微生物細胞壁成分検出用試薬および関連商品 エンドトキシン ペプチドグリカン β- グルカン 本文に収載しております試薬は 試験 研究の目的のみに使用されるもので 医薬品 食品 家庭用品 などとして使用できません 希望納入価格には消費税が含まれておりません 本カタログの内容は予告なしに仕様 デザイン 希望納入価格を変更することがあります 最新情報につきましてはお問い合わせください 本カタログの記載内容は 2018 年 4 月現在のものです フリーダイヤル :0120-052-099 フリーファックス :0120-052-806 URL:www.wako-chem.co.jp/ Wako LAL システム :www.wako-chem.co.jp/lal/ Web からのお問合せ :https://labchem.wako-chem.co.jp/question/others/
ンドトキシン検出用試薬ペプチドグリカンおよびβ- グルカン検出用試薬その他関連試薬エンドトキシン測定用機器関連器1 材Factor C Endotoxin(LPS) Factor C Factor B Factor B Factor G Proclotting enzyme Coagulogen Peptidyl-pNA Clotting enzyme エCONTENTS エンドトキシン試験の基本 2 7 ライセート試薬選択のフローチャート 8 9 ホームページ Wako LALシステム 紹介 10 エンドトキシン検出用および関連試薬 エンドトキシン検出用試薬エンドトキシン特異的試薬 (1 3)-β-D-Glucan リムルス ES の原理 12 Coagulin Peptide + pna Factor G リムルス ES-IIシリーズ 13 PYROSTAR ES-Fシリーズ 14 15 PYROSTAR ES-F/Plate 16 17 リムルスカラー KYシリーズ 18 19 リムルス ES-Ⅲ 20 21 リムルス PS シングルテストワコー 22 23 リムルス ES-IIプラス CS シングルテストワコー 24 25 エンドトキシン非特異的試薬 リムルス J シリーズ 26 リムルス HS-T シングルテストワコー 26 リムルス Fシリーズ 27 Endochrome-K TM 27 ペプチドグリカンおよび β- グルカン検出用試薬 SLP 試薬セット 28 29 SLP- HS シングル試薬セット 28 29 その他関連試薬エンドトキシン検出用抽出液 30 エンドトキシン試験関連試薬 ( 各種標準品 バッファー ) 31 エンドトキシンインジケーター 31 LPS( リポポリサッカリド ) 32 エンドトキシン測定用機器および関連器材 エンドトキシン測定用機器 トキシノメーター ET-6000 34 35 MPR エンドトキシン測定システム for BT 36 サーモステーション TS-37S/24 37 バイアルチューブミキサー V TM-252Ⅱ 37 トキシノメーター ET-Mini & リムルス ES- Ⅱプラス CS シングルテストワコー 38 Endosafe nexgen-pts TM 39 バリデーション サポート サービス ( トキシノメーター Endosafe nexgen-pts TM MPR エンドトキシン測定システム ) 40 41 関連器材 バイオクリーンシリーズ 42 アクロディスク シリンジフィルター 43 アクロディスク ムスタング E メンブレン 43 セルファイン ETクリーン 44 主な関連試薬 器材一覧表
エンドトキシン試験の基本 エンドトキシンとはエンドトキシン測定について エンドトキシンの生物活性と耐熱性エンドトキシンはグラム陰性菌の細胞壁を構成するリポ多糖です Lipopolysaccharide とも呼ばれ 通称 LPS と呼ばれています エンドトキシンは代表的な発熱物質であり pg (10-12 g) や ng (10-9 g) という微量でも血中に入ることで 発熱などの種々の生体反応を引き起こします 特徴としては 高い耐熱性が挙げられます オートクレーブ処理程度では完全に失活することはできません 完全に失活させるためには250 以上で30 分以上の乾熱滅菌が必要です グラム陰性菌はどこにでも存在し 菌が死んでもエンドトキシンは残ります エンドトキシンはマクロファージや樹状細胞の TLR4 (Toll-like receptor4) に結合し NF-kBを介して核に作用して各種サイトカインを産生します 産生されたサイトカインによって種々の生物活性を示します エンドトキシンの構造 エンドトキシンがライセート試薬中に含まれる因子を増幅活性化し 一連の反応によるゲル化 濁度増加 合成基質の切断による黄 発色を測定し エンドトキシン量を判定します 反応機構エンドトキシン試験には カブトガニの血球抽出物から作られるライセート試薬を使います 試料にエンドトキシンが含まれる場合 いずれもセリンプロテアーゼ前駆体である Factor C Factor B Proclotting enzyme が順次 増幅活性化されていきます ( 図 3) 最終的に Coagulogen が水解されて Coagulin となり 不溶性のゲルとなります 試験では 一連の反応によるゲル化 濁度増加 合成基質の切断による黄色発色を測定し エンドトキシン量を判定します Endotoxin(LPS) 図 1 に構造の模式図を示します リピド Factor C Factor C (1 3)-β-D-Glucan A 部分が生物活性を担う本体であり この部分の分子量は約 2 千です 糖鎖 Factor B Factor B Factor G Factor G 部分を含んだ全体は通常分子量 5 千から 8 千程度です ただし エンドトキシンは Proclotting enzyme Clotting enzyme 親水性部分 ( 糖鎖 ) と疎水性部分 ( リピ ド A) を持つ分子であるため 水溶液中 Coagulogen Coagulin ( ゲル化 濁度増加 ) で会合し 見かけの分子量が数十万 数 百万のミセル構造をとります ミセル構造が変化すると生物活性の強弱も変化することが報告されています 図 1 リポ多糖の構造 高岡文 (2011) 防菌防黴,39,47-56 より引用 または Peptidyl-pNA Peptide + pna( 黄色発色 ) 合成基質 内の各因子は活性型を示す 図 2 には大腸菌型とサルモネラ型のリピ 図 3 ライセート試薬の反応機構 ド A の構造を示します リピド A の基本 構造は菌株が異なっても共通している ライセート試薬 ( エンドトキシン非特異的試薬 ) には Factor G を介した反応経路もあります そのため 部分が多くみられます エンドトキシン以外に真菌の細胞壁に含まれる構成成分 β- グルカンに対する反応も起こります このように 本来のライセート試薬はエンドトキシン非特異的ですが Factor G を取り除くか その作用をブロックすること により エンドトキシンに特異的なライセート試薬を調製することができます エンドトキシン測定では 求められる測定精度や 試験頻度 検体数などを総合的に考慮して適切な試薬選 大腸菌型リピド A サルモネラリピド A 択が必要です 図 2 リピド A の構造 2 3
ゲル化法試験管中でライセート試薬と検体を混合し 37±1 で 60±2 分間 振動を与えないようにブロックヒーターなどで加温します 加温終了後ただちに試験管をゆっくりと 180 転倒し 変形したり崩れたりしないゲルが形成していれば陽性 形成していなければ陰性と判定します 検体を 2 倍段階希釈することにより どの希釈倍数まで陽性判定されるかを調べます 陽性判定された最も大きい希釈倍数 ( あるいは最小濃度 ) をエンドポイントと呼びます エンドトキシン標準品 実施する試験目的にあったエンドトキシン標準品をご使用ください 医薬品の最終製品検査など 日本薬局方に準拠する試験を行う 必ず薬局方エンドトキシン標準品をご使用ください 原料検査 工程検査などを行う 米国で販売する薬剤 (FDA 規制 ) の最終試験を行う Control Standard Endotoxin(CSE) の使用が可能です 180 転倒 対応試薬 : ES-Ⅱシリーズ ES-Fシリーズ J シリーズ F シリーズ 陽性 (+) 陰性 ( ) 比色法 エンドトキシンによるライセート試薬の活性化を発色合成基質が切断されることで検出する方法です p -ニトロアニリンの黄色発色を 405 nm 付近の吸光度変化で測定するため 検体が 405 nm 付近に大きな吸収を持つと適用できません 対応試薬 : カラー KYシリーズ Endochrome-K TM 比濁法エンドトキシンによるライセート試薬の活性化を ゲル化に伴う濁度変化で検出する方法です 濁りが大きい検体には適用できません 対応試薬 : ES-Ⅱシリーズ ES-Fシリーズ ES-F/Plate Jシリーズ Fシリーズ HS-T シングル ES-Ⅲ ES-Ⅱプラス CSシングルテスト PSシングルテスト 4 5
使用器具の影響適用分野 エンドトキシン試験を行う際に使用する器具はエンドトキシン β- グルカンフリーのものを使用しなければなりません 250 以上で 30 分以上の乾熱がエンドトキシン不活化には必要ですので 通常は乾熱滅菌したガラス器具を使用します 微量に溶出する金属イオン (Fe Al Ga Cr 等 ) が試験に影響するので 金属製器具の使用は避けてください 使い捨てのプラスチック器具等は メーカーによる保証のあるものを除いて 下記事項を ガラス製器具と比較 確認してからご使用ください ❶エンドトキシンの汚染がない ❷エンドトキシンが吸着しない ❸ 試験結果に影響する溶出物がない 試料の影響 エンドトキシン試験を実施する際には 試料が試験におよぼす影響 ( 反応干渉因子 ) に注意が必要です ❶ライセート試薬に影響するもの 蛋白変性作用のあるもの ( 酸 アルカリ 尿素 界面活性剤 有機溶剤 ) プロテアーゼ プロテアーゼ阻害剤 キレート剤 ( 反応に必要な Ca や Mg が捕捉される ) 比色法の場合 着色物質 (405 nm 付近に大きな吸収を持つ物質 ) 比濁法の場合 濁り ❷エンドトキシンに影響するもの 金属イオン (Fe Al Ga Cr イオン等 μm 程度でも影響あり ) 界面活性剤試料の影響の有無は 既知量のエンドトキシンを添加した検体を測定し 添加したエンドトキシン量の回収率を求める試験によって判断します 薬局方では反応干渉因子試験と呼ばれている試験です 比色法 比濁法 ( 光学的定量法 ) では添加したエンドトキシンの回収率が 50 200% の範囲であれば試料は測定に影響せず 試料はその濃度でエンドトキシン試験に影響を与えないといえます 試料の影響が見られた場合 試料を希釈して測定すると影響を軽減することができます ただし 試料を希釈すると 原液換算 ( 希釈する前の液 ) で検出できるエンドトキシンの濃度が高くなってしまいます 希釈可能な倍数 ( 最大有効希釈倍数 ) は 検出したいエンドトキシン濃度と用いるライセート試薬の検出感度によって決まります ( 反応干渉因子試験や最大有効希釈倍数の詳細は 日本薬局方のエンドトキシン試験法を参照してください ) 一方ゲル化法では 反応干渉因子試験に用いる試料溶液は 用いるライセート試薬が必ず陰性判定である事が必須です すなわち 使用するライセート試薬の検出感度以上のエンドトキシンが混入していると この試験は実施できません エンドトキシンが混入していない試料の入手が困難な場合は 原則としてゲル化法ではなく光学的定量法で対応ください また ライセート試薬を より感度の低いものに変更することで試験が可能となる事もあります 注射剤製剤の種類によって 薬局方 生物学的製剤基準 ( ワクチン 血液製剤などに関して規定 ) 学会基準 (PET 薬剤 : 日本核医学会院内製造 PET 薬剤基準 ) などで規定されています ( 薬局方では 皮内 皮下および筋肉内投与のみに用いるものは除く ) 医療機器厚労省通知 ( 薬食機発 0301 号第 20 号 ) に別添付された 医療機器の生物学的安全性試験法ガイダンス には 医療機器のエンドトキシン管理に関しての記載があります また 滅菌済み注射針などをはじめとする多くの医療機器については JIS でエンドトキシン規格が定められています 再生医療等製品厚労省から ヒト ( 同種 )ips( 様 ) 細胞加工医薬品等の品質および安全性の確保に関する指針 をはじめとした各種指針が出されています また 最終製品のみならず 培地 原料に関してもエンドトキシン管理の必要性が認識されています バイオ医薬品厚労省通知 ( 薬食審査発 1214 第 1 号 ) の 抗体医薬品の品質評価のためのガイダンス に 抗体医薬品原薬又は製剤の規格及び試験方法において参照される日本薬局方一般試験法として エンドトキシン試験法があげられています 透析用剤製剤は薬局方で規定されており 調製後の透析液に関しては別に学会基準 ( 透析医学会基準 日本臨床工学技士会ガイドライン ) や ISO で水質基準が定められています 参考資料 ( もっとよく知るために ) エンドトキシン試験の実施方法 ❶ 第 17 改正日本薬局方 (http://jpdb.nihs.go.jp/jp17) エンドトキシンの構造や作用機構など全般 ❷ 棚元憲一 エンドトキシンと医薬品の品質管理 Bull. Natl. Inst. Health Sci., 126, 19-33(2008) (http://www.nihs.go.jp/library/eikenhoukoku/2008/019-033.pdf) ❸レギュラトリーサイエンス財団 HP 技術情報 (http://www.pmrj.jp/hyojun/html/frm071.php) 厚労省 抗体医薬品の品質評価のためのガイダンス について (http://www.pref.nara.jp/secure/74563/24166.pdf) 6 7
ライセート試薬選択のフローチャート チューブリーダー法 エンドトキシン特異的試薬 比濁法 ゲル化法 日本薬局方 シングルテスト リムルス ES-II シングルテスト :295-51301( 表示感度 0.015 EU/mL) P.13 リムルス ES-II テスト :299-51201( 表示感度 0.015 EU/mL) P.13 カブトガニ血球抽出物 ES-II:292-51213( 表示感度 0.015 EU/mL) P.13 カブトガニ血球抽出物 ES-III:295-51801 1 P.20 シングルテストリムルス PS シングルテスト :299-54501 2 P.22 FDA 対応 シングルテスト PYROSTAR ES-F シングルテスト :295-72301( 表示感度 0.015EU/mL) P.14 PYROSTAR ES-F without CSE:291-75701( 表示感度 0.015EU/mL) P.14 比色法 簡便法 シングルテスト 3 4 リムルス ES-II プラス CS シングルテスト :299-77201 日本薬局方シングルテスト リムルスカラー KY シングルテスト :291-53601 低 リムルスカラー KY テスト :291-53101 P.24 P.18 P.18 エンドトキシン非特異的試薬 ゲル化法専用 日本薬局方 シングルテスト リムルス J シングルテスト :290-22041( 表示感度 0.25 EU/mL) P.26 リムルス HS ー J シングルテスト :292-22241( 表示感度 0.03 EU/mL) P.26 FDA 対応 シングルテスト リムルス F シングルテスト :297-52601( 表示感度 0.25 EU/mL) P.27 リムルス HS ー F シングルテスト :299-52801( 表示感度 0.03 EU/mL) P.27 比濁法 ゲル化法 日本薬局方 シングルテスト リムルス HS ー T シングルテスト :299-53401 4 P.26 リムルス J テスト :290-21941( 表示感度 0.25 EU/mL) P.26 リムルス HS-J テスト :296-22141( 表示感度 0.03 EU/mL) P.26 カブトガニ血球抽出物 J:298-22341( 表示感度 0.25 EU/mL) P.26 カブトガニ血球抽出物 HS-J:294-22441( 表示感度 0.03 EU/mL) P.26 FDA 対応 リムルス HS-F テスト :293-52701( 表示感度 0.03 EU/mL) P.27 カブトガニ血球抽出物 F:298-52511( 表示感度 0.25 EU/mL) P.27 カブトガニ血球抽出物 HS-F:290-52711( 表示感度 0.03 EU/mL) P.27 比色法 FDA 対応 Endochrome-K 256 test kit:519-87321 P.27 Endochrome-K 320 tests:513-87341 P.27 Endochrome-K 3200 tests:516-87331 P.27 1: 生物学的製剤に適した比濁法専用試薬 2: 水に不溶なサンプルに適した比濁法専用試薬 3: 日本薬局方のエンドトキシン試験法には準拠しておりません 4: 比濁法専用試薬 シングルテスト 1 回の測定分のライセート試薬が反応用試験管にあらかじめ分注されているタイプ ライセート試薬をエンドトキシン試験用水で溶解し 反応用試験管またはプレートに必要量分注し使用するタイプ マイクロプレートリーダー法 エンドトキシン特異的試薬 比濁法 FDA 対応 PYROSTAR ES-F/Plate with CSE:293-75401 P.16 PYROSTAR ES-F/Plate without CSE:297-75301 P.16 比色法 日本薬局方 リムルスカラー KY テスト :291-53101 P.18 エンドトキシン非特異的試薬 比色法 FDA 対応 Endochrome-K 256 test kit:519-87321 P.27 Endochrome-K 320 tests:513-87341 P.27 * 本カタログでは CSE : Control Standard Endotoxin のこと Endochrome-K 3200 tests:516-87331 P.27 8 9
Wako LAL システム エンドトキシン Web サイトです ( エンドトキシン情報を配信しています ) エンドトキシン検出用および関連試薬 エンドトキシンについての基礎知識から技術資料 セミナー / 講習会開催の情報まで幅広い内容をご提供致します また LAL データシート 等も掲載しています 是非ご活用下さい LAL データシート : 各試薬のロットごとの活性化時間 ( 和光データ ) を確認できます http://www.wako-chem.co.jp/lal/index.html エンドトキシン検出用試薬 エンドトキシン特異的試薬 リムルス ES-IIシリーズ PYROSTAR ES-Fシリーズ PYROSTAR ES-F/Plate リムルスカラー KYシリーズリムルス ES-Ⅲ リムルス PS シングルテストワコーリムルス ES-IIプラス CS シングルテストワコー エンドトキシン非特異的試薬リムルス Jシリーズリムルス HS-T シングルテストワコーリムルス Fシリーズ Endochrome-K ペプチドグリカンおよび β- グルカン検出用試薬 SLP 試薬セット SLP- HS シングル試薬セット その他関連試薬 エンドトキシン検出用抽出液エンドトキシン試験関連試薬 ( 各種標準品 バッファー ) エンドトキシンインジケーター LPS( リポポリサッカリド ) 10 11
エンドトキシン検出用試薬ライセート試薬とエンドトキシンの反応カスケード機構は図 1に示すとおりです 反応系に (1 3) -β-d-グルカン * が存在するとファクター Gを活性化し エンドトキシンがなくてもゲル化する いわゆる偽陽性反応が起こります このままではエンドトキシンに特異的とは言えません 当社が開発したリムルス ESは反応系に大過剰の (1 3)-β-D- グルカン ( カルボキシメチル化カードラン ) を共存させることにより β- グルカンによるライセート試薬の活性化を阻害し エンドトキシンを特異的に検出する方法です なぜ大過剰の β- グルカンがそれ自身の反応を阻害するかについては 図 2に示すとおり β- グルカンとライセート試薬の反応領域が狭い濃度範囲であることによります しかしながら エンドトキシンとリムルスの反応は低濃度から高濃度までの広い領域で反応し 大過剰の β- グルカンの共存でも阻害されないことがリムルス ES に応用されています ( 図 3) *:(1 3)-β-D- グルカンはカビ ( 真菌 ) やセルロース系のろ過膜から由来します エンドトキシン検出用試薬ゲリムルス ES( エンドトキシン特異的反応試薬 ) の原理 リムルス ES-Ⅱ シリーズ 比濁法 ゲル化法 エンドトキシン特異的 日本薬局方 検体中の ( 1 3)-β-D- グルカンの影響を受けることなく エンドトキシンを特異的に検出可能 日本薬局方収載 エンドトキシン試験法 に適合したキットおよび試薬 日本薬局方標準エンドトキシン (JP-RSE) によるゲル化感度検定力価 ( E U / m L ) を表示 トキシノメーター による比濁法では 0.0078 1EU/mL まで検出可能 測定試料の ph の影響を受けにくいため 安定したエンドトキシン測定が可能 シングルテスト コード No. 品名 表示感度 (EU/mL) 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 295-51301 リムルス ES-II シングルテストワコー 0.015 25 回用 35,000 エンドトキシン (1 3)-β-D- グルカン 活性化 活性化 ファクター C ファクター C ファクター G ファクター G 活性化 ファクター B ファクター B コード No. 品名表示感度 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) 299-51201 リムルス ES-II テストワコー 0.015 292-51213 カブトガニ血球抽出物 ES-II 0.015 60 回用 (2.0mL 用 3 本 ) 100 回用 (2.0mL 用 5 本 ) 37,000 58,000 凝固酵素前駆体 コアギュローゲン 凝固酵素 コアギュリン C S E( Control Standard Endotoxin) は E.coli UKT-B の菌体から精製したエンドトキシンの凍結乾燥品で 1 バイアル中に 500ng のエンドトキシンと添加剤マンニトールとグリシンを含有し ロットごとに日本薬局方 標準エンドトキシンで検定した参考値 (EU/Vial) が記載されています 図 1 リムルステストの反応カスケード ゲル形成 ) ゲル化時間 (min ル化時間(分)100 50 10 5 ゲル化時間(分)ゲル化時間 (min ) 50 10 5-8 -7-6 -5-4 -3-2 -1 0 1 0.001 0.01 0.1 1 10 0.001 0.01 0.1 1 10 CM-カードラン [log(mg/ml)] エンドトキシン [EU/mL] エンドトキシン [EU/mL] A ゲル化時間(分)ゲル化時間 (min ) 50 10 5 B 図 2 CM-カードランと LALの反応性 図 3 リムルス HS およびリムルス ES を用いたエンドトキシン測定に トキシノメーター の測定時間を 99 分に設定し 及ぼすCM-カードランの影響 リムルス HS を用いて測定した :9 9 分以内にゲル化判定されなかったもの : ゲル化判定されたもの A : リムルス HS を使用 B: リムルス ES を使用測定はトキシノメーター を用いて 測定時間 9 9 分で行った : エンドトキシン希釈系列 :1 μg/ml の CM-カードランを含むエンドトキシン希釈系列 12 13
エンドトキシン検出用試薬エンドトキシン検出用試薬 PYROSTAR ES-F シリーズ 比濁法ゲル化法エンドトキシン特異的 FDA 承認 検体中の (1 3)-β-D- グルカンの影響を受けることなく エンドトキシンを特異的に検出可能 米国食品医薬品局 (FDA) の認可を取得 米国輸出品目の最終製品試験に適用可能なキットおよび試薬 USP 標準エンドトキシン (USP-RSE) によるゲル化感度検定力価 ( E U / m L ) を表示 トキシノメーター による比濁法では 0.001 ~ 1EU/mL まで検出可能 測定試料の phの影響を受けにくいため 安定したエンドトキシン測定が可能 検量線情報 )0.1000 25.2 100 エンドトキシン濃度 ( E U / m L ) ゲル化時間 ( 分 ) 103.8 0.001000 103.8 103.6 50 49.2 0.01000 49.0 48.8 25.2 ゲル化時間(分 シングルテスト コード No. 品名表示感度 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) 295-72301 Limulus Amebocyte Lysate PYROSTAR TM ES-F SINGLE TEST 0.015 25 回用 41,000 0.001 0.01 0.1 1 エンドトキシン濃度 (EU/mL) 回帰式 : log(tg) = -0.289200 log(c) +1.13012 相関係数 : -0.9984 1.000 14.0 14.0 14.2 コード No. 品名表示感度 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) 291-75701 Limulus Amebocyte Lysate PYROSTAR TM ES-F MULTI TEST without CSE 0.015 100 回用 (2.0mL 用 5 本 ) 59,000 比濁法における添加エンドトキシンの回収率 シングルテスト 共存薬剤 0 50 100 150(%) 0.9% NaCl 3% NaCl 2.5% ブドウ糖リンゲル液 ( 原液 ) 硫酸 Mg(50mM) イオタラム酸メグルミン (1.0%) 炭酸水素 Na(0.25%) 74 39 80 87 72 69 89 クエン酸 Na(0.05%) 108 ヘパリン Na(10U/mL) キシリトール (2.5%) エンドトキシン抽出液 (0.1%) 97 82 77 ピリドキシン塩酸塩 (0.25mg/mL) 104 アスコルビン酸 Na(10mg/mL) 102 セフォゾプラン塩酸塩 (2.5mg/mL) 83 共存薬剤 0 50 100 150(%) 0.9% NaCl 3% NaCl 2.5% ブドウ糖 105 88 98 リンゲル液 ( 原液 ) 103 硫酸 Mg(50mM) 100 イオタラム酸メグルミン (1.0%) 89 炭酸水素 Na(0.25%) 126 クエン酸 Na(0.1%) ヘパリン Na(10U/mL) キシリトール (2.5%) エンドトキシン抽出液 (0.1%) 93 92 91 90 ピリドキシン塩酸塩 (0.25mg/mL) 100 アスコルビン酸 Na(25mg/mL) セフォゾプラン塩酸塩 (5mg/mL) 74 85 は 100μL のライセート試薬と 100μL のサンプル量を混合して測定するのに対して シングルテストは 200μL のサンプルで直接ライセート試薬を溶解します そのため 反応液中でのサンプル濃度には差がでます 一般的にシングルテストの方がサンプルの影響を受けやすい傾向にあります 14 15
エンドトキシン検出用試薬プレートリーダー法 性化(分エンドトキシン検出用試薬 PYROSTAR ES-F/Plate 比濁法エンドトキシン特異的 FDA 承認 PYROSTAR TM ES-F/Plate は 96 ウェルマイクロプレート専用の比濁法ライセート試薬です 吸光プレートリーダーを用いることにより 簡単に短時間で多検体の同時測定が可能です 定量範囲は0.01 10EU/mL と幅広く 水の試験はもちろん希釈が必要な各種薬剤の試験にも適用できます 検体中の ( 1 3)-β-D- グルカンの影響を受けず エンドトキシンを特異的に検出可能 米国食品医薬品局 (FDA) の認可を取得 米国輸出品目における最終製品試験にも適用可能 1well 当たりサンプル量 50μLで測定できるため 貴重なサンプルでも少量で測定可能 測定試料の phの影響を受けにくいため 安定したエンドトキシン測定が可能 コード No. 品名測定範囲 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) 293-75401 297-75301 Limulus Amebocyte Lysate PYROSTAR TM ES-F/Plate with CSE Limulus Amebocyte Lysate PYROSTAR TM ES-F/Plate without CSE 0.01-10 0.01-10 160 回用 (2.0mL 用 4 本 ) 200 回用 (2.0mL 用 5 本 ) 59,000 67,000 50.0 活 検量線情報 40.0 30.0 20.0 )10.0 0.0100 0.1000 1.0000 10.0000 エンドトキシン濃度 (EU/mL) 回帰式 :log(tg) = ー 0.260424 log(c) +1.10351 エンドトキシン濃度 ( E U / m L ) 活性化時間 ( 分 ) 46.0 0.0100 46.7 43.3 21.2 0.1000 21.5 21.2 12.0 1. 000 12.1 11.9 7.4 10.000 7.4 7.5 相関係数 : ー 0.9943 比濁法における添加エンドトキシンの回収率 共存薬剤 0 50 100 150(%) 0.9% NaCl 94 3% NaCl 81 2.5% ブドウ糖 105 リンゲル液 ( 原液 ) 106 硫酸 Mg(50mM) 96 イオタラム酸メグルミン (1.0%) 87 炭酸水素 Na(0.25%) 127 クエン酸 Na(0.1%) 90 ヘパリン Na(10 U/mL ) 96 キシリトール (2.5%) 89 エンドトキシン抽出液 (0.1%) 87 ピリドキシン塩酸塩 (0.25 mg/ml) 103 アスコルビン酸 Na(25 mg/ml) 65 セフォゾプラン塩酸塩 (5 mg/ml) 85 16 17
エンドトキシン検出用試薬リムルスカラー KY シリーズ エンドトキシン検出用試薬 日本薬局方 ライセート試薬と発色合成基質が一体製剤されており 試薬溶解後 ( シングルテストは試料で試薬を溶解 するだけ ) 試料と混合するだけで反応を開始させることが可能 溶解後の試薬の安定性にすぐれ ブランクの反応性が低く抑制 検体中の ( 1 3)- β - D - グルカンの影響を受けず エンドトキシンを特異的に検出可能 検量範囲が広く 高濃度から低濃度のサンプルにも使用可能 高感度のため 希釈法により試料中の反応阻害 促進物質の影響を低減 トキシノメーター / マイクロプレートリーダーによる測定が可能 ( シングルテストはトキシノメーターのみ ) 原理 エンドトキシンによる本試薬の発色機構は ライセート中に含まれるセリンプロテアーゼ前駆体が順次活性 化され 最後に凝固酵素が黄色発色合成基質を水解し 発色基 (pna) が遊離して 黄色の発色を呈する原 理に基づいています ( エンドトキシン特異的検出の原理は 12 ページ参照 ) エンドトキシン リポ多糖 LPS C 因子 B 因子 凝固酵素 発色基 pna C 因子 B 因子 凝固酵素前駆体 発色合成基質 ( 内の各因子は活性型を示す ) Boc-Thr-Gly-Arg-pNA リムルスカラー試薬の発色カスケード機構 シングルテスト トキシノメーター法 コード No. 品名 測定範囲 (EU/mL) 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 291-53601 リムルスカラー KY シングルテストワコー 0.0002-5 25 回用 50,000 プレートリーダー法 トキシノメーター法 コード No. 品名 測定範囲 (EU/mL) 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 60 回用 /120 回用 291-53101 リムルスカラー KY テストワコー 0.0005-5 (2.0mL 用 3 本 ) )比色法 54,000 プレートリーダー法の場合は120 回用 (1well 当たり 50μL) トキシノメーター マイクロプレートリーダー 活性化時間(分)活性化時間 検量線情報 ( マイクロプレートリーダー使用時一例 ) リムルスカラー KY テストワコーの測定条件検体量 :50μL 測定波長 :405nm-650nm 測光間隔 :40 秒測定時間 :200 分 Onset OD: 0.015 活性化(分100.0 10.0 ) 比色法における添加エンドトキシンの回収率リムルスカラー KYテストワコーの場合共存薬剤 0 50 100 150(%) 0.9% NaCl 83 3% NaCl 100 2.5% ブドウ糖 90 リンゲル液 ( 原液 ) 104 硫酸 Mg(50 mm) 79 イオタラム酸メグルミン (1.0%) 85 炭酸水素 Na(0.25%) 96 クエン酸 Na(0.1%) 110 ヘパリン Na(10 U/mL) 90 キシリトール (2.5%) 100 エンドトキシン抽出液 (0.1%) 123 1.0 0.0001 0.001 0.01 0.1 1 10 100 エンドトキシン濃度 (EU/mL) 反応時間 ( 分 ) エンドトキシン濃度 ( E U / m L ) 活性化時間 ( 分 ) 100.7 0.0005 86.7 94.0 44.7 0.0050 44.7 44.3 21.0 0.0500 22.0 22.3 10.3 0.5000 10.7 11.1 5.0 5.000 5.2 5.3 エンドトキシン濃度 ( E U / m L ) エンドトキシン濃度 ( E U / m L ) 18 19
エンドトキシン検出用試薬リムルス ES-Ⅲ エンドトキシン検出用試薬 比濁法エンドトキシン特異的日本薬局方生物学的製剤基準 生物学的製剤 特にアルブミン製剤やアルブミンを含有した製剤に最適な試薬 アルブミン含有量 6% 以下の検体の測定可能 生物学的製剤基準の エンドトキシン試験法 で要求される 平行線定量法 に適用可能な試薬 日本薬局方収載 エンドトキシン試験法 に適合した試薬 測定試料の phの影響を受けにくいため 安定したエンドトキシン測定が可能 専用ソフトウェアの設定画面専用ソフトウェア トキシマスター または トキシマスター ER/ES では 生物学的製剤基準のエンドトキシン試験法に記載された平行線定量法によるデータ処理機能をサポートし HSAやインターフェロンのほか 様々な生物学的製剤のエンドトキシン試験に利用できるように設計されています 分散分析の結果と製剤内在エンドトキシンの定量値および生データを 画面およびプリンタに出力できます コード No. 品名測定範囲 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) 295-51801 カブトガニ血球抽出物 ES-III 凍結乾燥品 0.0156-0.25 100 回用 (2.0mL 用 5 本 ) 58,000 平行線定量法とは 一般には あるサンプルの内在エンドトキシンを定量するには検量線法が用いられています この方法では 標 準品のエンドトキシンの各濃度に対するゲル化時間をプロットし 用量反応直線 ( 検量線 ) を作成し これに希釈サンプルによるゲル化時間を当てはめ希釈サンプルのエンドトキシン量を求めます そして求められた希釈サンプル中のエンドトキシン量に希釈倍率を乗じて サンプルの内在エンドトキシン定量値としています この方法には エンドトキシン濃度の変化にとも なうゲル化時間の変化はサンプルでも標準品でも同じ割合であり サンプルをどんな希釈倍数 ( ただしエンドトキシンの検出限界内 ) で定量しても求められるサンプル中のエンドトキシン定量値は同じになる という仮定が含まれます これはすなわち 標準希釈系列の用量反応直線とサンプル中のエンドトキシン濃度による用量反応直線は平行であるということを暗黙的に認めていることに相当します しかし 生物学的製剤等では反応系によっては 前述の仮定が正しくないこともあります 2 つの用量反応直線が平行でない場合 測定に用いたサンプルの希釈率によって 製剤の内在エンドトキシン量の計算値が大きく異なってしまうことになります 平行線定量法は 標準品とサンプルのそれぞれの希釈系列による用量反応直線を作成し 統計的手法を用いて標準品とサンプルの用量反応直線の平行性を検定することによって 両用量反応直線が互いに平行である場合に サンプル中の被検物質 ( エンドトキシン ) 量を標準品に対する相対価値として定量する方法です 測定レポートゲル化時間(分)図 1 検量線法によるエンドトキシンの測定 例えば 10 倍に薄めたサンプルに標準検量線を適用して 本当に 1/10 の濃度値が導出されるかどうかを確認後 標準検体に対する相対力価としてサンプル中の被検物質の濃度を求めます 10 希釈 1/10 濃度となる場合 図 2 平行 平行線定量法によるエンドトキシン量の測定 10 希釈 1/10 濃度とならない場合 平行でない 検体の濃度点数や繰り返し数など 検体設定内容をチェックするテンプレート チェック機能で各種試験項目に準拠した試験をサポートします 測定終了後に 必要な試験結果を表示 プリントアウト 平行線定量法に準拠したレポートを作成できます 20 21
エンドトキシン検出用試薬エンドトキシン検出用試薬 リムルス PS シングルテストワコー 比濁法エンドトキシン特異的日本薬局方 パイロセップ に試料中のエンドトキシンを吸着させて濃縮するので 共存物質の影響を受けずに 微量のエンドトキシンを特異的に測定することが可能 エンドトキシンはエタノール中でもパイロセップ に吸着するため 通常のリムルステストでは検出不可能な脂溶性試料でも エタノールに溶解できればエンドトキシンの測定が可能 ( 例 : 脂溶性ビタミン 油脂 ) ライセート試薬は必要な数だけ使用できるので 無駄がない測定が可能 測定原理 パイロセップ ( 水不溶性担体にスペーサーを介して ヒスチジンを結合させたアフィニティー吸着体で エンド トキシンを特異的に吸着する ) を充てんしたキャピラリ ーカラムに 試料中のエンドトキシンを吸着させます 試料を洗い流した後 吸着したエンドトキシンをライ セート試薬と反応させて 試料中のエンドトキシンの定量 を行います 測定はトキシノメーター で行います 内容 (1)LAL ES シングル試薬 : カブトガニ血球抽出物の凍結乾燥品 測定方法 キャピラリー ( シリコンチューブ付き ) パイロセップ 3 方コック 注射器アダプター トキシノメーターで測定する パイロセップ 懸濁液を軽く振り混ぜながら吸引し 内容液全量をキャピラリーカラムに充てんする 試料 試料 20 バイアル (0.3mL 用 ) ( 2 ) パイロセップ 懸濁液 ( リン酸緩衝液に懸濁 ) 20 バイアル (0.77mL) (3)LAL 溶解液 2 バイアル (7mL) (4) 洗浄液 4 バイアル (11mL) (5) 検体希釈用緩衝液 4 バイアル (10mL) ( 6 ) キャピラリー ( シリコンチューブ付き ) 2 0 本 LAL ES 試薬をパイロセップ ゲルと一緒に LAL ES 試薬が入っていた試験管にゆっくり排出する 吸着 パイロセップ アガロース ライセート ES 試薬 分離 エンドトキシン阻害あるいは活性化物質偽陽性物質 パイロセップ の模式図 O OH パイロセップ を充てんしたキャピラリーカラムに 試料を吸引する スペーサー ライセート試薬 本品には 注射器 3 方コック 専用アダプターは入っておりません 別途 PS アクセサリーキット (294-33311) をお求めください ホームページ Wako LALシステム で操作方法が動画でご覧いただけます Wako LALシステム HOME >サポートサービス > 使い方紹介ムービー ( http://www.wako-chem.co.jp/lal/support/movie.html ) トキシノメーター ヒスチジン エンドトキシンは吸着され 共存物質はパイロセップ を素通りして除かれます 試料の p H は 3 7 に イオン強度は 0.05 以下になるようにしてください 試料がリムルス反応に阻害などの影響を与える場合は 洗浄液を通して洗浄します 試料を吸引したキャピラリーカラムに LAL 溶解液で溶解した LAL ES 試薬を吸引する 応用例 A. 透析液中エンドトキシン測定への応用市販の腹膜透析液ダイアニール P D 4( バクスター社 ) 人工腎臓用補液サブラッド A 及び B( 扶桑薬品 ) 各 5.0mL にUSP 標準エンドトキシンを添加した後 0.1M 酢酸で phを5 付近に調製して検体としました これらのエンドトキシン濃度をパイロセップ 法で測定し 添加エンドトキシンの回収率を求めました パイロセップ 法を使用することにより 透析液中のエンドトキシンが 0.1EU/L から検出可能となりました 検量線 ( 検体量 :5.0mL) No. 設定濃度値 ( EU/L) Tg(min.) 平均ゲル化時間 ( 分 ) 1 1.000 53.0 53.60 53.4 54.4 2 2.000 41.6 41.53 41.2 41.8 3 10.00 26.6 26.07 26.0 25.6 4 100.0 14.6 14.60 14.8 14.4 B. 脂溶性ビタミン中のエンドトキシン測定の応用 脂溶性ビタミンであるビタミン D E K をエタノールで溶解し USP 標準エンドトキシンを添加した後 パイロセップ 法でエンドトキシン濃度を測定 添加したエンドトキシンの回収率を求めました パイロセップ 法を用いることにより これまでリムルス試薬では測定不可能だった脂溶性ビタミン中のエンドトキシンが測定可能となりました その他の応用例 エタノール シリコンオイル 大豆油 オリーブ油 ステアリン酸 卵黄レシチン オイルアジュバンドのワクチン その他 エタノールに溶解できる試料は測定可能 ( アルブミン製剤 凝固因子製剤 ( 第 8 因子 ) インターフェロン製剤 アンチトロンビン III 製剤 免疫グロブリン製剤 ) シングルテスト 表 1 パイロセップ 法における腹膜透析液 補液の エンドトキシン回収率 検体 エンドトキシン エンドトキシン 添加量 (EU/L) 回収率 (%) ダイアニール PD4 0.1 80 1.0 72 サブラッド A 0.1 144 1.0 102 サブラッド B 0.1 108 1.0 118 表 2 ゲル化時間(分)測定原理 100 1000 256 16 4 2 0.1 1 10 EC-6 濃度値 (EU/L) パイロセップ 法におけるエタノール溶解脂溶性 ビタミンのエンドトキシン回収率 ビタミン 濃度 エンドトキシン (mg/ml) 回収率 (%) D2 10 170 E 10 91 20 83 K 10 99 20 68 エンドトキシンは終濃度が 0.05EU/mL となるように添加 コード No. 品名 測定範囲 ( E U / L ) 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 299-54501 リムルス PS シングルテストワコー 1-100(*) 20 回用 103,000 (*) 検体量 5mLの場合 アクセサリーキット コード No. 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 294-33311 PS アクセサリーキット 1 セット 20,000 ( 内容 ) 2 0 m L 注射器 ( 針なし ) 1 2 本 三方コック R 型 1 2 個 専用アダプター 2 0 個 目玉クリップ 12 個 FALCON 352058 ポリスチレンチューブ (5mL) 25 本 FALCON 352057 ポリスチレンチューブ (14mL) 25 本 試験管立て (50 穴 ) 1 個 手順書 1 部 22 23
エンドトキシン検出用試薬表示力価に従い エンドトキシン検出用試薬 リムルス ES-Ⅱ プラス CS シングルテストワコー 比濁法 エンドトキシン特異的 簡便法 保存検量線データ付属 PCとPPCを付属の低含量 CSE から1 ステップで調製可能 測定試料の phの影響を受けにくいため 安定したエンドトキシン測定が可能 検体中の (1 3)-β-D- グルカンの影響を受けることなく エンドトキシンを特異的に検出可能 ライセート試薬としてリムルス ES-Ⅱシングルテストワコーを使用した場合に高い相関性 * トキシノメーター ET-Mini ET-6000 で測定が可能 ただし本キットを使用の際は 装置の温度キャリブレーション ( 校正 ) が必要です 1 年に1 度の OQ サービスをおすすめいたします PC と PPC の調製 0.1EU/mL に溶解 CSE 入りチューブ 表示力価に従い 0.1EU/mL に溶解 リムルス ES- Ⅱ plus CS シングルテストワコー CSE 入りチューブ シングルテスト 本キットは薬局方のエンドトキシン試験法には準拠しておりません コード No. 品名 測定範囲 (EU/mL) 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 低含量 299-77201 リムルス ES- Ⅱプラス CS シングルテストワコー 0.01-1 3 2 回用 ( *) 49,500 ( リムルス ES-Ⅱシングル試薬 0.2mL 用 32 本 低含量 CSE 16 本 検量線データシート 1 枚 ) (*) 標準プロトコルで使用時は 8 検体測定分に相当します エンドトキシン試験用水 P C( 陽性コントロール ) 調製 試料溶液 PPC( 陽性製品コントロール ) 調製 (PPC) 保存検量線データの提供 検量線読み込み ( Q R コード ) 試薬キットに付属している検量線データシートの QRコードをQRコードリーダーで読み込むことで 標準液調製と検量線測定が不要になります その為 作業時間の短縮と 試薬や希釈用試験管など消耗品の節約になります QR コードリーダー リムルス ES-II プラス CS シングルテストワコーには 低含量の CSE(Control Standard Endotoxin) が付属されており 日本薬局方で定められたエンドトキシン標準品 (JP-RSE) を用いて検定した力価を表示しています PCおよび PPC は CSE の凍結乾燥品を検量線の中点濃度 ( 0.1EU/mL) になるように溶解して調製します CSE をエンドトキシン試験用水で溶解すると PC 試料溶液で直接溶解すると PPC が調製できます 低含量 CSE からリムルス ES-Ⅱシングル試薬に試料を添加する際は バイオクリーンチップワコー R エクステンド SⅡ (42 ページ参照 ) を使用すると便利です 24 25 ページおよび 38 ページでは PC: 陽性コントロール PPC: 陽性製品コントロールのこと 検量線データシート QRコードリーダーが使用できるのはトキシノメーター ET-Mini のみになります Q R コードは ( 株 ) デンソーウェーブの登録商標です 検量線データ ホームページ Wako LALシステム で操作方法が動画でご覧いただけます Wako LALシステム HOME >サポートサービス > 使い方紹介ムービー ( http://www.wako-chem.co.jp/lal/support/movie.html ) 24 25
エンドトキシン検出用試薬リムルス J シリーズ エンドトキシン検出用試薬 リムルス F シリーズ 比濁法 ゲル化法 エンドトキシン非特異的 日本薬局方 比濁法 ゲル化法 エンドトキシン非特異的 FDA 承認 日本薬局方収載 エンドトキシン試験法 に適合したキットおよび試薬 米国食品医薬品局 (FDA) の認可を取得 (U.S. License No.1197) 日本薬局方標準エンドトキシン (JP-RSE) によるゲル化感度検定力価 (EU/mL) を表示 米国輸出品目の最終製品試験に適用可能なキットおよび試薬 (1 3)-β-D- グルカンにも反応 USP 標準エンドトキシン (USP-RSE) によるゲル化感度検定力価 (EU/mL) を表示 ( 1 3)-β-D- グルカンにも反応 シングルテスト ゲル化法専用 コード No. 品名 表示感度 (EU/mL) 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 290-22041 リムルス J シングルテストワコー 0.25 25 回用 照会 292-22241 リムルス HS-J シングルテストワコー 0.03 25 回用 照会 シングルテスト ゲル化法専用 コード No. 品名 表示感度 (EU/mL) 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 297-52601 リムルス F シングルテストワコー 0.25 25 回用 照会 299-52801 リムルス HS-F シングルテストワコー 0.03 25 回用 照会 コード No. 品名表示感度 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) 290-21941 リムルス J テストワコー 0.25 296-22141 リムルス HS-J テストワコー 0.03 298-22341 カブトガニ血球抽出物 J 0.25 50 回用 (5.2mL 用 1 本 ) 50 回用 (5.2mL 用 1 本 ) 50 回用 (5.2mL 用 1 本 ) 照会 照会 照会 コード No. 品名表示感度 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) 293-52701 リムルス HS-F テストワコー 0.03 298-52511 カブトガニ血球抽出物 F 0.25 290-52711 カブトガニ血球抽出物 HS-F 0.03 50 回用 (5.2mL 用 1 本 ) 50 回用 (5.2mL 用 1 本 ) 50 回用 (5.2mL 用 1 本 ) 照会 照会 照会 294-22441 カブトガニ血球抽出物 HS-J 0.03 50 回用 (5.2mL 用 1 本 ) 照会 リムルス HS-T シングルテストワコー 比濁法 エンドトキシン非特異的 日本薬局方 日本薬局方収載 エンドトキシン試験法 に適合したキット トキシノメーター による高感度分析が可能 (1 3)-β-D- グルカンにも反応 Endochrome-K TM 比色法 エンドトキシン非特異的 プレートリーダー法 FDA 承認 トキシノメーター法 チャールス リバー ラボラトリーズ CHARLES RIVER LABORATORIES 米国食品医薬品局 (FDA) の認可を取得 (U.S. License No.1197) 米国輸出品目の最終製品試験に適用可能なキットおよび試薬 ライセート試薬と発色合成基質が一体製剤されており 試薬溶解後 試料と混合するだけで反応を開始させることが可能 トキシノメーター / マイクロプレートリーダーによる測定が可能 (1 3)-β-D- グルカンにも反応 コード No. メーカーコード品名測定範囲 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) シングルテスト 比濁法用 519-87321 R1708K Endochrome-K 0.005-50 256 回用 110,000 コード No. 品名測定範囲 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) 299-53401 リムルス HS-T シングルテストワコー 0.002-1 25 回用 32,000 (Endochrome- K 試薬 3.2mL 用 8 バイアル コントロールスタンダードエンドトキシン (CSE) 2 バイアル LAL 溶解液 30mL 3 本 ) 513-87341 R1710 Endochrome-K 0.005-50 320 回用 128,000 (Endochrome- K 試薬 3.2mL 用 10 バイアル ) 516-87331 R17100 Endochrome-K 0.005-50 3200 回用照会 (Endochrome- K 試薬 3.2mL 用 100 バイアル ) 26 27
ペプチドグリカンおよびβ- グルカン検出用試薬PG はグラム陽性菌のみならずグラム陰性菌にも存在するため SLP 試薬は グラム陽性 陰性にかかわらず 広く 活性化時間(分)性化時間(分)ペプチドグリカンおよび β- グルカン検出用試薬 SLP 試薬セット Silkworm Larvae Plasma 試薬 研究用試薬 原理 カイコ (Bombyx mori) の体液中にはフェノール酸化酵素前駆体 (ProPO) カスケードと呼ばれる生体防御機構が存在し ペプチドグリカン (PG) および (1 3)-β-D グルカン (β- グルカン ) によって反応が開始され 最終的にフェノール酸化酵素前駆体 ( ProPO) がフェノール酸化酵素 (PO) に変換されます ProPO の活性化の機構は 複数のセリンプロテアーゼの活性化を含むカスケード機構であると推測されておりますが 現在のところ十分には解明されておりません このカスケード機構は 異物侵入の際に昆虫体内で認められるメラニン形成に重要な役割を果していると考えられております SLP 試薬は カイコの体液を無菌的に採取 調製した ProPO カスケードの因子をすべて含んだ凍結乾燥品です 本試薬は PG およびβ- グルカンによって活性化され 基質剤に含まれるDOPA(L-3,4- ジヒドロキシフェニルアラニン ) を酸化し メラニン色素を生成します PG はほとんどの細菌の細胞壁に β- グルカンも多くの真菌の細胞壁に認められる成分であることから 生成したメラニン色素を指標として 各種微生物の検出が可能です SLP 試薬の活性化機構は図 1のように考えられております すなわち PGまたはβ- グルカンがそれぞれの認識タンパク (PGRP およびβGRP) と結合することにより ProPO カスケードの反応が開始され 最終的に P O が活性化されます 活性化した PO によって基質剤中に含まれるDOPA が酸化され 結果として黒色のメラニン色素が生じます カブトガニ血球抽出物 ( ライセート試薬 ) で検出することのできるエンドトキシンは SLP のカスケード機構を活性化しませんが ライセート試薬では検出できない PGをSLP 試薬で検出することができます ( 図 1 ) SLP 試薬は 各種細菌由来の PG およびβ-1 3- グルコシド結合を持つβ- グルカンに強く反応しますが グラム陰性菌の細胞壁成分であるリポ多糖 ( エンドトキシン ) にはほとんど反応しません (1 3)-β-D - グルカンペプチドグリカン βgrp PGRP 未知の因子 Pro-PPAE PPAE ProPO PO DOPA ドーパクロムメラニン図 1 カイコ血液のフェノール酸化酵素前駆体カスケード 一般の細菌に反応します また 真菌由来の β - グルカンにも反応することから SLP 試薬は微生物全般に反応すると考えられます これらのことにより エンドトキシン及び β- グルカンに反応するライセート試薬と SLP 試薬の併用で 検体中の微生物の種類を予測できる可能性が考えられます 1. 高感度でペプチドグリカンおよび β- グルカンを測定可能 2. 特別な測定装置を必要としない目視判定法による測定可能 3. マイクロプレートリーダーや比濁時間分析装置トキシノメーター を用いることにより 精度よく 高感度にペプチドグリカンおよび β- グルカンの定量が可能 4. 本品は 冷蔵 ( 2 1 0 ) で 1 8 か月以上安定 内容 SLP 試薬セット 1.SLP 試薬 1バイアル 3mL 用 感度 : 目視判定法 (30 1 時間反応 ) によるエンドポイント (PG 及びβ- グルカン ) をロットごとに表示 2. 基 質 剤 バイアル 3mL 用 DOPA を含有 3. 基質溶解液 1バイアル 4mL 用 グッド緩衝液を含有 SLP-HSシングル試薬セット 1.SLP-HS(Silkworm Larvae Plasma High Sensitive) 0.2mL 用 20 バイアル感度 :10pg/mL(PG) 1 p g / m L( カードランアルカリ溶解液 )( トキシノメーター (30 ) で120 分以内に検出 ) 2.SLP-Diluent 1.0mL 用 20 バイアル コード No. 品名 規格 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 297-51501 SLP 試薬セット 微生物検出用 3mL 用 照会 293-58301 SLP-HS シングル試薬セット 微生物検出用 20 回用 照会 関連商品 コード No. 品名 規格 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 030-09903 カードラン 1 生化学用 1g 2,000 162-18101 ペプチドグリカン 2 生化学用 2mL 用 5,400 1 (1 3)-β-D- : グルカン 2 : SLP 試薬セット用 Micrococcus luteus 由来のペプチドグリカン 1μg/mL を含有 測定方法バイアル活SLP を用いた PG 並びにβ- グルカンの測定法として トキシノメーター 法 マイクロプレートリーダー法 目視判定 法があります トキシノメーター およびマイクロプレートリーダーでは 活性化に伴って生じる色素量を吸光度変化として捉え 吸光度があらかじめ設定したしきい値に達するまでの反応時間を活性化時間 (Ta または Onset Time) とし Ta を指標に SLP 活性化物質 (PG およびβ- グルカン ) を定量します この原理は トキシノメーター を用いてエンド トキシンを測定する場合と同様です ( 図 2 ) トキシノメーター 法を用いた測定例を図 4 に マイクロプレートリー ダーを用いた原理 ( 図 3 ) と測定例を図 5 に示します 目視判定法では 一定時間反応させた後 反応液の色調の変化を観察することにより判定を行ないます この方法は ライセート試薬におけるゲル化転倒法と同様の方法ですが 反応液の色が変化するため判定が容易 であること 振動の影響を受けないこと等で優れています 3.Standard(Digested Peptidoglycan from S. aureus) 0.5mL 用 1 用途 1. ペプチドグリカンの構造活性相関 生合成 代謝 病因的意義の解明 2. 水質汚染の指標 3. 人工透析液の微生物汚染対策 透過光量比(%)ゲル化時間 ( 分 ) 活性化時間 ( 分 ) 4. 医薬品 生物製剤 遺伝子工学製品などの菌体成分混入の検出 5. 昆虫の生体防御反応機構の解明 図 2 測定原理 : 測定開始から R(t) 図 3 測定原理 : 測定開始からが Rth になるまでの Ta を OD = 0.01 に達する時間を測定測定します ( T h: 判定しきい値 ) 図 4 トキシノメーター R 法 図 5 マイクロプレートリーダー法 28 29
そ1500 連試薬その他関連試薬 エンドトキシン検出用抽出液 エンドトキシン試験関連試薬 医療用具等のエンドトキシン試験に最適 医療用具等のエンドトキシン試験には従来 水や生理食塩水による抽出法が用いられていますが これらの方法では必ずしも有効に抽出されていないことが判ってきました 本品は人血清アルブミン ( H S A ) を含有したエンドトキシンフリーの抽出液 (20 倍濃縮液 ) で 水や生理食塩水では抽出できないエンドトキシンも抽出することが可能です 特に血液やたんぱく質を含有した液体と接触する用具のエンドトキシン試験には 本品の使用を推奨します 各種標準品 バッファーコード No. 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 638-01021 日本薬局方エンドトキシン標準品 10,000~25,000EU/vial 照会 531-13371 USP 標準エンドトキシン 10,000EU/vial 照会 293-16541 コントロールスタンダードエンドトキシン (CSE) 500ng/vial 6,200 201-10421 0. 1 M トリス - 塩酸緩衝液 ( p H 7. 3 ) ライセート試薬溶解用 5mL 10 13,000 ロットにより変動 各種抽出液を用いた市販滅菌済用具のエンドトキシン汚染検出 Endotoxin(mEU/product) Endotoxin(mEU/product) 1000 500 0 50 25 0 Product A (Pipet) Water 0.05% TEA 本品 Solution for Extraction Product C (Pipet) Endotoxin(mEU/product) Endotoxin(mEU/product) 50 25 0 100 50 0 Product B (Pipet) Water 0.05% TEA 本品 Solution for Extraction Product D (Serum tube) エンドトキシンインジケーター チャールス リバー ラボラトリーズ CHARLES RIVER LABORATORIES 乾熱滅菌バリデーション用試薬エンドトキシンインジケーターは 乾熱滅菌のバリデーションやモニタリン グ用として開発されました 乾熱滅菌工程の有効性は 乾熱滅菌前後のエンドトキシン値を測定することで 確認できます コード No. メーカーコード 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 517-87121 EVV2K エンドトキシンインジケーター 2,000EU 12 バイアル 32,000 513-87081 EVV10K エンドトキシンインジケーター 10,000EU 12 バイアル 32,000 516-87071 EVV100K エンドトキシンインジケーター 100,000EU 12 バイアル 32,000 513-87101 EVV1M エンドトキシンインジケーター 1million EU 1バイアル 8,500 Water 0.05% TEA 本品 Solution for Extraction Water 0.05% TEA 本品 Solution for Extraction 510-87111 EVV2.5M エンドトキシンインジケーター 2.5million EU 1バイアル 12,500 510-87091 EVV10M エンドトキシンインジケーター 10million EU 1バイアル 12,500 の他関 使用方法 1. エンドトキシン検出用抽出液の調製本品 1バイアル (10mL) をエンドトキシンフリー水 190mLと混合し 20 倍希釈して使用します 2. 使用方法エンドトキシン検出用抽出液を一定量とり 用具等の検体を浸漬 または検体に添加し軽く攪拌した後 約 1 時間室温で放置します 再び軽く攪拌し 抽出されたエンドトキシンを測定します コード No. 品名規格内容量希望納入価格 ( 円 ) 293-51601 エンドトキシン検出用抽出液 (20 倍濃縮液 ) エンドトキシン検出用 10mL 4 15,300 参考文献 1 ) 井上勝二 高岡文 土谷正和 松浦脩二 : 日本動物実験代替法学会第 6 回大会要旨集 1 1 0( 1 9 9 2 ) 2 ) 井上勝二 原田和明 土谷正和 松浦脩二 : 日本防菌防黴学会第 2 1 回大会要旨集 4 4( 1 9 9 4 ) 30 31
その他関連試薬 LPS( リポポリサッカリド ) L P S( リポポリサッカリド リポポリサッカライド リポ多糖 内毒素 ) はグラム陰性菌の外膜に存在している 成分です 様々な生物活性発現や細胞間コミュニケーションに大きな役割を果たしており 近年では LPS を 用いた自然免疫研究 生体防御機能の研究が盛んに行われています 精製法により 2 種類の製品を用意フェノール抽出品 : Westphal 法 ( フェノール抽出法 ) による抽出品超遠心品 : フェノール抽出品をさらに超遠心で 2 回精製した製品 フェノール抽出品 コード No. 品 名 規格 内容量 希望納入価格 ( 円 ) Campylobacter jejuni 128-05671 Lipopolysaccharide, from C. jejuni Penner O:19 細胞生物学用 5mg 20,000 Escherichia coli 120-05131 Lipopolysaccharide, from E.coli O26 細胞生物学用 25mg 16,000 127-05141 Lipopolysaccharide, from E.coli O55 細胞生物学用 25mg 16,000 125-05201 Lipopolysaccharide, from E.coli O111 細胞生物学用 25mg 16,000 124-05151 Lipopolysaccharide, from E.coli O127 細胞生物学用 25mg 16,000 Proteus 124-05271 Lipopolysaccharide, from P. vulgaris OX2 細胞生物学用 25mg 17,000 121-05281 Lipopolysaccharide, from P. vulgaris OX19 細胞生物学用 25mg 17,000 128-05291 Lipopolysaccharide, from P. mirabilis OXK 細胞生物学用 25mg 17,000 超遠心品 コード No. 品 名 規格 内容量 希望納入価格 ( 円 ) Bordetella pertussis 126-06331 Lipopolysaccharide, from B. pertussis Tohama 細胞生物学用 2mg 35,000 Escherichia coli 121-05161 Lipopolysaccharide, from E.coli O26 細胞生物学用 5mg 20,000 128-05171 Lipopolysaccharide, from E.coli O55 細胞生物学用 5mg 21,000 126-05471 Lipopolysaccharide, from E.coli O103 細胞生物学用 5mg 19,000 125-05181 Lipopolysaccharide, from E.coli O111 細胞生物学用 5mg 19,000 124-06251 Lipopolysaccharide, from E.coli O113 細胞生物学用 5mg 28,000 122-05191 Lipopolysaccharide, from E.coli O127 細胞生物学用 5mg 19,000 120-06471 Lipopolysaccharide, from E.coli O128 細胞生物学用 5mg 25,000 121-06261 Lipopolysaccharide, from E.coli O150 細胞生物学用 5mg 28,000 129-05461 Lipopolysaccharide, from E.coli O157 細胞生物学用 5mg 21,000 222-01901 Lipopolysaccharide, from E.coli O86a 細胞生物学用 5mg 22,000 Pseudomonas aerug inosa 129-05961 Lipopolysaccharide, from P. aeruginosa PA01 細胞生物学用 5mg 24,000 Salmonella 126-05971 Lipopolysaccharide, from S. typhimurium 細胞生物学用 5mg 23,000 127-06481 Lipopolysaccharide, from S. typhimurium G30/C21 細胞生物学用 2mg 39,000 124-05651 Lipopolysaccharide, from S. minnesota 1114 細胞生物学用 5mg 20,000 121-05661 Lipopolysaccharide, from S. minnesota R595 細胞生物学用 5mg 20,000 エンドトキシン測定用機器および関連器材 エンドトキシン測定用機器 トキシノメーター ET-6000 MPR エンドトキシン測定システム for BT サーモステーション TS-37S/24 バイアルチューブミキサー VTM-252Ⅱ トキシノメーター ET-Mini & リムルス ES-Ⅱ プラス CS シングルテストワコー Endosafe nexgen-pts TM バリデーション サポート サービス ( トキシノメーター MPR エンドトキシン測定システム ) バリデーション サポート サービス ( E n d o s a f e nexgen-pts TM ) 関連器材 バイオクリーンシリーズアクロディスク シリンジフィルターアクロディスク ムスタング E メンブレンセルファイン ETクリーン 32 33
エンドトキシン測定用機器 トキシノメーター ET-6000 操作性 拡張性に優れたパソコン制御タイプのトキシノメーター システムです 検体数に応じモジュールの 増設 が可能なため 少 検 体から多検 体まで 幅 広い分野のエンドトキシン測定に適用可能です さらに 37 /30 の温度切り替えにより (1 3)-β-D-グルカンやペプチドグリカンの試験研究にもご利用いただけます ER/ES 対応のみに付加される機能 電子署名 機能制限 オーディットトレイル 監査証跡 ライセート試薬の選択により 同一システムで比濁法 比色法 ゲル化 法の3法に適応 1モジュールで16 検体 最大 8モジュール増設で 128 検体の同時測定 が可能 日本 / 米国 / 欧州の薬局方に沿った試験をサポート 厚生労働省 ER/ES 指針 FDA21 CFR Part11対応のシステムも準備 パソコンは メーカーや機種等が 実際と異なる場合がございます トキシノメーター の測定原理と測定 電子署名によるログイン機能で 登録ユーザー の み の 利 用 に 制 限 記 録 と署 名 を デ ー タ ベース内でリンクさせることで データの不正 改ざんや偽装を防ぎます 主要な操作内容は コンピュータが自動生成 するタイムスタンプ付きで記録 データ変更時 には上書きされずに新たなリビジョンとして 記録登録されます その他の機能 設定変更などの際の変更事由の入力 バックアップ 復元など 本装置はエンドトキシンとライセート試薬との反応を430nm に おける透過光量の変化として捉えるものです 透過光量は反応 ER/ESシステム 開始後しばらく一定であり 反応の進行に伴って透過光量は コード No. 減少し 反応完了と共に減少変化も止まります 品名 透過光量l(t)の反応初期の透過光量loに対する割合をR(t)とし 内容量 希望納入価格 円 1式 3,000,000 内容量 希望納入価格 円 1式 1,800,000 内容量 希望納入価格 円 1台 1,400,000 品名 内容量 希望納入価格 円 トキシノメーター ET-6000/J ER/ES アップグレードセット 1式 1,650,000 トキシノメーター ET-6000 専用架台 1台 42,000 トキシノメーター ET-6000/J ER/ES セット この透過光量比の変化に対してしきい値 Rth を設定し 反応開 始からR(t) が Rth になるまでの時間をゲル化時間 Tg あるいは 293-33761 活性化時間 Taとして読み取るものです R(t)= l(t)/lo 100% 内容 ET-6000/J 本体 トキシマスター ER/ES 5 ライセンス * パソコン サーバー兼クライアント 検証資料 納入時 IQ/OQ サービス 1 回 ER/ES 非対応システム 定量 検体のゲル化時間からエンドトキシン濃度を算出します コード No. トキシノメーター ET-6000/J 標準セット 290-33771 専用ソフトウェアの各種測定画面 専用ソフトウェア トキシマスター または トキシマスター ER/ES を標準装備 しています 品名 内容 ET-6000/J 本体 トキシマスター パソコン 増設用モジュール コード No. タイムコース 検量線 測定レポート 297-33781 品名 トキシノメーター ET-6000/J エンドトキシン測定用機器 エンドトキシン濃度とゲル化時間 Tgとの間には検量関係が得られ プロトコル設定 システム使用やアクセスの許可範囲を複数の 権限グループとして管 理 登 録ユーザーは 所属するグループに許可された範囲内で機能 を使用できます オプション コード No. 290-34371 各種試験項目に準拠した処理プロトコル の設定 登録 データ解析やルーチン作業 の省力化をサポートします リアルタイムに全ポジションのタイム 測定終了後に 必要な試験結果を表示 プリ コースを 確 認 試 験 結 果 を 予 測し ントアウト 日本 / 米国 / 欧州の薬局方に沿った 次 の工 程 へ の 対 応 を早 め ること が レポート作成をサポートします できます 295-33461 内容 トキシマスター ER/ES 5 ライセンス * パソコン サーバー兼クライアント 検証資料 納入時 IQ/OQ サービス 1 回 パソコン 5台までインストール可能 34 35
エンドトキシン測定用機器コード No. 品名内容量希望納入価格 ( 円 ) エンドトキシン測定用機器 MPR エンドトキシン測定システム for BT サーモステーション TS-37S/24 吸光リーダー ELx808IU と標準装備のソフトウェア トキシマスター MPR を用いたエンドトキシン測定専 用のシステムです 医薬品 医療機器等における品質管理試験等の様々なエンドトキシン試験に使用できます ソフト 1 画面でのサンプル配置やサンプル情報の入力を可能にし 簡便かつ少ないソフト操作で 正確な多検体処理をサポートいたします 多検体の同時測定が可能 ライセート試薬の選択により 同一システムで比色法 / 比濁法に適応 日本 / 米国 / 欧州の薬局方に沿った試験をサポート 厚生労働省 ER/ES 指針 FDA21 CFR Part11 をサポート 専用ソフトウェア トキシマスター MPR または トキシマスター ER/ES MPR を標準装備 パソコンは メーカーや機種等が実際と異なる場合がございます 薬局方エンドトキシン試験法のゲル化法に最適なドライバス 当社リムルステストチューブ -S にジャストフィット 37 に設定済みで温度調整が不要 最大 24 検体まで同時に試験可能 測定温度は 一目で分かるデジタル表示 ヒートブロック方式で温度が均一コード No. 品名内容量希望納入価格 ( 円 ) 290-50251 サーモステーション TS-37S/24 1 台 180,000 ソフトウェアの各種測定画面 使い易い画面設計 サンプル編集画面でサンプル配置にて各種情報の登録が可能です プレート上でのサンプル配置を視覚的に確認することが可能なので 分注ミスを防ぎます 測定終了後に検量線情報や日本薬局方に準拠した各種試験結果レポートの出力が可能です タイムコース リアルタイムに全ウェルのタイムコースを確認 試験結果を予測し 迅速に次の工程へと進めます 選択ウェルをズーム表示可能 バイアルチューブミキサー VTM-252Ⅱ ER/ES システム コード No. 品名内容量希望納入価格 ( 円 ) 299-35441 ER/ES 非対応システム MPR エンドトキシン測定システム ER/ES セット for BT ( 内容 ) 吸光リーダー ELx808IU トキシマスター ER/ES MPR パソコン ( サーバー兼クライアント ) 検証資料 IQ/OQ サービス (1 回 ) 1 式 3,100,000 コード No. 品名内容量希望納入価格 ( 円 ) エンドトキシンの標準品の溶解 希釈に最適 専用のアダプター (SASAETE30) を使用することで 長時間の攪拌も手の支えが不要 平板アタッチメントを標準付属しており 多数の試験管 マイクロチューブのミキシングが容易仕様型名 VTM-252Ⅱ スイッチ方式手動 - 自動可変定格電力 100V-40W 50/60Hz 回転数 (rpm) MAX2,500(50Hz)/ 可変重量 (kg) 2.0 外寸法 (mm) W105 D130 H160 292-35431 MPR エンドトキシン測定システム標準セット for BT ( 内容 ) 吸光リーダー ELx808IU トキシマスター MPR パソコン 1 式 1,900,000 295-35421 バイアルチューブミキサー VTM-252Ⅱ( アダプター付 ) 1 台 62,000 アダプターのみの販売はございません エンドトキシン自動測定システムについてはお問い合わせください 36 37
エ用機器 もっと簡単で短時間に どこにでも持ち運べる小型のエンドトキシン測定装置があ エンドトキシン測定用機器 トキシノメーター ET-Mini & リムルス ES-Ⅱ プラス CS シングルテストワコー Endosafe nexgen-pts TM チャールス リバー ラボラトリーズ CHARLES RIVER LABORATORIES 迅速かつ簡単にエンドトキシンが測定できるシステムです トキシノメーター ET-Mini とリムルス ES-Ⅱ プラス CS シングルテストワコー ( 試薬キット ) の組み合せで 保存検量線を使用することができます また PC と PPC を れば という研究者の要望に応えて開発されました サンプルを直接扱う技術者や 1 ステップで調製でき 人為差が少なく信頼性の高い定量結果が得られます 研究者がリアルタイムにその場で その手で測定し すぐに結果を得られます トキシノメーター ET- 6000 とリムルス ES-Ⅱ シングルテストワコーを用いた測定結果と高い相関性があります 本システムは薬局方のエンドトキシン試験法には準拠しておりません アメリカ食品医薬品局 (Food and Drug Administration : FDA) 認可を取得している為 米国輸出品目についての最終製品試験に使用することができます 簡便な操作性 ( 測定からレポート作成まで専用ソフトウェアがサポート ) 保存検量線データ付属 ( 標準液調製と検量線測定が不要 ) 低含量 属 (PCとPPCの調製が簡単) パソコンと無線通信が可能 ( 無線セットのみ ) 本装置と試薬キットの組み合わせで使用される際は 装置の温度キャリブレーション ( 校正 ) が必要です 温度キャリブレーションについては 40 ページをご参照ください 保存検量線データの提供については 24 ページをご参照ください パソコンは メーカーや機種等が実際と異なる場合がございます リアルタイムデータ解析 タッチスクリーンディスプレー 持ち運びに便利なコンパクトボディー 試薬等が封入済みのカートリッジ 測定時間約 15 分 FDA 認可 (2006 年 7 月 ) カートリッジ 高いユーザー管理機能 原理 2 つのサンプルラインと 2 つのスパイクラインがあり 各々のラインにはライセート試薬 合成発色基質およびエンドトキシン標準品 ( スパイクラインのみ ) が封入済みです 1 カートリッジで 1 サンプルのエンドトキシン測定 (n=2) と添加回収測定 (n=2) を測定できます 測定時 PTS TM リーダーの内部は適切な温度に保たれ 光学密度 (OD) の読み取りの完了で 1 サンプルの測定が終了します ホームページ Wako LALシステム で操作方法が動画でご覧いただけます Wako LALシステム HOME >サポートサービス > 使い方紹介ムービー ( http://www.wako-chem.co.jp/lal/support/movie.html ) 検量線データシート QR コードリーダー PTS リーダー 無線セット コード No. 品名内容量希望納入価格 ( 円 ) トキシノメーター RET-Mini 無線セット ( 内容 ) トキシノメーター RET-Mini(1 1 式 750,000 台 ) 296-35191 トキシマスター RQC7 for ET-Mini パソコン QR コードリーダー 無線モジュール 有線セット 299-35181 増設用モジュール トキシノメーター RET-Mini 有線セット ( 内容 ) トキシノメーター RET-Mini(1 台 ) トキシマスター RQC7 for ET-Mini パソコン QR コードリーダー QR コードは ( 株 ) デンソーウェーブの登録商標です 1 式 700,000 コード No. メーカーコード 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 552-29511 PTS150K Endosafe nexgen-pts 1 台 1,600,000 PTS カートリッジ コード No. メーカーコード 品名 ( 感度 ) 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 518-87151 PTS20005F PTS カートリッジ FDA(0.005-0.5EU/mL) 10 枚 65,000 515-87161 PTS2001F PTS カートリッジ FDA(0.01-1EU/mL) 10 枚 64,000 519-87181 PTS2005F PTS カートリッジ FDA(0.05-5EU/mL) 10 枚 61,000 519-87201 PTS201F PTS カートリッジ FDA(0.1-10EU/mL) 10 枚 61,000 512-87171 PTS2001JP PTS カートリッジ JP(0.01-1EU/mL) 10 枚 64,000 516-87191 PTS2005JP PTS カートリッジ JP(0.05-5EU/mL) 10 枚 61,000 516-87211 PTS201JP PTS カートリッジ JP(0.1-10EU/mL) 10 枚 61,000 513-87221 PTS220 PTS 条件検討用カートリッジ 10 枚 70,000 517-87361 RMMGS1000 PTS グルカン測定用カートリッジ (10-1000pg/ m L) 10 枚 61,000 514-87131 LRMMGI100 PTS グラム ID カートリッジ 10 枚 32,000 292-35171 トキシノメーター RET-Mini 1 台 450,000 PTS オプション 試薬キット コード No. 品名測定範囲 (EU/mL) 内容量希望納入価格 ( 円 ) 299-77201 リムルス ES- Ⅱ プラス CS シングルテストワコー 0.01-1 3 2 回用 ( *) 49,500 リムルス E S - Ⅱ シングル試薬 0. 2 m L 用 3 2 本 低含量 C S E 1 6 本 検量線データシート 1 枚 * 標準プロトコルで使用時は 8 検体測定分に相当します コード No. メーカーコード 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 515-87041 BT103 0.1M トリスバッファー (30mL) 12 バイアル 33,000 518-87031 BT101 0.25M トリスバッファー (5mL) 6 バイアル 12,500 514-87011 BC1000 0.5M MgSO4 1M トリスバッファー (4mL) 6 バイアル 12,500 ンドトキシン測定 本ページおよび 24 25 ページでは PC: 陽性コントロール PPC: 陽性製品コントロールのこと 38 39
エ用機器さらに厳しさを増す規制当局の要求事項を満たしたラボ運営のためにお役立ていただける エンドトキシン測定システム用 バリデーション サポート サービス コンプライアンスのためのベストソリューション 各種サポート サービス商品です トキシノメーター Endosafe nexgen-pts 品名内容希望納入価格 ( 円 ) 品名内容希望納入価格 ( 円 ) IQ/OQ サービス ( 設置時バリデーション ) 設置場所確認 納入物品確認 装置状態 / 設置状態確認 システム構成確認 初期動作確認 トレーサビリティー証明書 I Q ドキュメント ( 計画書 実施手順書 実施報告書 ) OQ サービス O Q サービス ( 稼動性能確認 機能点検 ) 1 外観 / 設置環境確認 タッチパネル / スイッチ動作確認 光量確認 温度制御機能確認 タイマー精度確認 トキシマスター基本動作確認 演算処理機能確認 トレーサビリティー証明書 O Q ドキュメント ( 計画書 実施手順書 実施報告書 ) サービス対象機種 : 下記表全機種 試薬試験サービス 3 検量線試験(ES-2 シングル ) 再現性試験( 硫ヒド試験 ) 試薬試験実施記録 1 システム 200,000 1 システム 2 システム 150,000 250,000 2 1 システム 100,000 IQ/OQ サービス 据付時要求事項確認 Endosafe nexgen-pts Reader セットアップ テスト開始確認テスト 自己診断チェック 情報入力確認テスト バッテリー動作確認テスト カイネティック / ノイズテスト サンプル検知テスト テストカートリッジでの確認試験 I Q / O Q ドキュメント ( 計画書 実施手順書 実施報告書 ) 3 ヶ月以内に装置の温度キャリブレーションを実施した装置のみ IQ/OQ サービスを行います 温度キャリブレーション ブロック温度確認 調整 Calibration Certificate 発行 バッテリー充電能力確認 ポンプ動作確認 Endosafe nexgen-pts の年間保守サービスの提供はございません 温度キャリブレーションは引取りでの対応となります 1システム 150,000 2 システム 250,000 1システム 照会 温度キャリブレーション 4 温度チェック 温度調整 光量チェック 温度キャリブレーション成績書発行 サービス対象機種 :ET-Mini 光学系オーバーホール 4 測定ブロック分解清掃 温度チェック 温度調整 光源 LED 交換 ( 光源 LED 交換作業を依頼された場合 ) 光量チェック 光量調整 実用テスト サービス対象機種 :ET-6000 年間保守サービス 年 1 回の OQ サービス実施 故障時の代替装置優先レンタル 修理無償サービス ( 部品代を含む 但し 消耗品は除きます ) ( サービス詳細は 別途定める条件書にてご確認ください ) 1:OQ サービスは IQ/OQ 実地済みのお客様にご提供させていただきます 2:OQ サービスの 2 システム 価格は 同一施設において同一日実施の場合に限ります 3:OQ 実施時のみのご提供となります 4: 引取りでの対応となります 5: 光源 LED を交換した場合の価格となります 1 システム 80,000 1 システム 基本システム 90,000 190,000 5 250,000 料金詳細は お問い合わせ下さい MPR エンドトキシン測定システム 品名 内容 希望納入価格 ( 円 ) IQ/OQ サービス ( 設置時バリデーション ) MPR for Sunrise 設置場所確認 納入物品確認 装置状態 / 設置状態確認 200,000 システム構成確認 初期動作確認 BioTek プレートリーダー IQ(MPR for BT) 1システム トレーサビリティー証明書 I Q ドキュメント ( 計画書 実施手順書 実施報告書 ) MPR for BT OQ サービス 300,000 1 OQ サービス 2 ( 稼動性能確認 機能点検 ) 外観 設置環境確認 システム構成確認 装置基本動作確認 - QC-Pac2( 装置性能確認 ) 温度制御 タイマー精度確認 (MPR for Sunrise) - BioTek プレートリーダー OQ 温度制御 タイマー精度確認 (MPR for BT) 1システム 2 システム 150,000 250,000 3 トキシマスター基本動作確認 演算処理機能確認 トレーサビリティー証明書 O Q ドキュメント ( 計画書 実施手順書 実施報告書 ) ンドトキシン測定 サービス対象機種 ET-6000 ET-Mini IQ/OQ サービス OQ サービス 試薬試験サービス - 温度キャリブレーション - 光学系オーバーホール - 年間保守サービス 年間保守サービス 年 1 回の OQ サービス実施 故障時の代替装置優先レンタル 修理無償サービス ( 部品代を含む 但し 消耗品は除きます ) ( サービス詳細は 別途定める条件書にてご確認ください ) 1: 移設時点検など 2 回目以降の IQ/OQ サービスをご利用いただく場合 希望納入価格 200,000 円になります 2:OQ サービスは IQ/OQ 実施済みのお客様にご提供させていただきます 3:OQ サービスの 2 システム 価格は 同一施設において同一日実施の場合に限ります 対象は for Sunrise のみとなります 基本システム 250,000 ~ 料金詳細は 別途お問い合わせ下さい 40 41
関連器材エンドトキシン試験用チップ 関連器材 バイオクリーンシリーズ アクロディスク シリンジフィルター 日本ポール ( 株 ) エンドトキシンフリー 個別包装 γ 線照射済み コード No. 品名規格内容量希望納入価格 ( 円 ) 294-35011 バイオクリーンチップワコー エクステンド S Ⅱ 200μL 100 本 6,000 291-35021 バイオクリーンチップワコー 20 0Ⅱ 200μL 100 本 3,600 298-35031 バイオクリーンチップワコー 1000Ⅱ 1000μL 100 本 3,600 エンドトキシン試験用プレート 包装フィルムから粉塵が出ないのでクリーンルームで安心して使用可能 フタ付きで汚染のリスクを軽減 エンドトキシン吸着の少ないポリスチレン樹脂を採用 コード No. 品名規格内容量希望納入価格 ( 円 ) 293-35221 バイオクリーンプレートワコー TM 96 ウェル 50 枚 30,000 エンドトキシン試験用関連器具 乾熱滅菌試験管 アルミキャップ及びホールピペット コード No. 品名 規格 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 292-32751 リムルステストチューブ -S( アルミキャップ付 ) φ12 75mm 10 本 8 16,000 293-26551 リムルステストチューブ - S( エンドトキシンフリー ) φ12 75mm 10 本 10 12,000 293-28251 アルミキャップ -S( エンドトキシンフリー ) φ15 18mm 10 個 10 11,200 295-25151 ホールピペット ( エンドトキシンフリー ) 5.2mL 用 5 本 20,000 ピペッター コード No. 品名 可変ステップ 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 513-64901 フィンピペット F2 2 20μL 0.02μL 1 本 32,300 510-64911 フィンピペット F2 10 100μL 0.2μL 1 本 32,300 517-64921 フィンピペット F2 20 200μL 0.2μL 1 本 32,300 514-64931 フィンピペット F2 100 1000μL 1.0μL 1 本 32,300 スターターキット コード No. 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 291-49051 エンドトキシン試験スターターキット 1 セット 65,000 内容 フィンピペットデジタル 20 200μL 1 フィンピペットデジタル 100 1000μL 1 バイオクリーンチップワコー 200Ⅱ(100 本入 ) 1 バイオクリーンチップワコー 1000Ⅱ(100 本入 ) 1 試験管立て (50 穴 ) 1 本キットには測定用試薬は含まれておりません 水溶液中のバイオバーデンとパイロジェンの除去性能を高めたポジダインメンブレンを使用したシリンジ フィルターです 医薬品 ワクチンの研究開発等にご使用頂けます 低タンパク吸着性でサンプルロスが最小化 γ 線滅菌により 残留 EOG による潜在的汚染を排除 ろ液の無菌性を保証するために 除菌性能の試験済み 仕様 ポアサイズ 0.2μm 材 質 フィルターポジダイン ( 正荷電ナイロン 6,6) ハウジングポリプロピレン 接 続 メス ルアーロック ( 入口 ) オス ルアースリップ ( 出口 ) 有効ろ過面積 2.8cm 2 許容使用温度 60 (210kPa) コード No. メーカーコード 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 360-02571 4908 アクロディスク シリンジフィルターポジダイン 0.2μm, 25mm ( 滅菌済 ) 50 個 25,200 アクロディスク ムスタング E メンブレン 日本ポール ( 株 ) 水 バッファー 中性糖液 一部の生物溶液からのエンドトキシン除去を可能にしたムスタング E メンブレン を使用 評価 バリデーションに最適です USP 生物学的安全性試験 In Vivo <88> に適合 γ 線滅菌済み 個別包装 平均流速 1 ~ 4mL/ 分 仕様 ポアサイズ 0.2μm 材 質 フィルタームスタング E ハウジングポリプロピレン 接 続 メス ルアーロック ( 入口 ) オス ルアースリップ ( 出口 ) メンブレンベッドボリューム 0.12mL 許容使用温度 21 ~ 24 (0.55MPa) 60 (0.21MPa) 標準的な差圧 1mL/ 分時 0.07bar(7kPa 1psi) 以下 コード No. メーカーコード 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 365-06161 MSTG25E3 アクロディスク ムスタング E メンブレン ( 滅菌済 ) 10 個 22,000 42 43
関連器材 セルファイン ET クリーン J N C( 株 ) セルファイン シリーズの選択的エンドトキシン除去ゲル ET クリーン は セルロース粒子に安全性の高い ε- ポリリジンを共有結合で固定化した 工業的スケールでの使用が可能な新しいタイプのエンドトキシン 除去剤です セルロースベースゲルの水酸基にスペーサーを介し リガンドのアミノ基が共有結合され アルカリ処理においても高い耐久性 エンドトキシンのみを吸着して 目的とするタンパク質は通過させる高い選択性 リガンドであるε- ポリリジンは Streptomyces albulusが発酵生産する リジンのホモポリマーで食品添加物としても幅広く利用されており 安全性が高い テクニカルデータ 品名粒子サイズ (μm) 吸着容量 (μg/ml) 排除限界分子量 ET クリーン S ca.40-130 280 <10 3 ET クリーン L ca.40-130 480 2 10 6 各種タンパクを汚染しているエンドトキシンの除去をバッチ法で行った結果 Removal of LPS from Protein Solution by ET-Clean Sample solution ET-Clean S ET-Clean L (μ=0.05, ph7.0) (μ=0.40, ph7.0) Protein pi LPS conc. Remain Recovery of Remain Recovery of in protein LPS Protein LPS Protein solution (pg/ml) (%) (pg/ml) (%) (pg/ml) BSA 4.9 32,000 45 99 <10 97 γ-globulin 7.4 5,600 20 99 <10 97 CytochromeC 10.6 1,500 15 99 <10 98 コード No. メーカーコード 品名 内容量 希望納入価格 ( 円 ) 635-10181 682 985 324 セルファイン ET クリーン S 10 ml 23,700 638-10171 681 984 324 セルファイン ET クリーン L 10 ml 23,700 631-10183 682 985 326 セルファイン ET クリーン S 50 ml 43,300 634-10173 681 984 326 セルファイン ET クリーン L 50 ml 43,300 637-10185 682 985 328 セルファイン ET クリーン S 500 ml 257,500 630-10175 681 984 328 セルファイン ET クリーン L 500 ml 257,500 634-14791 20151 ミニカラムセルファイン ET クリーン S 1mL 用 5 22,700 637-14781 20051 ミニカラムセルファイン ET クリーン L 1mL 用 5 22,700 635-16781 20115 ミニカラムセルファイン ET クリーン S 5mL 用 1 22,700 638-16771 20015 ミニカラムセルファイン ET クリーン L 5mL 用 1 22,700 主な関連試薬 器材一覧表 コード No. 品名 容量 希望納入価格 ( 円 ) シングルテストキット ( 試験管入ライセート試薬 +CSE ただし PSには CSE 添付無 ) 295-51301 リムルス ES-IIシングルテストワコー 25 回用 35,000 295-72301 PYROSTAR TM ES-Fシングル 25 回用 41,000 291-53601 リムルスカラー KYシングルテストワコー 25 回用 50,000 290-22041 リムルス Jシングルテストワコー 25 回用 照会 292-22241 リムルス HS-J シングルテストワコー 25 回用 照会 299-53401 リムルス HS-T シングルテストワコー 25 回用 32,000 297-52601 リムルス Fシングルテストワコー 25 回用 照会 299-52801 リムルス HS-Fシングルテストワコー 25 回用 照会 299-54501 リムルス PSシングルテストワコー 20 回用 103,000 299-77201 リムルス ES-II プラス CS シングルテストワコー 1 32 回用 49,500 キット ( ライセート試薬 + CSE) 299-51201 リムルス ES-IIテストワコー 60 回用 37,000 293-75401 PYROSTAR TM ES-F/Plate with CSE 160 回用 59,000 291-53101 リムルスカラー KYテストワコー 2 60 回用 /120 回用 54,000 519-87321 Endochrome-K 256 回用 110,000 290-21941 リムルス Jテストワコー 50 回用 照会 296-22141 リムルス HS-J テストワコー 50 回用 照会 293-52701 リムルス HS-Fテストワコー 50 回用 照会 ライセート試薬 292-51213 カブトガニ血球抽出物 ES-II 100 回用 58,000 291-75701 PYROSTAR TM ES-F without CSE 100 回用 59,000 297-75301 PYROSTAR TM ES-F/Plate without CSE 200 回用 67,000 295-51801 カブトガニ血球抽出物 ES-III 100 回用 58,000 298-22341 カブトガニ血球抽出物 J 50 回用 照会 294-22441 カブトガニ血球抽出物 HS-J 50 回用 照会 298-52511 カブトガニ血球抽出物 F 50 回用 照会 290-52711 カブトガニ血球抽出物 HS-F 50 回用 照会 ペプチドグリカン β- グルカン検出用試薬 297-51501 SLP 試薬セット 3mL 用 照会 293-58301 SLP-HSシングル試薬セット 20 回用 照会 標準品 638-01021 日本薬局方エンドトキシン標準品 10,000 ~25,000EU/vial 3 照会 531-13371 USP 標準エンドトキシン 10,000EU/vial 照会 293-16541 コントロールスタンダードエンドトキシン (CSE) 500ng/vial 6,200 エンドトキシンフリー緩衝液 201-10421 0.1M トリス塩酸緩衝液 ( ライセート試薬溶解用 ) 5mL 10 13,000 エンドトキシン検出用抽出液 293-51601 エンドトキシン検出用抽出液 10mL 4 15,300 エンドトキシン試験用チップ 294-35011 バイオクリーンチップワコー エクステンド SⅡ 100 本 6,000 291-35021 バイオクリーンチップワコー 200Ⅱ 100 本 3,600 298-35031 バイオクリーンチップワコー 1000Ⅱ 100 本 3,600 エンドトキシン試験用プレート 293-35221 バイオクリーンプレートワコー TM 50 枚 30,000 エンドトキシン試験用試験管およびアルミキャップ 292-32751 リムルステストチューブ -S アルミキャップ付 10 本 8 16,000 293-26551 リムルステストチューブ -S 10 本 10 12,000 293-28251 アルミキャップ -S 10 個 10 11,200 1: 標準プロトコルで使用時は 8 検体測定分に相当します 2: プレートリーダー法の場合は 120 回用 3: ロットにより変動 44 45