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- あやか こうじょう
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3 P. mirabilisの Table 1 Analysis of pathogenecity mirabilis of various 病 原 性 発 現 因 子 の解 析 P. Table Distribution strains. of piliated cells in various P. mirabilis. Data were expressed P. mirabilis as % of each category of cells. 25お よびNo. 30で は 各 々 お 106と 強 力 な 毒 性 を示 した. No. よ び3.5 1で は で あ っ た.以 上 の よ うに 臨 床 分 離 株 は 比 較 的 高 い病 原 性 を有 す る こ とが 明 か と な っ た の で 以 下 の 実 験 に お い て これ らの 菌 株 に お け る個 々 の 病 原 性 発 現 因 子 へ の 解 析 を加 え た. 2. P. mirabilisの 近 年,付 付 着 因 子 の解 析 着 に 関 与 す る菌 体 側 因 子 と して 線 毛 の 存 在 が 重 要 視 され て い る の で 臨 床 分 離P. mirabilisに お け る 線 毛 と各 種 細 胞 に 対 す る付 着 活 性 に解 析 を加 え た. Fig. 1に 代 表 的 な 菌 株 に み られ る線 毛 の ネ ガ テ ィ ブ 染 色 像 を示 した.す Fig. 1 Electron micrographs of two types of pili observed in clinically isolated P. mirabilis strains. A: 7 P pili of No. 25, B: な わ ち,線 毛 の 径 が7nm,中 1A)と,線 5 P pili of No. 30. Bar, 100nm. 空 の ため 線 毛 の 中 へ 染 色 液 の 侵 入 が 認 め ら れ る直 線 的 な7 P(Fig. 毛 の径 が4-5nm,線 毛 内に染 色 液 の 侵 入 が 認 め ら れ な い 曲 が り くね っ て い る5 ウ ス に 対 す る致 死 活 性 をLD50の め た. Table 1に 示 した ご と く,臨 床 分 離 株 は 全 て ラ ッ トの 致 死 活 性,腎 形 成 を 示 し た.特 にNo. の 形 成 を認 め,そ 4-5mm径 測 定 に よ り求 膿瘍 お よび尿路 結石 6株 は 高 率 に 尿 路 結 石 の うちの膀胱 結石 の大 きさは P (Fig. 1 B)に 大 別 さ れ た. 動 物 通 過 後TSBに お け る 線 毛 の種 類,線 毛 密 度 は,ネ 作 為 に 各 々100個 選 び,電 子 顕 微 鏡 観 察 に よ り調 べ た.結 果 をTable 30は 他 の2株 P線 毛 保 有 菌 が23%, の臨床分 離株 に比べや や 高 い 致 死 活 性 を示 し た.ま た, No. 30に お い て は 腎 膿 瘍 が 高 率 に観 察 され た.一 に お い て は1匹 て い た が,致 だ け 約1mm径 方, No. 1 の 膀 胱 結 石 を有 し 死 活 性 お よ び 腎 膿 瘍 は 全 く観 察 さ マ ウ ス に お け るLD50の 測 定 か ら,臨 床 分 離 株 は 全 て108オ ー ター 以 下 の菌 数 を示 し,特 にNo. 2に 示 し た. No. 2は, 5 7 P線 毛 保 有 菌 が2%で, 各 線 毛 の 密 度 は 非 常 に低 か っ た. No. P線 毛 保 有 菌 の 割 合 が88%と 菌 は 存 在 しな か っ た.ま 6は, 5 高 く, 7 P線 毛 保 有 た, No. 6はNo. 2と 同 様 菌 の 個 体 当 りの 線 毛 密 度 は低 か っ た. No. 25 は, 98%が7 れ なか っ た. 目の各菌株 に ガ テ ィブ 染 色 を施 し た各 菌 株 を無 に達 す る もの が 多 く存 在 した. No. 25 お よ びNo. て 継 代3代 毛保 有菌 の割合 お よび線 P線 毛 を保 有 して お り,線 毛 保 有 菌 の 線 毛 密 度 も非 常 に 高 か った(Fig. 30は, 45%の 1 A). No. 菌 が5 P線 毛 を有 し,線 毛 保 有 菌
4 966 室 Table *: **: 3 Adherence of various 谷 P. mirabilis 勝 久 to bladder epitherial Distribution of adherent bacterial numbers among 20 bladder Mean of adherent bacterial numbers on one bladder epitherial cells epitherial cell. of mice and rats. cells. に お け る 線 毛 密 度 は 非 常 に 高 か っ た(Fig. 1 B). ま た, 2%の 菌 は7 P線 毛 を保 有 して い た が, こ れ らの 菌 にお け る線 毛 密 度 は著 し く低 か っ た. い ず れ の 菌 株 に お い て も同 一 菌 体 に2種 類 の 線 毛 を有 す る も の は な か っ た.な 毛保 有 菌 の 割 合 が10%以 お, No. 1は 線 下 で あ り,保 有 菌 に お け る 線 毛 密 度 も著 し く低 か っ た. Table 3に は 各 菌 株 の 剥 離 した マ ウ スお よび ラ ッ ト膀 胱 上 皮 細 胞 へ の 付 着 性 を ま とめ た.い ず れ の 菌 株 に お い て も膀 胱 上 皮 細 胞 へ の 付 着 菌 数 に は 大 きな ば らつ きが 存 在 した.単 一の 細胞 当 りの付 着 菌 数 を比 較 して み る と,線 毛 の タ イ プ に 関係 な く,線 毛 密 度 の 高 い菌 株(No. よ びNo. 25お Fig. 2 Micrograph of piliated P. mirabilis ad herence to exfoliated mouse bladder epitherial cell. The adherence pattern is 30)に お い て 高 い 付 着 菌 数 を 示 し た. そ れ ぞ れ の 菌 株 で マ ウ ス と ラ ッ トの 膀 胱 上 皮 細 obtained by No. 25. Bar, 0.1mm. 胞へ の 付 着 性 に有 意 差 は 殆 ど認 め られ な か っ た. な お,こ れ らの 菌 の 付 着 性 は反 応 液 中 に0.1Mマ 哺 乳 動 物 赤 血 球 に 広 く凝 集 を示 し,差 と して は, ン ノー ス の 添 加 を行 っ て も阻 止 さ れ な か っ た. 前 者 の み が 羊 と家 兎 の 赤 血 球 凝 集 性 を示 し た. Fig. 2は,マ ウ ス 膀 胱 上 皮 細 胞 へ 最 も 良 く菌 が 付 着 した 例 を 示 した. 線 毛 の レ セ プ タ ー 認 識 能 の特 異 性 に 解 析 を加 え る ため,各 こ れ ら菌 株 に お い て 観 察 さ れ た赤 血 球 の 凝 集 性 は い ず れ も反 応 液 へ の マ ン ノー ス の 添 加 で 阻 害 菌 株 に お け る各 種 動 物 赤 血 球 凝 集 性 に検 討 を加 え た.血 球 凝 集 能 は4, 37 の 各 温 度 条 件 で 調 べ た. Table 20, 4に 示 さ れ を受 け なか っ た. 3. ウ レ ア ー ゼ 活 性 お よび ウ レ ァ ー ゼ 阻 害 剤 の 影響 ウ レ ア ー ゼ は, Proteus属 細 菌 に お い て は その る ご と く,各 菌 株 共 反 応 温 度 の上 昇 に 伴 っ た 凝 産 生 量 が 高 い こ とか ら有 力 な病 原 因 子 と考 え ら 集 活 性 の 増 加 と凝 集 赤 血 球 の ス ペ ク トル の 広 が れ て い る.臨 床分P. mirabillisの りが 観 察 さ れ た.ま 活 性 の 測 定 を行 っ た 結 果,培 た,臨 床 分 離 の4株 類 の 赤 血 球 を最 も良 く凝 集 し た. No. 6は ほ ぼ 同 一 の 成 績 を示 した.そ 血 球 の ス ペ ク トル が 広 いNo. 共 に烏 2とNo. し て,凝 集 赤 25とNo. 30で は ウレアーゼ 地 中に尿素 が存在 し な い場 合 に は 菌 株 に 関 係 な くウ レア ー ゼ 活 性 の80-85%が, に は90-95%が 0.6%尿 素 存 在 下 で 培 養 した 場合 菌 体 画 分 に 活 性 が 存 在 した.そ
5 Table 4 Agglutinabilities of various P. mirabilis against the red blood cells of different animal species. Table 5 Summary of urease activity kinetics of various P. mirabilis grown in media with or without urea. Fig. 3 Urease activities of P. mirabilis (No. 25) grown in media with and without urea (A) and those kinetics analysis (B).
6 Table 6 Summary of chemotaxis assay of P. mirabilis to various rat tissue extracts. *: Chemotaxis to rat tissue extracts was measured by U -tube method. **: Concentration of tissue extracts adjusted to 0.4mg/ ml and 0.1ml of each used chemotaxis experiments. Fig. 4 Analysis of swarming ability and chemo taxis of P. mirabilis No. 25 to tissue extracts. The tissue extracts put on ter minal side of medium in U-shape tube were abbriveated as kidney (K), ureter (U), spleen (S), liver (L), bladder (B) and PBS (N).
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8 1) Senior BW: Proteus morgani is less frequently associated with urinary tract infections than Proteus mirabilis-an explanation. J Med Microbiol (1983) 16, ) Braude AI, Shapiro AP and Siemienski J: Hematogenous pyelonephritis in rat. iii. Relationship of bacterial species to the pathogenesis of acute pyelonephritis. J Bacteriol (1959) 77, ) Senior BW, Bradford NC and Simpson DS: The ureases of Proteus strains in relation to virulence for the urinary tract. J Med Microbiol (1980) 13, ) Senior BW: The special affinity of particular types of Proteus mirabilis for the urinary tract. J Med
9 Microbiol (1979) 12, ) MacLaren DM: The significance of urease in Proteus pyelonephritis: A histological and biochemical study. J Pathol (1969) 97, ) Pazin GJ and Braude AI: Immobilizing antibodies in urine. II. Prevention of ascending spread of Proteus mirabilis. Invest Urol (1974) 12, ) Silverblatt FJ : Host-parasite interaction in the rat renal pelvis. A possible role for pili in the pathogenesis of pyelonephritis. J Exp Med (1974) 140, ) Adegbola RA, Old DC and Senior BW: The adhesins and fimbriae of Proteus mirabilis strains associated with high and low affinity for the urinary tract. J Med Microbiol (1983) 16, ) Wray SK, Hull SI, Cook RG, Barrish J and Hull RA: Identification. and characterization of a uroepithelial cell adhesin from a uropathogenic isolate of Proteus mirabilis. Infect Immun (1986) 54, ) Old DC and Adegbola RA: Haemagglutinins and fimbriae of Morganella, Proteus and Providencia. J Med Microbiol (1982) 15, ) Duguid JP and Old DC: Adhesive Properties of Enterobacteriaceae. Beachey EH Ed"Bacterial Adherence" (1980)p , Chapman and Hall, London. 12) Sareneva T, Holthofer H and Korhonen TK: Tissue-binding affinity of Proteus mirabilis fimbriae in the human urinary tract. Infect Immun (1990) 58, ) Larsson P and Oiling S: O antigen distribution and sensitivity to the bactericidal effect of normal human serum of Proteus strains from clinical specimens. Med Microbiol Immunol (1977) 163, ) Peerbooms PG, Marian A, Verweij JJ and MacLaren DM: Urinary virulence of Proteus mirabilis in two experimental mouse models. Infect Immun (1982) 36, ) Reed LT and Muench H: A simple method of estimating fifty per cent endopoints. Am J Hyg (1938) 27, ) Akamatsu S: Some Micromethods for Enzyme Studies. J Biochem (1952) 39, ) Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL and Randall RJ: Protein measurement with Folin phenol reagent. J Biol Chem (1951) 193, ) Griffith DP, Musher DM and Campbell JW: Inhibition of bacterial urease. Invest Urology (1973) 11, ) Griffith DP and Musher DM: Prevention of infected urinary stones by urease inhibition. Invest Urology (1973) 11, ) Ferrero RL, Hazell SL and Lee A: The urease enzymes of Campylobacter pylon and a related bacterium. J Med Microbiology (1988) 27, ) Carrick J, Lee A, Hazell SL, Ralston M and Daskalopoulos G: Campylobacter pylon duodenal ulcer and gastric metaplasia possible role of functional heterotropic tissue in ulcerogenesis. Gut (1989) 30,
10 Analysis of pathogenic factors of Proteus mirabilis isolated from urinary tract infection Katsuhisa Department MUROTANI of Microbiology, Okayama University Medical School, Okayama 700, Japan (Director: Prof. Y. Kanemasa) Proteus mirabilis has several pathogenic factors such as adherent ability to urinary tract epitherial cells, urease, motility and resistance to urine. The pathogenic activities of clinically isolated P. mirabilis were analyzed. Higher pathogenic strains (No. 25 and No. 30) which had morphologically different pili but had a higher density of pili showed strong adherent activity to bladder epithelial cells of mouse and rat. These strains also showed a clear chemotaxis to urinary tract tissue extracts. These findings indicate that the combination of adherent, chemotaxis and urease activities is essential for causing of tipical kidney infection by P. mirabilis.
腹 部 救 急 診 療 の進 歩 表 面 を走 査 型 電 子 顕 微 鏡 で5,000倍 し, Vol.11.(3) 1991 の視 野 で観 察 1視 野 あ た り の 平 均 付 着 菌 数 を 算 出 した 対 象 と し た 臨 床 例 は, 名 古 屋 市 立 大 学 第1外 科 に
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