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しのぶねぎたや
5 years ago
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1 愛臨技新人サポート研修会愛臨技生物化学分析検査研究班苅谷尚美

2 本日の内容感染症肝炎ウイルス - イムノアッセイの原理 - 定性キットの Cut off S/CO S/N とは? 心疾患マーカー CK-MB ミオグロビントロポニン BNP NT-proBNP 炎症マーカープロカルシトニン

3 感染症ウイルス肝炎ウイルス肝炎発生の機序ウイルス肝炎の内訳感染肝細胞リンハ球肝細胞肝細胞障害肝硬変他 B 型 20.0% 他急性肝炎 10.0% 20.0% C 型肝炎発症の機序肝炎ウイルスを排除するための免疫の感染細胞への攻撃 80.0% C 型 A 型 40.0% 30.0% B 型肝炎とは体が持つ免疫能力がウイルスに感染した肝臓の細胞を攻撃してその結果肝臓の機能が正常に働かなくなってしまうことをいいます肝がん他 10.0% B 型 C 型 90.0% 慢性肝炎自己免疫肝炎未知ウイルス 10.0 % B 型 20.0% C 型 70.0% 清沢研道 :C 型肝炎保健同人社 1998.

4 感染症 B 型肝炎ウイルスと C 型肝炎ウイルス HBV(hepatitis B virus) 中心にコアを持つDNAウイルス感染経路 : 血液感染性感染垂直感染潜伏期間 :2~24 週 B 型肝炎ウイルス感染成人 :70~80% 不顕性感染 20~30% 急性肝炎 ) 垂直感染幼少期 : 持続感染が多 HCV(hepatitis C virus) 9.6kbの1 本鎖 (+)RNAウイルス感染経路 : 血液感染潜伏期間 :2~16 週 C 型肝炎ウイルス感染成人 : 約 20% 一過性感染約 80% 慢性化

5 感染症 B 型肝炎ウイルス遺伝子型 B 型肝炎ウイルスには A~J まで 10 種類の遺伝子型が存在しそれぞれ特有の分布がある日本では B C 欧米では A D が多い遺伝子型の違いが臨床像の違いに関係している成人 HBV 感染の多くは一過性感染で終わるが欧米に多い遺伝子型 A は約 10% が慢性化し最近日本でも増加している

6 感染症ウイルスマーカーの経過急性 B 型肝炎時の各マーカーの変動感染 HBsAg HBc-IgG ALT HBc-IgM HBsAb HBeAb HBeAg 1~6 ヶ月 1~2 ヶ月 2~3 ヶ月 4 ヶ月以降潜伏期急性期回復期治癒

7 感染症ウイルスマーカーと臨床的意義ウイルスマーカー HBs 抗原 HBs 抗体 HBV 感染状態を示す過去の HBV 感染を示す臨床的意義 HBc 抗体 IgM HBc 抗体低抗体価高抗体価低抗体価高抗体価過去の HBV 感染 ( 多くの場合 HBs 抗体陽性 ) を示す HBV 感染状態 ( 殆どの場合 HBs 抗原陽性 ) を示す B 型急性肝炎とその数ヶ月後または B 型慢性肝炎の急性憎悪を示す B 型急性肝炎を示す HBe 抗原血中 HBV が多い ( 感染性強い ) また肝炎例では肝炎の持続性 (HBV 増殖のマーカー ) を示す HBe 抗体血中 HBV が少ない ( 感染性弱い ) 肝炎例少ない HBV DNA 血中 HBV 量を示す ( 抗ウイルス効果の指標 ) 日本消化器病学会肝機能研究班 : 日本消化器病学会誌 98: より改変

8 感染症 HBsAg(-) HBsAb/HBcAb(+) 感染既往体内に HBV はいない? Occult HBV 感染症とは? 血清 HBs 抗原 (-) であるにもかかわらず体内に HBV が存在する状態 1 感染初期で HBs 抗原が検出されない 2 感染後 HBs 抗原量が減り検出されない微量のウイルスが肝臓で産生され続ける細胞性免疫が障害されるとウイルスの増殖がおこりえる

9 低シグナル高低シグナル高 - イムノアッセイの原理反応原理 ( 様式 ) 競合法 B/F 分離標識物質 ( シグナルの検出手段 ) サンドイッチ法少抗原量多少抗原量多

10 - イムノアッセイの原理化学発光法 CLIA 化学発光免疫測定法固相 Ag 発光物質化学反応直接発光 ECLIA 電気化学発光免疫測定法磁石電極固相 Ag エネルギーを与える発光物質直接発光 CLEIA 化学発光酵素免疫測定法固相 Ag 酵素酵素反応発光物質生成物間接発光

11 - イムノアッセイの原理イムノクロマト法 ( ダイナスクリーン Ⅱ HBsAg) Y Y Y Y 50μ L コントロールライン判定ライン 15min Y Y Y Y 長所特別な器具不要試薬調整不要 1 検体ずつ包装簡単操作短時間判定短所定量性がない精密法より感度が劣る試薬間差ロット間差目視の客観性がない血漿 / 血清セレニウムコロイド標識抗 HBsAgモノクローナル抗体コントロールライン用セレニウムコロイド HBs 抗原コントロールライン用キャプチャー試薬

12 - 定性キットの CutOff S/CO S/N とは? CutOff とは? ある判定を行なう時の基準値のことイムノアッセイの定性キットの場合では目的物質の有無の判定基準値例えば HBs 抗原検査ではこの値を超えた結果の場合 HBs 抗原検査陽性と判定される S/CO とは? S は検体測定値のシグナルの略で C O は CutOff 値である判定基準値は 1 となる (C O/C O=1) 数値 1 を基準として陽性陰性の判定を行なう (S/CO=1.0 以上は陽性 1.0 未満は陰性 ) S/N とは? S は検体測定値のシグナルの略で N は陰性キャリブレータのノイズシグナルの略である判定基準値として予め決められた S/N 値を基準として陽性陰性の判定を数値で行なう ( 例 :AxYSM,IMx HBsAg では S/ N=2 以上が陽性 2 未満は陰性となる )

13 心疾患マーカー急性冠症候群の診断急性冠症候群 (ACS) 非 ST 上昇 ST 上昇不安定狭心症非 ST 上昇型急性心筋梗塞 ST 上昇型急性心筋梗塞非 Q 波梗塞 Q 波梗塞初期評価項目問診身体所見心電図採血 ( 血液生化学検査 ) 心エコー胸部 X 線写真

14 心疾患マーカー CK-MB ミオグロビントロポニン虚血性心筋細胞障害が起こると心筋細胞虚血性心筋細胞障害 1 心筋細胞膜が障害 : 細胞質可溶性マーカーが血中に遊出虚血が高度かつ長時間 2 筋原線維が分解 : 筋原線維マーカーが血中に遊出細胞質可溶性マーカー CK/CK-MB S-AST, LD ミオグロビン ( トロポニン T:6%) 障害心筋細胞質からの遊出筋原線維マーカーミオシン軽鎖トロポニン T:94% 壊死筋原繊維の遊出

15 心疾患マーカー CK-MB ミオグロビントロポニン CK-MB クレアチンキナーゼ (CK) の 3 種類アイソザイム (MM MB BB) のうちの 1 つ心筋に特異的ミオグロビン筋細胞の細胞質に豊富に存在するヘム蛋白質ヒトでは主に骨格筋と心筋に存在する心筋特異性は低いトロポニン筋原線維を構成する収縮調節蛋白で T I C の 3 つの成分で複合体を形成し筋収縮に関与心筋特異性が極めて高い

reference limit 1 2 3 4 5 6 7 8 Days After Onset of MI A ミオグロビン心筋障害後 1

16 Multiples of the MI Cutoff Limit 心疾患マーカー CK-MB ミオグロビントロポニン心筋梗塞時の心筋マーカーの経時的変化 A C D B MI decision limit Upper reference limit Days After Onset of MI A ミオグロビン心筋障害後 1 時間前後で血中へ流出 B トロポニン胸痛の 2~8 時間で上昇 7 日間以上異常値を示す C CK-MB 胸痛の 2~8 時間で上昇 2,3 日で元に戻る D トロポニン ( 不安定狭心症 )

17 心疾患マーカー BNP NT-proBNP の産生機序 BNP( 脳性ナトリウム利尿ペプチド ) 主に心室から分泌されるホルモン強力な Na 排泄を伴う利尿と血管平滑筋弛緩作用を有する産生機序心室圧負荷 probnp の合成亢進蛋白分解酵素により BNP と NT-proBNP に分解され血中へ臨床的特長心室の容量負荷をきたす場合血中濃度が上昇心不全腎不全心肥大不整脈心筋梗塞などで重症度に応じて増加

18 心疾患マーカー BNP NT-proBNP 生理的変動加齢により増加女性 > 男性 BNP NT-proBNP 分子量約 3,500 約 8,500 ホルモン活性 + - 半減期約 20 分約 120 分クリアランス NPR-A NPR-C NEP 腎臓腎臓採血法 EDTA 加血漿血清血漿 (EDTA 加 / ヘパリン加 )

19 心疾患マーカー血中 BNP 値と心疾患血中 BNP 値による心疾患の診断 BNP 値 18.4< pg/ml 正常心不全安定狭心症急性心筋梗塞高血圧症弁膜症高血圧症 ( 肥大 ) 心疾患のない不整脈心房細動

20 炎症マーカープロカルシトニン (PCT) とはプロカルシトニンカルシウム代謝調節ホルモンであるカルシトニンの前駆体正常甲状腺 C 細胞で産生され Golgi 装置内でカルシトニンに変換血中には放出されない細菌感染時細菌由来の LPS や炎症性サイトカインの影響を受けて全身の臓器から分泌され血中濃度が上昇臨床的特長全身性感染症特に細菌性感染症で血中濃度が上昇ウィルス性感染症や局所感染症ではほとんど上昇しない

21 炎症マーカープロカルシトニン (PCT) 値と判定測定結果の判定方法指標カットオフ値 (ng/ml) 敗血症 ( 細菌性 ) 鑑別診断 0.5 敗血症 ( 細菌性 ) 重症度判定 2.0 敗血症の重症度判定測定値病態健常人局所感染敗血症 (Sepsis) 重症敗血症 (Sever Sepsis) 敗血症性ショック (Septic Shock)

22 炎症マーカープロカルシトニン (PCT) と血液培養プロカルシトニン抗菌薬の早期投与決定とモニタリング目的細菌性敗血症の診断補助利点即時に細菌感染か否かを判定可能治療効果のモニタリング課題原因菌の同定はできない血液培養適正な抗菌薬の選択目的菌血症の確定診断原因菌の同定利点検出菌を用いて薬剤耐性の検査可能課題結果がでるまで数日必要陽性率が低い

23 炎症マーカープロカルシトニン (PCT) 敗血症以外でプロカルシトニンが上昇する例 1 重症外傷熱傷および大手術後心原性ショック時感染がなければ速やかに低下 2 生後 48 時間以内の新生児健康な新生児でも 20ng/mL 程度まで上昇し生後 48 時間程度で低下 3 川崎病患者 4 その他 ( 深在性真菌感染マラリア急性期多臓器不全肺小細胞癌甲状腺 C 細胞癌 )

24 HBV まとめ B 型肝炎の感染原因の多くは現在性行為といわれている成人の水平感染の多くは一過性感染であるが HBV の遺伝子型によっては慢性化する従来治癒とみなされてきた感染既往のケースでも場合によっては再発再燃の危険がある心疾患マーカー心筋障害壊死のマーカーとして CK CK-MB ミオグロビン H-FABP トロポニンが活用されている BNP は心室の容量負荷をきたす場合血中濃度が上昇する NT-proBNP は主要代謝経路が腎のみであるため相対的に BNP よりも腎機能障害で高値となるプロカルシトニンプロカルシトニンは全身性感染症特に細菌性感染症で血中濃度が上昇するがウイルス性感染症や局所感染症ではほとんど上昇しない

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