パージェタ 緒言 Page 2 略語一覧略語 英語名 和名 ADCC Antibody-dependent cell-mediated 抗体依存性細胞障害 cytotoxicity EGF Epidermal growth factor 上皮増殖因子 EGFR Epidermal gro

パージェタ 2.6.1 緒言 Page 1 パージェタ点滴静注 420 mg/14 ml ( ペルツズマブ ( 遺伝子組換え )) [HER2 陽性手術不能又は再発乳癌 ] 第 2 部 ( モジュール 2):CTD の概要 ( サマリー ) 2.6 非臨床試験の概要文及び概要表 2.6.1 緒言 中外製薬株式会社

パージェタ 2.6.1 緒言 Page 2 略語一覧略語 英語名 和名 ADCC Antibody-dependent cell-mediated 抗体依存性細胞障害 cytotoxicity EGF Epidermal growth factor 上皮増殖因子 EGFR Epidermal growth factor receptor 上皮増殖因子受容体 HER2 Human epidermal growth factor receptor ヒト上皮増殖因子受容体 2 型 type 2 HER3 Human epidermal growth factor receptor ヒト上皮増殖因子受容体 3 型 type 3 HER4 Human epidermal growth factor receptor ヒト上皮増殖因子受容体 4 型 type 4 HRG Heregulin ヘレグリン MAPK Mitogen-activated protein kinase マイトジェン活性化プロテインキナーゼ PI3K Phosphatidylinositol-3 kinase ホスファチジルイノシトール-3 キナ ーゼ

パージェタ 2.6.1 緒言 Page 3 目次 頁 2.6.1 緒言... 4 2.6.1.1 ペルツズマブの構造... 4 2.6.1.2 ペルツズマブの薬理学的特性... 4 2.6.1.3 医薬品製造販売承認申請の概要... 4 2.6.1.4 参考文献... 4

パージェタ 2.6.1 緒言 Page 4 2.6.1 緒言 2.6.1.1 ペルツズマブの構造ペルツズマブはヒト化モノクローナル IgG1 抗体であり, アミノ酸 214 残基の L 鎖 2 分子及びアミノ酸 449 残基の H 鎖 2 分子からなる 本抗体はジスルフィド (S-S) で分子間結合しており, その分子量は約 148,000である (2.3.S.1) 2.6.1.2 ペルツズマブの薬理学的特性 (1) HER2 シグナル伝達及び乳癌との関係 HER ファミリーは EGFR(epidermal growth factor receptor,her1),her2,her3 及び HER4 の 4 種類の受容体が知られており,HER2 は HER2 同士で HER2/HER2 ホモダイマーを形成するだけではなく,HER1 のリガンドである EGF(epidermal growth factor) の刺激により HER2/EGFR ヘテロダイマーを,HER3 のリガンドである HRG(heregulin) の刺激により HER2/HER3 ヘテロダイマーを, それぞれ形成することが知られている 1) これら HER ファミリー間で形成されたホモ及びヘテロダイマーは細胞増殖や生存シグナルに重要な役割を果たしており, 乳癌腫瘍では 25% に HER2 の過剰発現が確認されている 1) HER2 の過剰発現は癌の進行及び予後不良と関連することが明らかとなっており, 現在 HER2 を標的としたヒト化モノクローナル抗体であるトラスツズマブは乳癌及び胃癌治療薬として広く使用されている (2) ペルツズマブの作用機序及び腫瘍増殖抑制効果ペルツズマブは, トラスツズマブと同様に HER2 の細胞外領域に結合するヒト化モノクローナル抗体である しかし, 両抗体が認識するエピトープ部位は異なり, トラスツズマブが膜近接部位のドメイン IV に結合するのに対し 2), ペルツズマブは HER2 ダイマー形成に必須な領域であるドメイン II に結合する 3) ペルツズマブはリガンド依存的なダイマー形成を阻害することにより,HER2/HER3 のヘテロダイマー形成, 及びその下流に位置する PI3K-Akt 及び MAPK の活性化を阻害する HER2 低発現ヒト乳癌株 MCF7 又は高発現ヒト乳癌株 SK-BR-3 を用いた in vitro 試験において, このリガンド依存的な HER2 シグナルに対する阻害作用は, トラスツズマブにはなくペルツズマブに特有な薬理学的特性であることが明らかとなった また, ペルツズマブはこの阻害作用に加えて,HER2 高発現ヒト乳癌株 KPL-4 においてトラスツズマブと同様に強い ADCC ( antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity ) 活性を示した HER2 高発現ヒト乳癌株 BT474JB 移植モデルを用いた in vivo 試験において, ペルツズマブは単独投与で腫瘍増殖をほぼ完全に抑制し,HER2 高発現ヒト乳癌株 KPL-4 同所性移植モデルではペルツズマブ / トラスツズマブの併用により腫瘍の縮小を含む強い腫瘍増殖抑制効果の増強が認められた また, ペルツズマブは, トラスツズマブ抵抗性株 Founder 2-134R 移植モデルに対しても効果を示した 2.6.1.3 医薬品製造販売承認申請の概要本申請で予定している効能 効果及び用法 用量については 2.2 を参照 2.6.1.4 参考文献 1) Slichenmyer WJ, Fry DW. Anticancer therapy targeting the erbb family of receptor tyrosine kinases. Semin Oncol 2001;28 Suppl 16:67-79. 2) Cho HS, Mason K, Ramyar KX, Stanley AM, Gabelli SB, Denney DW Jr, et al. Structure of the extracellular region of HER2 alone and in complex with the Herceptin Fab. Nature 2003;421:756-60. 3) Franklin MC, Carey KD, Vajdos FF, Leahy DJ, de Vos AM, Sliwkowski MX. Insights into ErbB signaling from the structure of the ErbB2-pertuzumab complex. Cancer Cell 2004;5:317-28.

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 1 パージェタ点滴静注 420 mg/14 ml ( ペルツズマブ ( 遺伝子組換え )) [HER2 陽性手術不能又は再発乳癌 ] 第 2 部 ( モジュール 2):CTD の概要 ( サマリー ) 2.6 非臨床試験の概要文及び概要表 2.6.2 薬理試験の概要文 中外製薬株式会社

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 2 略語一覧略語 英語名 和名 ADCC Antibody-dependent cell-mediated 抗体依存性細胞障害 cytotoxicity EGF Epidermal growth factor 上皮増殖因子 EGFR Epidermal growth factor receptor 上皮増殖因子受容体 ErbB2 Erythroblastic leukemia viral oncogene homolog 2 赤芽球性白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ 2( 上皮増殖因子受容体 2 型と相同受容体 ) GSK-3 Glycogen synthase kinase 3 グリコーゲン合成酵素キナーゼ3 HER2 Human epidermal growth factor receptor ヒト上皮増殖因子受容体 2 型 type 2 HER3 Human epidermal growth factor receptor ヒト上皮増殖因子受容体 3 型 type 3 HRG Heregulin ヘレグリン IP intraperitoneal 腹腔内 IV intravenous 静脈内 Kd Dissociation constant 解離定数 MAPK Mitogen-activated protein kinase マイトジェン活性化プロテインキナーゼ NSCLC Non-small-cell lung cancer 非小細胞肺癌 PBMC Peripheral blood mononuclear cells 末梢血単核球 PI3K Phosphatidylinositol-3 kinase ホスファチジルイノシトール-3 キナーゼ PO per os 経口 rhrg Recombinant heregulin リコンビナントヘレグリン SDS-PAGE Sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動 TG Tumor growth rate 腫瘍増殖率 TGF-α Transforming growth factor-α トランスフォーミング増殖因子 -アルファ TGI Tumor growth inhibition rate 腫瘍増殖抑制率

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 3 目次 頁 2.6.2 薬理試験の概要文... 4 2.6.2.1 まとめ... 4 2.6.2.2 効力を裏付ける試験... 5 2.6.2.2.1 In vitro 試験... 5 2.6.2.2.1.1 HER2 に対する結合親和性... 5 2.6.2.2.1.2 リガンド依存性 HER2/HER3 ダイマー形成に対する阻害作用... 6 2.6.2.2.1.3 リガンド依存性シグナルに対する阻害作用... 6 2.6.2.2.1.4 細胞増殖抑制作用... 8 2.6.2.2.1.5 ADCC 活性... 9 2.6.2.2.2 In vivo 試験... 10 2.6.2.2.2.1 HER2 高発現及び HER2 低発現癌細胞株 xenograft モデルに対する腫瘍 増殖抑制効果... 10 2.6.2.2.2.2 トラスツズマブ抵抗性株及びヒト癌患者由来癌組織, 並びにヒト癌細 胞株 xenograft モデルに対する腫瘍増殖抑制効果... 14 2.6.2.3 副次的薬理試験... 16 2.6.2.4 安全性薬理試験... 16 2.6.2.5 薬力学的薬物相互作用試験... 16 2.6.2.5.1 トラスツズマブ又はタキサン系薬剤パクリタキセルとの併用効果... 16 2.6.2.5.2 パクリタキセル以外の化学療法剤との併用効果... 19 2.6.2.6 考察及び結論... 27 2.6.2.7 参考文献... 27

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 4 2.6.2 薬理試験の概要文 2.6.2.1 まとめペルツズマブ及びトラスツズマブはともに HER2(human epidermal growth factor receptor type 2) を認識する抗体である しかし両抗体のエピトープは異なり, ペルツズマブがリガンド刺激による HER2のダイマー形成に必須な HER2 細胞外領域のドメイン II に結合するのに対し 1), トラスツズマブは膜近接部位のドメイン IV に結合する 2) ペルツズマブの薬理学的特性, 効力及びトラスツズマブとの違いを明らかにするために,in vitro 試験では,HER3 のリガンドであるヘレグリン (HRG : heregulin ) 刺激による HER2/HER3ダイマー形成に対する作用,HRG 依存性の HER2シグナルに対する作用, 細胞増殖抑制作用, 及び抗体依存性細胞障害 (ADCC:antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity) 活性等について精査した In vivo 試験では, ペルツズマブの効力を明らかにするために, 各種ヒト癌細胞株移植モデルを用いて本薬単独投与時の腫瘍増殖抑制効果, トラスツズマブ, パクリタキセル又は各種化学療法剤との併用効果を評価した In vitro 試験 (1) HER2 に対する結合親和性スキャチャードプロット法でペルツズマブのヒト及びサル HER2/ErbB2 に対する親和性を調べたところ, ヒト及びサルに対するペルツズマブの Kd 値はそれぞれ 0.80 及び 0.53 nmol/l であり, 同等であった (2) リガンド依存性 HER2/HER3 ダイマー形成に対する阻害作用 HER2 低発現ヒト乳癌株 MCF7 及び HER2 高発現ヒト乳癌株 SK-BR-3 において, ペルツズマブ 100 nmol/l は両細胞で HRG 刺激による HER2/HER3 ダイマー形成を阻害した 一方, トラスツズマブには HER2/HER3 ダイマー形成阻害作用はみられなかった (3) リガンド依存性シグナルに対する阻害作用 MCF7 細胞を用いて HRG 刺激による HER2 のリン酸化, その下流シグナルの PI3K-Akt 及び MAPK 経路に対する作用を調べたところ, ペルツズマブ 100 又は 200 nmol/l は HER2 のリン酸化,Akt 及び MAPK 両キナーゼの活性化を阻害した 一方, トラスツズマブにはいずれの阻害作用もみられなかった (4) 細胞増殖抑制作用ヒト乳癌株 MCF7,MDA-MB-134,T-47D 及び ZR-75-1 を用いて細胞増殖抑制作用を調べたところ, ペルツズマブ 300 nmol/l は HRG 刺激による細胞増殖を抑制した (5) ADCC 活性エフェクター細胞としてヒト末梢血単核球 (PBMC: peripheral blood mononuclear cells), 標的細胞として HER2 高発現ヒト乳癌株 KPL-4 を用いて ADCC 活性を調べたところ, ペルツズマブは, トラスツズマブと同様に強い ADCC 活性を示した In vivo 試験 (1) HER2 高発現及び HER2 低発現癌細胞株 xenograft モデルに対する腫瘍増殖抑制効果 HER2 高発現 (HER2(3+)*) のヒト乳癌株 BT474JB 及び非小細胞肺癌 (NSCLC:non-smallcell lung cancer) 株 Calu-3, 又は HER2 低発現 (HER2(1+)*) の乳癌患者由来組織 MAXF449 及び NSCLC 株 NCI-H522 xenograft マウスにペルツズマブを単独投与したところ, これらの株の

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 5 腫瘍増殖はほぼ完全に抑制された * 免疫組織化学染色法で評価 (2) トラスツズマブ抵抗性株及びヒト癌患者由来癌組織, 並びにヒト癌細胞株 xenograft モデルに対する腫瘍増殖抑制効果トラスツズマブ抵抗性株 Founder 2-134R 及び MAXF449 を含む 28 種類のヒト癌患者由来癌組織移植マウスにペルツズマブを単独投与したところ,Founder 2-134R 及び MAXF449 含む 6 種類に腫瘍増殖抑制効果が認められた ヒト乳癌株 MDA-MB-175 をマウスの生殖腺脂肪体に移植したマウスにペルツズマブを単独投与した結果, 対照群の腫瘍重量は増加したのに対しペルツズマブ単独投与群では腫瘍重量の増加は認められなかった 安全性薬理試験ペルツズマブの安全性薬理試験は, カニクイザルを用いたペルツズマブの反復投与毒性試験の一部として実施した 中枢神経系, 心血管系, 及び呼吸器系に対する作用を検討したところ, ペルツズマブにこれらのパラメータに対する影響は認められなかった (2.6.6.3 参照 ) 薬力学的薬物相互作用試験 (1) トラスツズマブ又はタキサン系薬剤パクリタキセルとの併用効果 HER2 高発現ヒト乳癌株 KPL-4 及び NSCLC 株 Calu-3 xenograft マウスにペルツズマブ / トラスツズマブを併用投与したところ, 腫瘍の縮小を伴う強い腫瘍増殖抑制効果の増強が認められた また,Calu-3 xenograft マウスでは, ペルツズマブ / パクリタキセルの併用投与で腫瘍増殖抑制効果の増強傾向が観察された (2) パクリタキセル以外の化学療法剤との併用効果ヒト NSCLC 株 QG-56,Calu-3, 卵巣癌株 IGROV-1, 及びヒト卵巣癌患者由来癌組織 OVXF550 の 4 種類の xenograft マウスを用いてペルツズマブ / ゲムシタビンの併用効果を調べたところ, 腫瘍増殖抑制効果の増強傾向がみられた ヒト乳癌患者由来癌組織 MAXF583, MAXF574, 及びヒト大腸癌患者由来癌組織 CXF264 の 3 種類の xenograft マウスを用いてペルツズマブ / カペシタビンの併用効果を調べたところ,CXF264 を除く 2 種類に腫瘍増殖抑制効果の増強又は増強傾向がみられた ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft マウスでペルツズマブ / シスプラチン, ペルツズマブ / エルロチニブ又はペルツズマブ / イリノテカンの併用効果を調べたところ, すべての併用で腫瘍増殖抑制効果の増強傾向が観察された 2.6.2.2 効力を裏付ける試験 2.6.2.2.1 In vitro 試験 2.6.2.2.1.1 HER2に対する結合親和性資料番号 4.2.1.1-1 スキャチャードプロット法でヒト及びサル HER2/ErbB2に対するペルツズマブの親和性を調べたところ, ヒト及びサルに対するペルツズマブの Kd 値はそれぞれ0.80 及び0.53 nmol/l であった ( 表 2.6.2.2.1.1-1) これらのことから, 本薬はヒト及びサル HER2/ErbB2に対して同等な親和性を示すことが明らかとなった 表 2.6.2.2.1.1-1 ヒト及びサル HER2/ErbB2 に対するペルツズマブの結合活性 動物種 Kd (nmol/l) ± SD ヒト 0.80 ± 0.08 サル 0.53 ± 0.07

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 6 2.6.2.2.1.2 リガンド依存性 HER2/HER3 ダイマー形成に対する阻害作用資料番号 4.2.1.1-2 HRG 刺激による HER2/HER3 ダイマー形成に対するペルツズマブの作用を,HER2 低発現ヒト乳癌株 MCF7 又は HER2 高発現ヒト乳癌株 SK-BR-3 を用いて調べた MCF7 又は SK-BR-3 細胞 ( それぞれ 1 10 6 /well) にペルツズマブ又はトラスツズマブ ( 最終濃度 : 各 100 nmol/l) を添加し, 室温で 1 時間インキュベートした Recombinant HRGβ1(rHRGβ1 177-244, 最終濃度 : 5 nmol/l) を加えて約 10 分間インキュベートした後に, 細胞を溶解した 抗 HER2 モノクロナール抗体を固相化したアフィニティーゲルを用いて, 細胞溶解液の HER2 蛋白質を免疫沈降させた ゲルを遠心分離で回収した後に SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gel electrophoresis) sample buffer を加えて煮沸し, 上清をポリアクリルアミドゲルで電気泳動した 抗 HER3 抗体をプローブとして, メンブレン上の HER3 蛋白質をウエスタンブロット法で検出した 結果を図 2.6.2.2.1.2-1 に示す HRG のみを添加した MCF7 及び SK-BR-3 の両細胞では, HER3 蛋白が検出され HER2/HER3 ダイマーの形成が認められた ペルツズマブと HRG を添加した細胞では,MCF7 細胞の免疫沈降物中に HER3 は検出されず, また,SK-BR-3 細胞の HER3 バンドも非常に薄かった 一方, トラスツズマブと HRG を添加した細胞では,MCF7 及び SK-BR-3 両サンプルで HER3 が検出され, トラスツズマブは HER2/HER3 ダイマー形成を阻害しないことが示された これらのことから, ペルツズマブはトラスツズマブとは異なりリガンド依存性の HER2/HER3 ダイマー形成を阻害できることが示された 図 2.6.2.2.1.2-1 リガンド依存性の HER2/HER3 ダイマー形成に対するペルツズマブ及びトラスツズマブの作用 ErbB3: HER3,2C4: ペルツズマブ [4.2.1.1-2 Fig.1 を改変 ] 2.6.2.2.1.3 リガンド依存性シグナルに対する阻害作用 (1) HER2のリン酸化に対する阻害作用資料番号 4.2.1.1-2 リガンド依存的な HER2のチロシンリン酸化に対するペルツズマブの作用を,MCF7 細胞を用いて調べた MCF7 細胞にペルツズマブ又はトラスツズマブ ( 最終濃度 :100 nmol/l), 並びに rhrgβ1( 最終濃度 :5 nmol/l) を添加した後に,2.6.2.2.1.2と同様に HER2 蛋白質を免疫沈降させ, 電気泳動を行った 抗リン酸化チロシン抗体をプローブとして, リン酸化されている HER2 蛋白質を検出した 結果を図 2.6.2.2.1.3-1に示す HRG のみを添加した細胞では HER2 蛋白がリン酸化され, ペ

Page 7 2.6.2 薬理試験の概要文 パージェタ ルツズマブはこのリン酸化を阻害した 一方 トラスツズマブは HER2のリン酸化を阻害しな かった これらのことから ペルツズマブはトラスツズマブとは異なり HRG による HER2の リン酸化を阻害できることが示された 図 2.6.2.2.1.3-1 HER2リン酸化に対するペルツズマブ及びトラスツズマブの作用 Control HRG のみを添加 2C4 ペルツズマブ ErbB2: HER2 [4.2.1.1-2 Fig.2を改変] (2) PI3K-Akt 経路に対する阻害作用 資料番号4.2.1.1-2 PI3K-Akt 経路に対するペルツズマブの作用を MCF7細胞を用いて調べた PI3K-Akt 経路に 対する作用は Akt 活性を指標に評価した Akt 活性は Cell Signaling Technology 社の測定キッ トを用いて Akt の天然基質である GSK glycogen synthase kinase -3α/β のリン酸化を指標に 評価した MCF7細胞 3 106/well にペルツズマブ又はトラスツズマブ 最終濃度 100 nmol/l を添加し 1時間インキュベートした rhrgβ1 最終濃度 1 nmol/l を加えて 12分間インキュベートした後に 細胞を溶解した 測定キットに従って抗 Akt 抗体を固相化 したアフィニティーゲルを用いて免疫沈降を行った後 リン酸化された GSK-3α/β 蛋白質をウ エスタンブロット法で検出した 結果を図 2.6.2.2.1.3-2に示す HRG のみを添加した細胞では Akt が活性化され ペルツズマ ブはこの活性化を阻害した 一方 トラスツズマブは Akt の活性化を阻害しなかった これ らのことから ペルツズマブはトラスツズマブとは異なりリガンドによって活性化される PI3K-Akt 経路を阻害できることが示された 図 2.6.2.2.1.3-2 Akt の活性化に対するペルツズマブ及びトラスツズマブの作用 Control HRG のみを添加 2C4 ペルツズマブ [4.2.1.1-2 Fig.2を改変]

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 8 (3) MAPK 経路に対する阻害作用資料番号 4.2.1.1-2 MAPK 経路に対するペルツズマブの作用を,MCF7 細胞を用いて調べた MAPK 経路に対する作用は MAPK 活性を指標に評価した MCF7 細胞 (1 10 5 /well) にペルツズマブ又はトラスツズマブ ( 最終濃度 :200 nmol/l) を添加し,30 分間インキュベーションした 細胞に rhrgβ1( 最終濃度 :0.2 nmol/l) 又は EGFR(epidermal growth factor receptor) のリガンドである TGF-α(transforming growth factor-α, 最終濃度 :1.0 nmol/l) を加えて室温で15 分間インキュベーションした後に,DTT(1%) を含む SDS-PAGE sample buffer を加えて電気泳動を行った 活性化された MAPK を, 抗 active MAPK 抗体を用いたウエスタンブロット法で検出した 結果を図 2.6.2.2.1.3-3に示す HRG 又は TGF-α のみを添加した細胞では MAPK は活性化され, ペルツズマブはこれら両リガンドによる活性化を阻害した 一方, トラスツズマブは HRG 及び TGF-α のいずれの刺激においても MAPK の活性化を阻害しなかった これらのことから, ペルツズマブは, トラスツズマブとは異なりリガンドによって活性化される MAPK 経路を阻害できることが示された 図 2.6.2.2.1.3-3 MAPK の活性化に対するペルツズマブ及びトラスツズマブの作用 2C4: ペルツズマブ [4.2.1.1-2 Fig.2 を改変 ] 以上,HER2 下流シグナルの PI3K-Akt 及び MAPK 経路に対する作用を調べた結果から, ペルツズマブは, トラスツズマブとは異なり HER3 のリガンドである HRG 又は EGFR のリガンドである TGF-α によって活性化される HER2 シグナルを介した経路を阻害できることが示された 2.6.2.2.1.4 細胞増殖抑制作用資料番号 4.2.1.1-2 In vitro での癌細胞増殖に対するペルツズマブの作用を,4 種類のヒト乳癌株 MCF7,MDA- MB-134,T-47D 及び ZR-75-1を用いて調べた これら4 細胞株 ( それぞれ1 10 4 /well) にペルツズマブ ( 最終濃度 :300 nmol/l) を添加し2 時間インキュベーションした後に,EGFR のリガンドである EGF(epidermal growth factor, 最終濃度 :3 nmol/l) 又は rhrgβ1( 最終濃度 : 0.3 nmol/l) を添加し3 日間培養した後に crystal violet dye で生細胞を染色した 結果を図 2.6.2.2.1.4-1に示す HRG 刺激時の細胞増殖に対して, ペルツズマブは4 株すべての増殖を抑制した 一方,EGF 刺激時の増殖に対する抑制作用はないかあるいは弱かった

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 9 図 2.6.2.2.1.4-1 ヒト乳癌細胞株増殖に対するペルツズマブの作用 2C4: ペルツズマブ [4.2.1.1-2 Fig.3 を改変 ] 2.6.2.2.1.5 ADCC 活性資料番号 4.2.1.1-3 ペルツズマブの ADCC 活性を, 標的細胞として HER2 高発現ヒト乳癌株 KPL-4 又は NSCLC 株 Calu-3, エフェクター細胞としてヒト PBMC を用いて調べた 蛍光標識した KPL-4 又は Calu-3 細胞と PBMC の比率が1:25となるよう混合して, ペルツズマブ又はトラスツズマブ ( 最終濃度 : それぞれ0.4~50 ng/ml) を添加し2 時間インキュベートした ADCC 活性は, 上清中の蛍光強度を測定することにより評価した 結果を図 2.6.2.2.1.5-1に示す ペルツズマブは, トラスツズマブと同様に KPL-4 及び Calu-3 に対して強力な ADCC 活性を示した

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 10 図 2.6.2.2.1.5-1 ペルツズマブ及びトラスツズマブの ADCC 活性 [4.2.1.1-3 Fig.4 を改変 ] 2.6.2.2.2 In vivo 試験 2.6.2.2.2.1 HER2 高発現及び HER2 低発現癌細胞株 xenograft モデルに対する腫瘍増殖抑制効果 (1) HER2 高発現ヒト癌細胞株 xenograft モデルに対する効果 1) ヒト乳癌株 BT474JB xenograft マウス (HER2(3+)) 資料番号 4.2.1.1-4 腫瘍体積が約 200 mm 3 の BT474JB xenograft マウス ( マウスの系統 :athymic nude) にペルツズマブ又はトラスツズマブを初回 0.8 mg/kg/ 週, その後 0.4 mg/kg/ 週 ( 以下,0.8/0.4 mg/kg) 又は 4/2 mg/kg で 3 週間, 計 4 回静脈内 (IV) 投与した HER2 の発現レベルは, 免疫組織化学染色法で評価した 薬物投与後から腫瘍体積を経時的に測定し, 腫瘍増殖率 (TG:tumor growth rate) を以下のように算出した また, ペルツズマブ及びトラスツズマブ初回投与後 7,14, 21,28 及び 35 日目に血中濃度を測定し, 両薬のトラフ濃度を求めた TG = (avg.tv treated t 1 avg.tv treated t 0 )/(avg.tv control t 1 avg.tv control t 0 ) 100 avg.tv treated t 1 : 薬物投与群の初回投与後の腫瘍体積測定時における腫瘍体積平均値 avg.tv treated t 0 : 薬物投与群の初回投与時の腫瘍体積平均値 avg.tv control t 1 : 対照群の初回投与後の腫瘍体積測定時における腫瘍体積平均値 avg.tv control t 0 : 対照群の初回投与時の腫瘍体積平均値 結果を図 2.6.2.2.2.1-1 に示す ペルツズマブ及びトラスツズマブの単独投与により腫瘍体積は用量依存的に減少し, 両薬の腫瘍増殖抑制効果はほぼ同じであった 最高用量 4/2 mg/kg では, ペルツズマブ及びトラスツズマブはともに腫瘍増殖をほぼ完全に抑制した TGI( 腫瘍増殖抑制率 :tumor growth inhibition rate)= 約 100%) TGI が約 100% を示した時 ( 投与後 25 日目 ) のトラフ濃度を算出したところ, ペルツズマブ及びトラスツズマブの濃度はそれぞれ 18 及び 14 μg/ml であった

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 11 図 2.6.2.2.2.1-1 HER2 高発現ヒト乳癌株 BT474JB xenograft マウス (HER2(3+)) に対するペルツズマブ及びトラスツズマブの効果 2C4: ペルツズマブ,Herceptin: トラスツズマブ,0.4 mg/kg:0.8/0.4 mg/kg,2 mg/kg:4/2 mg/kg, 各データは mean ± SE(n = 9), 各群の動物数 (n) は初回投与開始時の匹数 [4.2.1.1-4 Fig.2 を改変 ] 2) ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft マウス (HER2(3+)) 資料番号 4.2.1.1-5 腫瘍体積が約 90 mm 3 の Calu-3 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) に, ペルツズマブを1.2/0.6, 4/2,12/6,40/20 及び120/60 mg/kg で7 週間, 計 8 回腹腔内 (IP) 投与した HER2の発現レベルの評価, 腫瘍体積の測定及び TG の算出は, 上述 2.6.2.2.2.1(1)1) と同様に行った また, ペルツズマブ初回投与後 7,21,35,49 及び55 日目に血中濃度を測定し, トラフ濃度を求めた 結果を図 2.6.2.2.2.1-2に示す ペルツズマブの単独投与により腫瘍体積は用量依存的に減少し,12/6 mg/kg 以上の用量では腫瘍増殖がほぼ完全に抑制された (TGI = 約 100%) TGI が約 80% を示した時 ( 投与後 49 日目 ) のトラフ濃度を算出したところ, その濃度は約 25 μg/ml であった

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 12 図 2.6.2.2.2.1-2 HER2 高発現ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft マウス (HER2(3+)) に対するペルツズマブの効果 0.6 mg/kg:1.2/0.6 mg/kg,2.0 mg/kg:4/2 mg/kg,6.0 mg/kg:12/6 mg/kg,20 mg/kg:40/20 mg/kg, 60 mg/kg:120/60 mg/kg,ld:loading dose,md:maintenance dose, 各データは mean + SD(n =12), 各群の動物数 (n) は初回投与開始時の匹数 [4.2.1.1-5 Fig.3 を改変 ] (2) HER2 低発現ヒト癌患者由来組織及び癌細胞株 xenograft モデルに対する効果 1) ヒト乳癌患者由来組織 MAXF449 xenograft マウス (HER2(1+)) 資料番号 4.2.1.1-6 腫瘍体積が 100~200 mm 3 の MAXF449 xenograft マウス (NMRI nu/nu) に, ペルツズマブを 1.2/0.6,4/2,12/6,40/20 及び 120/60 mg/kg で 6 週間, 計 7 回 IP 投与した HER2 の発現レベルの評価, 腫瘍体積の測定及び TG の算出は, 上述 2.6.2.2.2.1(1)1) と同様に行った また, ペルツズマブ初回投与後 8,22,29,36 及び 42 日目に血中濃度を測定し, トラフ濃度を求めた 結果を図 2.6.2.2.2.1-3 に示す ペルツズマブは, 最小用量 1.2/0.6 mg/kg 以上で腫瘍増殖をほぼ完全に抑制した 腫瘍増殖がほぼ完全に抑制された時 ( 投与後 38 日目 ) のトラフ濃度を算出したところ, その濃度は 5 μg/ml であった

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 13 図 2.6.2.2.2.1-3 HER2 低発現ヒト乳癌患者由来組織 MAXF449 xenograft マウス (HER2(1+)) に対するペルツズマブの効果 Rel. Tumor Volume [%] 0.6 mg/kg:1.2/0.6 mg/kg,2.0 mg/kg:4/2 mg/kg,6.0 mg/kg:12/6 mg/kg,20 mg/kg:40/20 mg/kg, 60 mg/kg:120/60 mg/kg,ld:loading dose,md:maintenance dose, データは median(n = 9~11), 各群の動物数 (n) は初回投与開始時の匹数 [4.2.1.1-6 Fig.3 を改変 ] 2) ヒト NSCLC 株 NCI-H522 xenograft マウス (HER2(1+)) 資料番号 4.2.1.1-7 腫瘍体積が約 100 mm 3 の NCI-H522 xenograft マウス (SCID beige) に, ペルツズマブを1.2/0.6, 4/2,12/6,40/20 及び120/60 mg/kg で,0( 初回 ),7,21,35 及び49 日目に計 5 回 IP 投与した HER2の発現レベルの評価及び TG の算出は, 上述 2.6.2.2.2.1(1)1) と同様に行った また, ペルツズマブ初回投与後 7,21,35 及び49 日目に血中濃度を測定し, トラフ濃度を求めた 結果を図 2.6.2.2.2.1-4に示す ペルツズマブは, 最小用量 1.2/0.6 mg/kg 以上で腫瘍増殖をほぼ完全に抑制した TGI が90% 以上を示した時のトラフ濃度 ( 投与後 49 日目 ) を算出したところ, その濃度は10 μg/ml 以上であった

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 14 図 2.6.2.2.2.1-4 HER2 低発現ヒト NSCLC 株 NCI-H522 xenograft マウス (HER2(1+)) に対するペルツズマブの効果 0.6 mg/kg:1.2/0.6 mg/kg,2.0 mg/kg:4/2 mg/kg,6.0 mg/kg:12/6 mg/kg,20 mg/kg:40/20 mg/kg, 60 mg/kg:120/60 mg/kg, 各データは mean + SD(n = 14), 各群の動物数 (n) は初回投与開始時の匹数 [4.2.1.1-7 Fig.2 を改変 ] 以上,HER2 高発現及び低発現ヒト癌細胞株 xenograft モデルにおいて, ペルツズマブは単独投与で TGI が約 80% 以上の強い腫瘍増殖抑制効果を示し, その時のトラフ濃度は 5~25 μg/ml であった 2.6.2.2.2.2 トラスツズマブ抵抗性株及びヒト癌患者由来癌組織, 並びにヒト癌細胞株 xenograft モデルに対する腫瘍増殖抑制効果 (1) トラスツズマブ抵抗性株 Founder 2-134R 移植マウス資料番号 4.2.1.1-8 腫瘍体積が 100~200 mm 3 の Founder 2-134R 移植マウス (athymic nude) に, ペルツズマブを 2/1,6/3,20/10,60/30,180/90 mg/kg で 4 週間, 計 5 回 IV 投与した HER2 の発現レベルの評価, 腫瘍体積の測定及び TG の算出は, 上述 2.6.2.2.2.1(1)1) と同様に行った また, ペルツズマブ初回投与後 7,14,21,28,35,42 及び 47 日目に血中濃度を測定し, トラフ濃度を求めた 結果を図 2.6.2.2.2.2-1 に示す ペルツズマブの単独投与により腫瘍体積は用量依存的に減少した TGI が約 50% を示した時 ( 投与後 21 日目 ) のトラフ濃度を算出したところ, その濃度は 50 μg/ml 以上であった

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 15 図 2.6.2.2.2.2-1 トラスツズマブ抵抗性株 Founder 2-134R 移植マウスに対するペルツズマブの効果 1 mg/kg:2/1 mg/kg,3 mg/kg:6/3 mg/kg,10 mg/kg:20/10 mg/kg,30 mg/kg:60/30 mg/kg,90 mg/kg: 180/90 mg/kg, 各データは mean ± SE(n = 10), 各群の動物数 (n) は初回投与開始時の匹数 [4.2.1.1-8 Fig.2 を改変 ] (2) ヒト癌患者由来癌組織 xenograft マウス資料番号 4.2.1.1-9,4.2.1.1-10,4.2.1.1-11 MAXF449を含むヒト乳癌 6 種類, 卵巣癌 4 種類, 又は NSCLC 18 種類を用いた総数 28 種類のヒト癌患者由来癌組織 xenograft マウス (NMRI nu/nu) にペルツズマブを100 mg/kg/ 日で1 週間に1 又は2 回 IP 投与し, 本薬の腫瘍増殖抑制効果を調べた 腫瘍増殖抑制効果は, 以下のようにペルツズマブ投与群の初回投与日からの腫瘍体積増加率を対照群の増加率で除した %T/C を指標に評価した T/C = (med.tv treated t x / med.tv treated t 0 )/(med.tv control t x / med.tv control t 0 ) 100 med.tv treated t x : ペルツズマブ投与群の腫瘍体積測定日における腫瘍体積中央値 med.tv treated t 0 : ペルツズマブ投与群の初回投与日における腫瘍体積中央値 med.tv control t x : 対照群の腫瘍体積測定日における腫瘍体積中央値 med.tv control t 0 : 対照群の初回投与日における腫瘍体積中央値 総数 28 種類のヒト癌患者由来癌組織 xenograft マウスにおいて, ペルツズマブの単独投与により乳癌では 6 種類中 MAXF449 の 1 種類, 卵巣癌では 4 種類中 1 種類, 及び NSCLC では 18 種類中 4 種類で %T/C 値が 13~50% となり腫瘍増殖抑制効果が観察された その他の癌では %T/C 値が 50% 以上と, ペルツズマブの腫瘍増殖抑制効果は弱いかあるいはみられなかった (3) ヒト乳癌株 MDA-MB-175 xenograft マウス資料番号 4.2.1.1-12 ヒト乳癌株 MDA-MB-175をマウスの生殖腺脂肪体に移植したマウスに, ペルツズマブを3, 10,30 mg/kg/ 週で4 週間 IV 投与した 細胞移植 1 日前及び細胞移植 28 日後に,MDA-MB-175 細

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 16 胞の増殖を維持するためにエストロゲンを投与した 細胞移植 6 週後に腫瘍重量及び血中濃度を測定した 対照群の腫瘍重量は 0.076 g に達したのに対し, ペルツズマブ投与群ではいずれの用量でも腫瘍増殖は認められなかった ペルツズマブ 3,10 及び 30 mg/kg 投与群の血中濃度はそれぞれ 66.6,205 及び 545 μg/ml であった 以上, トラスツズマブ抵抗性株移植モデルにおいて, ペルツズマブはトラフ濃度が 50 μg/ml 以上の時に TGI が 50% 程度の腫瘍増殖抑制効果を示した また, ヒト癌患者由来癌組織 xenograft マウスでは 28 種類中 6 種類にペルツズマブによる効果がみられ, ヒト乳癌株 MDA- MB-175 xenograft マウスにも効果が観察された 2.6.2.3 副次的薬理試験該当なし 2.6.2.4 安全性薬理試験ペルツズマブの安全性薬理試験は, カニクイザルを用いたペルツズマブの反復投与毒性試験の一部として実施し, 中枢神経系, 心血管系及び呼吸器系に対する作用を検討した 7 及び 26 週間反復静脈内投与試験においてペルツズマブを150 mg/kg までの投与量で週 1 回, 投与したが, 一般状態 行動, 体温, 血圧, 呼吸数及び心電図等に対する影響は認められなかった (2.6.6.3 参照 ) 2.6.2.5 薬力学的薬物相互作用試験 2.6.2.5.1 トラスツズマブ又はタキサン系薬剤パクリタキセルとの併用効果 (1) トラスツズマブとの併用 1) HER2 高発現ヒト乳癌株 KPL-4 xenograft マウス ( 同所性移植 ) 資料番号 4.2.1.4-1 KPL-4 xenograft マウス (SCID beige) を用いて, ペルツズマブ / トラスツズマブ, ペルツズマブ / ベバシズマブ及びベバシズマブ / トラスツズマブの同時併用, 並びにベバシズマブ / トラスツズマブの逐次併用投与の効果を調べた 薬物投与群の腫瘍増殖抑制効果は, 以下のように薬物投与群の腫瘍体積の時間曲線下面積 (AUC:the area under the curve) を対照群の腫瘍体積の AUC で除した TCR(treatment-to-control ratio) を指標に評価した TCR = V treated /V control V treated : 薬物投与群の測定時点における AUC V control :vehicle 投与群の測定時点における AUC KPL-4 細胞 (3 10 6 / マウス ) 移植後 21 日目から各薬物の単独, 同時併用又は逐次併用投与を以下の用量 スケジュールで実施した 各薬物は IP で投与した 1 ペルツズマブ及びトラスツズマブ単独投与ペルツズマブ又はトラスツズマブを 30/15 mg/kg で 3 週間, 計 4 回単独投与 2 ベバシズマブ / トラスツズマブの逐次投与ベバシズマブ (5 mg/kg を週 2 回で 11 週間, 計 22 回 ) 投与途中 ( 移植後 57 日目より ) に, トラスツズマブ (15 mg/kg/ 週で 5 週間, 計 6 回 ) を逐次投与 3 ペルツズマブ / トラスツズマブ併用投与ペルツズマブとトラスツズマブの両薬物を 30/15 mg/kg で 10 週間, 計 11 回併用投与 4 ペルツズマブ / ベバシズマブ併用投与ペルツズマブ (30/15 mg/kg で 10 週間, 計 11 回 ) とベバシズマブ (5 mg/kg を週 2 回で 11 週

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 17 間, 計 22 回 ) を併用投与 5 ベバシズマブ / トラスツズマブ併用投与ベバシズマブ (5 mg/kg を週 2 回で 11 週間, 計 22 回 ) とトラスツズマブ (30/15 mg/kg で 10 週間, 計 11 回 ) を併用投与 結果を図 2.6.2.5.1-1 に示す 細胞移植後 37 日目におけるペルツズマブ及びトラスツズマブ単独投与群の TCR はそれぞれ 0.69 及び 0.73, ベバシズマブ / トラスツズマブ逐次投与群におけるベバシズマブ単独投与時の TCR は 0.51 であった ペルツズマブ / トラスツズマブ, ペルツズマブ / ベバシズマブ及びベバシズマブ / トラスツズマブの併用により TCR はそれぞれ 0.17,0.44 及び 0.38 と各薬物単独投与群に比べて低くなり, 腫瘍増殖抑制効果の増強が認められた これらの併用群の中ではペルツズマブ / トラスツズマブ併用群の TCR が一番低く, 投与開始後の初期から腫瘍の縮小及び消失がみられ, 各投与群の中で最も強い腫瘍増殖抑制効果を示した 図 2.6.2.5.1-1 HER2 高発現ヒト乳癌株 KPL-4 xenograft マウス ( 同所性移植 ) に対するペルツズマブ, トラスツズマブ又はベバシズマブの逐次又は同時併用効果 各データは median(n = 10), 各群の動物数 (n) は初回投与開始時の匹数 [4.2.1.4-1 Fig.4 を改変 ] 2) HER2 高発現ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft マウス資料番号 4.2.1.4-2 Calu-3 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) を用いて, ペルツズマブとトラスツズマブの単独投与又は併用効果を調べた 薬物投与群の腫瘍増殖抑制効果は, 上述 2.6.2.5.1(1)1) と同様に TCR を指標に評価した Calu-3 細胞 (5 10 6 / マウス ) 移植後 21 日目から各薬物の単独又は併用投与を以下の用量 スケジュールで実施した 各薬物は IP で投与した 1 ペルツズマブ及びトラスツズマブ単独投与ペルツズマブ又はトラスツズマブを30/15 mg/kg で6 週間, 計 7 回単独投与 2 ペルツズマブ / トラスツズマブ併用投与ペルツズマブとトラスツズマブをそれぞれ30/15 mg/kg で6 週間, 計 7 回併用投与

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 18 結果を図 2.6.2.5.1-2 に示す 細胞移植後 69 日目におけるペルツズマブ及びトラスツズマブ単独投与群の TCR はそれぞれ 0.23 及び 0.27 であった ペルツズマブ / トラスツズマブの併用により TCR は 0.05 と各薬物投与群に比べて低くなり, 腫瘍の縮小を伴う腫瘍増殖抑制効果の増強が認められた 図 2.6.2.5.1-2 HER2 高発現ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft マウスに対するペルツズマブ / トラスツズマブの併用効果 q7d:7 日間に 1 回投与, 各データは mean ± SE(n = 10), 各群の動物数 (n) は初回投与開始時の匹数 [4.2.1.4-2 Fig.2 を改変 ] (2) パクリタキセルとの併用 HER2 高発現ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft マウス資料番号 4.2.1.4-3 腫瘍体積が約 100 mm 3 の Calu-3 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) を用いて, ペルツズマブとパクリタキセルの逐次併用又は同時併用投与の効果を調べた 薬物投与群の腫瘍増殖抑制効果は, 上述 2.6.2.5.1(1)1) と同様に TCR を指標に評価した 各薬物の単独, 逐次及び併用投与は以下の用量 スケジュールで実施した ペルツズマブ及びパクリタキセルはそれぞれ IP 及び IV で投与した 1 ペルツズマブ単独投与 12/6 mg/kg/ 週で23 週間, 計 24 回単独投与 2 パクリタキセル単独投与 45 mg/kg/ 週で2 週間, 計 3 回単独投与 3 ペルツズマブ / パクリタキセル逐次投与パクリタキセル (45 mg/kg/ 週 ) の投与後 2 日目にペルツズマブ (12/6 mg/kg/ 週 ) を逐次投与 この逐次投与を2 週間, 計 3 回行い, その後はペルツズマブ (6 mg/kg/ 週 ) の単独投与を20 週間, 計 21 回 4 ペルツズマブ / パクリタキセル併用投与

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 19 パクリタキセル (45 mg/kg/ 週で 2 週間, 計 3 回 ) とペルツズマブ (12/6 mg/kg/ 週で 2 週間, 計 3 回 ) を併用投与し, その後はペルツズマブ (6 mg/kg/ 週 ) の単独投与を 20 週間, 計 21 回 結果を図 2.6.2.5.1-3 に示す 群分け後 57 日目でのペルツズマブ及びパクリタキセル単独投与群の TCR はそれぞれ 0.06 及び 0.09 であった ペルツズマブ / パクリタキセルの逐次及び併用投与により TCR はそれぞれ 0.01 及び 0.00 と各薬物単独投与群に比べて低くなり, 腫瘍増殖抑制効果の増強傾向がみられた また, 図に示さないが群分け後 173 日目までのペルツズマブ / パクリタキセル併用投与群の生存率は, ペルツズマブ及びパクリタキセル単独投与群それぞれの生存率を上回っていた 図 2.6.2.5.1-3 HER2 高発現ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft マウスに対するペルツズマブ / パクリタキセルの逐次又は同時併用効果 Paclitaxel shifted: ペルツズマブ / パクリタキセル逐次投与のコントロール群,Pertuzumab/paclitaxel shifted: ペルツズマブ / パクリタキセル逐次投与群,Paclitaxel sim.: ペルツズマブ / パクリタキセル併用投与のコントロール群,Pertuzumab/paclitaxel sim.: ペルツズマブ / パクリタキセル併用投与群, 各データは median(n = 11), 各群の動物数 (n) は初回投与開始時の匹数 [4.2.1.4-3 Fig.4 を改変 ] 以上,HER2 高発現ヒト乳癌株 KPL-4 及び NSCLC 株 Calu-3 xenograft マウスにペルツズマブ / トラスツズマブを併用投与した時に腫瘍の縮小を伴う著しい腫瘍増殖抑制効果が認められた また,Calu-3 xenograft ではペルツズマブ / パクリタキセルの併用投与で増殖抑制効果の増強傾向が観察された 2.6.2.5.2 パクリタキセル以外の化学療法剤との併用効果 (1) ゲムシタビンとの併用ヒト NSCLC 株 QG-56,Calu-3, 卵巣癌株 IGROV-1, 及びヒト卵巣癌患者由来癌組織 OVXF550 の 4 種類の xenograft マウスを用いて, ペルツズマブ / ゲムシタビンの併用効果を調べた 薬物投与群の腫瘍増殖抑制効果は, 上述 2.6.2.5.1(1)1) と同様に TCR, 又は上述 2.6.2.2.2.2(2) と同様に %T/C を指標に評価した

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 20 1) ヒト NSCLC 株 QG-56 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) 資料番号 4.2.1.4-4 ペルツズマブ Day 1( 初回 ) から12/6 mg/kg で2 週間, 計 3 回 IP とゲムシタビン Day 3 ( 初回 ) から120 mg/kg/3 日で2 週間, 計 4 回 IP を併用投与し, 試験終了日 (Day 22) に各群の TCR を求めた 結果を図 2.6.2.5.2-1に示す Day 22でのペルツズマブ及びゲムシタビン単独投与群の TCR はそれぞれ0.44 及び0.53であった ペルツズマブ / ゲムシタビンの併用投与により TCR は0.13と各薬物単独投与群に比べて低くなり, 腫瘍増殖抑制効果の増強傾向がみられた 図 2.6.2.5.2-1 QG-56 xenograft マウスに対するペルツズマブ / ゲムシタビンの併用効果 各データは median(n = 11), 各群の動物数 (n) は初回投与開始時の匹数 [4.2.1.4-4 Fig.4 を改変 ] 2) ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) 資料番号 4.2.1.4-5 ペルツズマブ Day 1( 初回 ) から12/6 mg/kg で7 週間, 計 8 回 IP とゲムシタビン Day 3 ( 初回 ) から120 mg/kg/3 日で2 週間, 計 4 回 IP を併用投与し, 試験終了日 (Day 52) に各群の TCR を求めた 結果を図 2.6.2.5.2-2に示す Day 52でのペルツズマブ及びゲムシタビン単独投与群の TCR はそれぞれ0.07 及び0.09であった ペルツズマブ / ゲムシタビンの併用投与により TCR は0.01と各薬物単独投与群に比べて低くなり, 腫瘍増殖抑制効果の増強傾向がみられた

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 21 図 2.6.2.5.2-2 Calu-3 xenograft マウスに対するペルツズマブ / ゲムシタビンの併用効果 各データは median(n =12), 各群の動物数 (n) は初回投与開始時の匹数 [4.2.1.4-5 Fig.4 を改変 ] 3) ヒト卵巣癌株 IGROV-1 xenograft マウス (SCID beige) 資料番号 4.2.1.4-6 ペルツズマブ Day 0( 初回 ) から12/6 mg/kg で4 週間, 計 5 回 IP とゲムシタビン Day 0 ( 初回 ),3,6,13,20,27に120 mg/kg で計 6 回 IP を併用投与し, 試験終了日 (Day 28) に各群の TCR を求めた 結果を図 2.6.2.5.2-3に示す Day 28でのペルツズマブ及びゲムシタビン単独投与群の TCR はそれぞれ0.76 及び0.32であった ペルツズマブ / ゲムシタビンの併用投与により TCR は0.15と各薬物単独投与群に比べて低くなり, 腫瘍増殖抑制効果の増強傾向がみられた

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 22 図 2.6.2.5.2-3 IGROV-1 xenograft マウスに対するペルツズマブ / ゲムシタビンの併用効果 RO4875816-000:HER シグナル阻害作用を有する化合物, 各データは median ± IQ(n = 10), 各群の動物数 (n) は初回投与開始時の匹数 [4.2.1.4-6 Fig.3 を改変 ] 4) ヒト卵巣癌患者由来癌組織 OVXF550 xenograft マウス (NMRI nu/nu) ペルツズマブ / ゲムシタビンの併用効果を投与スケジュールが異なる二つの併用試験で評価した 1 試験 1 資料番号 4.2.1.4-7 ペルツズマブ 30/15 mg/kg で Day 1( 初回 ),8,15,22,31,38 に計 6 回 IP とゲムシタビン Day 1( 初回 ),15,31 に 300 mg/kg を IV を併用投与し, 各群の %T/C を求めた 2 試験 2 資料番号 4.2.1.4-8 ペルツズマブ Day 1( 初回 ) から 12/6 mg/kg で 2 週間, 計 3 回 IP とゲムシタビン Day 1 に 240 mg/kg を IV を併用投与し, 各群の %T/C を求めた 試験 2 の投与スケジュールではペルツズマブ / ゲムシタビン併用による腫瘍抑制効果の増強はみられなかった しかし, 試験 1 ではペルツズマブ及びゲムシタビン単独投与群それぞれの最小 %T/C 値に比べてペルツズマブ / ゲムシタビン併用群の最小 %T/C 値は低下しており, 併用投与による腫瘍増殖抑制効果の増強傾向が観察された (2) カペシタビンとの併用ヒト乳癌患者由来癌組織 MAXF583 及び MAXF574, 並びにヒト大腸癌患者由来癌組織 CXF264 の 3 種類の xenograft マウスを用いてペルツズマブ / カペシタビンの併用効果を調べた 薬物投与群の腫瘍増殖抑制効果は, 上述 2.6.2.2.2.2(2) と同様に %T/C を指標に評価した

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 23 1) ヒト乳癌患者由来癌組織 MAXF583 xenograft マウス (NMRI nu/nu) 資料番号 4.2.1.4-8 ペルツズマブ Day 0( 初回 ) から30/15 mg/kg で2 週間, 計 3 回 IP とカペシタビン 300 mg/kg/ 日を Day 0( 初回 )~Day 10に PO を併用投与し, 各群の %T/C を求めた 結果を図 2.6.2.5.2-4に示す ペルツズマブ及びカペシタビン単独投与群それぞれの最小 %T/C 値に比べてペルツズマブ / カペシタビン併用投与群の最小 %T/C 値は低下し, 併用投与による腫瘍増殖抑制効果の増強がみられた 図 2.6.2.5.2-4 MAXF583 xenograft マウスに対するペルツズマブ / カペシタビンの併用効果 XELODA: カペシタビン, 各データは median(n = 10), 各群の動物数 (n) は初回投与開始時の匹数 [4.2.1.4-8 Fig.1 を改変 ] 2) ヒト乳癌患者由来癌組織 MAXF574 xenograft マウス (NMRI nu/nu) 資料番号 4.2.1.4-8 ペルツズマブ Day 1( 初回 ) から30/15 mg/kg で2 週間, 計 3 回 IP とカペシタビン 200 mg/kg/ 日を Day 0( 初回 )~Day 10に PO を併用投与し, 各群の %T/C を求めた 結果を図 2.6.2.5.2-5に示す Day 28でのペルツズマブ及びカペシタビンそれぞれの単独投与群の最小 %T/C 値に比べてペルツズマブ / カペシタビン併用群の最小 %T/C 値は低下し, 併用投与による腫瘍増殖抑制効果の増強傾向がみられた

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 24 図 2.6.2.5.2-5 MAXF574 xenograft マウスに対するペルツズマブ / カペシタビンの併用効果 2C4: ペルツズマブ,XELODA: カペシタビン, 各データは median(n = 10), 各群の動物数 (n) は初回投与開始時の匹数 [4.2.1.4-8 Fig.2 を改変 ] 3) ヒト大腸癌患者由来癌組織 CXF264 xenograft マウス (NMRI nu/nu) 資料番号 4.2.1.4-8 ペルツズマブ Day 1( 初回 ) から100 mg/kg/ 週で2 週間, 計 3 回 IP とカペシタビン 300 mg/kg/ 日を Day 0( 初回 )~Day 4,Day 7~Day 12に PO を併用投与し, 各群の %T/C を求めた カペシタビン単独投与群の最小 %T/C 値とペルツズマブ / カペシタビンの併用投与群の最小 %T/C 値はほぼ同じであり, 併用投与による腫瘍増殖抑制効果の増強はみられなかった (3) シスプラチンとの併用ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft マウス資料番号 4.2.1.4-9 ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) を用いてペルツズマブ / シスプラチンの併用効果を調べた 薬物投与群の腫瘍増殖抑制効果は, 上述 2.6.2.5.1(1)1) と同様に TCR を指標に評価した ペルツズマブ及びシスプラチンの単独, 同時併用又は逐次併用投与は以下の用量 スケジュールで実施した ペルツズマブ及びシスプラチンはそれぞれ IP 及び IV で投与した 1 ペルツズマブの単独投与 6 mg/kg/ 週で6 週間, 計 7 回単独投与

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 25 2 シスプラチンの単独投与 6 mg/kg/ 週で 2 週間, 計 3 回単独投与 3 ペルツズマブ / シスプラチン逐次投与ペルツズマブ (6 mg/kg/ 週 ) の投与後 2 日目にシスプラチン (6 mg/kg/ 週 ) を逐次投与 この逐次併用投与を 2 週間, 計 3 回行い, その後はペルツズマブ (6 mg/kg/ 週 ) の単独投与を 3 週間, 計 4 回投与 4 ペルツズマブ / シスプラチン併用投与ペルツズマブ (6 mg/kg/ 週で 2 週間, 計 3 回 ) とシスプラチン (6 mg/kg/ 週で 2 週間, 計 3 回 ) を併用投与し, その後はペルツズマブ (6 mg/kg/ 週 ) の単独投与を 4 週間, 計 4 回投与 結果を図 2.6.2.5.2-6 に示す 群分け (Day 0) 後の Day 53 におけるペルツズマブ及びシスプラチン単独投与群の TCR はそれぞれ 0.16 及び 0.54 であった ペルツズマブ / トラスツズマブの逐次及び併用投与により TCR はそれぞれ 0.10 及び 0.06 と各薬物単独投与群に比べて低くなり, 腫瘍増殖抑制効果の増強傾向がみられた 図 2.6.2.5.2-6 Calu-3 xenograft マウスに対するペルツズマブ / シスプラチンの逐次又は同時併用効果 CDDP: シスプラチン,shifted: 逐次投与,sim.: 同時併用投与, 各データは median(n = 10), 各群の動物数 (n) は初回投与開始時の匹数 [4.2.1.4-9 Fig.4 を改変 ] (4) エルロチニブ又はイリノテカンとの併用ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft マウス資料番号 4.2.1.4-10 ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) を用いてペルツズマブ / エルロチニブ又はペルツズマブ / イリノテカンの併用効果を調べた 薬物投与群の腫瘍増殖抑制効果は, 上述 2.6.2.5.1(1)1) と同様に TCR を指標に評価した ペルツズマブ, エルロチニブ又はイリノテ

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 26 カンの単独, 併用投与は以下の用量 スケジュールで実施した ペルツズマブ及びイリノテカンは IP で, エルロチニブは PO で投与した 1 ペルツズマブの単独投与 12/6 mg/kg で 6 週間, 計 7 回単独投与 2 エルロチニブの単独投与 50 mg/kg/ 日で 7 週間, 計 49 回単独投与 3 イリノテカンの単独投与 20 mg/kg/3 日で 2 週間, 計 4 回単独投与 4 エルロチニブとの併用ペルツズマブ (12/6 mg/kg で 6 週間, 計 7 回 ) とエルロチニブ (50 mg/kg/ 日で 7 週間, 計 49 回 ) を併用投与 5 イリノテカンとの併用ペルツズマブ (12/6 mg/kg で 2 週間, 計 3 回 ) とイリノテカン (20 mg/kg/3 日で 2 週間, 計 4 回 ) を併用投与し, その後はペルツズマブ (6 mg/kg/ 週 ) の単独投与を 3 週間, 計 4 回 結果を図 2.6.2.5.2-7 に示す 群分け (Day 0) 後の Day 49 におけるペルツズマブ, エルロチニブ及びイリノテカン単独投与群の TCR はそれぞれ 0.54,0.34 及び 0.31 であった ペルツズマブ / エルロチニブ及びペルツズマブ / イリノテカンの併用投与により TCR はそれぞれ 0.13 及び 0.08 と各薬物単独投与群に比べて低くなり, 腫瘍増殖抑制効果の増強傾向がみられた 図 2.6.2.5.2-7 Calu-3 xenogtaft マウスに対するペルツズマブ / エルロチニブ又はペルツズマブ / イリノテカンの併用効果 2C4: ペルツズマブ,Tarceva: エルロチニブ, 各データは median(n = 12), 各群の動物数 (n) は初回投与開始時の匹数 [4.2.1.4-10 Fig.4 を改変 ] 以上, ヒト NSCLC 株 QG-56,Calu-3, 卵巣癌株 IGROV-1, 及びヒト卵巣癌患者由来癌組織 OVXF550 の 4 種類の xenograft マウスを用いてゲムシタビンとの併用効果を検討したところ,

パージェタ 2.6.2 薬理試験の概要文 Page 27 腫瘍増殖抑制効果の増強傾向がみられた ヒト乳癌患者由来癌組織 MAXF583,MAXF574, 及びヒト大腸癌患者由来癌組織 CXF264 の 3 種類の xenograft マウスを用いてカペシタビンとの併用効果を検討した試験では,CXF264 を除く 2 種類に腫瘍増殖抑制効果の増強又は増強傾向がみられた Calu-3 xenograft マウスでシスプラチン, エルロチニブ又はイリノテカンとの併用効果を検討した試験では, ペルツズマブ / シスプラチン, ペルツズマブ / エルロチニブ及びペルツズマブ / イリノテカンのすべての併用で腫瘍増殖抑制効果の増強傾向が観察された 2.6.2.6 考察及び結論ペルツズマブの薬理学的特性, 効力及びトラスツズマブとの違いを各種 in vitro 及び in vivo 試験で検討した ヒト乳癌株での in vitro 試験結果から, ペルツズマブは HRG 刺激による HER2/HER3のダイマー形成,HRG による HER2のリン酸化, 及びその下流の PI3K-Akt MAPK の活性化を阻害することが明らかとなった これら HRG 依存性の HER2を介するシグナルに対する阻害作用はトラスツズマブには認められず, ペルツズマブに特有のものであった また,X 線結晶解析の論文知見から, ペルツズマブ及びトラスツズマブはそれぞれ HER2 のドメイン II 及び IV と異なる部位に結合することが示されている 1),2) ドメイン II は HER ファミリーレセプターの二量体形成に必須な領域であり 1), ペルツズマブはドメイン II に結合しリガンド依存的な HER2/HER3のダイマー形成を阻害することで, リガンド依存性の HER2を介するシグナル伝達を阻害すると推定される In vitro 試験は, 更に, 各種ヒト乳癌株を用いてペルツズマブの細胞増殖抑制作用及び ADCC 活性を調べた ペルツズマブは癌細胞株の増殖を抑制し, トラスツズマブと同様に強力な ADCC 活性を示した これら in vitro 試験の結果から, ペルツズマブはトラスツズマブと同様に HER2を標的とするものの両薬はそれぞれ異なるエピトープを認識し, 両薬の作用機序は異なることが示された 従って, ペルツズマブとトラスツズマブの併用により抗腫瘍効果が増強する可能性が示唆された In vivo 試験では,HER2 高発現 (HER2(3+)),HER2 低発現 (HER2(1+)) 及びトラスツズマブ抵抗性株を含む各種ヒト癌細胞株等の xenograft モデルを用いてペルツズマブ単独投与時の腫瘍増殖抑制効果を調べた HER2 高発現のヒト乳癌株 BT474JB 及び NSCLC 株 Calu-3, 又は HER2 低発現のヒト乳癌患者由来組織 MAXF449 及び NSCLC 株 NCI-H522 xenograft マウスへのペルツズマブの単独投与は腫瘍増殖をほぼ完全に抑制し, トラスツズマブ抵抗性株 Founder 2-134R 移植マウスでも TGI が約 50% の腫瘍増殖抑制効果がみられた In vivo 試験では, 更に, 各種ヒト癌細胞株を用いて, トラスツズマブ, ベバシズマブ, 又はタキサン系薬剤パクリタキセルあるいはタキサン系薬剤以外の化学療法剤との併用効果を調べた HER2 高発現ヒト乳癌株 KPL-4 同所性 xenograft マウスではペルツズマブ / トラスツズマブ, ペルツズマブ / ベバシズマブ及びベバシズマブ / トラスツズマブのすべての併用群で腫瘍増殖抑制効果の増強が観察された これらの中ではペルツズマブ / トラスツズマブ併用群の腫瘍増殖抑制効果が最も強く, 投与開始後の初期から腫瘍の縮小が認められた また,Calu-3 xenograft マウス等では, 本薬とパクリタキセル又はゲムシタビン等の他の化学療法剤との併用で腫瘍増殖抑制効果の増強傾向がみられた 安全性薬理試験では, 一般症状 行動, 体温, 血圧, 心電図, 及び呼吸数に対するペルツズマブの影響は認められなかった 以上のことから, 臨床においてもペルツズマブ / トラスツズマブに他の化学療法剤を併用することにより, 更に効力が増強することが期待される 2.6.2.7 参考文献 1) Franklin MC, Carey KD, Vajdos FF, Leahy DJ, de Vos AM, Sliwkowski MX. Insights into ErbB signaling from the structure of the ErbB2-pertuzumab complex. Cancer Cell 2004;5:317-28. 2) Cho HS, Mason K, Ramyar KX, Stanley AM, Gabelli SB, Denney DW Jr, et al. Structure of the extracellular region of HER2 alone and in complex with the Herceptin Fab. Nature 2003;421:756-60.

パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 1 パージェタ点滴静注 420 mg/14 ml ( ペルツズマブ ( 遺伝子組換え )) [HER2 陽性手術不能又は再発乳癌 ] 第 2 部 ( モジュール 2):CTD の概要 ( サマリー ) 2.6 非臨床試験の概要文及び概要表 2.6.3 薬理試験概要表 中外製薬株式会社

パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 2 略語一覧略語 英語名 和名 ADCC Antibody-dependent cell-mediated 抗体依存性細胞障害 cytotoxicity EGF Epidermal growth factor 上皮増殖因子 ErbB2 HER2 HER3 Erythroblastic leukemia viral oncogene homolog 2 Human epidermal growth factor receptor type 2 Human epidermal growth factor receptor type 3 赤芽球性白血病ウイルス癌遺伝子ホモログ2( 上皮増殖因子受容体 2 型と相同受容体 ) ヒト上皮増殖因子受容体 2 型 ヒト上皮増殖因子受容体 3 型 HRG Heregulin ヘレグリン IP intraperitoneal 腹腔内 IV intravenous 静脈内 Kd Dissociation constant 解離定数 MAPK Mitogen-activated protein kinase マイトジェン活性化プロテインキナーゼ NSCLC Non-small-cell lung cancer 非小細胞肺癌 PBMC Peripheral blood mononuclear cells 末梢血単核球 PI3K Phosphatidylinositol-3 kinase ホスファチジルイノシトール-3 キナーゼ PO per os 経口 TGI Tumor growth inhibition rate 腫瘍増殖抑制率

パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 3 目次 頁 2.6.3 薬理試験概要表... 4 2.6.3.1 薬理試験一覧表... 4 2.6.3.1.1 効力を裏付ける試験一覧表... 4 2.6.3.1.2 副次的薬理試験一覧表... 7 2.6.3.1.3 安全性薬理試験一覧表... 7 2.6.3.1.4 薬力学的薬物相互作用試験一覧表... 8 2.6.3.2 効力を裏付ける試験... 11 2.6.3.2.1 In vitro 試験... 11 2.6.3.2.2 In vivo 試験... 14 2.6.3.2.2.1 HER2 高発現及び低発現癌細胞株 xenograft モデルに対する腫瘍増殖抑 制効果... 14 2.6.3.2.2.1.1 HER2 高発現ヒト癌細胞株 xenograft モデルに対する効果... 14 2.6.3.2.2.1.2 HER2 低発現ヒト癌患者由来組織及び癌細胞株 xenograft モデルに 対する効果... 16 2.6.3.2.2.2 トラスツズマブ抵抗性株及びヒト癌患者由来癌組織, 並びにヒト癌細 胞株 xenograft モデルに対する腫瘍増殖抑制効果... 17 2.6.3.3 副次的薬理試験... 18 2.6.3.4 安全性薬理試験... 18 2.6.3.5 薬力学的薬物相互作用試験... 19 2.6.3.5.1 トラスツズマブ又はタキサン系薬剤パクリタキセルとの併用効果... 19 2.6.3.5.1.1 トラスツズマブとの併用... 19 2.6.3.5.1.2 パクリタキセルとの併用... 21 2.6.3.5.2 パクリタキセル以外の化学療法剤との併用効果... 22 2.6.3.5.2.1 ゲムシタビンとの併用... 22 2.6.3.5.2.2 カペシタビンとの併用... 24 2.6.3.5.2.3 シスプラチンとの併用... 25 2.6.3.5.2.4 エルロチニブ又はイリノテカンとの併用... 26

2.6.3 薬理試験概要表 2.6.3.1 薬理試験一覧表 2.6.3.1.1 効力を裏付ける試験一覧表 被験物質 : ペルツズマブ 試験の種類 試験系 試験方法 実施施設 試験番号 / 掲載雑誌 記載箇所 ( 資料番号 ) In vitro 試験 HER2に対する結合親和性 ヒト又はサル in vitro Genentech 社 -249-1821 4.2.1.1-1 HER2/ErbB2 リガンド依存性 HER2/HER3ダイ HER2 低発現ヒト乳癌株 in vitro Genentech 社 Cancer Cell 4.2.1.1-2 マー形成に対する阻害作用 MCF7,HER2 高発現ヒト乳癌株 SK-BR-3 2002;2:127-37 HER2のリン酸化に対する阻害作 HER2 低発現ヒト乳癌株 in vitro Genentech 社 Cancer Cell 4.2.1.1-2 用 MCF7 2002;2:127-37 PI3K(phosphatidylinositol-3 HER2 低発現ヒト乳癌株 in vitro Genentech 社 Cancer Cell 4.2.1.1-2 kinase)-akt に対する阻害作用 MCF7 2002;2:127-37 MAPK(mitogen-activated protein kinase) に対する阻害作用 HER2 低発現ヒト乳癌株 MCF7 in vitro Genentech 社 Cancer Cell 2002;2:127-37 4.2.1.1-2 パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 4

被験物質 : ペルツズマブ 試験の種類 試験系 試験方法 実施施設 試験番号 / 掲載雑誌 記載箇所 ( 資料番号 ) In vitro 試験 ( 続 ) 細胞増殖抑制作用 ヒト乳癌株 MCF7, MDA-MB-134,T-47D 及び ZR-75-1 in vitro Genentech 社 Cancer Cell 2002;2:127-37 4.2.1.1-2 抗体依存性細胞障害 (ADCC: antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity) 活性 HER2 高発現ヒト乳癌株 KPL-4,HER2 高発現ヒト非小細胞肺癌 (NSCLC:non-smallcell lung cancer) 株 Calu- 3, 及びヒト末梢血単核球 (PBMC:peripheral blood mononuclear cells) in vitro 社 Cancer Res 2009;69:9330-6 4.2.1.1-3 パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 5

In vivo 試験 試験の種類試験系試験方法実施施設試験番号 / 掲載雑誌 HER2 高発現及び HER2 低発現癌細胞株 xenograft モデルに対する腫瘍増殖抑制効果 HER2 高発現ヒト癌細胞株 xenograft モデルに対する効果 ヒト乳癌株 BT474JB xenograft モデル (HER2(3+) * ) ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft モデル (HER2(3+) * ) 癌細胞株 xenograft マウス (athymic nude) 癌細胞株 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) 被験物質 : ペルツズマブ in vivo Genentech 社 1041202 4.2.1.1-4 in vivo 社 1041203 4.2.1.1-5 HER2 低発現ヒト癌患者由来組織及び癌細胞株 xenograft モデルに対する効果 ヒト乳癌患者由来組織 MAXF449 xenograft モデル (HER2(1+) * ) 癌患者由来組織 xenograft マウス (NMRI nu/nu) in vivo 社 1041204 4.2.1.1-6 ヒト NSCLC 株 NCI -H522 xenograft モデル (HER2(1+) * ) * 免疫組織化学染色法での評価 癌細胞株 xenograft マウス (SCID beige) in vivo 社 1041201 4.2.1.1-7 記載箇所 ( 資料番号 ) パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 6

被験物質 : ペルツズマブ 試験の種類 試験系 試験方法 実施施設 試験番号 / 掲載雑誌 記載箇所 ( 資料番号 ) In vivo 試験 ( 続 ) トラスツズマブ抵抗性株及びヒト癌患者由来癌組織, 並びにヒト癌細胞株 xenograft モデルに対する腫瘍増殖抑制効果 トラスツズマブ抵抗性株 Founder 癌細胞株移植マウス in vivo Genentech 社 1041193 4.2.1.1-8 2-134R 移植モデル (athymic nude) 28 種類のヒト癌患者由来癌組織 xenograft モデル 癌組織 xenograft マウス (NMRI nu/nu) in vivo 社 1043264, 1043265, 1043263 4.2.1.1-9, 4.2.1.1-10, 4.2.1.1-11 ヒト乳癌株 MDA-MB-175 xenograft モデル 癌細胞株 xenograft マウス in vivo Genentech 社 -308C 4.2.1.1-12 2.6.3.1.2 副次的薬理試験一覧表 該当なし 2.6.3.1.3 安全性薬理試験一覧表 2.6.7.7 参照 パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 7

2.6.3.1.4 薬力学的薬物相互作用試験一覧表 被験物質 : ペルツズマブ 試験の種類 試験系 試験方法 実施施設 試験番号 / 掲載雑誌 記載箇所 ( 資料番号 ) トラスツズマブ又はタキサン系薬剤パクリタキセルとの併用効果 トラスツズマブとの併用 HER2 高発現ヒト乳癌株 KPL-4 癌細胞株 xenograft マウス in vivo 社 1021305 4.2.1.4-1 xenograft モデル ( 同所性移植 ) (SCID beige) HER2 高発現ヒト NSCLC 株 Calu-3 癌細胞株 xenograft マウス in vivo 社 1019398 4.2.1.4-2 xenograft モデル (BALB/c nu/nu) パクリタキセルとの併用 HER2 高発現ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft モデル 癌細胞株 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) in vivo 社 1015439 4.2.1.4-3 パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 8

被験物質 : ペルツズマブ 試験の種類 試験系 試験方法 実施施設 試験番号 / 掲載雑誌 記載箇所 ( 資料番号 ) パクリタキセル以外の化学療法剤との併用効果 ゲムシタビンとの併用 ヒト NSCLC 株 QG-56 xenograft モ 癌細胞株 xenograft マウス in vivo 社 1011230 4.2.1.4-4 デル (BALB/c nu/nu) ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft モ 癌細胞株 xenograft マウス in vivo 社 1011232 4.2.1.4-5 デル (BALB/c nu/nu) ヒト卵巣癌株 IGROV-1 xenograft モデル 癌細胞株 xenograft マウス (SCID beige) in vivo 社 1016330 4.2.1.4-6 ヒト卵巣癌患者由来癌組織 OVXF550 xenograft モデル 癌細胞株 xenograft マウス (NMRI nu/nu) in vivo 社 1043266, 1043267 4.2.1.4-7, 4.2.1.4-8 パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 9

被験物質 : ペルツズマブ 試験の種類 試験系 試験方法 実施施設 試験番号 / 掲載雑誌 記載箇所 ( 資料番号 ) パクリタキセル以外の化学療法剤との併用効果 ( 続 ) カペシタビンとの併用 ヒト乳癌患者由来癌組織 癌組織 xenograft マウス in vivo 社 1043267 4.2.1.4-8 MAXF583 xenograft モデル (NMRI nu/nu) ヒト乳癌患者由来癌組織 癌組織 xenograft マウス in vivo 社 1043267 4.2.1.4-8 MAXF574 xenograft モデル (NMRI nu/nu) ヒト大腸癌患者由来癌組織 癌組織 xenograft マウス in vivo 社 1043267 4.2.1.4-8 CXF264 xenograft モデル (NMRI nu/nu) シスプラチンとの併用 ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft モデル 癌細胞株 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) in vivo 社 1009892 4.2.1.4-9 エルロチニブ又はイリノテカンとの併用 ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft モデル 癌細胞株 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) in vivo 社 1011974 4.2.1.4-10 パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 10

2.6.3.2 効力を裏付ける試験 2.6.3.2.1 In vitro 試験 被験物質 : ペルツズマブ 試験の種類 試験系 試験方法 / 投与方法 試験成績 資料番号 ( 試験番号 / 掲載雑誌 ) HER2に対する結合親和性 in vitro スキャチャードプロット ヒト及びサルに対するペルツズマ 4.2.1.1-1 ヒト又はサル HER2/ErbB2 法 ブの Kd 値はそれぞれ0.80 及び0.53 nmol/l であった ( -249-1821) リガンド依存性 HER2/HER3ダイマー形成に対する阻害作用 in vitro HER2 低発現ヒト乳癌株 MCF7,HER2 高発現ヒト ペルツズマブ又はトラスツズマブ (100 nmol/l) ペルツズマブはヘレグリン (HRG:heregulin) 刺激による HER2/HER3ダイマー形成を阻害し 4.2.1.1-2 (Cancer Cell 2002;2:127-37) 乳癌株 SK-BR-3 たが, トラスツズマブに阻害作用はみられなかった HER2のリン酸化に対する阻害作用 in vitro HER2 低発現ヒト乳癌株 MCF7 ペルツズマブ又はトラスツズマブ (100 nmol/l) ペルツズマブは HRG 刺激による HER2のリン酸化を阻害したが, トラスツズマブに阻害作用はみられなかった 4.2.1.1-2 (Cancer Cell 2002;2:127-37) パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 11

In vitro 試験 ( 続 ) 被験物質 : ペルツズマブ 試験の種類 試験系 試験方法 / 投与方法 試験成績 資料番号 ( 試験番号 / 掲載雑誌 ) PI3K-Akt に対する阻害作用 in vitro HER2 低発現ヒト乳癌株 MCF7 ペルツズマブ又はトラスツズマブ (100 nmol/l) ペルツズマブは HRG 刺激による Akt キナーゼの活性化を阻害したが, トラスツズマブに阻害作用は 4.2.1.1-2 (Cancer Cell 2002;2:127-37) みられなかった MAPK に対する阻害作用 in vitro HER2 低発現ヒト乳癌株 MCF7 ペルツズマブ又はトラスツズマブ (200 nmol/l) ペルツズマブは HRG 刺激による MAPK キナーゼの活性化を阻害したが, トラスツズマブに阻害作用 4.2.1.1-2 (Cancer Cell 2002;2:127-37) はみられなかった 細胞増殖抑制作用 in vitro ヒト乳癌株 MCF7,MDA- MB-134,T-47D 及び ZR- 75-1 ペルツズマブ (300 nmol/l) HRG 刺激時の細胞増殖に対して, ペルツズマブは4 株すべての増殖を抑制した 一方,EGF(epidermal growth factor) 刺激時の増殖に対する抑制作用はないかあるいは弱かった 4.2.1.1-2 (Cancer Cell 2002;2:127-37) パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 12

In vitro 試験 ( 続 ) 被験物質 : ペルツズマブ 試験の種類 試験系 試験方法 / 投与方法 試験成績 資料番号 ( 試験番号 / 掲載雑誌 ) ADCC 活性 in vitro HER2 高発現ヒト乳癌株 KPL-4,HER2 高発現ヒト NSCLC 株 Calu-3, 及びヒト PBMC ペルツズマブ又はトラスツズマブ (0.4~50 ng/ml) ペルツズマブはトラスツズマブと同様に KPL-4 及び Calu-3に対して強力な ADCC 活性を示した 4.2.1.1-3 (Cancer Res 2009;69:9330-6) パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 13

2.6.3.2.2 In vivo 試験 2.6.3.2.2.1 HER2 高発現及び低発現癌細胞株 xenograft モデルに対する腫瘍増殖抑制効果 2.6.3.2.2.1.1 HER2 高発現ヒト癌細胞株 xenograft モデルに対する効果 試験の種類試験系試験方法 / 投与方法試験成績 HER2 高発現ヒト乳癌株 BT474JB xenograft モデル (HER2(3+) * ) * 免疫組織化学染色法での評価 in vivo 癌細胞株 xenograft マウス (athymic nude) ペルツズマブ又はトラスツズマブを初回 0.8 mg/kg/ 週, その後 0.4 mg/kg/ 週 ( 以下,0.8/0.4 mg/kg) 又は4/2 mg/kg で 3 週間, 計 4 回静脈内 (IV) 投与 ペルツズマブ及びトラスツズマブは腫瘍体積を用量依存的に減少させ, 最高用量 4/2 mg/kg で両薬はともに腫瘍増殖をほぼ完全に抑制した 腫瘍増殖抑制率 (TGI:tumor growth inhibition rate) = 約 100% TGI が約 100% を示した時のペルツズマブ及びトラスツズマブのトラフ濃度はそれぞれ18 及び 14 μg/ml であった 被験物質 : ペルツズマブ 資料番号 ( 試験番号 / 掲載雑誌 ) 4.2.1.1-4 (1041202) パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 14

HER2 高発現ヒト癌細胞株 xenograft モデルに対する効果 ( 続 ) 試験の種類試験系試験方法 / 投与方法試験成績 HER2 高発現ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft モデル (HER2(3+) * ) * 免疫組織化学染色法での評価 in vivo 癌細胞株 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) ペルツズマブを1.2/0.6, 4/2,12/6,40/20 及び 120/60 mg/kg で7 週間, 計 8 回腹腔内 (IP) 投与 ペルツズマブは腫瘍体積を用量依存的に減少させ,12/6 mg/kg 以上の用量で腫瘍増殖をほぼ完全に抑制した (TGI = 約 100%) TGI が約 80% を示した時のトラフ濃度は約 25 μg/ml であった 被験物質 : ペルツズマブ 資料番号 ( 試験番号 / 掲載雑誌 ) 4.2.1.1-5 (1041203) パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 15

2.6.3.2.2.1.2 HER2 低発現ヒト癌患者由来組織及び癌細胞株 xenograft モデルに対する効果 試験の種類試験系試験方法 / 投与方法試験成績 HER2 低発現ヒト乳癌患者由来組織 MAXF449 xenograft モデル (HER2(1+) * ) HER2 低発現ヒト NSCLC 株 NCI - H522 xenograft モデル (HER2(1+) * ) * 免疫組織化学染色法での評価 in vivo 癌患者由来組織 xenograft マウス (NMRI nu/nu) in vivo 癌細胞株 xenograft マウス (SCID beige) ペルツズマブを1.2/0.6, 4/2,12/6,40/20 及び 120/60 mg/kg で6 週間, 計 7 回 IP 投与 ペルツズマブを1.2/0.6, 4/2,12/6,40/20 及び 120/60 mg/kg で, 投与 0 ( 初回 ),7,21,35 及び49 日の計 5 回 IP 投与 ペルツズマブは, 最小用量 1.2/0.6 mg/kg 以上で腫瘍増殖をほぼ完全に抑制した 腫瘍増殖がほぼ完全に抑制された時のトラフ濃度は5 μg/ml であった ペルツズマブは, 最小用量 1.2/0.6 mg/kg 以上で腫瘍増殖をほぼ完全に抑制した TGI が90% 以上を示した時のトラフ濃度は10 μg/ml 以上であった 被験物質 : ペルツズマブ 資料番号 ( 試験番号 / 掲載雑誌 ) 4.2.1.1-6 (1041204) 4.2.1.1-7 (1041201) パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 16

2.6.3.2.2.2 トラスツズマブ抵抗性株及びヒト癌患者由来癌組織, 並びにヒト癌細胞株 xenograft モデルに対する腫瘍増殖抑制効果被験物質 : ペルツズマブ 試験の種類試験系試験方法 / 投与方法試験成績 トラスツズマブ抵抗性株 Founder 2-134R 移植モデル 28 種類のヒト癌患者由来癌組織 xenograft モデル in vivo 癌細胞株移植マウス (athymic nude) in vivo ヒト乳癌 6 種類, 卵巣癌 4 種類, 又は NSCLC 18 種類を用いたヒト癌患者由来癌組織 xenograft マウス (NMRI nu/nu) ペルツズマブを2/1, 6/3,20/10,60/30 及び 180/90 mg/kg で4 週間, 計 5 回 IV 投与 ペルツズマブを100 mg/kg/ 日で1 週間に1 又は 2 回 IP 投与 ペルツズマブは腫瘍体積を用量依存的に減少させた TGI が約 50% を示した時のトラフ濃度は50 μg/ml 以上であった 乳癌では6 種類中 1 種類, 卵巣癌では4 種類中 1 種類, 及び NSCLC では 18 種類中 4 種類で, ペルツズマブによる腫瘍増殖抑制効果がみられた 資料番号 ( 試験番号 / 掲載雑誌 ) 4.2.1.1-8 (1041193) 4.2.1.1-9 (1043264), 4.2.1.1-10 (1043265), 4.2.1.1-11 (1043263) パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 17

トラスツズマブ抵抗性株及びヒト癌患者由来組織, 並びにヒト癌細胞株 xenograft モデルに対する腫瘍増殖抑制効果 ( 続き ) 被験物質 : ペルツズマブ 資料番号 試験の種類 試験系 試験方法 / 投与方法 試験成績 ( 試験番号 / 掲載雑誌 ) ヒト乳癌株 MDA-MB-175 in vivo ペルツズマブを3,10, 対照群の腫瘍重量は0.076 g に達し 4.2.1.1-12 xenograft モデル 癌細胞株 xenograft マウス 30 mg/kg/ 週で4 週間 IV 投与 たのに対し, ペルツズマブ投与群ではいずれの用量でも腫瘍増殖は認められなかった ペルツズマブ 3,10 及び30 mg/kg 投与群の血中濃度はそれぞれ,66.6,205 及び545 μg/ml であった ( -308C) 2.6.3.3 副次的薬理試験 該当なし 2.6.3.4 安全性薬理試験 2.6.7.7 参照 パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 18

2.6.3.5 薬力学的薬物相互作用試験 2.6.3.5.1 トラスツズマブ又はタキサン系薬剤パクリタキセルとの併用効果 2.6.3.5.1.1 トラスツズマブとの併用 試験の種類試験系試験方法 / 投与方法試験成績 HER2 高発現ヒト乳癌株 KPL-4 xenograft モデル ( 同所性移植 ) in vivo 癌細胞株 xenograft マウス (SCID beige) ベバシズマブ (5 mg/kg を週 2 回で11 週間, 計 22 回 IP) 投与途中から, トラスツズマブ (15 mg/kg/ 週で5 週間, 計 6 回 IP) を逐次投与 ペルツズマブとトラスツズマブの両薬物を30/15 mg/kg で10 週間, 計 11 回 IP 併用投与 ペルツズマブ (30/15 mg/kg で 10 週間, 計 11 回 IP) とベバシズマブ (5 mg/kg を週 2 回で11 週間, 計 22 回 IP) を併用投与 ベバシズマブ (5 mg/kg を週 2 回で11 週間, 計 22 回 IP) とトラスツズマブ (30/15 mg/kg で10 週間, 計 11 回 IP) を併用投与 ペルツズマブ / トラスツズマブ, ペルツズマブ / ベバシズマブ及びベバシズマブ / トラスツズマブ併用, 並びにベバシズマブ / トラスツズマブ逐次投与のすべての群で, 腫瘍増殖抑制効果の増強が認められた ペルツズマブ / トラスツズマブ併用群では, 投与開始後の初期から腫瘍の縮小及び消失がみられ, 各投与群の中で最も強い腫瘍増殖抑制効果を示した 被験物質 : ペルツズマブ 資料番号 ( 試験番号 / 掲載雑誌 ) 4.2.1.4-1 (1021305) パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 19

トラスツズマブとの併用 ( 続き ) 被験物質 : ペルツズマブ 試験の種類 試験系 試験方法 / 投与方法 試験成績 資料番号 ( 試験番号 / 掲載雑誌 ) HER2 高発現ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft モデル in vivo 癌細胞株 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) ペルツズマブとトラスツズマブをそれぞれ30/15 mg/kg で6 週間, 計 7 回 IP 併用投与 ペルツズマブ / トラスツズマブ併用により, 腫瘍の縮小を伴う腫瘍増殖抑制効果の増強が認められた 4.2.1.4-2 (1019398) パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 20

2.6.3.5.1.2 パクリタキセルとの併用 被験物質 : ペルツズマブ 試験の種類 試験系 試験方法 / 投与方法 試験成績 資料番号 ( 試験番号 / 掲載雑誌 ) HER2 高発現ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft モデル in vivo 癌細胞株 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) パクリタキセル (45 mg/kg/ 週,IV) の投与後 2 日目にペルツズマブ (12/6 mg/kg,ip) を逐次投与 この逐次投与を 2 週間, 計 3 回行い, その後はペルツズマブ (6 mg/kg/ 週 ) の単独投与を 20 週間, 計 21 回 パクリタキセル (45 mg/kg / 週で2 週間, 計 3 回 IV ) とペルツズマブ (12/6 mg/kg で2 週間, 計 3 回 IP ) を併用投与し, その後はペルツズマブ (6 mg/kg/ 週 ) の単独投与を20 週間, 計 21 回 ペルツズマブ / パクリタキセルの逐次及び同時併用投与により, 腫瘍増殖抑制効果の増強傾向がみられた 4.2.1.4-3 (1015439) パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 21

2.6.3.5.2 パクリタキセル以外の化学療法剤との併用効果 2.6.3.5.2.1 ゲムシタビンとの併用 試験の種類試験系試験方法 / 投与方法試験成績 ヒト NSCLC 株 QG-56 xenograft モデル ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft モデル ヒト卵巣癌株 IGROV-1 xenograft モデル in vivo 癌細胞株 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) in vivo 癌細胞株 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) in vivo 癌細胞株 xenograft マウス (SCID beige) ペルツズマブ Day 1( 初回 ) から12/6 mg/kg で2 週間, 計 3 回 IP とゲムシタビン Day 3( 初回 ) から120 mg/kg/3 日で2 週間, 計 4 回 IP を併用投与 ペルツズマブ Day 1( 初回 ) から12/6 mg/kg で7 週間, 計 8 回 IP とゲムシタビン Day 3( 初回 ) から120 mg/kg/3 日で2 週間, 計 4 回 IP を併用投与 ペルツズマブ Day 0( 初回 ) から12/6 mg/kg で4 週間, 計 5 回 IP とゲムシタビン Day 0( 初回 ),3,6,13,20,27に120 mg/kg で計 6 回 IP を併用投与 ペルツズマブ / ゲムシタビン併用により, 腫瘍増殖抑制効果の増強傾向がみられた ペルツズマブ / ゲムシタビン併用により, 腫瘍増殖抑制効果の増強傾向がみられた ペルツズマブ / ゲムシタビン併用により, 腫瘍増殖抑制効果の増強傾向がみられた 被験物質 : ペルツズマブ 資料番号 ( 試験番号 / 掲載雑誌 ) 4.2.1.4-4 (1011230) 4.2.1.4-5 (1011232) 4.2.1.4-6 (1016330) パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 22

ゲムシタビンとの併用 ( 続 ) 被験物質 : ペルツズマブ 試験の種類 試験系 試験方法 / 投与方法 試験成績 資料番号 ( 試験番号 / 掲載雑誌 ) ヒト卵巣癌患者由来癌組織 OVXF550 xenograft モデル in vivo 癌細胞株 xenograft マウス (NMRI nu/nu) 試験 1: ペルツズマブ 30/15 mg/kg で Day 1( 初回 ),8, 15,22,31,38に計 6 回 IP とゲムシタビン Day 1( 初回 ), 15,31に300 mg/kg を IV を併用投与 試験 2: ペルツズマブ Day 1 ( 初回 ) から12/6 mg/kg で2 週間, 計 3 回 IP とゲムシタビン Day 1に240 mg/kg を IV を併用投与 試験 2の投与スケジュールではペルツズマブ / ゲムシタビン併用による腫瘍増殖抑制効果の増強はみられなかったが, 試験 1では併用投与による腫瘍増殖抑制効果の増強傾向が観察された 4.2.1.4-7 (1043266), 4.2.1.4-8 (1043267) パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 23

2.6.3.5.2.2 カペシタビンとの併用 被験物質 : ペルツズマブ 試験の種類 試験系 試験方法 / 投与方法 試験成績 資料番号 ( 試験番号 / 掲載雑誌 ) ヒト乳癌患者由来癌組織 MAXF583 xenograft モデル in vivo 癌組織 xenograft マウス ペルツズマブ Day 0( 初回 ) から30/15 mg/kg で2 週間, 計 3 回 ペルツズマブ / カペシタビン併用により, 腫瘍増殖抑制効果の増強が 4.2.1.4-8 (1043267) (NMRI nu/nu) IP とカペシタビン 300 mg/kg/ 日を Day 0( 初回 )~Day 10に PO を併用投与 みられた ヒト乳癌患者由来癌組織 MAXF574 xenograft モデル in vivo 癌組織 xenograft マウス ペルツズマブ Day 1( 初回 ) から30/15 mg/kg で2 週間, 計 3 回 ペルツズマブ / カペシタビン併用により, 腫瘍増殖抑制効果の増強傾 4.2.1.4-8 (1043267) (NMRI nu/nu) IP とカペシタビン 200 mg/kg/ 日を Day 0( 初回 )~Day 10に PO を併用投与 向がみられた ヒト大腸癌患者由来癌組織 CXF264 xenograft モデル in vivo 癌組織 xenograft マウス (NMRI nu/nu) ペルツズマブ Day 1( 初回 ) から100 mg/kg/ 週で2 週間, 計 3 回 IP とカペシタビン 300 mg/kg/ 日を Day 0( 初回 )~Day 4, Day 7~Day 12に PO を併用投与 ペルツズマブ / カペシタビン併用による腫瘍増殖抑制効果の増強はみられなかった 4.2.1.4-8 (1043267) パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 24

2.6.3.5.2.3 シスプラチンとの併用 被験物質 : ペルツズマブ 試験の種類 試験系 試験方法 / 投与方法 試験成績 資料番号 ( 試験番号 / 掲載雑誌 ) ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft モデル in vivo 癌細胞株 xenograft マウス (BALB/c nu/nu) ペルツズマブ (6 mg/kg / 週, IP) の投与後 2 日目にシスプラチン (6 mg/kg/ 週,IV) を逐次投与 この逐次併用投与を2 週間, 計 3 回行い, その後はペルツズマブ (6 mg/kg/ 週,IP) の単独投与を3 週間, 計 4 回単独投与 ペルツズマブ (6 mg/kg/ 週で2 週間, 計 3 回 IP) とシスプラチン (6 mg/kg/ 週で2 週間, 計 3 回 IV) を併用投与し, その後はペルツズマブ (6 mg/kg/ 週 IP) の単独投与を3 週間, 計 4 回単独投与 ペルツズマブ / シスプラチンの逐次及び同時併用投与により, 腫瘍増殖抑制効果の増強傾向がみられた 4.2.1.4-9 (1009892) パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 25

2.6.3.5.2.4 エルロチニブ又はイリノテカンとの併用 被験物質 : ペルツズマブ 試験の種類 試験系 試験方法 / 投与方法 試験成績 資料番号 ( 試験番号 / 掲載雑誌 ) ヒト NSCLC 株 Calu-3 xenograft モデル in vivo 癌細胞株移植マウス (BALB/c nu/nu) ペルツズマブ (12/6 mg/kg で6 週間, 計 7 回 IP) とエルロチニブ (50 mg/kg/ 日で7 週間, 計 49 回 PO) を併用投与 ペルツズマブ (12/6 mg/kg で 2 週間, 計 3 回 IP) とイリノテカン (20 mg/kg/3 日で2 週間, 計 4 回 IP) を併用投与し, その後はペルツズマブ (6 mg/kg/ 週,IP) の単独投与を3 週間, 計 4 回 ペルツズマブ / エルロチニブ及びペルツズマブ / イリノテカン併用投与により, 腫瘍増殖抑制効果の増強傾向がみられた 4.2.1.4-10 (1011974) パージェタ 2.6.3 薬理試験概要表 Page 26