液型検査 検査 法と注意点 イムノヘマトロジー事業部 事業部 古杉光明 Ortho Clinical Diagnostics 2016 IHT 1601
ABO 液型発 Karl Landsteiner オーストリア医学者 1900 年 液型をA B C(O) 型に分類 1930 年ノーベル 理学 医学賞受賞受賞理由 間の 液型の発 1943 年実験室でピペットを持ったまま 臓発作により死亡 Karl Landsteiner Gesellschaft より参照 (2016/02/10) http://www.karl-landsteiner.at/wissenswertes.html or 他 同 の 清 球を混和すると 凝集する場合としない場合があることに気付いた 突き詰めた結果 3 つのグループに分類できることを発 Landsteiner の法則の発表へ
Landsteiner の法則 球には A B 抗原が存在し 清 ( 漿 ) 中には 球に存在しない抗原に対する 然抗体抗 A 抗 B が存在する A 抗原 B 抗原抗 A 抗 B A 型 + 0 0 + B 型 0 + + 0 AB 型 + + 0 0 O 型 0 0 + +
H 抗原 A 抗原 B 抗原 :N アセチルガラクトサミン (GalNAc) : フコース (Fuc) : ガラクトース (Gal) :N アセチルグルコサミン (GlcNAc) H 抗原 A 抗原 B 抗原 O 型 A 型 B 型 HO C H CH2OH C O H OH C H H C OH H C OH ガラクトース (Gal)
A 1 抗原が作られるまで A A トランスフェラーゼ ( 転移酵素 ) H 抗原に :GalNac を結合し A 抗原にする酵素 ( 蛋 質 ) (B 型は B トランスフェラーゼがあり H 抗原に :Gal を結合する ) (O 型はトランスフェラーゼが不完全のため H 抗原のまま ) A A H A 1 A H
A 1 型と亜型 A 1 球 A 抗原はあるが A 1 抗原はない抗 Aとの反応性は弱くなり 抗 A 1 レクチン陰性 H 抗原が多いため抗 Hレクチンが強めに反応する A 亜型 球 A1 抗原 H 抗原 A A 亜型 A 抗原 H 抗原 蛋 A 型 Normal トランスフェラーゼ 蛋 A 型亜型トランスフェラーゼ 遺伝 の突然変異により元気がなく不完全な活性
A 亜型 - 種類別の A 抗原の模式図 表現型 A 抗原数 Bio 抗 A 抗 A 1 レクチン 不規則抗 A 1 A1 A2 A3 Ax Ael < A1 80 120 万 4+ 4+ なし A2 24 29 万 4+ 0 ある場合あり A3 0.7 万 3+ 0 ある場合あり Ax 0.1 1 万 1 3+ 0 あり Am(y) 0.02 0.2 万 0 なし Ael 0.01 0.14 万 0 あり O - 0 規則抗 A Bombay - 0 抗 H Mollison 1988( 部改変 ) Am(y) O Bombay (H 抗原がない )
規則抗体 抗A 抗B 規則抗A 抗Bが存在する理由は明らかとなっていないが 腸内常在菌の糖鎖 構造に対する 然抗体が 球上のA抗原やB抗原と交叉反応している という 説がある 分の 球抗原に対する抗体は原則作られない もし作ったら 分の 球を攻撃して破壊してしまう 産 量には個 差や年齢による変動がある 糖鎖抗原
本 における抗 A 抗 B 抗体価の変動 IgM 型抗 A 抗体価 70 60 50 40 30 IgM 型抗 B 抗体価 20 10 0 70 60 50 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024 40 ラオス (2001) タイ (2005) 日本 (1986) 日本 (2001) 日本 (2005) Immunohematology(2007 年 Vol.23) より 30 20 10 0 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024 ラオス (2001) タイ (2005) 日本 (1986) 日本 (2001) 日本 (2005)
本 における抗 A 抗 B 抗体価の変動 IgG 型抗 A 抗体価 60 50 40 IgG 型抗 B 抗体価 30 70 20 60 10 50 40 30 0 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024 ラオス (2001) タイ (2005) 日本 (1986) 日本 (2001) 日本 (2005) Immunohematology(2007 年 Vol.23) より 20 10 0 8 16 32 64 128 256 512 1024 2048 4096 Ortho Clinical Diagnostics ラオス (2001) 2016 2018 タイ (2005) 日本 (1986) 日本 (2001) 日本 (2005)
球抗体による溶 溶 性輸 副作 管外溶 ( 脾臓 ) 溶 性輸 副作 管内溶 マクロファージ 補体 主に不規則抗体保有者への不適合輸 により じる 主に ABO 不適合輸 により じる 胎児新 児溶 性疾患 HDFN: Hemolytic disease of the fetus and the newborn
厚 労働省輸 療法の実施に関する指針 ( 抜粋 ) 副作 予防対策 Ⅳ 患者の 液型検査と不規則抗体スクリーニング検査患者 ( 受 者 ) については 不適合輸 を防ぐため 輸 を実施する医療機関で責任を持って以下の検査を う これらの検査については 原則患者の属する医療機関で実施するが まれにしか輸 を わない医療機関等 施設内で検査が適切に実施できる体制を整えることができない場合には 専 機関に委託して実施する 1. ABO 液型の検査 1) オモテ検査とウラ検査 ABO 液型の検査には, 抗 A 及び抗 B 試薬を いて患者 球の A 及び B 抗原の有無を調べる, いわゆるオモテ検査を うとともに, 既知の A 及び B 球を いて患者 清中の抗 A 及び抗 B 抗体の有無を調べる, いわゆるウラ検査を わなければならない オモテ検査とウラ検査の 致している場合に 液型を確定することができるが, 致しない場合にはその原因を精査する必要がある 2) 同 患者の 重チェック同 患者からの異なる時点での2 検体で 重チェックを う必要がある 必須 3) 同 検体の 重チェック同 検体について異なる2 の検査者がそれぞれ独 に検査し 重チェックを い 照合確認するように努める 2. Rho(D) 抗原の検査 推奨
ABO 液型の判定基準 正常な ABO のオモテ検査で られる反応は 4+ ( 最強陽性 ) か 0( 完全陰性 ) である それ以外の中途半端な反応が られた場合は異常反応であることが疑われる オモテ検査 ウラ検査 抗 A 抗 B A1 B 判定 ABO のウラ検査では 4+( 最強陽性 ) か 0 ( 完全陰性 ) が理想的であるが しばしば抗 A 抗 B の弱い患者が存在するため 2+ 前後が妥当 1 4+ 0 0 4+ A 2 0 4+ 4+ 0 B 3 0 0 4+ 4+ O 4 4+ 4+ 0 0 AB 通常オモテ検査とウラ検査の判定結果はオモテ :A 型 ウラ : A 型と必ず 致するはずであり これをもって ABO 液型判定とする 不 致の場合は原因を精査する必要がある
ABO 式 液型の異常反応の要因 試薬 器具 技 抗体試薬 理 塩液 球試薬試験管ピペット遠 器 分注 検体由来 A 亜型 オモテ検査 ウラ検査 亜型年齢 疾患異型輸 寒冷凝集素 輸液免疫抑制剤 清異常 ( 連銭形成 ) 冷式抗体寒冷凝集素亜型の不規則抗 A1 抗 B
異常反応 ( 試薬 器具由来 ) と予防 抗 A 試薬 抗 B 試薬 冷えたまま使 変性 理 塩液 時間経過による ph 低下 変性 球試薬 冷えたまま使 変性 試験管 ガラス以外のものを使 コート試験管の使 ピペット 1 滴量が少ない (50µL が適切 ) 試薬 検体を室温に再調製 PBS-saline 試薬 検体を室温に適切な材質適切なピペットを選択 精度管理 遠 器 遠 不 / 過剰 / 機構 適切な遠 時間
試薬の精度管理 球型検査 ( 球系検査 ) ガイドライン ( 改定 版 ) ABO 液型およびRhD 液型検査は 不適合輸 を防ぐために輸 前に われる重要な検査であり 管理された試薬 法および 順のもと正しい判定が われなければならない 液型検査における陽性および陰性コントロールの使 例 試薬陽性コントロール 球陰性コントロール 球 抗 A A 型 B 型 抗 B B 型 A 型 抗 D D 陽性 D 陰性 3.3. 精度管理 (D 抗原検査を含む ) 3.3.1. 実施する検査 法の管理に適したタイミング ( 試薬ロット変更時 業務開始前 検査バッチ毎など ) で各種コントロールを測定し 試薬の性能や検査プロセスの有効性を確認する 3.3.2. 全 動輸 検査装置を使 する場合は メーカー指定のコントロール試薬キットで装置の管理を い 検査の有効性を確認する 3.3.3. コントロールに期待される結果が得られなかった場合は原因を追究する 3.2.1. 検査においては オモテ検査とウラ検査を実施する オモテ検査とウラ検査を実施することは 双 の検査のチェック機能を有するだけではなく 偽陽性や偽陰性反応の影響を検出できる重要な役割を果たしている 4.2.1. 抗 D 試薬と同時に Rh コントロールを いて検査を実施する 本輸 細胞治療学会 球型検査 ( 球系検査 ) ガイドライン ( 改訂 2 版 ) より 部抜粋
液型異常反応時のチェックリスト オモテ検査弱 / 異常反応ウラ検査弱 / 異常反応抗 D 弱 / 異常反応 当 のQC 結果の確認 遠 器 ( 回転数 回転時間 ) 抗体試薬の反応性 標準 清との反応性 抗体試薬の反応性 理 塩液の確認 ( 浮遊物 カビ等の繁殖 ph の低下 ) 球浮遊液の再調製 ウラ検査 球の調製 球浮遊液の再調製 球洗浄 ( ) または O 型 (A2 型 ) 球の準備 球洗浄 ( ) または 球洗浄 ( 温 ) A1 B 球の洗浄 / 置換 球洗浄 ( 温 ) 適正な濃度調製 (EDTA 加 浮遊 ) 適正な濃度調製 適正な抗体試薬 / 患者 球滴下 分な患者 清 / 漿の滴下適正な抗体試薬 / 患者 球滴下 適正条件での遠 緩やかにほぐしながらの判定 患者情報の ( 疾患 3 か 以内の輸 歴 妊娠中 液 / 化学データ )
液型検査の分注 滴下の順番は必ず 1 抗体試薬 or 清 ( 着 が薄い ) 2 球 ( 着 が濃い )
滴下後の確認 第 液滴下後は必ず滴下 / 量を確認
ピペットの形態と滴下量の変化 52μL 58μL 68μL 清は 球沈渣量の 80 倍以上 3% 球浮遊液 50μL 内の 球沈渣は約 1.5μL 120μL 144μL 168μL
試験管ラックと検体 / 試薬滴下 可能な限り試験管は垂直に!
試薬滴下時における試験管 度の影響 垂直の試験管に滴下 斜めの試験管に滴下 管壁に試薬 / 検体が付き遠 前に 分混和されないことによる弱陽性化! 滴下は確実に管底へ う
遠 の状態と強さ 90 度スイングタイプ 60 度スイングタイプ 遠 は 900xg 以上 1200xg 以下が基本
最も注意すべき事項は オモテ検査 弱反応 or 部分凝集の有無 ウラ検査 微弱な反応が本当に観察されないか ( オモテ試験の先 観でウラ試験を ていないか?)
オモテ / ウラ検査が不 致 ( 反応不 ) 損反応 ( 反応陽性予測 ) 部位の原因を確認 オモテ検査 適切な 法による再検査 抗 A1 抗 Hレクチンによる試験 ウラ検査 ウラ検査の反応増強法実施 O 型 球 / 球による試験 球抗体以外の反応の確認 型物質の確認 患者情報の収集 新 児 妊産婦 異型輸 髄移植 重度熱傷
オモテ / ウラ検査が不 致 ( 余剰反応 ) 余剰反応の原因を確認 オモテ検査 適切な 法による再検査 抗 A1 抗 Hレクチンによる試験 ウラ検査 O 型 球 / 球による試験 A2 球による試験 球抗体以外の反応の確認 患者情報の収集 妊産婦 ( 寒冷凝集素保有 ) 偽 板減少症 ( カルボン酸抗体保有 ) 重度感染症 ( 寒冷凝集素上昇 )
オモテ / ウラ検査が 致 ( 弱反応 /mf) 弱反応の原因を確認 オモテ検査 適切な 法による再検査 抗 A 抗 Bによる凝集価 抗 A1 抗 Hレクチンによる試験 ウラ検査 ウラ検査の反応増強法実施 O 型 球 / 球による試験 A2 球による試験 球抗体以外の反応の確認 患者情報の収集 新 児 妊産婦 ( 抗原性低下 ) 異型輸 髄移植 重度感染症 ( 抗原変異 T 化 )
必要 分な検査項 正しい使 法に基づいたオモテ検査 元検体からの浮遊液再調製 ( または再採 ) ルチンで 球洗浄をしていない場合必ず洗浄を う 抗体特性を把握した反応増強法 確認法を含むウラ検査 不規則抗体の確認 (O 型 球 ) ウラ検査 球 不規則抗体検査 球 対照を同時に い浮遊液を同 ( 理 塩液 ) にする 抗 H( 抗 A1) レクチンの使 唾液 ( 清 ) 中の型物質 ( 吸着解離試験 )
ウラ試験の異常反応解決に役 つテクニック 清量 (2 滴 4 滴 ) 室温放置 (15 分 ) 冷式パネル (10 15 1 2 時間 ) 酵素処理 球の使 ( 酵素 段法を いたウラ検査 ) 採 法の変更 ( プレーン EDTA) 市販 球の 理 塩液置換 ph dependentな抗体の対応 薬剤関与の確認 解離抗原 ( 型物質 ) による抑制 Fresh 球の使 ( ドナー 球のプール ) 抗原陰性 球の使 ( 不規則抗体保有時 ) 型物質を いた抗体の中和 ( 抗 Le a, 抗 Le b, 抗 P1, 抗 HI, 抗 I 等 )
反応特性と分類 A1 A2 A3 Ax Am(y) Ael 直接凝集陽性 直接凝集陰性 不規則抗体を保有する型物質を分泌する抗 Hレクチンとの反応が強い 抗 H との反応性 O > A2 > A2B > B > A1 > A1B 4+ 3+ 2+ 1+ 1+ 0
球輸 検査における最終の 的 患者体内において抗原抗体反応を起こさ せないこと 患者に新たなる免疫をさせないこと
ABO 変異形における 液の供給 Type 不規則抗体 対応血球 対応血漿 / 血小板 Anti-A 1 なし A A A 2,A 3,Ax,Ael Anti-A 1 あり (saline reactive) O( 又はA) A Anti-A 1 あり (30 reactive) O A (Aint),Am,Ay Anti-A 1 なし O(A) A Anti-B なし B B B 3,Bx,Bel Anti-B あり (saline reactive) O( 又はB) B 亜型 Anti-B あり (30 reactive) O B (variant) (Bint),Bm,By Anti-B なし O(B) B Anti-A 1 なし A 又はO AB cisa 2 B 3 Anti-A 1 あり (saline reactive) O( 又はA) AB Anti-A 1 あり (30 reactive) O 又はcisA 2 B 3 AB cisa 2 B Anti-A 1 あり (saline reactive) B( 又はAB) AB cisa 1 B 3 A 又はcisA 1 B 3 AB RowⅠ O h O h O Row Ⅱ A h anti-h あり (30 reactive) A h A B h B h B A h A 又はA h A Am h A 又はAm h A Row Ⅲ B h anti-hi あり (saline reactive) B 又はB h B Bm h B 又はBm h B Om h O 又はOm h O
輸 療法の実施に関する指針 2. 緊急時の輸 緊急に 球の輸 が必要な出 性ショック状態にある救急患者について, 直ちに患者の検査 液を採取することに努めるが, 採 不可能な場合には出 した 液を検査に利 しても良い 輸 液製剤の選択は状況に応じて以下のように対処するが, 液型の確定前には O 型の 球の使 ( 全 は不可 ), 液型確定後には ABO 同型 の使 を原則とする 1)ABO 液型確定時の同型の 液の使 患者の最新の 液を検体として ABO 液型及びRho(D) 抗原の判定を い 直ちにABO 同型 である 球 ( は全 ) を輸 する 輸 と平 して 引き続き交差適合試験を実施する 2) 液型が確定できない場合のO 型 球の使 出 性ショックのため, 患者のABO 液型を判定する時間的余裕がない場合, 同型 が不 した場合, 緊急時に 液型判定 試薬がない場合, あるいは 液型判定が困難な場合は, 例外的にO 型 球を使 する ( 全 は不可 )
抗 D 判定における異常反応 患者 球の質的 量的な異常 後天的な変化 ( 妊婦 病等 ) DAT 陽性患者 抗 Dによるマスキング 寒冷凝集素の影響 抗 D 試薬の劣化 不適正な使 D 異型輸 (D+ D-)
D 抗原の分類 Unusual D (Normal) Weak D (D u ): 弱反応性 D Partial D Partial weak D Elevated D 1996 年 Dr.Daniels 講演より
D 抗原量の分布 D D D D Phenotype sites(x10 4 ) R1r DCcee 0.99-1.46 R0r(R0R0) Dccee 0.2-2.0 R2r DccEe 1.4-1.66 R1R1 DCCee 1.45-1.93 R1R2 DCcEe 2.3-3.1 R2R2 DccEE 1.58-3.33 D- - D- - 11-20.2 weak D Du 0.011-0.047 D P.L. Mollison(1979) より 30 D D D 25 20 頻度 15 10 5 D 0 35000 30000 25000 20000 15000 10000 抗原 sites 5000 2000 1000 500 250 0 S1 模式図 D
Weak D における頻度は0.2% 1% 遺伝 検査において脂質 重膜内の部位に点変異が られる 遺伝 レベルでは76 Type 84 種に分類 (2010 年 ) 抗原数は100から4000 sites/cells Weak D Type2 (446-818 sites/cells) であっても免疫原性あり WeakD Type 抗原数 頻度 (Caucasian) Type 1 533 1283 70.3% Type 2 446 818 18.0% Type 3 1333 2650 5.2% Type 4 1687 2406 1.3%
アジア各地における DEL に関する報告 報告 D 陰性頻度 DEL 頻度 (D 陰性に占める ) DEL 全体頻度 本 0.58% 10.3% 0.060% 中国 0.28% 25.5% 0.071% 港 0.29% 29.2% 0.085% 韓国 0.15% 16.3% 0.024% 台湾 0.33% 32.0% 0.106% (Caucasian) 15% 0.18% 0.027% (African) 3-7% NA NA
DEL 液による抗体産 が疑われた症例 輸 4U 6U 7U 2U 不規則抗体 450 (-) (-) (-) (+: 抗 D) 400 350 300 250 200 150 100 50 0 12 10 8 6 4 2 0 JJTM Vol.51, No.6: 2005 より ( 部改変 ) LDH(IU/L) Hb(g/dL) 患者は67 歳 性 B, ccdee 20 年前にD 陽性 液の輸 により抗 D 産 の履歴あり 2000 年以降輸 された 液構成 (ccdee:1, ccdee:7, ccdee:6, Ccdee:2, CcdEe:3)
Weak D と Partial D Partial D で 出された変化 Weak D で 出された変化 外側 Clin. Lab. 2002;48:53-59 より抜粋 球膜 内側 Partial DもWeak Dも Rh(D) 抗原のアミノ酸配列が 部変化したもの (417aa) わずかなアミノ酸の変化は 体構造を含む構造への影響を及ぼす主に 球膜の外側もしくはその直近位置の変化 : Partial D エピトープが変化し 抗 Dが結合出来なくなる部分ができる主に 球膜内や内側の変化 : Weak D Rh(D) 抗原の膜外への表出状態が変化 ( 減少 ) する
Weak D と Partial D D 遺伝 D 遺伝 D 遺伝 D 遺伝 球 球 球 球 Normal D Weak D Partial D* Partial-Weak D* * 明確な定義はなく により解釈が異なる いる試薬により分類が異なる場合があり要注意
抗 D 弱反応時の検査 検体の再調製の実施と再検査 異なるformulationの抗 Dを いた試験 直接凝集試験 D 陰性確認試験 ( 間接抗グロブリン法 ) ポリクローナル抗 D を いた被凝集価測定 凝集像の判定に注意が必要 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024 2048 正常 D 陽性 4+ 4+ 4+ 3+ 3+ 2+ 2+ 1+ 1+ w+ 0 Weak D 3+ 3+ 2+ 1+ w+ 0 0 0 0 0 0 異型輸 2+ 2+ 2+ 2+ 2+ 1+ 1+ w+ w+ 0 0 mf mf mf mf mf mf mf mf mf 0 0
モノクローナル抗 D(MoAb)+ 被検 球 (-) は (±) (+) D(+) D u 因 確認試験モノクローナル抗 D (MoAb) + 被検 球ポリクローナル抗 D(PoAb) MoAb(+) PoAb(+) MoAb(-) PoAb(+) MoAb(-) PoAb(-) titration 輸 検査の実際第三版より抜粋 D(+) Weak D Partial D D(-)
IBGRL に依頼された検体 1991 1992 1993 1994 計 依頼数 抗体保有 依頼数 抗体保有 依頼数 抗体保有 依頼数 抗体保有 依頼数 抗体保有 weak D 8 0 14 0 12 0 38 0 72 0 Ⅵ 10 2 22 1 11 2 10 0 53 5 HMi 1 0 7 1 7 0 11 0 26 1 HMii 1 0 4 0 4 0 2 0 11 0 Ⅴa 6 2 1 0 2 0 2 0 11 2 not identfy 3 2 3 1 3 1 8 2 17 6 DFR 1 0 7 0 1 0 0 0 9 0 Ⅶ 0 0 0 0 4 4 2 2 6 6 Ⅲc 1 1 0 0 1 1 1 1 3 3 Ⅱ 0 0 2 2 0 0 0 0 2 2 Ⅲa 0 0 2 2 0 0 0 0 2 2 Ⅳa 0 0 1 1 0 0 1 0 2 1 Ⅳb 2 0 0 0 0 0 0 0 2 0 DBT 1 1 0 0 0 0 0 0 1 1 計 34 8 63 8 45 8 75 5 217 29 Transfusion Med. 1995より 部改変
DFR が疑われた症例 ANTI-D No EPITOPE SPECIFICITY (1-9) VARIANT D II D IIIa DIIIb DIIIc D IVa D IVb Dva DVI DVII A LHM76/58 + + - + + + + - + (+) - + 1+ B LHM76/59 + + + + + - + + + + - - 4+ C LHM174/102 + + + + - - + - + + - - 3+ w D LHM50/B2 + + + + + + + - + + - + 4+ E LHM169/81 + + + + - - - - + + - - 4+ F ESD1? +?? - - + + +? -? 3+ G LHM76/55 + + + + - - + + + + - - 4+ H LHM77/64 - + + + - - + + + + - - 4+ I LHM70/45 + + + + - - - - + - - - 0 J LHM59/19 + + + + + + + - - - - + w+ K LHM169/80 + + + + + + + - + + - - 4+ L LHM57/17 + + + + + + + - + - + + 0 DFR DHAR DBT TEST Results 市販抗 D 試薬 Bioclone anti-d Blend Polyclonal anti-d IgG Gamma clone anti-d IgM/IgG Monoclonal anti-d 三光 Monoclonal anti-d wako BioVue ABR cassette IS 37 weak D 0 NT 3+ 3+ NT NT 4+ NT NT 3+ NT NT 3+s NT NT 1+ NT NT
Weak D 表現型患者の管理 供 者輸 予定者 ( 受 者 ) 産婦 科患者新 児 扱い Rh 陽性扱い D 陰性確認試験実施後 陰性扱い D 陰性確認試験未実施 陰性扱い陽性扱い Rh 陽性扱い (RhIgの観点より) Rh 陰性扱い (RhIgの観点より) Rh 陽性扱い (RhIgの観点より) 対応とリスク Rh 陰性患者にこの供 者を輸 すると 抗 D 産 の刺激となる可能性がある ( これらの 球に免疫原性が無いことを す 分な証拠に ける ) 但し陰性確認試験陰性群の中にも微弱なD 抗原を持つ供 者がいることは報告されているが ( 約 10%. 久保ら.1993) 陰性 として供給されている また 抗 Dを保有するRh 陰性者に輸 された場合 体内で抗 Dと反応するためAG 法によるD 陰性確認試験の確認が絶対必要 直後遠 で反応がみられないまたは微弱な反応を す全ての患者にRh 陰性 液を輸 する 受 者にとって最も好ましい ( リスクのない ) 対応といえる ただしこれはRh 陰性 液の浪費につながりD 陰性者の少ない 本 においては問題が残る可能性がある また 試薬特性により正常 D 陽性者であっても弱反応を す ( 技上の問題 ) 場合があり この対応には検査環境 ( 検査 技 ) の徹底が前提となる 患者の年齢 性別 D 陰性 液の の可能性 緊急性を考慮して Rh 陽性 液を輸 することもある Rh 陰性 液の浪費は防げるが免疫の機会の否定はできない Rh 0 (D) 異型輸 実施時同様に本 家族へのインフォームドコンセントが必要かどうか今のところ不明 妊娠初期に検査を いWeak DであればRhIgの投与対象者とはならない 妊娠初期にD 陰性確認試験を実施することはその後の経胎盤出 をWeak Dと 誤らないためにも重要 仮に抗 D 抗体を産 した場合にはD 陰性の妊婦の場合と同様の処置を要する ( 検査で免疫は防げない ) 本来妊娠初期に検査を いWeak DであればRhIgの投与対象者とはならない では 親にとって harmlessであり 児の 液への効果がないとはいえないといった説もありRhIg 投与を う医師も存在する 親 球への感作により効果に関しては疑問 また RhIg 投与基準に則していないことも問題 ( ローブリンテスト陽性は投与対象とならない ) 親が陰性且つ新 児がWeak Dの場合には 親を免疫する可能性があるため 親にRhIgを投与する
1. ABO 液型の検査 輸 療法の実施に関する指針 1 オモテ検査とウラ検査 ABO 液型の検査には, 抗 A 及び抗 B 試薬を いて患者 球のA 及びB 抗原の有無を調べる, いわゆるオモテ検査を うとともに, 既知のA 及びB 球を いて患者 清中の抗 A 及び抗 B 抗体の有無を調べる, いわゆるウラ検査を わなければならない オモテ検査とウラ検査の 致している場合に 液型を確定することができるが, 致しない場合にはその原因を精査する必要がある 2 同 患者の 重チェック同 患者からの異なる時点での2 検体で, 重チェックを う必要がある 3 同 検体の 重チェック同 検体について異なる2 の検査者がそれぞれ独 に検査し, 重チェックを い, 照合確認するように努める 2. Rho(D) 抗原の検査 抗 D 試薬を いてRho(D) 抗原の有無を検査する この検査が陰性の患者の場合には, 抗原陰性として取り扱い,D 抗原確認試験は わなくてもよい
抗 D 弱反応時の対応と留意 供給 液の選択 D 陽性?D 陰性? 年齢 性別 必要な単位数と緊急度 他の不規則抗体の有無 新たなる免疫のリスク 近々の輸 の有無 液型の異常反応における判断基準の明確化 液の選択基準の明確化
供 者 諸外国の対応 間接抗グロブリン法を含む試験を実施し D 抗原の有無を確認 -DEL を除く 受 者 間接抗グロブリン法未実施 Category Ⅵ と反応しない抗体を少なくとも つ以上使 して試験を 実施 (UK, GE, Fr etc) 他のパーシャル D は ルチン検査では原則考慮しない When two different reagents are used it is helpful to use those of a similar reactivity with partial D and weak D red cells, in order to reduce the number of discrepancies. If a discrepancy occurs the patient should be treated as D negative until the D status is resolved. Patients should not be classified as D positive on the basis of a weak reaction with a single anti-d reagent. If clear positive results are not obtained with two monoclonal anti-d reagents it is safer to classify the patient as D negative. Reagents used for D grouping patients should not detect category DVI. UKBTS ガイドラインより抜粋
D 弱反応患者への対処 BCSH ガイドライン Review for 2014 より Yes 1 種または多種の抗 D によって弱反応 * が観察されるか? No 患者は 性で且つ 50 歳以下か? No 患者は慢性的な輸 の要請がある可能性があるか? No D 陽性として扱い報告 Yes Yes D 陽性として扱い報告 患者は D 陰性 ( または可能ならば保留 ) として扱い D 抗原の確認試験を依頼する ** * : 弱反応の基準は各ラボ基準または添付 書に記載がある場合それに従います **: 専 の機関への委託
患者への対処 (BCSH ガイドライン Review for 2014 より ) 7.8 D Selection 7.8.1 Selection of D matched blood is the recommended best practice, and D positive blood should be selected for D positive patients according to the definition in the flow chart (figure 2, section 4). However, in order to preserve supplies of D negative red cells for D negative women of child bearing potential, D positive red cells may be selected for D negative patients in the following situations: i. Female patients > 50 years. ii. Adult males who are D negative or whose D status is unknown; iii. Patients undergoing a large volume transfusion (> 8 units), excluding children, females of childbearing potential and patients with immune anti-d. 7.8.2 The policy for use of D positive red cells to a D negative recipient should be documented and controlled by validated rules in the LIMS where applicable. 7.8.3 D negative red cells should always be selected for: i. D negative women of childbearing potential (<51 years). Guidelines for pre-transfusion compatibility procedures in blood transfusion laboratories Page 30 of 60 ii. D negative patients <18 years old. iii. Patients who have formed immune anti-d, even if not currently detectable. iv. Transfusion-dependant D negative adults.
総括 51 異常を異常として捕らえられる環境を整備する ( 精度管理 再検査 法の確 ) 再検 精査 患者バックグラウンド等を俯瞰し 総合的に判断する 安易に 液型を決めつけない ( 多分 型だろう は危険 ) 必ずしも 詳細な分類 ( 亜型検査 ) は必須ではない 持ちの試薬が豊富でなくとも まかな推測は可能 最 限の追加検査で最 限の情報を得る ( 事前計画が 切!) 緊急時の対応を明確にしておく
ご清聴 ありがとうございました 問題解決の参考としてオーソ クリニカル ダイアグノスティックス お客様サポートセンター 0120-03-6527
異常反応の原因 53 オモテ検査検体 亜型新 児 抗原性減弱 ( 液疾患 妊婦等 ) 異型輸 髄移植 Polyagglutination Tn (Acquired A) 試薬 器具の異常 その他 試薬成分に対する抗体キメラ モザイク 抗体試薬の劣化遠 不 球濃度異常 ウラ検査 検体 理 塩液法で検出される不規則抗体 寒冷 抗体 温式の不規則抗体 亜型が保有する不規則抗 A1 清異常 ( 連銭形成 ) 薬剤抗体 試薬 器具の異常 ウラ 球のダメージ 過剰遠 その他 検体 試薬を冷えたまま試験実施