エンドトキシン　ペプチドグリカン・ベータ-グルカン

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1 微生物細胞壁成分検出用試薬および関連商品 エンドトキシン ペプチドグリカン β- グルカン

2 Endotoxin(LPS) Factor C Factor C (1 3)- β -D-Glucan Factor B Factor B Factor G Factor G Proclotting enzyme Clotting enzyme Coagulogen Coagulin Peptidyl-pNA Peptide + pna

3 エンドトキシン検出用試薬エンドトキシン試験関連試薬ペプチドグリカンおよびβ- グルカン検出用試薬その他関連試薬エンドトキシン測定用機器関連器材C O N T E N T S エンドトキシン試験の基本 2 7 ライセート試薬選択のフローチャート 8 9 ホームページ Wako LAL システム 紹介 10 エンドトキシン検出用および関連試薬 エンドトキシン検出用試薬 エンドトキシン特異的試薬 リムルス ES の原理 リムルス ES-Ⅱシリーズ PYROSTAR ES-F シリーズ PYROSTAR ES-F/Plate リムルスカラー KY シリーズ リムルス ES-Ⅲ リムルス PS シングルテストワコー リムルス ES-Ⅱプラス CS シングルテストワコー エンドトキシン試験関連試薬 エンドトキシン非特異的試薬リムルス HS-T シングルテストワコー 標準品 エンドトキシン検出用抽出液 ペプチドグリカンおよび β - グルカン検出用試薬 SLP- HS シングル試薬セット Ⅱ その他関連試薬 LPS( リポポリサッカリド ) エンドトキシン測定用機器および関連器材 エンドトキシン測定用機器 トキシノメーター ET MPR エンドトキシン測定システム for BT サーモステーション TS-37S/ バイアルチューブミキサー V TM-252Ⅱ トキシノメーター ET-Mini & リムルス ES-Ⅱプラス CS シングルテストワコー バリデーション サポート サービス ( トキシノメーター MPR エンドトキシン測定システム ) 関連器材 バイオクリーンシリーズ アクロディスク シリンジフィルター アクロディスク ムスタング E メンブレン セルファイン E T クリーン 関連サービス エンドトキシン試験受託サービス 主な関連試薬 器材一覧表 関連サービス1

4 エンドトキシン試験の基本 エンドトキシンとは エンドトキシンの生物活性と耐熱性 エンドトキシンはグラム陰性菌の細胞壁を構成するリポ多糖です Lipopolysaccharide とも呼ばれ 通称 LPS と呼ばれています エンドトキシンは代表的な発熱物質であり pg (10 12 g) や ng (10 9 g) という微量でも血中に入ることで 発熱などの種々の生体反応を引き起こします 特徴としては 高い耐熱性が挙げられます オートクレーブ処理程度では完全に失活することはできません 完全に失活させるためには 250 以上で 30 分以上の乾熱滅菌が必要です グラム陰性菌はどこにでも存在し 菌が死んでもエンドトキシンは残ります エンドトキシンはマクロファージや樹状細胞の TLR4 (Toll-like receptor4) に結合し NF-kB を介して核に作用して各種サイトカインを産生します 産生されたサイトカインによって種々の生物活性を示します エンドトキシンの構造 図 1 に構造の模式図を示します リピド A 部分が生物活性を担う本体であり この部分の分子量は約 2 千です 糖鎖部分を含んだ全体は通常分子量 5 千から8 千程度です ただし エンドトキシンは親水性部分 ( 糖鎖 ) と疎水性部分 ( リピド A) を持つ分子であるため 水溶液中で会合し 見かけの分子量が数十万 数百万のミセル構造をとります ミセル構造が変化すると生物活性の強弱も変化することが報告されています 図 1 リポ多糖の構造 高岡文 (2011) 防菌防黴,39,47-56 より引用 2

5 エンドトキシン測定について エンドトキシンがライセート試薬中に含まれる因子を増幅活性化し 一連の反応によるゲル化 濁度増加 合成基質の切断による黄 発色を測定し エンドトキシン量を判定します 反応機構エンドトキシン試験には カブトガニの血球抽出物から作られるライセート試薬を使います 試料にエンドトキシンが含まれる場合 いずれもセリンプロテアーゼ前駆体である Factor C Factor B Proclotting enzyme が順次 増幅活性化されていきます ( 図 2) 最終的に Coagulogen が水解されて Coagulin となり 不溶性のゲルとなります 試験では 一連の反応によるゲル化 濁度増加 合成基質の切断による黄色発色を測定し エンドトキシン量を判定します Endotoxin(LPS) Factor C Factor C (1 3)-β-D-Glucan Factor B Factor B Factor G Factor G Proclotting enzyme Clotting enzyme Coagulogen Coagulin ( ゲル化 濁度増加 ) または Peptidyl-pNA Peptide + pna( 黄色発色 ) 合成基質 内の各因子は活性型を示す 図 2 ライセート試薬の反応機構 ライセート試薬 ( エンドトキシン非特異的試薬 ) には Factor G を介した反応経路もあります そのためエンドトキシン以外に真菌の細胞壁に含まれる構成成分 β - グルカンに対する反応も起こります このように本来のライセート試薬はエンドトキシン非特異的ですが Factor G を取り除くか その作用をブロックすることにより エンドトキシンに特異的なライセート試薬を調製することができます エンドトキシン測定では 求められる測定精度や 試験頻度 検体数などを総合的に考慮して適切な試薬選択が必要です 3

6 ゲル化法試験管中でライセート試薬と検体を混合し 37 ± 1 で 60 ± 2 分間 振動を与えないようにブロックヒーターなどで加温します 加温終了後ただちに試験管をゆっくりと 180 転倒し 変形したり崩れたりしないゲルが形成していれば陽性 形成していなければ陰性と判定します 検体を 2 倍段階希釈することにより どの希釈倍数まで陽性判定されるかを調べます 陽性判定された最も大きい希釈倍数 ( あるいは最小濃度 ) をエンドポイントと呼びます 対応試薬 : ES-Ⅱ シリーズ E S - F シリーズ 陽性 (+) 陰性 ( ) 比色法 エンドトキシンによるライセート試薬の活性化を発色合成基質が切断されることで検出する方法です p - ニトロアニリンの黄色発色を 405 nm 付近の吸光度変化で測定するため 検体が 405 nm 付近に大きな吸収を持つと適用できません 対応試薬 : カラー K Y シリーズ 比濁法エンドトキシンによるライセート試薬の活性化を ゲル化に伴う濁度変化で検出する方法です 濁りが大きい検体には適用できません 対応試薬 : ES-Ⅱ シリーズ ES-Fシリーズ HS-T シングル ES-Ⅲ PS シングルテスト 4

7 エンドトキシン標準品 実施する試験目的にあったエンドトキシン標準品をご使用ください 医薬品の最終製品検査など 日本薬局方に準拠する試験を行う 必ず薬局方エンドトキシン標準品をご使用ください 原料検査 工程検査などを行う 米国で販売する薬剤 (FDA 規制 ) の最終試験を行う Control Standard Endotoxin(CSE) の使用が可能です 5

8 使用器具の影響 エンドトキシン特異的試薬を用いてエンドトキシン試験を行う際に使用する器具は エンドトキシンフリーのものを使用しなければなりません 250 以上で 30 分以上の乾熱がエンドトキシン不活化には必要ですので 通常は乾熱滅菌したガラス器具を使用します 微量に溶出する金属イオン (Fe Al Ga Cr 等 ) が試験に影響するので 金属製器具の使用は避けてください 使い捨てのプラスチック器具等は メーカーによる保証のあるものを除いて 下記事項を ガラス製器具と比較 確認してからご使用ください ❶エンドトキシンの汚染がない ❷エンドトキシンが吸着しない ❸ 試験結果に影響する溶出物がない 試料の影響 エンドトキシン試験を実施する際には 試料が試験におよぼす影響 ( 反応干渉因子 ) に注意が必要です ❶ライセート試薬に影響するもの 蛋白変性作用のあるもの ( 酸 アルカリ 尿素 界面活性剤 有機溶剤 ) プロテアーゼ プロテアーゼ阻害剤 キレート剤 ( 反応に必要な Ca や Mg が捕捉される ) 比色法の場合 着色物質 (405 nm 付近に大きな吸収を持つ物質 ) 比濁法の場合 濁り ❷エンドトキシンに影響するもの 金属イオン (Fe Al Ga Cr イオン等 μm 程度でも影響あり ) 界面活性剤 試料の影響の有無は 既知量のエンドトキシンを添加した検体を測定し 添加したエンドトキシン量の回収率を求める試験によって判断します 薬局方では反応干渉因子試験と呼ばれている試験です 比色法 比濁法 ( 光学的定量法 ) では添加したエンドトキシンの回収率が % の範囲であれば試料は測定に影響せず 試料はその濃度でエンドトキシン試験に影響を与えないといえます 試料の影響が見られた場合 試料を希釈して測定すると影響を軽減することができます ただし 試料を希釈すると 原液換算 ( 希釈する前の液 ) で検出できるエンドトキシンの濃度が高くなってしまいます 希釈可能な倍数 ( 最大有効希釈倍数 ) は 検出したいエンドトキシン濃度と用いるライセート試薬の検出感度によって決まります ( 反応干渉因子試験や最大有効希釈倍数の詳細は 日本薬局方のエンドトキシン試験法を参照してください ) 一方ゲル化法では 反応干渉因子試験に用いる試料溶液は 用いるライセート試薬が必ず陰性判定である事が必須です すなわち 使用するライセート試薬の検出感度以上のエンドトキシンが混入していると この試験は実施できません エンドトキシンが混入していない試料の入手が困難な場合は 原則としてゲル化法ではなく光学的定量法で対応ください また ライセート試薬を より感度の低いものに変更することで試験が可能となる事もあります 6

9 適用分野 注射剤製剤の種類によって 薬局方 生物学的製剤基準 ( ワクチン 血液製剤などに関して規定 ) 学会基準 (PET 薬剤 : 日本核医学会院内製造 PET 薬剤基準 ) などで規定されています ( 薬局方では 皮内 皮下および筋肉内投与のみに用いるものは除く ) 医療機器厚労省通知 ( 薬食機発 0301 号第 20 号 ) に別添付された 医療機器の生物学的安全性試験法ガイダンス には 医療機器のエンドトキシン管理に関しての記載があります また 滅菌済み注射針などをはじめとする多くの医療機器については JIS でエンドトキシン規格が定められています 再生医療等製品厚労省から ヒト ( 同種 )ips( 様 ) 細胞加工医薬品等の品質および安全性の確保に関する指針 をはじめとした各種指針が出されています また 最終製品のみならず 培地 原料に関してもエンドトキシン管理の必要性が認識されています バイオ医薬品厚労省通知 ( 薬食審査発 1214 第 1 号 ) の 抗体医薬品の品質評価のためのガイダンス に 抗体医薬品原薬又は製剤の規格及び試験方法において参照される日本薬局方一般試験法として エンドトキシン試験法があげられています 透析用剤製剤は薬局方で規定されており 調製後の透析液に関しては別に学会基準 ( 透析医学会基準 日本臨床工学技士会ガイドライン ) や ISO で水質基準が定められています 参考資料 ( もっとよく知るために ) エンドトキシン試験の実施方法 ❶ 第 17 改正日本薬局方 ( エンドトキシンの構造や作用機構など全般 ❷ 棚元憲一 エンドトキシンと医薬品の品質管理 Bull. Natl. Inst. Health Sci., 126, 19-33(2008) ( ❸レギュラトリーサイエンス財団 HP 技術情報 ( 厚労省 抗体医薬品の品質評価のためのガイダンス について ( 7

10 ライセート試薬選択のフローチャート チューブリーダー法 エンドトキシン特異的試薬 ゲル化法 日本薬局方 FDA 対応 比濁法 日本薬局方 FDA 対応 簡便法 比色法 日本薬局方 エンドトキシン非特異的試薬 比濁法 日本薬局方 マイクロプレートリーダー法 エンドトキシン特異的試薬 比濁法 FDA 対応 比色法 日本薬局方 8 * 本カタログでは CSE : Control Standard Endotoxin のこと

11 シングルテスト CSE 付 リムルス ES-Ⅱ シングルテストワコー P.13 マルチテスト CSE 付 リムルス ES-Ⅱ テストワコー P.13 カブトガニ血球抽出物 ES-Ⅱ P.13 シングルテスト CSE 付 PYROSTAR ES-F シングルテスト P.14 マルチテスト PYROSTAR ES-F マルチテスト without CSE P.14 シングルテスト CSE 付 リムルス ES-Ⅱ シングルテストワコー P.13 リムルス PS シングルテストワコー 1 P.22 マルチテスト CSE 付 リムルス ES-Ⅱ テストワコー P.13 カブトガニ血球抽出物 ES-Ⅱ P.13 カブトガニ血球抽出物 ES-Ⅲ 2 P.20 シングルテスト CSE 付 PYROSTAR ES-F シングルテスト P.14 マルチテスト PYROSTAR ES-F マルチテスト without CSE P.14 シングルテスト 低 CSE 付 リムルス ES-Ⅱ プラス CS シングルテストワコー 3 4 P.24 シングルテスト CSE 付 リムルスカラー KY シングルテストワコー P.18 マルチテスト CSE 付 リムルスカラー KY テストワコー P.18 シングルテスト CSE 付 リムルス HS-T シングルテストワコー 4 P.26 1: 水に不溶なサンプルに適した比濁法専用試薬 2: 生物学的製剤に適した比濁法専用試薬 3: 日本薬局方のエンドトキシン試験法には準拠しておりません 4: 比濁法専用試薬 シングルテスト マルチテスト 1 回の測定分のライセート試薬が反応用試験管にあらかじめ分注されているタイプ ライセート試薬をエンドトキシン試験用水で溶解し 反応用試験管またはプレートに必要量分注し使用するタイプ マルチテスト CSE 付 PYROSTAR ES-F/Plate with CSE P.16 PYROSTAR ES-F/Plate without CSE P.16 マルチテスト CSE 付 リムルスカラー KY テストワコー P.18 9

12 Wako LAL システム エンドトキシン Web サイトです ( エンドトキシン試験情報を配信しています ) エンドトキシン試験についての基礎知識から技術資料 セミナー / 講習会開催の情報まで幅広い内容をご提供致します また L AL データシート 等も掲載しています 是非ご活用下さい LAL データシート : 各試薬のロットごとの活性化時間 ( 和光データ ) を確認できます Wako LAL システム検索 10

13 エンドトキシン検出用および関連試薬 エンドトキシン検出用試薬 エンドトキシン特異的試薬リムルス ES の原理リムルス ES-Ⅱシリーズ PYROSTAR ES-Fシリーズ PYROSTAR ES-F/Plate リムルスカラー KYシリーズリムルス ES-Ⅲ リムルス PS シングルテストワコーリムルス ES-Ⅱプラス CS シングルテストワコー エンドトキシン試験関連試薬 エンドトキシン非特異的試薬リムルス HS-T シングルテストワコー 標準品 エンドトキシン検出用抽出液 ペプチドグリカンおよびβ - グルカン検出用試薬 SLP- HS シングル試薬セット Ⅱ その他関連試薬 LPS( リポポリサッカリド ) 11

14 エンドトキシン検出用試薬 ル化時時間間((分分)) カードランを含むエンドトキシン希釈系列ゲ ES( エンドトキシン特異的反応試薬 ) の原理)リムルス ライセート試薬とエンドトキシンの反応カスケード機構は図 1 に示すとおりです 反応系に (1 3) - β -D - グルカン が存在するとファクター G を活性化し エンドトキシンがなくてもゲル化する いわゆる偽陽性反応が起こります このままではエンドトキシンに特異的とは言えません 当社が 開発したリムルス ES は反応系に大過剰の (1 3)- β -D - グルカン ( カルボキシメチル化カードラ ン ) を共存させることにより β - グルカンによるライセート試薬の活性化を阻害し エンドトキシ ンを特異的に検出する方法です なぜ大過剰のβ - グルカンがそれ自身の反応を阻害するかについては 図 2 に示すとおり β - グル カンとライセート試薬の反応領域が狭い濃度範囲であることによります しかしながら エンドト キシンとリムルスの反応は低濃度から高濃度までの広い領域で反応し 大過剰のβ - グルカンの 共存でも阻害されないことがリムルス ES に応用されています ( 図 3) :(1 3)- β -D- グルカンはカビ ( 真菌 ) やセルロース系のろ過膜から由来します 図 1 リムルステストの反応カスケード ゲ ル化 :1 μg/ml の CM- 図 2 CM- カードランと LAL の反応性 図 3 リムルス HS およびリムルス ES を用いたエンドトキシン測定に トキシノメーター の測定時間を 99 分に設定し 及ぼすCM-カードランの影響 リムルス HS を用いて測定した A : リムルス HS を使用 B: リムルス ES を使用 :99 分以内にゲル化判定されなかったもの 測定はトキシノメーター を用いて 測定時間 99 分で行った : ゲル化判定されたもの : エンドトキシン希釈系列 ゲル化時間(分 リムルス HS とは エンドトキシン非特異的反応試薬を意味します 12

15 検出用試エンドトキシン検出用試薬 リムルス ES- Ⅱ シリーズ 比濁法ゲル化法エンドトキシン特異的日本薬局方 薬13 エンドトキシン特長 検体中の (1 3)- β -D- グルカンの影響を受けることなく エンドトキシンを特異的に検出可能 日本薬局方収載 エンドトキシン試験法 に適合したキットおよび試薬 日本薬局方標準エンドトキシン (JP-RSE) によるゲル化感度検定力価 (EU/mL) を表示 トキシノメーター による比濁法では EU/mL まで検出可能 測定試料の ph の影響を受けにくいため 安定したエンドトキシン測定が可能 シングルテスト コード No. 品名表示感度 ( E U / m L ) 内容量希望納入価格 ( 円 ) CSE 付 CSE 付 CSE 付 NEW NEW リムルス ES-Ⅱ シングルテストワコー 回用 35, リムルス ES-Ⅱ シングルテストワコー 回用照会 リムルス ES-Ⅱ シングルテストワコー 回用照会 マルチテスト コード No. 品名表示感度 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) CSE 付 リムルス ES-Ⅱ テストワコー 回用 (2mL 用 3 本 ) 37,000 CSE 付 NEW リムルス ES-Ⅱ テストワコー 回用 (5.2mL 用 1 本 ) 照会 NEW カブトガニ血球抽出物 ES-Ⅱ, 凍結乾燥品 回用 (5.2mL 用 1 本 ) 29, カブトガニ血球抽出物 ES-Ⅱ, 凍結乾燥品 回用 (2mL 用 5 本 ) 58,000 NEW カブトガニ血球抽出物 ES-Ⅱ, 凍結乾燥品 回用 (5.2mL 用 1 本 ) 照会 NEW カブトガニ血球抽出物 ES-Ⅱ, 凍結乾燥品 回用 (5.2mL 用 1 本 ) 照会 CSE(Control Standard Endotoxin) は E.coli UK T- B の菌体から精製したエンドトキシンの凍結乾燥品 で 1 バイアル中に 500ng のエンドトキシンと添加剤マンニトールとグリシンを含有し ロットごとに日本薬局方標準エンドトキシンで検定した参考値 (EU/Vial) が記載されています

16 エンドトキシン検出用試薬 PYROSTAR ES-F シリーズ 比濁法ゲル化法エンドトキシン特異的 FDA 承認 特長 検体中の (1 3)- β -D- グルカンの影響を受けることなく エンドトキシンを特異的に検出可能 米国食品医薬品局 (FDA) の認可を取得 米国輸出品目の最終製品試験に適用可能なキットおよび試薬 USP 標準エンドトキシン (USP-RSE) によるゲル化感度検定力価 (EU/mL) を表示 トキシノメーター による比濁法では ~ 1EU/mL まで検出可能 測定試料の ph の影響を受けにくいため 安定したエンドトキシン測定が可能 シングルテスト コード No. 品名表示感度 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) CSE 付 Limulus Amebocyte Lysate PYROSTAR ES-F SINGLE TEST 回用 41,000 CSE 付 NEW Limulus Amebocyte Lysate PYROSTAR ES-F SINGLE TEST 回用照会 マルチテスト コード No. 品名表示感度 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) Limulus Amebocyte Lysate PYROSTAR ES-F MULTI TEST without CSE 回用 (2mL 用 5 本 ) 59,000 NEW Limulus Amebocyte Lysate PYROSTAR ES-F MULTI TEST 回用 (5.2mL 用 1 本 ) 照会 CSE 付 NEW Limulus Amebocyte Lysate PYROSTAR ES-F MULTI TEST 0.03 with CSE 回用 (5.2mL 用 1 本 ) 照会 NEW Limulus Amebocyte Lysate PYROSTAR ES-F MULTI TEST 回用 (5.2mL 用 1 本 ) 照会 14

17 エンドトキシン : 検量線情報 エンドトキシン濃度 ( E U / m L ) ゲル化時間 ( 分 ) : log(tg) = log(c) 検出用試薬 比濁法における添加エンドトキシンの回収率. マルチテストは 100 μl のライセート試薬と 100 μl のサンプル量を混合して測定するのに対して シングルテストは 200 μl のサンプルで直接ライセート試薬を溶解します そのため 反応液中でのサンプル濃度には差がでます 一般的にシングルテストの方がサンプルの影響を受けやすい傾向にあります

18 エンドトキシン検出用試薬 PYROSTAR ES-F/Plate 比濁法エンドトキシン特異的 FDA 承認 PYROSTAR TM ES-F/Plate は 96 ウェルマイクロプレート専用の比濁法ライセート試薬です 吸光プレートリーダーを用いることにより 簡単に短時間で多検体の同時測定が可能です 定量範囲は EU/mL と幅広く 水の試験はもちろん希釈が必要な各種薬剤の試験にも適用できます 特長 検体中の (1 3)- β -D- グルカンの影響を受けず エンドトキシンを特異的に検出可能 米国食品医薬品局 (FDA) の認可を取得 米国輸出品目における最終製品試験にも適用可能 1well 当たりサンプル量 50 μl で測定できるため 貴重なサンプルでも少量で測定可能 測定試料の ph の影響を受けにくいため 安定したエンドトキシン測定が可能 マルチテスト プレートリーダー法 CSE 付 コード No. 品名測定範囲 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) Limulus Amebocyte Lysate PYROSTAR TM ES-F/Plate with CSE Limulus Amebocyte Lysate PYROSTAR TM ES-F/Plate without CSE 回用 (2mL 用 4 本 ) 200 回用 (2mL 用 5 本 ) 59,000 67,000 16

19 エンドトキシン検出用試薬 検量線情報 エンドトキシン濃度 ( E U / m L ) 活性化時間 ( 分 ) 比濁法における添加エンドトキシンの回収率 17

20 エンドトキシン検出用試薬 CSE 付 CSE 付 リムルスカラー KY シリーズ エンドトキシン特異的 日本薬局方 特長 原理 シングルテストリムルスカラー試薬の発色カスケード機構活トキシノメーター法 マルチテスト プレートリーダー法 プレートリーダー法の場合は 120 回用 (1well 当たり 50 μl) トキシノメーター ライセート試薬と発色合成基質が一体製剤されており 試薬溶解後 ( シングルテストは試料で試薬を溶解するだけ ) 試料と混合するだけで反応を開始させることが可能 溶解後の試薬の安定性にすぐれ ブランクの反応性が低く抑制 検体中の (1 3)- β -D- グルカンの影響を受けず エンドトキシンを特異的に検出可能 検量範囲が広く 高濃度から低濃度のサンプルにも使用可能 高感度のため 希釈法により試料中の反応阻害 促進物質の影響を低減 トキシノメーター / マイクロプレートリーダーによる測定が可能 ( シングルテストはトキシノメーターのみ ) エンドトキシンによる本試薬の発色機構は ライセート中に含まれるセリンプロテアーゼ前駆体が順次活性化され 最後に凝固酵素が黄色発色合成基質を水解し 発色基 (pna) が遊離して 黄色の発色を呈する原理に基づいています ( エンドトキシン特異的検出の原理は 12 ページ参照 ) コード No. 品名測定範囲 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) 活性化時間(分 リムルスカラー KY シングルテストワコー 回用 50,000 トキシノメーター法 コード No. 品名測定範囲 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) リムルスカラー KY テストワコー 性化時間(分)18 マイクロプレートリーダー 60 回用 /120 回用 (2mL 用 3 本 ) 54,000 エンドトキシン濃度 ( E U / m L ) エンドトキシン濃度 ( E U / m L )

21 エンドトキシン検出用試薬 検量線情報 ( マイクロプレートリーダー使用時一例 ) エンドトキシン濃度 ( E U / m L ) 活性化時間 ( 分 ) 比色法における添加エンドトキシンの回収率 19

22 エンドトキシン検出用試薬 リムルス ES-Ⅲ 比濁法エンドトキシン特異的日本薬局方生物学的製剤基準 特長 生物学的製剤 特にアルブミン製剤やアルブミンを含有した製剤に最適な試薬 アルブミン含有量 6% 以下の検体の測定可能 生物学的製剤基準の エンドトキシン試験法 で要求される 平行線定量法 に適用可能な試薬 日本薬局方収載 エンドトキシン試験法 に適合した試薬 マルチテスト コード No. 品名測定範囲 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) カブトガニ血球抽出物 ES-Ⅲ 凍結乾燥品 回用 (2mL 用 5 本 ) 58,000 平行線定量法とは 測定試料の ph なうゲル化時間の変化はサンプルでも標準品での影響を受けにくいため 安定したエンドトキシン測定が可能ゲも同じ割合であり サンプルをどんな希釈倍数 ( ただしエンドトキシンの検出限界内 ) で定量しても求められるサンプル中のエンドトキシン定量値は同じになる という仮定が含まれます これはすなわち 標準希釈系列の用量反応直線とサンプル中のエンドトキシン濃度による用量反応直線は平行であるということを暗黙的に認めていることに相当します しかし 生物学的製剤等では反応系によっては 前述の仮定が正しくないこともあります 2 つの用量反応直線が平行でない場合 測定に用いたサンプルの希釈率によって 製剤の内在エンドトキシン量の計算値が大きく異なってしまうことになります 平行線定量法は 標準品とサンプルのそれぞれの希釈系列による用量反応直線を作成し 統計的手法を用いて標準品とサンプルの用量反応直線の平行性を検定することによって 両用量反応直線が互いに平行である場合に サンプル中の被検物質 ( エンドトキシン ) 量を標準品に対する相対価値として定量する方法です 一般には あるサンプルの内在エンドトキシンを定量するには検量線法が用いられています この方法では 標準品のエンドトキシンの各濃度に対するゲル化時間をプロットし 用量反応直線 ( 検量線 ) を作成し これに希釈サンプルによるゲル化時間を当てはめ希釈サンプルのエンドトキシン量を求めます そして求められた希釈サンプル中のエンドトキシン量に希釈倍率を乗じて サンプルの内在エンドトキシン定量値としています この方法には エンドトキシン濃度の変化にとも ル化時間(分)図 1 検量線法によるエンドトキシンの測定例えば 10 倍に薄めたサンプルに標準検量線を適用して 本当に 1/10 の濃度値が導出されるかどうかを確認後 標準検体に対する相対力価としてサンプル中の被検物質の濃度を求めます 10 希釈 1/10 濃度となる場合 10 希釈 1/10 濃度とならない場合 図 2 平行 平行線定量法によるエンドトキシン量の測定 平行でない 20

23 検出用試薬21 エンドトキシン 専用ソフトウェアの設定画面専用ソフトウェア トキシマスター では 生物学的製剤基準のエンドトキシン試験法に記載された平行線定量法によるデータ処理機能をサポートし HSA やインターフェロンのほか 様々な生物学的製剤のエンドトキシン試験に利用できるように設計されています 分散分析の結果と製剤内在エンドトキシンの定量値および生データを 画面およびプリンタに出力できます 検体の濃度点数や繰り返し数など 検体設定内容をチェックするテンプレート チェック機能で各種試験項目に準拠した試験をサポートします 測定終了後に 必要な試験結果を表示 プリントアウト 平行線定量法に準拠したレポートを作成できます 測定レポート

24 エンドトキシン検出用試薬 リムルス PS シングルテストワコー 比濁法エンドトキシン特異的日本薬局方 特長 パイロセップ に試料中のエンドトキシンを吸着させて濃縮するので 共存物質の影響を受けずに 微量のエンドトキシンを特異的に測定することが可能 エンドトキシンはエタノール中でもパイロセップ に吸着するため 通常のリムルステストでは検出不可能な脂溶性試料でも エタノールに溶解できればエンドトキシンの測定が可能 ( 例 : 脂溶性ビタミン 油脂 ) ライセート試薬は必要な数だけ使用できるので 無駄がない測定が可能 測定原理パイロセップ ( 水不溶性担体にスペーサーを介してヒスチジンを結合させたアフィニティー吸着体で エンドトキシンを特異的に吸着する ) を充てんしたキャピラリーカラムに 試料中のエンドトキシンを吸着させます 試料を洗い流した後 吸着したエンドトキシンをライセート試薬と反応させて 試料中のエンドトキシンの定量を行います 測定はトキシノメーター で行います 内容 測定原理 パイロセップ の模式図 (1)LAL ESシングル試薬 : カブトガニ血球抽出物の凍結乾燥品.. 20バイアル (0.3mL 用 ) ( 2 ) パイロセップ 懸濁液 ( リン酸緩衝液に懸濁 ) 20バイアル (0.77mL) (3)LAL 溶解液 2 バイアル (7mL) (4) 洗浄液 4バイアル (11mL) (5) 検体希釈用緩衝液 4バイアル (10mL) ( 6 ) キャピラリー ( シリコンチューブ付き ) 2 0 本 本品には 注射器 3 方コック 専用アダプターは入っておりません 別途 PS アクセサリーキット ( ) をお求めください 測定方法 パイロセップ 懸濁液を軽く振り混ぜながら吸引し 内容液全量をキャピラリーカラムに充てんする パイロセップ を充てんしたキャピラリーカラムに 試料を吸引する エンドトキシンは吸着され 共存物質はパイロセップ を素通りして除かれます 試料の p H は 3 7 に イオン強度は 0.05 以下になるようにしてください 試料がリムルス反応に阻害などの影響を与える場合は 洗浄液を通して洗浄します LAL ES 試薬をパイロセップ ゲルと一緒に LAL ES 試薬が入っていた試験管にゆっくり排出する 試料を吸引したキャピラリーカラムに LAL 溶解液で溶解した LAL ES 試薬を吸引する 22

25 エンドトキシン 応用例 A. 透析液中エンドトキシン測定への応用市販の腹膜透析液ダイアニール PD4( バクスター社 ) 人工腎臓用補液サブラッドA 及び B( 扶桑薬品 ) 各 5mL にUSP 標準エンドトキシンを添加した後 0.1M 酢酸で ph を 5 付近に調製して検体としました これらのエンドトキシン濃度をパイロセップ 法で測定し 添加エンドトキシンの回収率を求めました パイロセップ 法を使用することにより 透析液中のエンドトキシンが 0.1EU/L から検出可能となりました 検出用試薬 検量線 ( 検体量 :5 m L ) No. 設定濃度値 ( EU/L) Tg(min.) 平均ゲル化時間 ( 分 ) B. 脂溶性ビタミン中のエンドトキシン測定の応用 脂溶性ビタミンであるビタミン D E K をエタノールで溶解し USP 標準エンドトキシンを添加した後 パイロセップ 法でエンドトキシン濃度を測定 添加したエンドトキシンの回収率を求めました パイロセップ 法を用いることにより これまでライセート試薬では測定不可能だった脂溶性ビタミン中のエンドトキシンが測定可能となりました 表 1 パイロセップ 法における腹膜透析液 補液の エンドトキシン回収率 検体 エンドトキシン エンドトキシン.. 添加量 (EU/L) 回収率 (%) ダイアニール PD サブラッド A サブラッド B 表 2 パイロセップ 法におけるエタノール溶解脂溶性 ビタミンのエンドトキシン回収率 ビタミン 濃度 エンドトキシン.. (mg/ml) 回収率 (%) D E K エンドトキシンは終濃度が0.05EU/mLとなるように添加 23 その他の応用例エタノール シリコンオイル 大豆油 オリーブ油 ステアリン酸 卵黄レシチン オイルアジュバンドのワクチン その他 エタノールに溶解できる試料は測定可能 ( アルブミン製剤 凝固因子製剤 ( 第 8 因子 ) インターフェロン製剤 アンチトロンビン Ⅲ 製剤 免疫グロブリン製剤 ) シングルテストコード No. 品名測定範囲 ( E U / L ) 内容量希望納入価格 ( 円 ) リムルス PSシングルテストワコー ( ) 20 回用 103,000 検体量 5mLの場合アクセサリーキット コード No. 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) PS アクセサリーキット 1 セット 20,000 ( 内容 ) 20mL 注射器 ( 針なし ) 12 本 三方コック R 型 12 個 専用アダプター 20 個 目玉 クリップ 12 個 FALCON ポリスチレンチューブ (5mL) 25 本 FALCON ポリスチレンチューブ (14mL) 25 本 試験管立て (50 穴 ) 1 個 手順書 1 部

26 エンドトキシン検出用試薬 リムルス ES-Ⅱ プラス CS シングルテストワコー 比濁法 エンドトキシン特異的 簡便法 特長 保存検量線データ付属 PC と PPC を付属の低含量 CSE から1 ステップで調製可能.PC: 陽性コントロール PPC: 陽性製品コントロール 測定試料の ph の影響を受けにくいため 安定したエンドトキシン測定が可能 検体中の (1 3)- β -D- グルカンの影響を受けることなく エンドトキシンを特異的に検出可能 ライセート試薬としてリムルス ES-Ⅱ シングルテストワコーを使用した場合に高い相関性. トキシノメーター ET-Mini ET-7000 で測定が可能です ただし本キットを使用の際は 装置の温度キャリブレーション ( 校正 ) が必要です 1 年に 1 度の OQ サービスをお勧めいたします 温度キャリブレーションについては 37 ページをご参照ください シングルテスト 本キットは保存検量線 CSE を使用するため 薬局方のエンドトキシン試験法には準拠しておりません 低含量 CSE 付 コード No. 品名測定範囲 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) リムルス ES-Ⅱ プラス CS シングルテストワコー 回用 ( *) 49,500 ( リムルス ES-Ⅱ シングル試薬 0. 2 m L 用 3 2 本 低含量 C S E 1 6 本 検量線データシート 1 枚 ) (*) 標準プロトコルで使用時は 8 検体測定分に相当します 保存検量線データの提供 検量線読み込み ( Q R コード ) 試薬キットに付属している検量線データシートの QR コードを QR コードリーダーで読み込むことで 標準液調製と検量線測定が不要になります その為 作業時間の短縮と 試薬や希釈用試験管など消耗品の節約になります QR コードリーダー 検量線データシート QRコードリーダーが使用できるのはトキシノメーター ET-Mini のみになります QRコードは ( 株 ) デンソーウェーブの登録商標です 検量線データ 24

27 エンドトキシン検出用試薬 PC と PPC の調製 0.1EU/ L CSE 0.1EU/ L ES- plus CS CSE エンドトキシン試験用水 試料溶液 P C( 陽性コントロール ) 調製 PPC( 陽性製品コントロール ) 調製 (PPC) リムルス ES-Ⅱ プラス CS シングルテストワコーには 低含量の CSE(Control Standard Endotoxin) が付属されており 日本薬局方で定められたエンドトキシン標準品 (JP-RSE) を用いて検定した力価を表示しています PC および PPC は CSE の凍結乾燥品を検量線の中点濃度 (0.1EU/mL) になるように溶解して調製します CSE をエンドトキシン試験用水で溶解すると PC 試料溶液で直接溶解すると PPC が調製できます 低含量 CSE からリムルス ES-Ⅱ シングル試薬に試料を添加する際は バイオクリーンチップワコー R エクステンド S Ⅱ(39 ページ参照 ) を使用すると便利です 25

28 エンドトキシン試験関連試薬 リムルス HS-T シングルテストワコー 比濁法 エンドトキシン非特異的 日本薬局方 トキシノメーター 専用の比濁試験用試薬です 特長 日本薬局方収載 エンドトキシン試験法 に適合したキット トキシノメーター による高感度分析が可能 (1 3)- β -D- グルカンにも反応 シングルテスト コード No. 品名測定範囲 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) CSE 付 リムルス HS-T シングルテストワコー 回用 32,000 エンドトキシン試験関連試薬 標準品 各種標準品コード No. 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 日本薬局方エンドトキシン標準品 10,000~25,000EU/vial 照会 USP 標準エンドトキシン 10,000EU/vial 照会 コントロールスタンダードエンドトキシン (CSE) 500ng/vial 6,200 ロットにより変動 26

29 エンドトキシン試験関連試薬 エンドトキシン試験関連試薬 エンドトキシン検出用抽出液 医療用具等のエンドトキシン試験に最適 医療用具等のエンドトキシン試験には従来 水や生理食塩水による抽出法が用いられていますが これらの方法では必ずしも有効に抽出されていないことが判ってきました 本品は人血清アルブミン (HSA) を含有したエンドトキシンフリーの抽出液 (20 倍濃縮液 ) で 水や生理食塩水では抽出できないエンドトキシンも抽出することが可能です 特に血液やたんぱく質を含有した液体と接触する用具のエンドトキシン試験には 本品の使用を推奨します 各種抽出液を用いた市販滅菌済用具のエンドトキシン汚染検出 使用方法 1. エンドトキシン検出用抽出液の調製本品 1 バイアル (10mL) をエンドトキシンフリー水 190mL と混合し 20 倍希釈して使用します 2. 使用方法.. エンドトキシン検出用抽出液を一定量とり 用具等の検体を浸漬 または検体に添加し軽く攪拌した後 約 1 時間室温で放置します 再び軽く攪拌し 抽出されたエンドトキシンを測定します コード No. 品名規格内容量希望納入価格 ( 円 ) エンドトキシン検出用抽出液 (20 倍濃縮液 ) エンドトキシン検出用 10mL 4 15,300 参考文献 1) 井上勝二 高岡文 土谷正和 松浦脩二 : 日本動物実験代替法学会第 6 回大会要旨集 110(1992) 2) 井上勝二 原田和明 土谷正和 松浦脩二 : 日本防菌防黴学会第 21 回大会要旨集 44(1994) 27

30 ペプチドグリカンおよび β- グルカン検出用試薬 SLP-HS シングル試薬セット Ⅱ 研究用試薬 Silkworm Larvae Plasma 試薬 原理カイコ (Bombyx mori) の体液中にはフェノール酸化酵素前駆体 (ProPO) カスケードと呼ばれる生体防御機構が存在し ペプチドグリカン (PG) および (1 3)- β -D グルカン (β - グルカン ) によって反応が開始され 最終的にフェノール酸化酵素前駆体 (ProPO) がフェノール酸化酵素 (PO) に変換されます ProPO の活性化の機構は 複数のセリンプロテアーゼの活性化を含むカスケード機構であると解明されました このカスケード機構は 異物侵入の際に昆虫体内で認められるメラニン形成に重要な役割を果していると考えられております SLP 試薬は カイコの体液を無菌的に採取 調製した ProPO カスケードの因子をすべて含んだ凍結乾燥品です 本試薬は PG およびβ - グルカンによって活性化され 基質剤に含まれる DOPA(L-3,4- ジヒドロキシフェニルアラニン ) を酸化し メラニン色素を生成します PG はほとんどの細菌の細胞壁に β - グルカンも多くの真菌の細胞壁に認められる成分であることから 生成したメラニン色素を指標として 各種微生物の検出が可能です SLP 試薬の活性化機構は図 1 のとおりです すなわち PG またはβ - グルカンがそれぞれの認識タンパク (PGRP およびβ GRP) と結合することにより ProPO カスケードの反応が開始され 最終的に PO が活性化されます 活性化した P O によって基質剤中に含まれる DOPA が酸化され 結果として黒色のメラニン色素が生じます カブトガニ血球抽出物 ( ライセート試薬 ) で検出することのできるエンドトキシンは SLP のカスケード機構を活性化しませんが ライセート試薬では検出できない PG を SLP 試薬で検出することができます ( 図 1) SLP 試薬は 各種細菌由来の PG お 図 1 カイコ血液のフェノール酸化酵素前駆体カスケード よびβ グルコシド結合を持つ β - グルカンに強く反応しますが グラム陰性菌の細胞壁成分であるリポ多糖 ( エンドトキシン ) にはほとんど反応しません P G はグラム陽性菌のみならずグラム陰性菌にも存在するため SL P 試薬は グラム陽性 陰性にかかわらず 広く一般の細菌に反応します また 真菌由来のβ - グルカンにも反応することから SLP 試薬は微生物全般に反応すると考えられます これらのことにより エンドトキシン及び β - グルカンに反応するライセート試薬と SLP 試薬の併用で 検体中の微生物の種類を予測できる可能性が考えられます 特長 1. 高感度でペプチドグリカンおよび β - グルカンを測定可能 2. 特別な測定装置を必要としない目視判定法による測定可能 3.. トキシノメーター を用いることにより 精度よく 高感度にペプチドグリカンおよび β - グルカンの定量が可能 28

31 ペプチドグリカンおよびβ- グルカン検出用試薬 用途 1. ペプチドグリカンの構造活性相関 生合成 代謝 病因的意義の解明 2. 水質汚染の指標 3. 人工透析液の微生物汚染対策 4. 医薬品 生物製剤 遺伝子工学製品などの菌体成分混入の検出 5. 昆虫の生体防御反応機構の解明 NEW 内容 SLP-HS シングル試薬セット Ⅱ 1.SLP-HS(Silkworm Larvae Plasma High Sensitive) 0.2mL 用 20 バイアル感度 : 10 p g /m L(PG).. 1 p g / m L( カードランアルカリ溶解液 )( トキシノメーター (30 ) で120 分以内に検出 ) 2.SLP-Diluent 5mL 用 2 バイアル 3.Standard(Digested Peptidoglycan from S. aureus) 0.5mL 用 1バイアル コード No. 品名 規格 内容量 希望納入価格 ( 円 ) SLP-HS シングル試薬セット Ⅱ 微生物検出用 20 回用 照会 関連商品 コード No. 品名 規格 内容量 希望納入価格 ( 円 ) カードラン 1 生化学用 1g 2, ペプチドグリカン 2 生化学用 2mL 用 5,800 1 : (1 3)- β -D- グルカン 2 : SLP 試薬セット用 Micrococcus luteus 由来のペプチドグリカン 1 μg/ml を含有 測定方法 SLP を用いた PG 並びにβ - グルカンの測定法として トキシノメーター 法 目視判定法があります トキシノメーター では 活性化に伴って生じる色素量を吸光度変化として捉え 吸光度があらかじめ設定したしきい値に達するまでの反応時間を活性化時間 (Ta) とし Ta を指標に SLP 活性化物質 (PG およびβ - グルカン ) を定量します この原理は トキシノメーター を用いてエンドトキシンを測定する場合と同様です ( 図 2) トキシノメーター 法を用いた測定例を図 3 に示します 目視判定法では 一定時間反応させた後 反応液の色調の変化を観察することにより判定を行ないます この方法は ライセート試薬におけるゲル化法と同様の方法ですが 反応液の色が変化するため判定が容易であること 振動の影響を受けないこと等で優れています 図 2.. 測定原理 : 測定開始から R(t) が Rth になるまでの Ta を測定します (Th: 判定しきい値 ) 図 3 トキシノメーター R 法を用いた測定例 29

32 その他関連試薬 LPS( リポポリサッカリド ) LPS( リポポリサッカリド リポポリサッカライド リポ多糖 内毒素 ) はグラム陰性菌の外膜に存在している成分です 様々な生物活性発現や細胞間コミュニケーションに大きな役割を果たしており 近年では LPS を用いた自然免疫研究 生体防御機能の研究が盛んに行われています 特長 精製法により 2 種類の製品を用意フェノール抽出品 : Westphal 法 ( フェノール抽出法 ) による抽出品超遠心品 : フェノール抽出品をさらに超遠心で 2 回精製した製品 フェノール抽出品 コード No. 品 名 規格 内容量 希望納入価格 ( 円 ) Campylobacter jejuni Lipopolysaccharide, from C. jejuni Penner O:19 細胞生物学用 5mg 20,000 Escherichia coli Lipopolysaccharide, from E.coli O26 細胞生物学用 25mg 16, Lipopolysaccharide, from E.coli O55 細胞生物学用 25mg 16, Lipopolysaccharide, from E.coli O111 細胞生物学用 25mg 16, Lipopolysaccharide, from E.coli O127 細胞生物学用 25mg 16,000 Proteus Lipopolysaccharide, from P. vulgaris OX2 細胞生物学用 25mg 17, Lipopolysaccharide, from P. vulgaris OX19 細胞生物学用 25mg 17, Lipopolysaccharide, from P. mirabilis OXK 細胞生物学用 25mg 17,000 超遠心品 コード No. 品 名 規格 内容量 希望納入価格 ( 円 ) Bordetella pertussis Lipopolysaccharide, from B. pertussis Tohama 細胞生物学用 2mg 35,000 Escherichia coli Lipopolysaccharide, from E.coli O26 細胞生物学用 5mg 20, Lipopolysaccharide, from E.coli O55 細胞生物学用 5mg 21, Lipopolysaccharide, from E.coli O103 細胞生物学用 5mg 19, Lipopolysaccharide, from E.coli O111 細胞生物学用 5mg 19, Lipopolysaccharide, from E.coli O113 細胞生物学用 5mg 28, Lipopolysaccharide, from E.coli O127 細胞生物学用 5mg 19, Lipopolysaccharide, from E.coli O128 細胞生物学用 5mg 25, Lipopolysaccharide, from E.coli O150 細胞生物学用 5mg 28, Lipopolysaccharide, from E.coli O157 細胞生物学用 5mg 21, Lipopolysaccharide, from E.coli O86a 細胞生物学用 5mg 22,000 Pseudomonas aerug inosa Lipopolysaccharide, from P. aeruginosa PA01 細胞生物学用 5mg 24,000 Salmonella Lipopolysaccharide, from S. typhimurium 細胞生物学用 5mg 23, Lipopolysaccharide, from S. typhimurium G30/C21 細胞生物学用 2mg 39, Lipopolysaccharide, from S. minnesota 1114 細胞生物学用 5mg 20, Lipopolysaccharide, from S. minnesota R595 細胞生物学用 5mg 20,000 30

33 エンドトキシン測定用機器および関連器材 エンドトキシン測定用機器 トキシノメーター ET-7000 MPR エンドトキシン測定システム for BT サーモステーション TS-37S/24 バイアルチューブミキサー VTM-252Ⅱ トキシノメーター ET-Mini & リムルス ES-Ⅱ プラス CS シングルテストワコーバリデーション サポート サービス ( トキシノメーター M P R エンドトキシン測定システム ) 関連器材 バイオクリーンシリーズアクロディスク シリンジフィルターアクロディスク ムスタング E メンブレンセルファイン ET クリーン 関連サービス エンドトキシン試験受託サービス主な関連試薬 器材一覧表 31

34 エンドトキシン測定用機器 トキシノメーター ET-7000 操作性 拡張性に優れたパソコン制御タイプのトキシノメーター システムです 検体数に応じモジュールの増設が可能なため 少検体から多検体まで 幅広い分野のエンドトキシン測定に適用可能です さらに 37 /30 の温度切り替えにより (1 3)- β -D- グルカンやペプチドグリカンの試験研究にもご利用いただけます 特長.. ライセート試薬の選択により 同一システムで比濁法 比色法 ゲル化法の 3 法に適応..1 モジュールで 16 検体 最大 8 モジュール増設で 128 検体の同時測定が可能 日本 / 米国 / 欧州の薬局方に沿った試験をサポート 厚生労働省 ER/ES 指針 FDA21 CFR Part11 対応のシステムも準備 データインテグリティ に対応 データが完全で 一貫性があり 正確であること. パソコンは メーカーや機種等が実際と異なる場合がございます トキシノメーター の測定原理と測定本装置はエンドトキシンとライセート試薬との反応を 430nm における透過光量の変化として捉えるものです 透過光量は反応開始後しばらく一定であり 反応の進行に伴って透過光量は減少し 反応完了と共に減少変化も止まります 透過光量 l(t) の反応初期の透過光量 lo に対する割合を R(t) とし この透過光量比の変化に対してしきい値 R th を設定し 反応開始から R(t) が Rth になるまでの時間をゲル化時間 Tg あるいは活性化時間 Ta として読み取るものです R(t)= l(t)/lo 100% 定量エンドトキシン濃度とゲル化時間 Tg との間には検量関係が得られ 検体のゲル化時間からエンドトキシン濃度を算出します 専用ソフトウェアの各種測定画面 ( 図はトキシマスター QC8 ER/ES) 専用ソフトウェア トキシマスター QC7 または トキシマスター QC8 ER/ES を標準装備しています トキシマスター QC8 ER/ES は従来の QC7 ER/ES に比べ ER/ES 指針 FDA21 CFR Part 11 やデータインテグリティへの対応が強化されました データの完全性をもとに 安全で確実な品質管理をサポートします プロトコル設定タイムコース検量線 測定レポート 各種試験項目に準拠した処理プロトコルの設定 登録 データ解析やルーチン作業の省力化をサポートします リアルタイムに全ポジションのタイムコースを確認 試験結果を予測し 次の工程への対応を早めることができます 測定終了後に 必要な試験結果を表示 プリントアウト 日本 / 米国 / 欧州の薬局方に沿ったレポート作成をサポートします 32

35 測定用機 ER/ES 対応のみに付加される機能 電子署名機能制限オーディットトレイル ( 監査証跡 ) 電子署名によるログイン機能で 登録ユーザーのみの利用に制限 記録と署名をデータベース内でリンクさせることで データの不正改ざんや偽装を防ぎます システム使用やアクセスの許可範囲を複数の権限グループとして管理 登録ユーザーは 所属するグループに許可された範囲内で機能を使用できます 主要な操作内容は コンピュータが自動生成するタイムスタンプ付きで記録 データ変更時には上書きされずに新たなリビジョンとして記録登録されます その他の機能 設定変更などの際の変更事由の入力 バックアップ 復元など ER/ES システム コード No. 品名内容量希望納入価格 ( 円 ) トキシノメーター ET-7000/J ER/ES セット ( 内容 ) ET-7000/J 本体. トキシマスター QC8 ER/ES(5 ライセンス *). パソコン ( サーバー兼クライアント ). 検証資料. 納入時 IQ/OQ サービス (1 回 ) 1 式 3,000,000 ER/ES 非対応システム コード No. 品名内容量希望納入価格 ( 円 ) トキシノメーター ET-7000/J 標準セット ( 内容 ) ET-7000/J 本体. トキシマスター QC7 パソコン 1 式 1,800,000 エンドトキシン増設用モジュール コード No. 品名内容量希望納入価格 ( 円 ) トキシノメーター ET-7000/J 1 台 1,400,000 器33 オプション コード No. 品名内容量希望納入価格 ( 円 ) トキシノメーター ER/ES アップグレードセット ( 内容 ) トキシマスター QC8 ER/ES(5 ライセンス *). パソコン ( サーバー兼クライアント ). 検証資料. 納入時 IQ/OQ サービス (1 回 ) 1 式 1,650, トキシノメーター ET-7000 専用架台 1 台 42,000 * パソコン 5 台までインストール可能

36 エンドトキシン測定用機器 MPR エンドトキシン測定システム for BT 吸光リーダー EL x808iu と標準装備のソフトウェア トキシマスター MPR を用いたエンドトキシン測定専用のシステムです 医薬品 医療機器等における品質管理試験等の様々なエンドトキシン試験に使用できます ソフト 1 画面でのサンプル配置やサンプル情報の入力を可能にし 簡便かつ少ないソフト操作で 正確な多検体処理をサポートいたします 特長 多検体の同時測定が可能 ライセート試薬の選択により 同一システムで比色法 / 比濁法に適応 日本 / 米国 / 欧州の薬局方に沿った試験をサポート 厚生労働省 ER/ES 指針 FDA21 CFR Part11 をサポート (ER/ES セットのみ ) データインテグリティ への対応 (ER/ES セットのみ ) データが完全で 一貫性があり 正確であること. 専用ソフトウェア トキシマスター MPR または トキシマスター ER/ES MPR を標準装備 パソコンは メーカーや機種等が実際と異なる場合がございます ソフトウェアの各種測定画面 使い易い画面設計サンプル編集画面でサンプル配置にて各種情報の登録が可能です プレート上でのサンプル配置を視覚的に確認することが可能なので 分注ミスを防ぎます 測定終了後に検量線情報や日本薬局方に準拠した各種試験結果レポートの出力が可能です タイムコースリアルタイムに全ウェルのタイムコースを確認 試験結果を予測し 迅速に次の工程へと進めます 選択ウェルをズーム表示可能 ER/ES システム コード No. 品名内容量希望納入価格 ( 円 ) MPR エンドトキシン測定システム ER/ES セット for BT ( 内容 ) 吸光リーダー ELx808IU トキシマスター QC8 ER/ES MPR(5 ライセンス ) パソコン ( サーバー兼クライアント ) 検証資料 IQ/OQ サービス (1 回 ) 1 式 3,100,000 パソコン 5 台までインストール可能 ER/ES 非対応システム コード No. 品名内容量希望納入価格 ( 円 ) MPR エンドトキシン測定システム標準セット for BT ( 内容 ) 吸光リーダー ELx808IU トキシマスター QC7 MPR パソコン 1 式 1,900, エンドトキシン自動測定システムについてはお問い合わせください

37 測定用機エンドトキシン測定用機器 サーモステーション TS-37S/24 特長 薬局方エンドトキシン試験法のゲル化法に最適なドライバス 当社リムルステストチューブ -S にジャストフィット 37 に設定済みで温度調整が不要 最大 24 検体まで同時に試験可能 測定温度は 一目で分かるデジタル表示 ヒートブロック方式で温度が均一 コード No. 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) サーモステーション TS-37S/24 1 台 180,000 エンドトキシン測定用機器 バイアルチューブミキサー VTM-252 Ⅱ 特長 エンドトキシンの標準品の溶解 希釈に最適.. 専用のアダプター (SASAETE30) を使用することで 長時間の攪拌も手の支えが不要.. 平板アタッチメントを標準付属しており 多数の試験管 マイクロチューブのミキシングが容易 器35 エンドトキシン仕様 型名スイッチ方式定格電力回転数 (rpm) VTM-252Ⅱ 手動 - 自動可変 100V-40W 50/60Hz MAX2,500(50Hz)/ 可変 重量 (kg) 2.0 外寸法 (mm) W105 D130 H160 コード No. 品名内容量希望納入価格 ( 円 ) バイアルチューブミキサー VTM-252Ⅱ( アダプター付 ) 1 台 62,000 アダプターのみの販売はございません

38 エンドトキシン測定用機器 トキシノメーター ET-Mini & リムルス ES- Ⅱ プラス CS シングルテストワコー 迅速かつ簡単にエンドトキシンが測定できるシステムです トキシノメーター E T- M i n i とリムルス E S -Ⅱ プラス CS シングルテストワコー ( 試薬キット ) の組み合せで 保存検量線を使用することができます また PC と PPC を1 ステップで調製でき 人為差が少なく信頼性の高い定量結果が得られます トキシノメーター E T とリムルス ES-Ⅱシングルテストワコーを用いた測定結果と高い相関性があります 本システムは薬局方のエンドトキシン試験法には準拠しておりません 特長. 簡便な操作性 ( 測定からレポート作成まで専用ソフトウェアが. サポート ) 保存検量線データ付属 ( 標準液調製と検量線測定が不要 ) 低含量 CSE 付属 (PC と PPC の調製が簡単 ).PC: 陽性コントロール PPC: 陽性製品コントロール パソコンと無線通信が可能 ( 無線セットのみ ). 本装置と試薬キットの組み合わせで使用される際は 装置の温度キャリブレーション ( 校正 ) が必要です 1 年に 1 度の OQ サービスをお勧めします 温度キャリブレーションについては 37 ページをご参照ください. パソコンは メーカーや機種等が実際と異なる場合がございます 保存検量線データの提供については 24 ページをご参照ください QR コードリーダー 検量線データシート QR コードは ( 株 ) デンソーウェーブの登録商標です 無線セット コード No. 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) トキシノメーター RET-Mini 無線セット 1 式 950,000 ( 内容 ) トキシノメーター RET-Mini(1 台 ) トキシマスター RQC7 for ET-Mini パソコン QR コードリーダー 無線モジュール 有線セット トキシノメーター RET-Mini 有線セット ( 内容 ) トキシノメーター RET-Mini(1 台 ) トキシマスター RQC7 for ET-Mini パソコン QR コードリーダー 1 式 900,000 増設用モジュール トキシノメーター R ET-Mini 1 台 600,000 試薬キット コード No. 品名検量範囲 ( E U / m L ) 容量希望納入価格 ( 円 ) リムルス ES-Ⅱ プラス CS シングルテストワコー リムルス ES-Ⅱ シングル試薬 0.2mL 用 32 本 低含量 CSE 16 本 検量線データシート 1 枚 * 標準プロトコルで使用時は 8 検体測定分に相当します 回用 ( *) 49,500 36

39 測定用機エンドトキシン測定用機器 バリデーション サポート サービス コンプライアンスのためのベストソリューション さらに厳しさを増す規制当局の要求事項を満たしたラボ運営のためにお役立ていただける 各種サポート サービス商品です トキシノメーター 品名内容希望納入価格 ( 円 ) IQ/OQ サービス ( 設置時バリデーション ) 設置場所確認 納入物品確認 装置状態 / 設置状態確認 システム構成確認 初期動作確認 トレーサビリティー証明書 I Q ドキュメント ( 計画書 実施手順書 実施報告書 ) OQ サービス 1 システム 200,000 OQ サービス ( 稼動性能確認 機能点検 ) 1 外観 / 設置環境確認 タッチパネル / スイッチ動作確認 光量確認 温度制御機能確認 タイマー精度確認 トキシマスター基本動作確認 演算処理機能確認 トレーサビリティー証明書 O Q ドキュメント ( 計画書 実施手順書 実施報告書 ) サービス対象機種 : 下記表全機種 1 システム 2 システム 150, ,000 2 温度キャリブレーション 3 温度チェック 温度調整 光量チェック 温度キャリブレーション成績書発行 サービス対象機種 :ET-Mini 1 システム 80,000 光学系オーバーホール 3 測定ブロック分解清掃 温度チェック 温度調整 光源 LED 交換 ( 光源 LED 交換作業を依頼された場合 ) 光量チェック 光量調整 実用テスト サービス対象機種 :ET-6000, ET-7000 年間保守サービス 年 1 回の OQ サービス実施 故障時の代替装置優先レンタル 修理無償サービス ( 部品代を含む 但し 消耗品は除きます ) ( サービス詳細は 別途定める条件書にてご確認ください ) 1 システム 基本システム 90, , ,000 料金詳細は お問い合わせ下さい 器37 エンドトキシン 1:OQ サービスは IQ/OQ 実地済みのお客様にご提供させていただきます 2:OQ サービスの 2 システム 価格は 同一施設において同一日実施の場合に限ります 3: 引取りでの対応となります 4: 光源 LED を交換した場合の価格となります サービス対象機種 ET-6000 ET-7000 ET-Mini IQ/OQ サービス OQ サービス 温度キャリブレーション - - 光学系オーバーホール - 年間保守サービス

40 エンドトキシン測定用機器 MPR エンドトキシン測定システム 品名内容希望納入価格 ( 円 ) IQ/OQ サービス ( 設置時バリデーション ) 設置場所確認 納入物品確認 装置状態 / 設置状態確認 システム構成確認 初期動作確認 BioTek プレートリーダー IQ(MPR for BT) トレーサビリティー証明書 I Q ドキュメント ( 計画書 実施手順書 実施報告書 ) OQ サービス 1 システム MPR for Sunrise 200,000 MPR for BT 300,000 1 OQ サービス 2 ( 稼動性能確認 機能点検 ) 外観 設置環境確認 システム構成確認 装置基本動作確認 - QC-Pac2( 装置性能確認 ) 温度制御 タイマー精度確認 (MPR for Sunrise) - BioTek プレートリーダー OQ 温度制御 タイマー精度確認 (MPR for BT) トキシマスター基本動作確認 演算処理機能確認 トレーサビリティー証明書 O Q ドキュメント ( 計画書 実施手順書 実施報告書 ) 1 システム 2 システム 150, ,000 3 年間保守サービス 年 1 回の OQ サービス実施 故障時の代替装置優先レンタル 修理無償サービス ( 部品代を含む 但し 消耗品は除きます ) ( サービス詳細は 別途定める条件書にてご確認ください ) 基本システム 250,000 ~ 料金詳細は 別途お問い合わせ下さい 1: 移設時点検など 2 回目以降の IQ/OQ サービスをご利用いただく場合 希望納入価格 200,000 円になります 2:OQ サービスは IQ/OQ 実施済みのお客様にご提供させていただきます 3:OQ サービスの 2 システム 価格は 同一施設において同一日実施の場合に限ります 対象は for Sunrise のみとなります 38

41 関連器材エンドトキシン試験用チップ 関連器材 バイオクリーンシリーズ 特長 エンドトキシンフリー 個別包装 γ 線照射済み コード No. 品名規格内容量希望納入価格 ( 円 ) バイオクリーンチップワコー エクステンド S Ⅱ 200μL 100 本 6, バイオクリーンチップワコー 20 0Ⅱ 200μL 100 本 3, バイオクリーンチップワコー 1000Ⅱ 1000μL 100 本 3,600 エンドトキシン試験用プレート 包装フィルムから粉塵が出ないので. クリーンルームで安心して使用可能 フタ付きで汚染のリスクを軽減 エンドトキシン吸着の少ないポリスチレン樹脂を採用 コード No. 品名規格内容量希望納入価格 ( 円 ) バイオクリーンプレートワコー 96 ウェル 50 枚 30,000 エンドトキシン試験用関連器具 乾熱滅菌試験管 アルミキャップ及びホールピペット コード No. 品名 規格 内容量 希望納入価格 ( 円 ) リムルステストチューブ -S( アルミキャップ付 ) φ12 75mm 10 本 8 16, リムルステストチューブ - S( エンドトキシンフリー ) φ12 75mm 10 本 10 12, アルミキャップ -S( エンドトキシンフリー ) φ15 18mm 10 個 10 11, ホールピペット ( エンドトキシンフリー ) 5.2mL 用 5 本 20,000 ピペッター コード No. 品名 可変ステップ 内容量 希望納入価格 ( 円 ) フィンピペット F2 2 20μL 0.02μL 1 本 32, フィンピペット F μL 0.2μL 1 本 32, フィンピペット F μL 0.2μL 1 本 32, フィンピペット F μL 1.0μL 1 本 32,300 スターターキット コード No. 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) エンドトキシン試験スターターキット 1 セット 65,000 内容フィンピペットデジタル μl 1 フィンピペットデジタル μl 1 バイオクリーンチップワコー 200 Ⅱ(100 本入 ) 1 バイオクリーンチップワコー 1000 Ⅱ(100 本入 ) 1 試験管立て(50 穴 ) 1 本キットには測定用試薬は含まれておりません 39

42 関連器材 アクロディスク シリンジフィルター 日本ポール ( 株 ) 水溶液中のバイオバーデンとパイロジェンの除去性能を高めたポジダインメンブレンを使用したシリンジフィルターです 医薬品 ワクチンの研究開発等にご使用頂けます 特長 低タンパク吸着性でサンプルロスが最小化 γ 線滅菌により 残留 EOG による潜在的汚染を排除 ろ液の無菌性を保証するために 除菌性能の試験済み 仕様 ポアサイズ 0.2 μm 材 質 フィルターポジダイン ( 正荷電ナイロン 6,6) ハウジングポリプロピレン 接 続 メス ルアーロック ( 入口 ) オス ルアースリップ ( 出口 ) 有効ろ過面積 2.8cm 2 許容使用温度 60 (210kPa) コード No. メーカーコード 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) アクロディスク シリンジフィルターポジダイン 0.2μm, 25mm ( 滅菌済 ) 50 個 25,200 関連器材 アクロディスク ムスタング E メンブレン 日本ポール ( 株 ) 水 バッファー 中性糖液 一部の生物溶液からのエンドトキシン除去を可能にしたムスタング E メンブレンを使用 評価 バリデーションに最適です 特長 USP 生物学的安全性試験 In Vivo <88> に適合 γ 線滅菌済み 個別包装 平均流速 1 ~ 4mL/ 分 仕様 ポアサイズ 材 質 フィルターハウジング 接 続 メンブレンベッドボリューム 許容使用温度 標準的な差圧 0.2 μm ムスタング E ポリプロピレンメス ルアーロック ( 入口 ) オス ルアースリップ ( 出口 ) 0.12mL 21 ~ 24 (0.55MPa) 60 (0.21MPa) 1mL/ 分時 0.07bar(7kPa 1psi) 以下 コード No. メーカーコード 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) MSTG25E3 アクロディスク ムスタング E メンブレン ( 滅菌済 ) 10 個 23,000 40

43 関連器材 セルファイン ET クリーン J N C( 株 ) セルファイン シリーズの選択的エンドトキシン除去ゲル ET クリーン は セルロース粒子に安全性の高 いε- ポリリジンを共有結合で固定化した 工業的スケールでの使用が可能な新しいタイプのエンドトキシン除去剤です 特長.. セルロースベースゲルの水酸基にスペーサーを介し リガンドのアミノ基が共有結合され アルカリ処理においても高い耐久性 エンドトキシンのみを吸着して 目的とするタンパク質は通過させる高い選択性.. リガンドであるε - ポリリジンは Streptomyces albulus が発酵生産する リジンのホモポリマーで食品添加物としても幅広く利用されており 安全性が高い テクニカルデータ 品名 粒子サイズ (μm) 吸着容量 (μg/ml) 排除限界分子量 ET クリーン S ca <10 3 ET クリーン L ca 各種タンパクを汚染しているエンドトキシンの除去をバッチ法で行った結果 Removal of LPS from Protein Solution by ET-Clean.. Sample solution ET-Clean S.. ET-Clean L.... (μ=0.05, ph7.0) (μ=0.40, ph7.0) Protein pi LPS conc. Remain Recovery of Remain Recovery of... in protein LPS Protein LPS Protein... solution (pg/ml) (%) (pg/ml) (%)... (pg/ml).. BSA , <10 97 γ-globulin 7.4 5, <10 97 CytochromeC , <10 98 コード No. メーカーコード 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) セルファイン ETクリーン S 10 ml 23, セルファイン ETクリーン L 10 ml 23, セルファイン ETクリーン S 50 ml 43, セルファイン ETクリーン L 50 ml 43, ミニカラムセルファイン ETクリーン S 1mL 用 5 22, ミニカラムセルファイン ETクリーン L 1mL 用 5 22, ミニカラムセルファイン ETクリーン S 5mL 用 1 22, ミニカラムセルファイン ETクリーン L 5mL 用 1 22,700 関連器材41

44 関連サービス エンドトキシン試験受託サービス 特長 豊富な経験と知識によるコンサルのような綿密なサポート 日本 / 米国 / 欧州の薬局方に沿った試験も対応可能 測定条件の開発やバリデーションに対応 このような方にお勧め 測定系が確立できないから開発してほしい 装置の導入前に検討したい 貴重な検体だから信頼性のあるところに依頼したい 研究開発段階からエンドトキシンを考慮しておきたい 品質管理 検査以外の研究開発部門の方からも多くのご依頼を頂いております 開発 研究者の方は本サービスを使用することで専門外のエンドトキシン試験を行わなくて済むようになり より研究開発に集中出来ます また 開発段階から原料のエンドトキシン試験や最終製品を見越した検査方法を考慮しておくことで 製品化がスムーズに進み業務の効率化が図れます ご依頼の流れ お問い合わせご相談 詳細お打ち合わせ対応可否の回答 お見積り試験方法提示 正式発注試験実施 ご報告 綿密なお打ち合わせを行い お客様の試験の目的や必要なデータについて理解した上で適切な試験計画を立案しご提案致します 受託に関するお問い合わせ お見積りのご依頼はこちらへメールアドレス :jutaku@fujifilm.com 42

45 主な関連試薬 器材一覧表 主な関連試薬 器材一覧表 コード No. 品名容量希望納入価格 ( 円 ) シングルテストキット ( 試験管入ライセート試薬 + CSE ただし リムルス P S シングルテストワコーには C S E 添付なし ) NEW NEW NEW リムルス ES-Ⅱ シングルテストワコー 25 回用 35, リムルス ES-Ⅱ シングルテストワコー 回用 照会 リムルス ES-Ⅱ シングルテストワコー 回用 照会 PYROSTAR ES-Fシングル 25 回用 41, PYROSTAR ES-Fシングル 回用 照会 リムルスカラー KY シングルテストワコー 25 回用 50, リムルス HS-T シングルテストワコー 25 回用 32, リムルス PS シングルテストワコー 20 回用 103, リムルス ES-Ⅱ プラス CS シングルテストワコー 32 回用 49,500 マルチテストキット ( ライセート試薬 + CSE) NEW NEW リムルス ES-Ⅱ テストワコー 60 回用 37, リムルス ES-Ⅱ テストワコー 回用 照会 PYROSTAR ES-F 0.03 with CSE 50 回用 照会 PYROSTAR ES-F/Plate with CSE 160 回用 59, リムルスカラー KYテストワコー 60 回用 /120 回用 54,000 ライセート試薬 NEW NEW NEW NEW NEW カブトガニ血球抽出物 ES-Ⅱ, 凍結乾燥品 50 回用 29, カブトガニ血球抽出物 ES-Ⅱ, 凍結乾燥品 100 回用 58, カブトガニ血球抽出物 ES-Ⅱ, 凍結乾燥品 回用 照会 カブトガニ血球抽出物 ES-Ⅱ, 凍結乾燥品 回用 照会 PYROSTAR ES-F without CSE 100 回用 59, PYROSTAR ES-F 回用 照会 PYROSTAR ES-F 回用 照会 PYROSTAR ES-F/Plate without CSE 200 回用 67, カブトガニ血球抽出物 ES-Ⅲ 100 回用 58,000 ペプチドグリカン β- グルカン検出用試薬 NEW SLP-HS シングル試薬セット Ⅱ 20 回用照会 標準品 日本薬局方エンドトキシン標準品 10,000 ~ 25,000EU/vial 3 照会 USP 標準エンドトキシン 10,000EU/vial 照会 コントロールスタンダードエンドトキシン (CSE) 500ng/vial 6,200 エンドトキシン検出用抽出液 エンドトキシン検出用抽出液 10mL 4 15,300 エンドトキシン試験用チップ バイオクリーンチップワコー エクステンド SⅡ 100 本 6, バイオクリーンチップワコー 200Ⅱ 100 本 3, バイオクリーンチップワコー 1000Ⅱ 100 本 3,600 エンドトキシン試験用プレート バイオクリーンプレートワコー 50 枚 30,000 エンドトキシン試験用試験管およびアルミキャップ リムルステストチューブ -S アルミキャップ付 10 本 8 16, リムルステストチューブ -S 10 本 10 12, アルミキャップ -S 10 個 10 11,200 関連サービス43 1: 標準プロトコルで使用時は 8 検体測定分に相当します 2: プレートリーダー法の場合は 120 回用 3: ロットにより変動

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48 本文に収載しております試薬は 試験 研究の目的のみに使用されるもので 医薬品 食品 家庭用品 などとして使用できません 希望納入価格には消費税が含まれておりません 本カタログの内容は予告なしに仕様 デザイン 希望納入価格を変更することがあります 最新情報につきましてはお問い合わせください 本カタログの記載内容は 2019 年 3 月現在のものです フリーダイヤル : フリーファックス : URL: Wako LAL システム : Web からのお問合せ : 開 01K