Key words: EHEC, VTEC, verotoxin, Shiga-like toxin

Key words: EHEC, VTEC, verotoxin, Shiga-like toxin

Table 1 Cases with EHEC infection * Y: Years old M : age of the month ** M : male F: Female HUS: hemolytic uremic syndrome

埼 玉 県 で分 離 され たEHECの 薬 剤 感 受 性 試 験 は,セ 用 い て,aminobenzylpenicillin kanamycin (KM), cin (SM), (TC), (CP), 剤 に つ い て,NCCLS 2 EHEC (ABPC), tetracycline chloramphenicol (NA)の6薬 Table ン シ デ ィ ス ク(BBL)を 1453 性状 Detection of Verotoxin and serotypes of strains streptomy- nalidixic acid 9)に 準 拠 し て 実 施 し た. 6.プ ラ ス ミ ドプ ロ フ ァ イ ル 供 試 菌16株 and Liuの か ら の プ ラ ス ミ ドDNAは,Kado 変 法10)に よ り抽 出 し,0.7%ア ガロース ゲ ル 電 気 泳 動 に よ りそ の プ ロ フ ァ イ ル を観 察 し た.分 子 量 はE. coli V517株 お よ びE. coli NR1 株 を マ ー カ ー と し て 推 定 し た. 成 1.病 供 試 菌16株 0128: 績 原大腸菌 血清型別 の 血 清 型 別 は,0157:H7が14株, H2が1株,0111: 血 清 型 別 で は,す H-が1株 で あ っ た.O べ て の株 が 生 菌 お よ び加 熱 菌 の 両 方 で 凝 集 を 認 め た.ま た,H血 PCRに 清型別 で はク レ 以 上 通 過 さ せ た 後 に 凝 集 が 認 め ら れ た. 素 産 生性 各 供 試 菌16株 のVero毒 べ ての株 が3日 素 産生 能 以 内 に 細 胞 変 性 を 示 し,Vero毒 中,VT1,VT2両 毒 素 遺 伝 子 保 有 株 は9株,VT2 単 独 保 有 株 は5株 で あ り,VT1遺 に よ るVT1,VT2遺 Fig. 1 伝 子 保 有 株 で あ り,Ol11:H-の1株 VT1遺 伝 子 の 単 独 保 有 株 で あ っ た(Fig.1). 4.生 1.5% agarose gel electrophoresis size marker Strain 平 成6年12月20日 of PCR amplification (123bpDNA Number は 化学的性状 供 試 菌 株 は い ず れ もIndole, 伝子 の確認 M: molecular はVT1, VT2遺 の あ る こ と が 確 認 さ れ た(Table2). 3.PCR法 伝 伝子単独 保有株 は 認 め ら れ な か っ た.0128:H2の1株 素 の 産 生 性 をVero細 胞 を 用 い た 培 養 細 胞 法 で 行 っ た 結 果,す よ びVT2遺 子 の 保 有 状 況 を 確 認 し た と こ ろ,0157:H714株 イ ギ ー 管 の 入 っ た ト リ プ ト ソ イ 半 流 動 培 地 を3回 2.Vero毒 よ る 供 試 菌 株 のVT1お Ladder: GIBCO products BRL) Methylred陽 性

* 1454 山田 Fig. 2 0.7% agarose gel electrophoresis 文也 他 of plasmid DNAs detected in enterohemorrhagic E. coli Ml: molecular Strain size marker (E. coli V517), M2 : molecular Number size marker Strain Table 3 Biochemical characteristics (E. coli NR1) Number of EFIEC strains : positive after 3 days Table S: Sensitive ABPC: phenicol, R: Drug resistance of EJIEC strains Resistant Aminobenzylpenicillin NA: 4 Nalidixic, KM : Kanamaycin, TC: Tetracycline, SM: Streptomycin, CP: Chloram- acid. 感 染 症 学 雑誌 第68巻 第12号

Table 5 Serotype, VT genes by PCR, Drugresistance and Biotype of 16 EHEC strains, Plasmid profile, Biochemical character

7) Pollard, D.R., Johnson, W.M., Lior, H., Tayler, S.D. & Rozee, K.R.: Rapid and specific detec- of verotoxin genes in Escherichia coli by tion the polymerase chain reaction. J. Clin. Mi- 28 : 540-545, 1990. crobiol., 8) Ewing, W.H. : Edwards and Ewing's Identification of Enterobacteriaceae 4th ed., Elsevier Science Pub. Co., New York, 1986. 9) National Committee for Clinical Laboratory Standrds : Performance Standrds for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests, 3rd Ed., 4(16), NCCLS, Villanava, 1984. 10) Kado, C.I. & Liu, S.T.: Rapid procedure for detection and isolation of large and small plasmids. J. Bacteriol., 145 : 1365-1373, 1981. 1) Riley, L.W., Remis, R.S., Helgerson, H.B., McGee, J.G., Wells, B.R., Davis, R.J., Hebert, E. S., Olcott, R.N., Linda, L.M., Johnson, N.T., Hargrett, P.A., & Blake, M.L. Cohen : Hemorrhagic colitis associated with a rare Escherichia coli serotype. N. Engl. J. Med., 308 : 681-685, 1983. 2) Karmali, M.A.: Infection by verocytotoxinproducing Escherichia coli. Clin. Microbiol. Rev., 2 : 15-38, 1989.

18) Christopher-Hennings, J., Willgohs, J.A., Francis, D.H., Raman, U.A.K., Moxley, R.A. & Hurley, D.J. : Immunocompromise in gnotobiotic pigs induced by Verotoxin- Producing Escherichia coli (Ol l l : NM). Infect. Immun., 61 : 2304-2308, 1993. Biological Characters of Enterohemorrhagic Escherichia coli Isolates from Diarrhea Patients in Saitama (1990-1992) Fumiya YAMADA, Takayuki KURAZONO, Masanori YAMAGUCHI, Youko OHZEKI & Yusuke OKUYAMA Saitama Institute of Public Health A total of 16 strains of Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) isolated from diarrea patients in Saitama from 1990 to 1992 were tested for their serotype, verotoxin production, biochemical characteristics, antibiotics sensitivity and plasmid profiles. By serotype analysis, 14 strains from two outbreaks and 12 sporadic cases were classified as type 0157: H7, one as O111: H-(not motility) and one as 0128 : H2. Typing of verotoxin by gene analysis using Polymerase Chain Reaction (PCR) showed that 9 of 0157 : H7 strains including two cases from outbreaks and O128: H2 have VT1 and VT2 genes, other 0157 : H7 have the VT2 gene and 0111: H-has only the VT1 gene. Biochemical characteristic anlaysis indicated two strains of 0157: H7 type from outbreaks were biotype II and the rest of 0157 : H7 wre biotype One of the 0157: H7 strain from a sporadic case showed positive for urease production. According to sensitivity tests against antibiotics, out of the 0157 : H7 group, one strain was resistant against ABPC, one against SM and two strains resistant to SM-TC. For plasmid profiles, all strains had 94 Kb plasmids and several smaller sizes of plasmids. But 5 strains of 0157 : H7 had 94 Kb plasmid only.