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1 保険適用 体外診断用医薬品承認番号 218AMZ 特 長 イヌリンクリアランスは腎機能の基本的指標である糸球体濾過値 (GFR) 測定の gold standard とされています イヌリンはクレアチニンと違い 尿細管での分泌がありません イヌリン測定に適した 特異性が高い酵素法です 各種自動分析機に適用可能です グルコースなど共存物質の影響をほとんど受けません 本イヌリン測定試薬は注射用イヌリン製剤 イヌリード 注 と組み合わせて使用します イヌリンクリアランス クレアチニンクリアランス 糸球体 近位尿細管 分泌 遠位尿細管 約 ml/min = 真の GFR 約 1mL/min イヌリンクリアランスは クレアチニンクリアランスと違って尿細管での分泌がないため真の GFR に近い値を測定できます 製造販売元 東洋紡株式会社 A94K

2 試薬の構成と包装はじめに 腎は血液中の水 電解質および代謝産物等の排泄を司り 体液量 血液浸透圧および酸塩基平衡を調節するとともに 体内環境の恒常性の維持をはかる重要な臓器です 一つの腎には 万個以上のネフロンがあり ネフロンでは 糸球体における血液の濾過 尿細管における濾液からの有用血漿成分と水分の再吸収ならびに尿細管における分泌 排泄が行われています 特に 血液を濾過する糸球体は腎機能の中核を担っており その働き具合を示す糸球体濾過値 (GFR) は最良の指標になります 特に慢性腎不全に進行する可能性のある腎疾患の診断 血液透析導入の決定等においては糸球体濾過値 (GFR) を測定することが必要とされます 現在 本邦では GFR を示す腎クリアランスの測定には 体内成分であるクレアチニンを指標とするクレアチニンクリアランス (Ccr) が汎用されています しかしながらクレアチニンは尿細管からの再吸収を受けないものの 尿細管から分泌されるため Ccr は必ずしも正確な糸球体濾過値を反映せず 特に糸球体機能が低下すると糸球体濾過値を過大評価するとされ Ccr の測定では重篤な腎機能障害を見逃す可能性があることが指摘されています またタンパク質の摂取により GFR が増加するとの報告がありますが Ccr は真の GFR 以上に増加する場合が認められ タンパク質食の影響を受けやすいことも懸念されます この他 Ccr はクレアチニンの分泌に影響する薬剤によっても変動することが知られています 一方 欧米を中心として世界各国の多くの医学専門家により臨床利用され 真の GFRを示すgold standardとして定着している腎機能の指標がイヌリンクリアランス (Cin) です 測定原理 生体内に投与されたイヌリンは血液と細胞間隙に分布し 腎糸球体で濾過され 尿細管で分泌および再吸収を受けずに尿中に排泄されることから GFR を測定する上で理想的な薬物動態を有していると考えられています よってイヌリンクリアランスを用いる GFR 測定は 従来用いられてきた Ccr より 真の腎クリアランスに近い値を測定できるといえます Cin の測定法として 臨床検査法提要にはアンスロン法が記載されています アンスロン法は グルコースやフルクトースなどの糖類の影響を受けやすいため 糖類の影響を受けない測定法として イヌリナーゼを用いた酵素法が適していると考えられます イヌリン測定試薬である本品 ダイヤカラー イヌリン は 外因性物質としてイヌリン製剤を投与して GFR を測定する際に採血 採尿された血清および尿中のイヌリン測定に使用する測定試薬で 株式会社富士薬品のイヌリン注射用製剤 イヌリード 注 と組み合わせてご使用いただけます

3 試薬の構成と包装測定原理 本品は 酵素法を原理とする汎用自動分析機への適用が可能な簡便で特異性に優れたイヌリン測定試薬です 検体中のイヌリンにイヌリナーゼを作用させると フルクトースとグルコースを生成します 生成したフルクトースに酸化型 1 メトキシ メチルフェナジウムメチルサルフェート (1mPMS) の存在下 フルクトースデヒドロゲナーゼを作用させると ケト D フルクトースおよび還元型 1mPMS を生成します 還元型 1mPMS は溶存酸素に作用し 過酸化水素を生成します 生成した過酸化水素は ペルオキシダーゼの作用で N エチル N(2 ヒドロキシ 3 スルホプロピル )m トルイジン (EHSPT) と 4 アミノアンチピリン (4AA) を酸化縮合させ キノン色素に変換されることから これを比色定量します イヌリン イヌリナーゼ フルクトース + グルコース D フルクトースデヒドロゲナーゼフルクトース + 酸化型 1mPMS ケト D フルクトース + 還元型 1mPMS 還元型 1mPMS + O 2 酸化型 1mPMS + H 2 O 2 ペルオキシダーゼ 2H 2 O 2 + 4AA + EHSPT キノン色素 + 4H 2 O 試薬の構成と包装 品 名 酵素試薬 A ( 製品コード No. KTIN1) 酵素試薬 B ( 製品コード No. KTIN11) イヌリン測定用標準液 コントロールセット ( 化成品 ) ( 製品コード No. KTIN1) イヌリナーゼ Dフルクトースデヒドロゲナーゼアスコルビン酸オキシダーゼ 1 メトキシ メチルフェナジウムメチルサルフェート 4アミノアンチピリンペルオキシダーゼ N エチル N(2 ヒドロキシ 3 スルホプロピル )m トルイジン 標準液 主成分 コントロール 1 イヌリン (4mg/dL) コントロール 2 イヌリン (16mg/dL) 包装酵素試薬 A ml 用 6 本酵素溶解液 A ml 6 本酵素試薬 B ml 用 6 本酵素溶解液 B ml 6 本 ml 2 本 ml 2 本 ml 2 本 前処理液は別途販売しております 詳細は問合せ先までご確認ください

4 用法 用量 1. 試液調製法 (1) 酵素試薬 A 1 バイアルを所定量の酵素溶解液 A 1 本に溶解し 試液 R1 とします (2) 酵素試薬 B 1 バイアルを所定量の酵素溶解液 B 1 本に溶解し 試液 R2 とします (3) 標準液はそのまま測定に使用します 調製後の試液は冷蔵庫 (2~ ) 保存で 2 週間使用可能です 2. 操作法 (1) 検体の前処理 血清 血清.3 ml 前処理剤 (.3 mol/l 過塩素酸 ).9 ml 振とう混和 遠心分離 (3, rpm 分間 ) 上清を採取し 試料とします 尿 尿は精製水で 倍及び 4 倍に希釈して測定します (2) 測定 検体 検体ブランク 標準 試薬ブランク イヌリン投与後検体.8μL イヌリン投与前検体.8μL 標準液.8μL 精製水.8μL 試液 R1 インキュベーション 37 分間 試薬 R2 インキュベーション 37 分間 測光 上記インキュベーション後 波長 46nm における吸光度を精製水を対照に光路長 mm で測定する 吸光度 吸光度 A 吸光度 D 吸光度 S 吸光度 B

5 3. 計算方法 (1) 濃度計算法次式よりイヌリン濃度を求めます ( 吸光度 A 吸光度 B) 検体濃度 (mg/dl)= ( 吸光度 S 吸光度 B) 希釈倍率 * 検体ブランク (mg/dl)= ( 吸光度 D 吸光度 B) ( 吸光度 S 吸光度 B) 希釈倍率 * : 標準液濃度 (mg/dl) 希釈倍率 : 血清の場合 前処理により生じた希釈倍率 =4 尿の場合 精製水での希釈倍率 イヌリン濃度 (mg/dl) = 検体濃度 検体ブランク (2) イヌリンクリアランス (Cin) 計算法次式よりCinを求めます U V 1.73 Cin(mL/min/1.73m 2 ) = P A Cin : イヌリンクリアランス (ml/min/1.73m 2 ) U : 尿中イヌリン濃度 (mg/dl) P : 血清中イヌリン濃度 (mg/dl) V : 単位時間あたりの尿量 (ml/min) 1.73 : 国際的体表面積補正値 A : 被験者の身長 体重から求めた体表面積 (m 2 ) なお A( 体表面積 ) は下記の Dubois の式より算出します 体表面積 (m 2 ) = 体重 (kg).4 身長 (cm) 自動分析機適用例日立 718 形 ASSAY SAMPLE VOL. 酵素試液 A 酵素試液 B 波長 (SUB/MAIN) 血清用 1 ポイント / 46 尿用 1 ポイント / 46

6 試薬性能 血清タイムコース (~mg/dl) 希釈尿タイムコース (~mg/dl) 吸光度 4 (ABS) ベース : 血清 時間 ( 分 ) 吸光度 4 (ABS) ベース : 倍希釈尿 時間 ( 分 ) 測定値 (mg/dl) 血清直線性 希釈系列 ( /) 測定値 (mg/dl) 希釈尿直線性 希釈系列 ( /) 試薬の構成と包装検体測定 注 ) 市販の管理血清および管理尿にイヌリンを添加した試料を用いております 添加回収試験 試料 血清 イヌリン濃度 (mg/dl) 原濃度 添加量 測定値 回収率 (%) 測定濃度 原濃度回収率 (%)= 添加濃度 尿 注 ) 市販の管理血清および管理尿にイヌリンを添加した試料を用いております

7 検体測定 イヌリン mg/dl 同時再現性 イヌリン mg/dl 平均 R S.D. CV (%) 血清前処理 N= 測定 N= 血清前処理 N=1 測定 N= 倍希釈尿 平均 R S.D. CV (%) 血清前処理 N= 測定 N= 血清前処理 N=1 測定 N= 倍希釈尿 注 ) 市販の管理血清および管理尿にイヌリンを添加した試料を用いております 日差再現性 イヌリン mg/dl ( 日目 ) 血清 1 血清 2 血清 3 倍希釈尿 1 希釈尿 2 倍希釈尿 平均 R S.D CV(%) 注 ) 市販の管理血清および管理尿にイヌリンを添加した試料を用いております

8 検体測定 妨害物質の影響 ( 血清ベース ) ビリルビンCの影響 ビリルビンFの影響 ヘモグロビンの影響 4 4 乳びの影響 添加濃度 ( ホルマシ ン濁度 ) アスコルビン酸の影響 グルコースの影響 4 注 ) 市販の管理血清にイヌリンを添加した試料を用いております 妨害物質の影響 ( 倍希釈尿ベース ) 4 アスコルビン酸の影響 グルコースの影響 注 ) 市販の管理尿にイヌリンを添加した試料を用いております

9 参考基準範囲 男性 72~176 ml/min/1.73m 2 女性 81~137 ml/min/1.73m 2 Schuster,V.L, The Kidney : Physiology and Pathophysiology. Raven Press, New York, 94(1992) 文 献 ア ) 木全伸介 馬島肇一 岸本高英 水口克彦 米田圭三 手嶋眞一 岡正則折田義正 : 医療と検査機器 試薬第 28 巻 (2), () イ ) 折田義正 下條文武 坂爪実 椎貝達夫 前田益孝 今井圓裕 藤井健遠藤正之 神出毅一郎 羽田勝計 杉本俊郎 菱田明 高橋聡 細谷龍男山本裕康 洞和彦 岡田洋一 保坂成俊 小口智雄 神應裕 西尾康英矢野新太郎 相川一男 安井聖 : 日腎会誌第 47 巻 (7),84812() ウ ) 折田義正他 : 日腎会誌第 43 巻 (1),119(1) エ ) 社団法人日本腎臓学会編 ( 編集代表折田義正 ) 腎機能 (GFR) 尿蛋白測定ガイドライン 東京医学社,28,77(3) オ ) 金井泉 金井正光編 臨床検査法提要 改定 32 版 金原出版,141427() カ ) Schuster,V.L, The Kidney : Physiology and Pathophysiology. Raven Press, New York, 94(1992) キ ) Levey, A. S., Kidney Int., (199) ク ) Shemesh, O., et.al., Kidney Int., (198) ケ ) Tessitore, No., et. al. Nephron, (1979) コ ) Monteiro, M. C. A., et. al. Braz. J. Med. Biol. Res., (1964) サ ) Roy, L., et. al., Clin. Nephrol., (1998) シ ) King, A. J., et. al., J. Am. Soc. Nephrol., (1993) ス ) Laville, M., et. al., Nephron, (1989) セ ) Levey, A. S., Am. J. Kidney Dis., (1993) ソ ) Chow, S. Y., Endocrinology, (196) タ ) Keiding, S., Acta.Physiol. Scand. 133(3),3342(1988)

10 貯法および有効期間 2~ 保存 有効期間 24 ヶ月 使用上の注意 1 本製品は体外診断用であり それ以外の目的に使用しないでください 2 診断は他の関連する検査結果や臨床症状等に基づいて総合的に判断してください 3 検体の取扱いは感染防止上 防護手袋 マスク メガネ等を着用ください 4 本品の酵素溶解液 A は防腐剤としてアジ化物を添加しております 取扱い時に誤って皮膚についた場合は水で十分に洗い流し 万一 目や口に入った場合は医師の診断を受けてください またアジ化物は鉛や銅などの重金属と結合し 乾燥状態で衝撃により爆発する性質がありますので 排水後に排水管に残留しないように十分量の水で洗い流してください 別添の MSDS( 製品安全データシート ) をあわせてご参照ください 6 標準液セット 前処理液は別途発売しております 留意事項 1 試料の性質検体を採取後は速やかに測定に供してください やむを得ない場合は 密栓して冷蔵保存してください 凍結保存を行う場合 凍結融解により検体中イヌリン濃度が低下する場合があります 2 試液調製時の注意溶解液が 2~ の状態で試液を調製し 直ちに 冷蔵 (2~ ) 下にて保存使用してください 溶解後は試液の温度を 2~ に保持し 試液温度が上昇しないように注意してください 3 尿の希釈倍率イヌリン投与前後に採取された尿は あらかじめ精製水で 倍および 4 倍の 2 段階に希釈して測定して下さい 尿中イヌリン濃度の測定結果については 以下の表に示すイヌリン濃度範囲に応じた希釈倍率での測定結果を採用ください 検体濃度が 8mg/dL を超える検体については 16 倍希釈して再測定してください 尿中イヌリン検体濃度 (mg/dl) 以上 未満 以上 8 未満 算出に用いる検体の希釈倍率 倍希釈 4 倍希釈 問い合わせ先 製造販売元 東洋紡株式会社診断システム事業部 82 大阪市北区堂島浜二丁目 2 番 8 号 TEL: FAX: 東洋紡株式会社 福井県敦賀市東洋町 番 24 号