6,3. 9.69. 0.4 P 6,33 35,37.09 6.06 3.9 7. Donor,756 3,357 0.4 5.9 6.7 S09 Donor,354,46 0.44.79 0.0 S 06050 4,39 3,49 0.45 9.4 4.5 6.0 S 9,0 0,5 0.9 5.66 7.. 6,6,793 0.73..5.7 S3 S4,770,93 0.5 0.63..0 3, 0,093 0.94 50.95 54. 67.4 S4 5,47 5,67 0.95.5.3.3 S4 5,0 4,6.4.7 7.5 09.5 S43 5,0 5,.96 3.7. 0.5 Cell Count 少 Sample Median/NC Medianのカットオフ.0 以上陽性 5

FCM 再解析 ~ ヒストグラム S0 S0 S0 S03 S04 S05 S06 S07 S0 S09 S09 S S S3 S3 S33 S4 S4 S43 SH0 NC 6

FCM 再解析 ~Cell count S S3 S3 7

FCM 再解析 ~ 特異性 Lab ID Cell ID HLA Type Count 再解析 提出時 S0 P3 B35 B39 Cw9 4,36 34.3 40,Cw7 判定スコア 反応抗原 S 6 B6 B67 Cw 0,5 7.. Cw7,6,,Cw S 06050 A3 B5 3,49 4.5 6,A3 S4 S4 4 B5 B59 Cw Cw 4,6 7.5 09.5 S0 4 B6 B6 Cw Cw5,44 74.0.73 S0 P7 4 B6 B46 Cw 6,3. 0.4 S0 P B6 B55 Cw9 Cw 35,37 3.9 7.,6 S3 3 4 B56 B6 Cw7 Cw5 0,093 54. 67.4 6 S0 P6 4 B6 B60 Cw9 Cw0 33,93 0.3 3.9 6 S0 P4 A B6 B54 Cw Cw 0,5 7.7 0.6 6 S0 P A3 A B5 Cw4 3,73 3. 0. A3 S09 Donor 4 B6 B6 Cw4 Cw 3,357 6.7 A33,Cw4 A33 HLAA HLAB HLAC Cw7 S0 P A B44 B54 Cw Cw4 6,755 9. 0. A33 S09 Donor 4 B7,46 0.0 Cw7 Cw7 S/N 比 S4 S43 A B35 B39 Cw9 5,. 0.5 S3 4 B6 Cw Cw0,793.5.7 S4 S4 4 B5 B54 Cw Cw 5,67.3.3 S0 P5 A 4 B46 B5 Cw Cw,305.. S3 A B5 B6 Cw4 Cw,93. Sample Median/NC Median のカットオフ.0 以上陽性 FCM (S/N ratio) cutoff color 0 5.0 3.0.0 <.0

検査法分類 ICFA 検査状況 測定条件 判定条件 Lab ID HLA クラス 試薬 ロット 次抗体 サブタイプ など 次抗体 ( メ カ / 品名 /Lot) 陰性血清 ( メ カ / 品名 /Lot) 測定機器判定ソフト血清処理具体的な判定基準 S0 I & II S00 G キット添付品キット添付品 Luminex IS HLAclass 特異モノクローナル抗体を結合させたHLAビーズ (classi,classi) と マウスIgGを結合させたバックグラウンドビーズの蛍光強度 Median 値を用いて Index 値を算出し.0 以上を陽性と判定する S03 I S0B G キット添付品キット添付品 luminex IS WAKFlow Manager classⅠ ビーズ classⅠ ビーズ Index.0 以上陽性 Index0.0 以上陽性 S0 I S0B G キット添付品キット添付品 Luminex IS WAKFlow ICFA カットオフ値 S09 I & II S00 G キット添付品 キット添付品 LuminexIS WAKFlow Manager WAKFlow ICFA S3 I S0B G キット添付品 キット添付品 Luminex IS.3 Ver. S7 I S0B キット添付品キット添付品 検査状況未記入!! E DTT 添加 SH0 カットオフ値 classⅠ ビーズ :Index.0 以上 classⅠ ビーズ : Index0.0 以上を陽性 S I S0C G キット添付品キット添付品 Luminex 00 WAKFlow ICFA classi ビーズの index.0 以上または classi ビーズの index0.0 以上を陽性とする S0 I S0B キット添付品キット添付品 Luminex00 WAKFlow ICFA F クラス Ⅰ カットオフ値.0 クラス Ⅰ カットオフ値 0.0 S3 I S0B G キット添付品キット添付品 Luminex IS.3 WAKFlow ICFA Ver. Index>.0(classⅠ ビーズ ) ビーズ ) を陽性 Index>0.0(classⅠ S5 I & II S0B キット添付品キット添付品 Luminex xponent WAKFlow ICFA Index.0 以上で陽性 S9 I S0C キット添付品キット添付品 Luminex IS WAKFlow ICFA (v.) Luminex S45 I & II S0B G キット添付品 キット添付品 xponent WAKFlow Manager 9

Positive Control SH0 ICFA 測定結果 9 cells Lab ID Serum ID Cell ID HLAA HLA Type HLAB ICFA Index classi_ classi_ S0 P3 B35 B39 Cw9 Cw 7 5. 405. S0 B35 B6 Cw9 Cw0. 9.4 S0 3337079 B6 B60 Cw4 Cw5.4 47.6 S3 P B46 B6 Cw Cw9.6 4.0 S7 S7P6 B35 Cw9.0 3.9 S 3 B6 B60 Cw9 Cw5. 0.5 S45 S B6 Cw Cw.7 94.5 S0 P B6 B55 Cw9 Cw 3.0 379.6 S9 03307 B37 B56 Cw4 Cw6.7.5 S9 0403573 6 B59 B6 Cw Cw0.3 9.7 S0 339339343 B35 B46 Cw.9 50. S9 0403759 B3 B60 Cw7.3 0.6 S7 S7P4 A3 B5 B59 Cw Cw4.5 70. S9 03535 A33 B5 B46 Cw Cw0. 9.6 S03 S9 030 0573044 4 4 B7 B4 B6 Cw7 4.6.4 34.5 79.9 S9 05309654 A3 B3 B5 Cw6.4 74.6 S9 04037675 A30 B3 B7 Cw6 Cw.3 75.9 S9 04035 A B37 B4 Cw6 Cw 0.9 3. S0 P7 4 B6 B46 Cw 3.4 309.6 S0 4 B60 B6 Cw5.9 3. S3 P5 4 B5 B55 Cw Cw. 09.6 S7 S7P 4 B46 B5 Cw Cw4.5 77.6 S5 9 cell 4 B60 B5 Cw0 Cw. 9.7 S0 33370 B6 Cw9 Cw4 0.5 4.0 S 3 B5 B5 Cw0 Cw..6 S9 0337735 A3 B44 B5 Cw5 Cw4 0. 43.4 S0 P6 4 B6 B60 Cw9 Cw0.3 90.0 S0 P4 A B6 B54 Cw Cw.0 76.3 S03 0303 4 B5 Cw4.0 60. S3 P3 4 B60 B5 Cw0 Cw.3.6 S0 3 6 4 B6 Cw0 Cw 0. 7.6 S 4 4 B35 B5 Cw9 Cw 0.9 3. S9 040353 A3 B7 B46 Cw Cw.0 7. S45 O A B37 B46 Cw. 5. S 5 4 B35 B54 Cw Cw9.0 4. S 4 B6 B5 Cw4 Cw4 0.9 3.9 S B5 Cw4. 35.5 S 5 B46 B54 Cw.0 05. S9 0403759 A33 B75 B5 Cw9 Cw5 0.6. S0 P A B5 Cw4 0. 9. S3 P6 4 B5 Cw4 0.9.4 S03 030 A3 4 B5 Cw4.. S7 S7P7 4 B54 Cw 0.7 74. S0 4 4 B6 B6 Cw9 Cw 0. 64. S03 0304 B44 Cw4. 65.6 S3 P B44 Cw4.0 37. S0 339343460 B6 B44 Cw4 Cw4 0.5 50. S 6 B5 B6 Cw0 3. 3.3 S3 P7 4 B6 B44 Cw9 Cw4.0 356.0 S0 P A B44 B54 Cw Cw4.5 5.6 S0 5 A33 A B44 B54 Cw Cw4.0 7.0 S09 Donor 4 B6 B6 Cw4 Cw. 94.7 S9 035399 4 B44 B35 Cw4 0. 7.3 S45 S A 6 4 A B5 B6 B5 Cw Cw0 Cw.0 3.5 50..0 S09 Donor 4 B7. 6. S3 P4 4 B7. 5.7 S9 04037600 4 B39 B67..9 S7 S7P0 4 B7.0. S7 S7P5 A 4 B7 B67 0.9.4 S3 P4 4 B7 B44 Cw4.3 3.5 S9 040376 4 B7 B5 Cw 0..4 Cw7 S9 03039344 A B7 B54 Cw 0.9.9 S 9 A 4 B7 B55 Cw 0.9.9 S 6 A 4 B39 B5 Cw..5 S3 P3 A 4 B37 B5 Cw6 Cw.0.0 S3 P6 A B55 Cw 0.7 0.9 S7 S7P A 4 B5 B54 Cw 0.7 0.4 S7 S7P A 4 B54 B59 Cw 0..0 S0 P5 A 4 B46 B5 Cw Cw..0 S9 033776 A 4 B5 B54 Cw Cw 0. 0. S3 P7 A 4 B5 B54 Cw Cw4.. S A 4 B35 B54 Cw Cw9 0.9 0.9 S0 7 A 4 B35 B5 Cw9 Cw.0.0 S 4 B54 Cw.0.0 S3 P 4 B60 B54 Cw Cw0.0 0. S03 0305 4 B5 B54 Cw Cw 0.4 0.5 S03 0306 4 B5 B54 Cw Cw 0. 0. S0 6 4 B5 B59 Cw Cw 0.9 0.9 S0 4 B6 B5 Cw0 Cw.. S7 S7P3 4 B60 B5 Cw0 Cw 0.9 0. S 0 4 B5 Cw..0 S3 P5 4 B5 Cw 0. 0.7 S03 0307 4 B5 B5 Cw Cw4 0.6 0.6 S7 S7P9 4 B4 B5 Cw Cw.0 0.9 S 4 B6 B5 Cw Cw. 0.9 S 7 4 B6 Cw9 Cw0.0 0.9 S3 P A3 A B44 B55 Cw Cw5 0.9. S0 P A A33 B44 B54 Cw Cw4 9.6 0.7 S0 P A A3 B5 Cw4 54.. S0 P3 B35 B39 Cw9 Cw7 9..0 S0 P4 A 6 B6 B54 Cw Cw 5. 6.9 S0 P5 A 4 B46 B5 Cw Cw. 3.6 S0 P6 4 6 B6 B60 Cw9 Cw0 7.6. S0 P7 4 B6 B46 Cw 0. 4.7 S0 P 6 B6 B55 Cw9 Cw 5.5 9.5 S03 94. 9.4 S0 Cont 7. 33.0 S3 PC 7.6.6 S7 C 0.7 59.9 HLAC Cutoff color 0 0 5.0.0 <.0 BB_Median 67.5 43.5 09.5 Index Average.95 (.5~6.) 0. (0.4~.) 0

4法比較 Lob ID S3 S3 S3 S5 S S S S3 S3 S3 S3 S3 S3 S5 S0 S5 S5 S5 S5 S5 S0 S0 S0 S0 S0 S0 S0 S09 S09 S0 Panel ID 4 5 9 06050 0604 0605 3 3 6 4395 47 03 354 4396 37 P3 P7 P P4 P6 P P Donor Donor P5 Cell 凍結細胞 凍結細胞 凍結細胞 凍結細胞 凍結細胞 凍結細胞 HLAA 4 6 6 6 A3 4 A 4 A33 6 6 A3 A 6 6 A3 A33 A33 4 A HLAB 法による B75 B5 検出感度の差異 4 4 4 A3 A3 4 4 4 A33 4 4 4 4 A 4 4 6 A 4 A A 4 4 B6 B46 B54 B60 B5 B46 B35 B56 B35 B54 B6 B5 B5 B35 B6 B6 B39 B6 B35 B7 B35 B6 B6 B6 B6 B5 B44 B6 B7 B46 B60 B5 B5 B59 B6 B54 B6 B6 B7 B55 B6 B44 B5 B54 B5 B60 B39 B46 B55 B54 B60 B54 B6 B5 判定スコア HLAC Cw0 Cw7 Cw Cw4 Cw Cw Cw0 NT Cw Cw9 Cw7 Cw7 Cw Cw9 Cw Cw9 Cw4 Cw Cw4 Cw7 Cw Cw Cw5 Cw0 Cw Cw9 Cw5 NT Cw0 Cw4 Cw9 Cw Cw Cw0 Cw4 Cw Cw AHGFCM 4 凍結細胞による 検出感度の差異 ICFA FCM ICFA CD3+ classi_ classi_. 4.5 54..5. 74.0 反応抗原 測定値 Sample Median/NC Medianのカット オフ.0以上陽性 34.3. 3.9 7.7 0.3 3. 9. 6.7 0.0. 9.7,A3 5. 3.4 3.0.0.3 0..5... 405. 309.6 379.6 76.3 90.0 9. 5.6 94.7 6..0,Cw7,6 6 6 A3 A33 A33,Cw4 Cw7 FCM (S/N ratio) & ICFA (Index) cutoff color 0 5.0 3.0.0 <.0

まとめ その他検査法 の反応性はサンプル選定時と同等の結果であった 凍結細胞を用いた AHGでは期待通りの反応を示さない例があった MPHAスクリーンとパネルで抗原量が原因と考えられる反応性の差異が認められた また クロロキン処理と未処理で施設間で反応性が逆転していた FCM 再解析において 測定細胞数が不十分なうえ 同一パネルでありながらコントロールとサンプルでも差があり 理由が不明であった 測定細胞数が不足するケースでは ヒストグラムの乱れが生じ 数値結果が不正確になる可能性がある ICFAは概ね期待通りの結果が得られていたが バックグラウンド シグナルの高いケースではIndexが顕著に低下しており 注意が必要である FCMとICFAでCw7の反応強度が異なり どちらが合理的な結果といえるかは 今のところ不明である

仮想クロスマッチ

クロスマッチ実施内容 テーマ ダイレクトクロスマッチ 配布検体の一部を使用しクロスマッチを正確に行えること 仮想クロスマッチ 抗体とDNAの結果から正しく適合判定が行えること 実施方法 ダイレクト クロスマッチ 抗体サンプルはSH0を指定し HLAクラスⅠ領域を対象とする この抗体に反応する細胞と反応しない細胞を各施設準備する それぞれ 4細胞程度 反応する細胞だけでも良い 各施設で通常実施しているクロスマッチ方法で測定データをとる 方法は FCM ICFAなど液性免疫に関するクロスマッチとする 本入力ファイルのクロスマッチ シートに記入し 提出する 仮想クロスマッチ 抗体サンプルはSH04を指定し HLAクラスⅠ Ⅱ領域を対象とする DNAサンプルはH03 H04を指定し HLAクラスⅠ Ⅱ領域を対象とする それぞれの抗体特異性結果とタイピング結果で仮想クロスマッチを行う 本入力ファイルのクロスマッチ シートに記入し 提出する それぞれの抗体特異性結果とタイピング結果で仮想クロスマッチを行う 注意 これは組織適合性学会が実施するクロスマッチであり 移植学会が実施する全血クロスマッチ ではありません 5

NGS Sanger GenoSearch WAKFlow LABType SSP DPA DQA DPB DQB DRB3/4/5 DRB C B A 仮想クロス ICFA FCM AHG その他 造血細胞 臓器移植 輸血関連 Lab ID 仮想クロスマッチ詳細 参加部門 クロスマッチ 抗体検査 タイピング方法 タイピング実施ローカス SSO SBT S3 I I FlowPRA S0 I I FlowPRA S4 I FlowPRA S03 I LABScreen, WAKFlow S3 I,FlowPRA, LABScreen S5 I I&II AHG, WAKFlow S I I I FlowPRA, LABScreen S0 I I&II LABScreen, WAKFlow S09 I I&II LABScreen S I FlowPRA, LABScreen S0 I LABScreen, WAKFlow S3 I LABScreen, WAKFlow S7 I LABScreen, WAKFlow S I LABScreen, WAKFlow S0 I MPHA, LABScreen, WAKFlow S3 I LABScreen, WAKFlow S9 I ICFA, LABScreen, WAKFlow S45 I&II WAKFlow S04 LABScreen S06 FlowPRA, LABScreen S6 LABScreen S4 LABScreen S35 LABScreen S37 LABScreen S40 LABScreen S43 MPHA, FlowPRA, LABScreen S5 LABScreen, WAKFlow 7 9 4 4 4 7 3 7 7 7 5 4 9 6 3 6 0 I HLAClass I I&II HLAClass I&II 6

仮想クロスマッチ サンプル H03 x SH04 H04 x SH04 SH04 H03 HLA Type SH04 H04 HLA Type A3 A*03:0 4 A*4:0,4 A A*:0 3 A33 A*33:03 3 B44 B*44:0 B7 B*5: 0 B5 B*5:0 03 B6 B*40:03 Cw0 C*03:04 47 Cw0 C*03:04 47 Cw5 C*05:0 453 Cw7 C*07:04 35 DR4 DRB*04:05 565 DR4 DRB*04:0 567 DR5 DRB*5:0 600 DR4 DRB*4:05 0 * DR53 DRB4*0:03 3,793 DR5 DRB3*0:0 * DR5 DRB5*0:0 9,63 DR53 DRB4*0:0 a,4 DQ4 DQA*03:03 DQB*04:0 0 DQ7 DQA*03:03 DQB*03:0 * DQ6 DQA*0:0 DQB*06:0 3 DQ5 DQA*0:04 DQB*05:03 b * DPw5 DPA*0:0 DPB*05:0 * DPw DPA*0:03 DPB*0:0 DPw5 DPA*0:0 DPB*05:0 * DPw5 DPA*0:0 DPB*05:0 * 0th.QCWS SA nmfi Average of 4 Labs. a SH04 HLA type b DQA*0:0 5,055 DRB4*0:0 DRB4*0:03,76 3,793 DQB*05:03 0 * 7

HLADR遺伝子 猪子英俊 笹月健彦 十字猛夫 移植 輸血検査学 講談社サイエンティフィク 34 004

DPA DQA DPB DQB DRB3/4/5 DRB C B A NGS Sanger GenoSearch WAKFlow LABType 仮想クロスマッチ結果 抗体検査 タイピング方法 仮想クロスマッチ結果 SSO SBT タイピング実施ローカス H03 H04 Lab ID FP: FlowPRA : LABScreen WF: WAKFlow 判定 スコア 反応が予測される特異性 判定スコア 反応が予測される特異性 S0 DR5, DR53 4,B6,DR53,DPw S04 3/4,B40/6 S06 FP, B6 S0 B6 S09 0 4,3,B6 S3 403 S6 3 4 B6 S7 B6 S DR5,DR53 4,B6,DR53 S0 MPHA, B6 S FP, 4,B6 S3 3,4,B6,DP S4 B6 S5 AHG, WF DR5 B6 S FP, 4,B6 S9 ICFA, B6 S35 DR5,DR53 4,B6,DR53,DPw S37 4 DR4,DR5 4,B6,DR4 S3,FP, DR4 3,4,B6 S40 4 B6 DR4 S43 MPHA, FP, 0 B6 S45 WF 4 DR5 B6 S5 DR4 DR5 3 4 B6 DR4 6 3 3 7 6 3 HLA クラス II 未検査 DR5, DR53 (4), B6, DR53, DPw 9

仮想クロスマッチ結果 抗体検査 タイピング方法 SSO WF: WAKFlow S0 S04 S06 S0 S09 S3 S6 S7 S S0 S S3 S4 S5 S S9 S35 S37 S3 S40 S43 S45 S5 FP, MPHA, FP, AHG, WF FP, ICFA,,FP, MPHA, FP, WF DPA DQA DPB DQB DRB3/4/5 DRB C B A NGS Sanger : LABScreen 6 仮想クロスマッチ結果 H03 SBT タイピング実施ローカス GenoSearch FP: FlowPRA WAKFlow LABType Lab ID 3 3 H03 7 6 3 判定 反応が予測される スコア 特異性 0 4 0 4 DR5, DR53 DR5, DR53 記入ミス H04xSH04 の結果 3 4 B6 DR5,DR53 DR5 DR5,DR53 DR4,DR5 DR4 抗体検査とタイ ピング結果から 予測 DR5 DR4 DR5 30

仮想クロスマッチ結果 抗体検査 タイピング方法 SSO WF: WAKFlow S0 S04 S06 S0 S09 S3 S6 S7 S S0 S S3 S4 S5 S S9 S35 S37 S3 S40 S43 S45 S5 FP, MPHA, FP, AHG, WF FP, ICFA,,FP, MPHA, FP, WF DPA DQA DPB DQB DRB3/4/5 DRB C B A NGS Sanger : LABScreen 6 仮想クロスマッチ結果 H03 SBT タイピング実施ローカス GenoSearch FP: FlowPRA WAKFlow LABType Lab ID 3 3 H03 7 6 3 判定 反応が予測される スコア 特異性 0 4 0 4 DR5, DR53 DR5, DR53 緑 DRB_BNV 3 4 B6 DR5,DR53 *5:0 WF+ *04:05 /*5:0 DR5 DR5,DR53 DR4,DR5 DR4 DR5 DR4 DR5,/,075 *04:05 465 *5:0 WF+ *04:05 /*5:0,56/,467 3

仮想クロスマッチ結果 抗体検査 タイピング方法 SSO WF: WAKFlow S0 S04 S06 S0 S09 S3 S6 S7 S S0 S S3 S4 S5 S S9 S35 S37 S3 S40 S43 S45 S5 DPA DQA DPB DQB DRB3/4/5 DRB C B A NGS Sanger : LABScreen 仮想クロスマッチ結果 H03 SBT タイピング実施ローカス GenoSearch FP: FlowPRA WAKFlow LABType Lab ID H03 判定 反応が予測される スコア 特異性 DR5, DR53 H03はDR4, DR5の抗体はMFIも000前 FP, 後で他に陽性となった抗体に比べるとかなり弱 い抗体である 抗体検査では陽性と判断してい 0 るが反応としては弱い ただしDRB*04:05 3 4 B6 DRB*5:0はDSAとなりうるので仮想クロ スマッチとしては判断を保留し 他の検査方法 DR5,DR53 MPHA,, WF と併せての判断が良いと思われた FP, AHG, WF FP, ICFA,,FP, MPHA, FP, WF 4 0 4 H03 DRB3/4/5の結果をハプロタイ プ頻度から推測すると 陽性 特異性 DR5 DR53 となる可能性があります 6 3 3 7 6 3 緑 DRB_BNV *5:0 WF+ *04:05 /*5:0 DR5 DR5,DR53 DR4,DR5 DR4 DR5 DR4 DR5 DR5, DR53,/,075 *04:05 465 *5:0 WF+ *04:05 /*5:0,56/,467 3

仮想クロスマッチ結果 抗体検査 タイピング方法 SSO WF: WAKFlow S0 S04 S06 S0 S09 S3 S6 S7 S S0 S S3 S4 S5 S S9 S35 S37 S3 S40 S43 S45 S5 FP, MPHA, FP, AHG, WF FP, ICFA,,FP, MPHA, FP, WF DPA DQA DPB DQB DRB3/4/5 DRB C B A NGS Sanger : LABScreen 6 仮想クロスマッチ結果 H04 SBT タイピング実施ローカス GenoSearch FP: FlowPRA WAKFlow LABType Lab ID 3 3 H04 7 6 3 判定 反応が予測される スコア 特異性 4,B6,DR53,DPw 3/4,B40/6 B6 B6 4,3,B6 403 (4), B6, DR53, DPw B6 4,B6,DR53 B6 4,B6 3,4,B6,DP B6 B6 4,B6 B6 4,B6,DR53,DPw 4,B6,DR4 3,4,B6 4 B6 DR4 B6 B6 3 4 B6 DR4 3 タイピング表 記の問題 なぜ 403か 記入ミス H03xSH04 へ入力 33

仮想クロスマッチ結果 抗体検査 タイピング方法 SSO WF: WAKFlow S0 S04 S06 S0 S09 S3 S6 S7 S S0 S S3 S4 S5 S S9 S35 S37 S3 S40 S43 S45 S5 FP, MPHA, FP, AHG, WF FP, ICFA,,FP, MPHA, FP, WF DPA DQA DPB DQB DRB3/4/5 DRB C B A NGS Sanger : LABScreen 6 仮想クロスマッチ結果 H04 SBT タイピング実施ローカス GenoSearch FP: FlowPRA WAKFlow LABType Lab ID 3 3 H04 7 6 3 判定 反応が予測される スコア 特異性 H04 DRB3/4/5の結果 をハプロタイプ頻度から推測す ると 特異性 DR53も陽性と なる可能性があります 4,B6,DR53,DPw 3/4,B40/6 B6 B6 4,3,B6 403 (4), B6, DR53, DPw B6 4,B6,DR53 B6 4,B6 3,4,B6,DP B6 B6 4,B6 B6 4,B6,DR53,DPw 4,B6,DR4 3,4,B6 4 B6 DR4 B6 B6 3 4 B6 DR4 緑 DRB_BNV *04:0,50 *04:0,06 *04:0,00 34

まとめ 仮想クロスマッチ DRB 遺伝子領域の構造を理解していないと DRB 抗体 () DRB345 抗体 (+) DRB345タイピング未実施の場合 仮想クロスマッチでは見逃す恐れがある 上記例でDRB345の抗原抗体反応を予測したラボがある 一方 連鎖するDRB 抗体の弱反応で判定したと思われるラボもあった タイピング領域とDRB 遺伝子領域構造の理解度及び抗体検査の手技 特に血清処理方法の違いにより 判定の相違を生じた このような例は C DQ DPローカスでも想定される 35