U-937 Technical Data Sheet 77% HTS-RT 法 96-well plate 試薬 D 1 μl 10,000g(10,000~12,000rpm) 4 で 5 分間遠心し 上清除去 sirna 溶液 (0.23μM final conc. 10nM) 20 倍希釈した

Technical Data Sheet HVJ Envelope sirna/mirna 導入キット ( 研究用 ) GenomONE - Si High throughput screening (HTS) のプロトコルとデータ集 1502GSHTS

U-937 Technical Data Sheet 77% HTS-RT 法 96-well plate 試薬 D 1 μl 10,000g(10,000~12,000rpm) 4 で 5 分間遠心し 上清除去 sirna 溶液 (0.23μM final conc. 10nM) 20 倍希釈した試薬 E U-937 への Eg5 sirna の導入 実験材料 方法 Cell : U-937(Human leukemic monocytic lymphoma cell line, ATCC:CRL-1593.2) Culture condition :5 10 3 cells/well/100μl, RPMI1640 medium with 10% fetal calf serum 96-well plate :IWAKI 1860-096 (Non-Treated) の HTS-RT 法を用いて U-937 に Eg5 sirna を導入したところ 77% のノックダウン効果が得られた 一方 他の導入試薬を用いた場合は 十分な効果が得られず の優位性が示された No.GS-HTS-001

THP-1 Technical Data Sheet 85% THP-1 への Eg5 sirna の導入 実験材料 方法 Cell : THP-1(Human acute monocytic leukemia cell line, ATCC:TIB-202) Culture condition :2.5 10 4 cells/well/100μl, RPMI1640 medium with 10% fetal calf serum 96-well plate :IWAKI 1860-096 (Non-Treated) HTS-RT 法 96-well plate 試薬 D 1 μl 10,000g(10,000~12,000rpm) 4 で5 分間遠心し 上清除去 sirna 溶液 (0.92μM final conc. 40nM) 20 倍希釈した試薬 E 37 5%CO 2 インキュベーターで培養 のHTS-RT 法を用いてTHP-1にEg5 sirnaを導入したところ 85% のノックダウン効果が得られた 一方 他の導入試薬を用いた場合は 十分な効果が得られず の優位性が示された No.GS-HTS-002

Jurkat Technical Data Sheet 77% Jurkat への Eg5 sirna の導入 実験材料 方法 Cell : Jurkat clone E6-1(Human T cell leukemia cell line, ATCC:TIB-152) Culture condition :2.5 10 4 cells/well/100μl, RPMI1640 medium with 10% fetal calf serum 96-well plate :IWAKI 1860-096 (Non-Treated) HTS-RT 法 96-well plate 試薬 D 1 μl 10,000g(10,000~12,000rpm) 4 で 5 分間遠心し 上清除去 sirna 溶液 (0.92μM final conc. 40nM) 再懸濁 HVJ-E * 20 倍希釈した試薬 E の HTS-RT 法を用いて Jurkat に Eg5 sirna を導入したところ 77% のノックダウン効果が得られた 一方 他の導入試薬を用いた場合は 十分な効果が得られず の優位性が示された No.GS-HTS-003

HeLa Technical Data Sheet 70% HeLa への Eg5 sirna の導入 実験材料 方法 Cell : HeLa (Human cervical carcinoma cell line, ATCC:CCL-2) Culture condition :4 10 3 cells/well/100μl, DMEM medium with 10% fetal calf serum 96-well plate :IWAKI 3860-096 (Tissue culture Treated) HTS-RT 法 96-well plate 試薬 D 1 μl 10,000g(10,000~12,000rpm) 4 で5 分間遠心し 上清除去 sirna 溶液 (1.15/3, 1.15μM final conc. 50/3, 50nM) 20 倍希釈した試薬 E の HTS-RT 法を用いて HeLa に Eg5 sirna を導入したところ 50/3nM で 65% 50nM で 70% のノックダウン効果が得られ 他の導入試薬を用いた場合と遜色ない効果が得られた No.GS-HTS-004

HeLa Technical Data Sheet 75% HTS-FT 法 96-well plate 細胞を培養用プレートに播種し 培養 24h 100μl/well 10 μl 試薬 D 2 μl 10,000g(10,000~12,000rpm) 4 で 5 分間遠心し 上清除去 sirna 溶液 (1.15/3, 1.15μM final conc. 50/3, 50nM) HeLa への Eg5 sirna の導入 実験材料 方法 Cell : HeLa (Human cervical carcinoma cell line, ATCC:CCL-2) Culture condition :2 10 3 cells/well/100μl, DMEM medium with 10% fetal calf serum 96-well plate :IWAKI 3860-096 (Tissue culture Treated) 20 倍希釈した試薬 E 予め細胞を播種 培養しておいたプレートの各ウェルに添加 混合 1 / well の HTS-RT 法を用いて HeLa に Eg5 sirna を導入したところ 50/3nM で 72% 50nM で 75% のノックダウン効果が得られた No.GS-HTS-005

Technical Data Sheet sirna Library transfection n=1 HTS-RT 法 96-well plate 30 μl 試薬 D 6 μl 10,000g(10,000~12,000rpm) 4 で 5 分間遠心し 上清除去 sirna 溶液 (0.23, 0.92μM final conc. 10, 40nM) 1 20 倍希釈した試薬 E U-937への sirna Library の導入 sirna Library(10, 40nM) transfection 2days WST-8 ( 細胞数測定, A 450 ) 実験材料 方法 Cell : U-937(Human leukemic monocytic lymphoma cell line, ATCC:CRL-1593.2) Culture condition :5 10 3 cells/well/100μl, RPMI1640 medium with 10% fetal calf serum 96-well plate :IWAKI 1860-096 (Non-Treated) sirna :sirna Library, Cell cycle-regulated genes(thermo Scientific Dharmacon) の HTS-RT 法を用いて U-937 に細胞周期調節に関わる sirna ライブラリーの sirna を導入したところ 4 種類の Positive な活性を示す sirna がヒットした 実験に用いた sirna Library はヒトの細胞周期関連遺伝子コレクションの sirna ライブラリーコレクションで 細胞分裂する際に必要な機能を阻害して細胞分裂の停止やアポトーシスが誘導される その現象を利用して sirna の導入効果を WST-8 法 ( 生細胞数測定法 ) にて定量的に評価 No.GS-HTS-006

Technical Data Sheet (HVJ-E sirna/mirna transfection kit) 使用上の注意 1. 本製品は 研究目的にのみご使用ください ヒト 動物への医療 臨床目的および生体内外診断の目的には使用できません 2. 本製品は 遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律 ( カルタヘナ議定書担保法 ) の規制を受けずにご使用いただけますが 組換え DNA 実験の実施に際しては 当該法律および各研究機関内の安全性委員会 の定める 組換え DNA 実験指針 を遵守し 実験目的に応じた適切な設備を有する実験室をご使用ください 3. 本製品を用いた実験は 細胞培養および遺伝子工学に関する基本的な知識と手技を習得した実験者により実施してください 4. 本キットに含まれる HVJ Envelope(HVJ-E) は HVJ( センダイウイルス ) を不活性化しており増殖性 感染性を完全になくしてありますが 膜の融合活性は 保持していますので 万一の人体への吸入や付着を防ぐため安全キャビネット内 で操作し 実験者は手袋 マスク等の防護具をご使用ください 5. 実験後の空容器の廃棄に際しても取扱に注意し 適切に処置してください 6. キット付属の他の試薬類については 毒物や劇物に属するものではありませんが 取扱に際しては手袋 マスク等の防護具をご使用ください 7. 凍結乾燥 HVJ-E は 無菌試験でバクテリア カビ類の混入がないことを確認して いますが 全ての微生物の存在を否定するものではありませんので ご使用に際 してはご注意ください 8. 本製品の使用によって生じた如何なる事故 損害に対しても 弊社では責任を負 いかねますので 予めご了承の上ご使用ください 9. 弊社の文書による事前許諾なしに本製品の商業目的でのご使用 製品の改変等に よる再販売はできません