Microsoft PowerPoint - On-chip Droplet Generator Final
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- あつとし かわらい
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2 Single Cell Compartmentalization by On-chip Droplet Generator 近年 water-in-oil( 油中 滴型 w/o) の液滴は その 1 つ 1 つが さな反応系としてデジタル PCR(ddPCR) や次世代シーケンス (NGS) などの遺伝 解析分野に於いて実 化されています 創薬の基礎 応 研究では細胞ベースのハイスループットスクリーニング (HTS) や 多くの 物活性や毒性を同時にアッセイするハイコンテンツスクリーニングの需要が まり アッセイ系のダウンサイジングが求められているなか マルチウェルプレートのウェルに替えて注 を浴び始めたのが in vitro compartmentalization(ivc) 法と呼ばれる w/o のエマルジョン内にて酵素反応や細胞内伝達を蛍光を標識にしてアッセイする 法です の反応系 =3 8 4 ウェルプレートが 2, 枚 従来の 法 ( マイクロタイタープレート ) 1 well 100μl 時間 コスト特定サンプルの回収が困難 の反応系 =1 チューブに 個のエマルジョン エマルジョン法 ( さい反応系 ) 1 エマルション 0.03nl 短時間低コスト特定サンプル ( エマルジョン ) を回収可能 On-chip Droplet Generator の原理 安定かつ均 な液滴 ( ドロップレット ) を作製弊社独 の使い捨てマイクロ流路チップを使 することで 安定かつ均 な液滴を作製することができます 容易な圧 制御により液滴 ( ドロップレット ) サイズを調節可能サンプルやオイルにかかる圧 を制御することにより 作製する液滴のサイズを調整することが可能です 観察ユニットで作製中の液滴 ( ドロップレット ) の観察可能付属の観察ユニットを使 することで 作製後の液滴を観察できます Emulsion Size distribution of the droplets Oil Oil %Max [μm] Sample Reagent
3 On-chip Droplet Generator によるエマルジョン封 例 腸菌 ミドリムシ 酵 テトラヒメナ その他 物 細胞 腸内細菌 環境微 物 原 物 物以外 DNA ビーズ 等々 On-chip Droplet Generator と の活 On-chip Droplet Generator と で拡がる研究領域 細胞 細胞構造体 菌体粒 等のカプセル化と 的細胞のソーティング cdna/ ペプチド / 化合物ライブラリーのカプセル化及びスクリーニング ddpcr と 的の遺伝 配列の検出など ( エマルジョン内 PCR) シース液にオイルを使 出来るので water-in-oil( 油中 滴型 w/o) の液滴を解析 ソーティングが可能 エマルジョンを利 した 的細胞の分離 複数種類の細胞混合液微 液滴への細胞の分画 的液滴の解析と分取 On-chip Droplet Generator エマルジョンを利 した細菌の分離 GFP 発現 腸菌の混合液微 液滴への 腸菌の分画と培養 的液滴の解析と分取 On-chip Droplet Generator エマルジョンを利 したデジタルドロップレット PCR(ddPCR) 複数種類の DNA 混合液微 液滴への DNA の分画と DNA の増幅 的液滴の解析と分取 On-chip Droplet Generator
4 On-chip Droplet Generator A Water-in-Oil Emulsion Droplet Generator with Full Potential On-chip Droplet Generator で作製した液滴内で ddpcr を い で回収する 装置と試薬 On-chip Droplet Generator ジェネレーターオイル( ミネラルオイルベース ) -Mineral Oil (Light Oil, Sigma, M8410) -Sun Soft No. 818SK (Taiyo Kagaku) -Span 80 (Sigma, S6760) PCR 試薬 -DNA templete -Primer -SsoFast EvaGreen Supermix (Biorad) 液滴の 成 順 ジェネレーターオイルとサンプル (PCR 試薬 ) を専 のマイクロ流路チップにいれ チップを On-chip Droplet Generator にセットする 専 ソフトを使い オイルとサンプルを加圧することにより チップ上でドロップレットが 成される 成されるドロップレットの きさは 圧 を変化させることにより調整 (20~100μm) できる 使 機器 PCR サーマルサイクラー On-chip Droplet Generator で液滴作製 ( 液滴サイズ 40μm) で液滴をソーティング Sorting Target 2.4% (Sample reservoir) Target 94%:Yield 94% (Collection reservoir) w/o エマルジョンを使った微 物の分離 同定 w/o エマルジョン中に細菌や細胞の成育環境を再現出来れば 環境微 物の探索や 的細胞の分離 同定に有効な 段となる 1)BFP 発現 腸菌の封 と培養 (On-chip Droplet Generator) 及びソーティング () 装置と試薬 E.coli expressing GFP in PBS + Km (approx. 1 cell in 1 droplet) 腸菌濃度は 1x10 6 個 /ml に調整 Mineral oil: Span80 4.5%, Triton X % Droplet Generator: sample/7.3kpa, sheath/9.5kpa about 40μm 20 時間 チップ内 室温で静置培養 0 時間 4 時間 20 時間 20 時間後 FL2 強度 い領域をソーティング 2) テトラヒメナの封 と培養装置と試薬 Tetrahymena in AB + penicillin (approx. 1 cell in 1 droplet) 原 物濃度は1x10 5 /mlに調整 Pico-Surf 1 (2% (w/w) in Novec 7500) Droplet Generator: sample/7.0kpa, sheath/11.0kpa about 120μm 100um 100um 0 時間 2 間培養 100um 家蛍光の強度 い領域をソーティング
5 On-chip Droplet Generator A Water-in-Oil Emulsion Droplet Generator with Full Potential 8 連チップを いて 安定なエマルジョンをシンプルに 量作製 仕様 : サンプルリザーバー容量 :20 100μL オイルリザーバー容量 :20 200μL エマルションリザーバー容量 : 最 200μL 適 サンプル : 溶液 培養液適 オイル : フッ素系オイルチップ素材 : 樹脂 (COP) 流路サイズ :30μm x 30μm( レーン1 8まで全て同じ ) 成時間 : サンプル オイルの組成及び 成時の圧 によるオイルの消費 率 : サンプルとオイルの組成 成時の圧 により消費 率は変化します 20µL サンプルあたりのドロップレット数 : 最 100 万個 ( 直径 30μmエマルジョン 成時 ) 製品番号製品名製品概要包装単位 DG8 Chip Holder (8 lane) 8 連ホルダー観察ユニット 1 個 D chip-800dg (8 連チップ ) ドロップレット作製 8 連チップ (COP) 10 chips/ 箱 On-chip Droplet Generator の主な仕様 本体サイズ 270 x 270 x 280 mm (W x D x H) チップチップ素材サンプル量オイル量送液圧 使い捨てマイクロ流路チップ樹脂 μl μl 7 80 kpa 最 送液系統 3 系統 ( サンプル オイル 他試薬 ) オイル ミネラルオイル フッ素系オイル 作製液滴サイズ直径 μm( 任意で調整可能 ) 成速度毎分 25,000 個 (40 μm 液滴作成時 ) 制御 ノート PC(Windows) 製品番号製品名仕様概要送液系統使 オイル液滴サイズ 成速度 On-chip Droplet Generator 本体 チップホルダー 観察ユニット 制御 PC 3 系統 ( サンプル オイル 試薬 ) ミネラルオイルフッ素系オイル 直径 μm 毎分 25,000 個 (40μm 作製時 ) A On-chip Droplet Generator ( 本体のみ ) 本体 チップホルダー 制御 PC 3 系統 ( サンプル オイル 試薬 ) ミネラルオイルフッ素系オイル 直径 μm 毎分 25,000 個 (40μm 作製時 ) お問い合わせ先 株式会社オンチップ バイオテクノロジーズ Phone: Fax: info@on-chip.co.jp
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