~ミックスモードカラム ~ DS との違い 移動相の考え方 TCI Chromatography Department
逆相とミックスモード : 充填剤の違い DS カラムに用いる充填剤 オクタデシル基をシリカゲルに化学結合 ミックスモードカラムに用いる充填剤 オクタデシル基とイオン交換基両方を有する試薬をシリカゲルに化学結合 弊社製品は DS とイオン交換の充填剤を混ぜることはしておりません 疎水性部分 : イオン交換基 :
逆相とミックスモード : 条件の違い 分離モード逆相ミックスモード カラム DS DS+ イオン交換 疎水性化合物分析有効有効 酸性化合物分析 塩基性化合物分析 弱酸性化合物 : 移動相 pを下げ解離抑制させて分析 強酸性化合物 : 酸性物質用イオン対試薬を移動相に添加 塩基性物質用イオン対試薬を移動相に添加 DS+ アニオン交換系カラムを選択 (Kaseisorb LC DS-SAX Superなど ) 緩衝液 ( 弱酸性 ~ 中性条件 ) で酸性化合物を解離状態にして分析 イオン対試薬の添加は不要 DS+ カチオン交換系カラムを選択 (TCI Dual DS-CX5など ) 緩衝液 ( 酸性 ~ 弱酸性条件 ) で塩基性化合物を解離状態にして分析 イオン対試薬の添加は不要
逆相とミックスモード : 条件の違い 分離モード逆相ミックスモード 有機溶媒の種類 有機溶媒比率 アセトニトリル メタノール TF 等 疎水性試料の保持は水との混合比率で調整する 緩衝液イオン性試料分析時に必要必要 DS と同じ DS と同じ 緩衝液の種類リン酸系 酢酸系 ギ酸系等 DS と同じ 緩衝液濃度 5mM~5mM 程度 DS と同じ イオン対試薬 イオン性試料の保持が弱い場合に使用 不要 イオン対試薬濃度 ~mm 程度不要 グラジエント溶出有効有効
カラム選択 : カチオン交換タイプ 塩基性化合物 TCI Dual DS-CX5 (DS+ 中カチオン交換 ) 保持が弱い場合 保持が強い場合 TCI Dual DS-CX (DS+ 強カチオン交換 ) TCI Dual DS-CX (DS+ 弱カチオン交換 ) 保持の強さはカラムのイオン交換基の強さと同じ順序になる場合が多い DS-CX( 強カチオン交換 )>DS-CX5( 中カチオン交換 )>DS-CX( 弱カチオン交換 )
カチオン交換系分離比較 保持の強さ : TCI Dual DS-CX < TCI Dual DS-CX5 < TCI Dual DS-CX Column Size :.6 mmi.d. 5 mm Mobile Phase: C C / 5mmol/L C (p.5)=7/ Flow Rate :. ml/min Detection : UV 5 nm Temperature : 5 Sample : 5 uv,,5,7,. VMA 5 6 8,9,,. DPA 5. VA. oradrenaline 5 7 5 5. Adrenaline 6. Creatinine 7. Dopamine 8. Serotonin 9. Tyramine. Isoproterenol 5 5-5 - 本条件下 (p.5) ではイオン交換基が解離抑制されるため保持が弱くなっています ( 中性条件では保持が強まります ) 8 9 6 5 6 7 8..5 5. 7.5..5 5. 7.5 min 9 TCI Dual DS-CX TCI Dual DS-CX5 TCI Dual DS-CX
カチオン交換系分離比較 保持の強さ : TCI Dual DS-CX < TCI Dual DS-CX5 < TCI Dual DS-CX Column Size :.6 mmi.d. 5 mm Mobile Phase : C C / mmol/l K P (p.) = /6 Flow Rate :. ml/min Detection : UV nm Temperature : 5 uv Sample : Melamine 9 8 7 6 TCI Dual DS-CX 5 TCI Dual DS-CX5 TCI Dual DS-CX -. 5.. 5.. 5.. min
カラム選択 : アニオン交換タイプ 酸性化合物 Kaseisorb LC DS-SAX Super 保持が弱すぎる場合 TCI Dual DS-AX まだ保持が弱い場合 TCI Dual DS-AX 保持の強さは以下の様になる場合が多い DS-AX( 弱アニオン交換 )>DS-AX( 強アニオン交換 )>DS-SAX( 強アニオン交換 )
アニオン交換系の分離比較 保持の強さ :Kaseisorb LC DS-SAX Super<TCI Dual DS-AX<TCI Dual DS-AX 5 5 5 5 uv 5 6 5 5 6 6 p7. 55 5 5 5 5 5 p5. p5. p5. 5 uv 5 6 5 p7. 5 5 5 p.5 6 p.5 p.5. 5.. 5.. 5. min 5 6 7 8 min. 5.. 5.. 5. min Kaseisorb LC DS-SAX TCI Dual DS-AX TCI Dual DS-AX 5 6 5 5 5 5 uv 5 6 p7. 5 6 5 6 Mobile Phase : p7. C C/ 5mmol/L K P (p7., P )=5/5 p5. C C/ 5mmol/L C C (p5., C C)=5/5 p.5 C C/ 5mmol/L C (p.5, C)=5/5 Detection : UV5nm Flow Rate :.ml/min Temperature : Column Size :.6mmI.D. 5mm Sample :.Benzene.Toluene.Ethylbenzene.Benzenesulfonic Acid 5.p-Toluenesulfonic Acid 6.-Ethylbenzenesulfonic Acid
移動相設計 有機溶媒の比率を変更する 有機溶媒の組成を上げる 疎水性化合物 早く溶出する 酸性および塩基性化合物 早く溶出する傾向がある ( 疎水性化合物と比べて保持時間の変動が少ない場合が多い ) 緩衝液の濃度を変更する 緩衝液の濃度を上げる 疎水性化合物 影響なし ( 保持時間がほとんど変わらない ) 酸性および塩基性化合物 早く溶出する p を変更する p を低くする 疎水性化合物 影響なし ( 保持時間がほとんど変わらない ) 酸性化合物 遅く溶出する傾向がある 塩基性化合物 早く溶出する傾向がある
有機溶媒と水の組成比を変更する Column:TCI Dual DS-AX.6mmI.D. 5mm Temperature:5 Flow Rate:. ml/min 5 -Adenylic Acid ( 酸性化合物 ). Methyl Benzoate ( 疎水性化合物 ) Methanol % Mobile Phase mmol/l Phosphate buffer 7% Time(min) Methanol 6% mmol/l Phosphate buffer %
バッファー濃度を変更する Column:TCI Dual DS-AX.6mmI.D. 5mm Temperature:5 Flow Rate:. ml/min 5 -Adenylic Acid ( 酸性化合物 ). Methyl Benzoate ( 疎水性化合物 ) Methanol % Mobile Phase mmol/l Phosphate buffer 7% Time(min) Methanol % 5mmol/L Phosphate buffer 7%
p を変更する Column : TCI Dual DS-AX.6mmI.D. 5mm Temperature : Flow rate :. ml/min Mobile phase : C C/5mM buffer=5 / 5 p7. : K P (p7.) p5. : C C (p5.) p.5 : C (p.5) Sample :. Benzene. Toluene. Ethylbenzene. Benzenesulfonic acid 5. p-toluenesulfonic acid 6. -Ethylbenzenesulfonic acid uv 5 5 5 5 5 5 5 6 5 6 p7. p5. p.5 5 6 5 6 7 8 min
pka を考える 酢酸 C C C C - + + 移動相 :p.75 pka:.75 移動相 :p6.75 疎水性増大 逆相 イオン性増大 イオン交換 グルクロン酸 C pka:. 親水性の糖関連化合物は逆相条件での保持が難しい イオン性を増大させイオン交換を適用 試料の pka より 以上離した p に移動相を調整することで 試料が完全に解離しイオン交換が有効に働く (DS でイオン対試薬を使用するときと同じ考え方 )
グラジエント溶出 : 溶媒比率 Column : TCI Dual DS-CX5 (.6 mm I.D. 5 mm) Mobile phase : A) C C / 5mmol/L C (p.5) = / 9 Flow rate Detection B) C C / 5mmol/L C (p.5) = 7 / -5% B (-min.) :. ml/min : UV 5 nm Temperature : 5 Sample :. 5-ydroxy-L-tryptophan. 5-ydroxy--acetic acid(5-iaa). Acetylserotonin. L-Tryptophan 5. Serotonin(5-T) 6. Melatonin. C.. 9 8 7 6 5 C 5. C. 6. C 5 6 -..5 5. 7.5..5 5. 7.5 min
グラジエント溶出 : 塩濃度 Column : TCI Dual DS-AX (.6 mmi.d. X 5 mm) Mobile phase : A) C / mmol/l K P (p7.) = / 8 B) C / 5mmol/L K P (p7.) = / 8 -% B (-min) Flow rate :. ml/min mau 9 Detection : UV 5 nm 8 7 Temperature : C 6 5 Sample :. AMP. camp 9 8 7 6 5. ADP. ATP - - -. 5.. 5.. 5.. 5.. min
Column size :.6 mmi.d. X 5 mm Mobile phase : C C / / P = 5 / 95 /. Flow rate :. ml/min Detection : UV nm Temperature : 5 Sample :. L-Glutamic Acid γ-aminobutyric acid(gaba) TCI Dual DS-CX TCI Dual DS-CX5 TCI Dual DS-CX 酸性条件ではイオン交換基が働かないため保持が弱い. γ-aminobutyric Acid(GABA) Kaseisorb LC DS 5 min
Sialic Acids Column size :.6 mmi.d. 5 mm Mobile phase : C C / mmol/l Ac (Ac, p5.) = 5/95 Flow rate :. ml/min uv Kaseisorb LC DS-SAX Super 5 Detection : UV nm Temperature : 5 Sample :. -Glycolylneuramic acid(eu5gc) C C. -Acetylneuramic acid(eu5ac) C 75 5 5 75 5 5 75 5 5 TCI Dual DS-AX TCI Dual DS-AX Kaseisorb LC DS..5 5. 7.5..5 min
Galacturonic Acid, L-Ascorbic Acid Column :.6 mmi.d. 5 mm Mobile Phase : C / mmol/l K P (p7., P ) = /9 Flow Rate :. ml/min Detection : UV nm Temperature : Sample :. Galacturonic Acid Kaseisorb LC DS-SAX Super TCI Dual DS-AX. L-Ascorbic Acid, TCI Dual DS-AX Kaseisorb LC DS..5 5. 7.5 min
Basic Drugs Column : TCI Dual DS-CX.6 mmi.d. 5 mm Mobile phase : C C / 5mmol/L C C (p5.,c C) = 8 / Flow Rate :. ml/min Detection : UV nm Temperature : Sample :. icardipine. Verapamil. Alprenolol. Clomipramine 5. Chlorpromazine mau 5 C C C C C C C C C C C C 5 5 5 5 Cl S Cl -5. 5.. 5.. 5.. 5.. 5. min
Basic Drugs Column : TCI Dual DS-CX.6 mmi.d. 5 mm Mobile phase : C C/5mmol/L C C (p5.,c C)=8/ Flow Rate :. ml/min Detection : UV nm Temperature : C Sample : C C 7 mau 6 5 C C.icardipine C C C C C C.Verapamil C.Alprenolol - 5 6 7 8 9 min
Column size :.6 mmi.d. X 5 mm Mobile phase : A) C C / 5mM C (p.5) = /9 Flow rate Detection Temperature : 5 Sample : C C Serotonin Metabolites mau 5 B) C C / 5mM C (p.5) = 7/ -5%B (-min) :. ml/min : UV 5 nm. 5-ydroxy-L-tryptophan. L-Tryptophan. 5-ydroxyindole--acetic acid(iaa). -Acetylserotonin C 5. Serotonin(5-T) 6. Melatonin C 75 5 5 9 8 7 6 5 -..5 5. 7.5..5 5. 7.5 min mau 75 5 5..5 5. 7.5..5 5. 7.5 min mau 5 TCI Dual DS-CX TCI Dual DS-CX5 6 5 Kaseisorb LC DS..5 5. 7.5..5 5. 7.5 min 5 6 6
Amino Acids Column : TCI Dual DS-CX5(.6 mmi.d. 5 mm) Mobile Phase : A) C C / 5 mmol/l K P (p., P ) = 5/95 B) C C / 5 mmol/l K P (p., P ) = /6 -%B(5-min.) uv Flow Rate :. ml/min Detection : UV nm Temperature : Aspartic Acid 9 Aspartic Acid Alanine 8 7 Alanine S 6 5 Methionine Methionine Phenylalanine Phenylalanine Arginine Arginine -. 5.. 5.. 5. min
Anti-diabetic agent Column size :.6 mmi.d. X 5 mm Mobile phase : C C / 5mmol/L K P (p.) = 5/5 Flow rate :. ml/min Detection : UV nm Temperature : Sample : uv 65 6 55 5 5 TCI Dual DS-CX TCI Dual DS-CX5 Metformin 5 5 TCI Dual DS-CX 酸性条件ではイオン交換基が働かないため保持が弱い 5 5 Kaseisorb LC DS 5 min
Allantoin, D-Panthenol Column Size :.6 mmi.d. 5 mm Mobile Phase : C / mmol/l K P (p6., P ) = /9 Flow Rate :. ml/min Detection : UV nm C C Temperature : Sample :. Allantoin. D-Panthenol 8 time(min) TCI Dual DS-CX 8 time(min) TCI Dual DS-CX
Levulinic Acid, Methyl Levulinate Column : TCI Dual DS-AX.6mmI.D. 5mm Mobile Phase : C C / mmol/l K P (p7., P ) = / 8 Flow Rate :. ml/min Detection : UV nm Temperature : 5 mv 9 Sample : C. Levulinic Acid C C. Methyl Levulinate 8 7 6 5.7.79..5 5. 7.5 min
Adenosine Phosphates Column : TCI Dual DS-AX (.6 mmi.d. X 5 mm) Mobile phase : A) C / mmol/l K P (p7.) = / 8 B) C / 5mmol/L K P (p7.) = / 8 -% B (-min) Flow rate :. ml/min mau 9 Detection : UV 5 nm 8 7 Temperature : 6 5 Sample :. AMP. camp 9 8 7 6 5. ADP. ATP - - -. 5.. 5.. 5.. 5.. min
ucleotides Column Size :.6 mmi.d. 5 mm Mobile Phase : C / mmol/l K P (p 7., P ) = / 8 Flow Rate :. ml/min Detection : UV 5 nm Temperature : Sample :. CMP. UMP. IMP. GMP 5. AMP, 5 5 5 5 time(min) TCI Dual DS-AX 5 5 time(min) TCI Dual DS-AX
Alkali alides CI - Li + Coulmn : TCI Dual DS-CX5.6 mmi.d. 5 mm Mobile Phase : C C/ 5mmol/L C C (p5., C C) = 5/5 Detection : Corona CAD Temperature : Flow Rate :. ml/min Sample Size : 5uL Sample : Lithium chloride Sodium chloride Potassium chloride a + K + 5 5 min
alide Ions K + Br - 5 5 min I - UV nm Coulmn : Kaseisorb LC DS-SAX Super.6mmI.D. 5 mm Mobile Phase : C C/ 5mmol/L C C (p5., C C) = 5/5 Detection : UV nm, Corona CAD Flow Rate :. ml/min Temperature : Sample Size : 5 ul Sample : Potassium cloride Potassium bromide Potassium Iodide Cl - Br - I - Corona CAD 5 5 min
Ionic Liquid Column : TCI Dual DS-CX (.6 mm I.D. X 5 mm) Mobile phase : C C / 5mmol/L Ac (Ac,p5.) = / 9 Flow rate :. ml/min Detection : Corona CAD Temperature : Sample : -Butyl--methylimidazolium Chloride (bmimcl) Cl - + C (C ) C 6 8 min
ラインアップ タイプ DS+ カチオン交換タイプ 塩基性化合物の分離に DS+ アニオン交換タイプ 酸性化合物の分離に カラム TCI Dual DS-CX TCI Dual DS-CX5 TCI Dual DS-CX TCI Dual DS-AX TCI Dual DS-AX Kaeisorb LC DS-SAX Super 保持力 強 中 弱 強 中 弱. 5mm 55, 円 S75 S765 S75 S75 S75 S8. mm 6, 円 S77 S767 S77 S77 S77 S8. 5mm 65, 円 S7 S76 S7 S7 S7 S98. 5mm 75, 円 S7 S76 S7 S7 S7 S99.6 5mm 7, 円 S7 S76 S7 S7 S7 S8.6 mm 5, 円 S79 S769 S79 S79 S79 S8.6 5mm 59, 円 S7 S76 S7 S7 S7 S9.6 5mm 7, 円 S7 S76 S7 S7 S7 S9. 5mm 8, 円 S76 S766 S76 S76 S76 S85. 5mm, 円 S78 S768 S78 S78 S78 S86 カートリッジタイプガードカラム [ 専用ホルダーが必要です :S5 9, 円 ]. 5mm, 円 S77 S77 S77 S775 S77 S77