ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 2 用語及び略語一覧 ATP adenosine triphosphate アデノシン三リン酸 AUC area under the concentration-time curve 血中濃度曲線下面積 AUC(INF) area u

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1 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 1 CTD 第 2 部 2.6 非臨床試験の概要文及び概要表 薬物動態試験の概要文 ブリストル マイヤーズ株式会社

2 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 2 用語及び略語一覧 ATP adenosine triphosphate アデノシン三リン酸 AUC area under the concentration-time curve 血中濃度曲線下面積 AUC(INF) area under the concentration-time curve from time zero extrapolated to infinite time 投与後 0 時間から無限時間まで外挿した血中濃度曲線下面積 BSEP bile salt export pump 胆汁酸塩輸送ポンプ BCRP breast cancer resistance protein 乳癌耐性蛋白 BDC bile duct-cannulated 胆管カニューレ挿入 BMS Bristol-Myers Squibb ブリストル マイヤーズスクイブ社 BSP bromosulphothalien ブロモスルホフタレイン CLTp total plasma clearance 総血漿クリアランス Cmax maximum concentration 最高血中濃度 CYP cytochrome(s) P450 チトクローム P450 DCN document control number 文書管理番号 GLP Good Laboratory Practice 医薬品の安全性に関する非臨床試験の実施の基準 GSH glutathione グルタチオン HCV hepatits C virus C 型肝炎ウイルス IC 50 concentration required for 50% inhibition 50% 阻害濃度 Km michaelis constant ミカエリス定数 LC-MS/MS liquid chromatography with tandem mass spectrometry 液体クロマトグラフィー タンデム質量分析 MRP multiple drug-resistance protein 多剤耐性蛋白 MRT mean residence time 平均滞留時間 NADPH β-nicotinamide adenine dinucleotide β-ニコチンアミドアデニンジヌクレオ phosphate チドリン酸 NTCP sodium-taurocholate cotransporting polypeptide タウロコール酸ナトリウム共輸送体 OAT organic anion transporter 有機アニオントランスポーター OATP organic anion transporting polypeptide 有機アニオン輸送ポリペプチド OCT organic cation transporter 有機カチオントランスポーター Pc permeability coefficient 透過係数 P-gp P-glycoprotein P 糖蛋白 PK pharmacokinetics 薬物動態 QC quality control 品質管理 QWBA quantitative whole-body autoradiography 定量的全身オートラジオグラフィー roatp rat organic anion transporting polypeptide ラット有機アニオン輸送ポリペプチド T-HALF Elimination half-life 消失半減期 Tmax time to reach maximum concentration 最高血中濃度到達時間 UGT uridine diphosphate glucuronosyl transferase Vss steady-state volume of distribution 定常状態分布容積 ウリジン二リン酸グルクロン酸転移酵素

3 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 3 目次 1 まとめ 分析法 吸収 吸収及びバイオアベイラビリティ In vitro における吸収 In vivo における吸収 単回投与後の吸収 マウス ラット イヌ サル 分布 代謝 In vitro での代謝 In vivo での代謝 マウス ラット ウサギ イヌ サル ヒト 排泄 マウス ラット ウサギ イヌ サル ヒト 薬物動態学的薬物相互作用 考察及び結論 参考文献... 37

4 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 4 表一覧 表 7-1 In vitro における薬物代謝酵素及びトランスポーターの阻害剤としてのダク ラタスビルの評価の要約... 30

5 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 5 図一覧 図 5-1 ダクラタスビルの化学構造式... 20

6 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 6 1 まとめダクラタスビル塩酸塩 (BMS ) は C 型肝炎ウイルス (HCV) の非構造蛋白 5A(NS5A) 複製複合体に対して高い選択性を有する 新規作用機序の低分子阻害薬 ( 直接作用型抗ウイルス薬 ) である ダクラタスビルのフリー体又は塩酸塩を試験で使用したが 用量及び濃度はフリー体に換算して表記した ダクラタスビルの非臨床薬物動態 (PK) は 一連の in vitro 試験並びにマウス ラット ウサギ イヌ及びサルを用いた in vivo 試験に基づいて評価した げっ歯類としてラットを選択し 非げっ歯類としてはイヌ及びサルを選択した 当初 単回投与トキシコキネティクス試験で イヌの血漿中ダクラタスビル曝露量がサルのそれよりも大きかったことから 非げっ歯類としてイヌを選択した その後 臨床試験でヒトにダクラタスビル 25 mg を単回経口投与した結果 代謝物 BMS ( ダクラタスビルの脱カルボキシメチル体 ) はヒト血漿中で定量下限未満であったが 代謝物 BMS ( ダクラタスビルのピロリジン環水酸化 転位化合物 ) が定量可能であり ダクラタスビルの血中濃度曲線下面積 (AUC) 値に対する BMS の AUC 値の割合は約 5% であった BMS は サル及びイヌの両方で評価された BMS は サルよりもイヌにおいてかなり高い濃度で存在した さらに イヌ及びサルにダクラタスビルを経口投与した結果 ダクラタスビルの AUC 値に対する BMS の AUC 値の割合は サル (1.3% 以下 ) よりもイヌ (10%~32%) で高値であった 以上より ダクラタスビルとその代謝物 (BMS ) の十分な曝露量がサルで得られ また イヌにおける BMS の曝露量は他の種に比べてかなり大きかったことから ダクラタスビルの毒性評価では 長期投与試験にサルを選択した ダクラタスビルの代謝物プロファイル及びトキシコキネティクスの詳細な検討は それぞれ薬物動態試験の概要文及び毒性試験の概要文に記載した 初期の探索試験において マウス ラット イヌ及びサル由来の各種生体試料は蛋白沈殿法により調製し 液体クロマトグラフィー タンデム質量分析 (LC-MS/MS) 法により分析した 医薬品の安全性に関する非臨床試験の実施の基準 (GLP) に準拠したトキシコキネティクス試験でマウス ラット ウサギ イヌ及びサルから得られた血漿試料は 妥当性を検証した LC-MS/MS 法を用いてダクラタスビルを単独で又は他の被験物質と併せて分析し その血漿中濃度を求めた なお 使用した分析法は これら被験物質に対して高感度で 精度良く 正確であった 各種動物に経口投与後のダクラタスビルの吸収は速やかで 最高血中濃度 (Cmax) の到達時間 (Tmax) は 0.5~2.9 時間の範囲であった (CTD ) ダクラタスビルの絶対バイオアベイラビリティ値はマウスで 100% 超 ラットで 50% イヌで 100% 超 サルでは 38% であり マウス ラット及びイヌでの良好な吸収性 (50% 以上 ) は ヒトでの良好な絶対バイオアベイラビリティ (67% AI 試験 ) と一致することが示された In vitro 及び in vivo 試験データから ダクラタスビルは P 糖蛋白 (P-gp) の基質であるが (CTD ) 乳癌耐性蛋白(BCRP) の基質ではないことが示された (CTD ) したがって P-gp は ダクラタスビルの経口吸収を抑制する可能性がある イヌにおいて ダクラタスビルの吸収は ph に依存していた ( CTD ) ダクラタスビルの ph 依存の吸収は ファモチジン (AI 試験 ) 又はオメプラゾール (AI 試験 ) を併用投与したときのヒトで確認され バイオアベイラビリティは胃内 ph の上昇に伴って減少した

7 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 7 マウスに静脈内投与後のダクラタスビルは速やかに消失し 半減期 (T-HALF) は 1.1 時間であった (CTD ) 一方 ラット イヌ及びサルでは ダクラタスビルは緩やかに消失し T-HALF はそれぞれ 3.3~ 及び 3.7 時間であった 総血漿クリアランス (CLTp) はマウス ラット及びサルよりもイヌで大きく (CTD ) マウス ラット イヌ及びサルでそれぞれ ~ 及び 12.4 ml/min/kg( 各動物種で報告されている肝血流 1) の 10% 16~27% 66% 及び 28% 相当 ) であった マウス ラット ウサギ イヌ サル及びヒト血清蛋白に対するダクラタスビルの結合率は 濃度 10 μm でそれぞれ 98.2% 98.3% 99.5% 96.5% 95.1% 及び 95.6% であった (CTD ) ダクラタスビル ( 濃度 0.1~10 μm) の in vitro ヒト血漿蛋白結合率は濃度に依存せず 濃度 1 μm (0.739 μg/ml) では 98.0% であった (CTD ) ダクラタスビルの ex vivo 血漿蛋白結合率は 健康被験者で 99.4% HCV ジェノタイプ 1 感染患者で 98.9%~99.3% Child-Pugh 分類 A B 及び C の肝障害患者ではそれぞれ 99.4% 99.1% 及び 99.0% であった (AI 及び AI 試験 ) したがって 蛋白結合の違いによるダクラタスビルの体内動態の種差はないと考えられた ダクラタスビルの血漿中濃度に対する血液中濃度の比はヒトで 0.77~0.82 動物では 0.56~1.08 と同程度の値であり 当該濃度比からダクラタスビルは血液中で優先的に血漿中に分布することが示唆された (CTD ) ダクラタスビルの定常状態分布容積 (Vss) は ラット イヌ及びサルでそれぞれ 及び 2.2 L/kg で 報告されている全身水分量 1) よりも大きかったことから (CTD ) ダクラタスビルは血管外に分布することが示唆された Long-Evans ラット ( 有色 ) に [ 14 C] ダクラタスビルを単回経口投与後の放射能の組織内分布は 雌雄 SD ラット ( アルビノ ) に [ 14 C] ダクラタスビルを単回経口投与後の放射能の組織内分布 並びに雄性 SD ラットに [ 14 C] ダクラタスビルを反復経口投与後の放射能の組織内分布と類似していた (CTD 及び CTD ) [ 14 C] ダクラタスビル由来の放射能は速やかに吸収され 体内に広範に分布した 有色ラットにおいて 血漿中放射能濃度に対する組織中放射能濃度の比が最も大きかった組織は 副腎 (6~13) 肝臓 (8~15) 及び消化管 (2~135) で 放射能濃度が低い又は定量下限未満の組織は 神経組織 分泌器官 脂肪 生殖組織 骨 / 筋肉 呼吸器及び水晶体であった 有色ラットにおいて [ 14 C] ダクラタスビル由来の放射能の消失は 皮膚 ブドウ膜 脾臓 胸腺 腎皮質及び副腎で緩やかであった これら組織中の投与後 840 時間 (35 日 ) の放射能濃度は ブドウ膜で μg-equivalents/g 残りの組織では 0.08~0.147 μg-equivalents/g[ 定量下限 (0.069 μg-equivalents/g) に近い値 ] を呈した [ 14 C] ダクラタスビルを用いた組織分布試験の結果は 非標識ダクラタスビルを用いた in vivo 試験の結果と一致し ダクラタスビルが肝臓 ( マウス ラット イヌ及びサル ) で濃縮されること また ダクラタスビルの脳 ( マウス及びラット ) への移行が抑制されることが示された さらに 野生型マウス及び P-gp ノックアウトマウスを用いた試験から 血漿中ダクラタスビルに対する脳中ダクラタスビルの AUC 比が野生型マウスよりも P-gp ノックアウトマウスで大きく 静脈内投与後及び経口投与後でそれぞれ 3.5 倍及び 5.4 倍であったことから P-gp はダクラタスビルの脳への移行を抑制することが示唆された ラット肝細胞を用いた取り込み試験結果から 受動輸送と能動輸送の両方がダクラタスビルの

8 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 8 肝取り込みに関与することが示された (CTD ) しかしながら ヒト肝細胞では ダクラタスビルの肝取り込みは主に受動拡散に起因することが示された (CTD ) 当該試験結果は ダクラタスビルが有機アニオン輸送ポリペプチド (OATP)1B1 OATP2B1 又は OATP1B3 の基質ではないことを示した in vitro 試験の結果 (CTD ) と一致した 妊娠 SD ラットに [ 14 C] ダクラタスビルを経口投与したとき 母動物組織及び胎盤への放射能の移行は速やかであった (CTD ) [ 14 C] ダクラタスビル由来の放射能は 投与後 4 時間の胎児肝臓中のみに検出され 母動物血漿中濃度に対する胎児肝臓中濃度の比は 0.19 であった 他の胎児組織では 放射能は検出されない又は定量下限未満であった これらの結果は ダクラタスビルとその代謝物は胎盤を通過するが 胎児組織への移行は抑制されたことを示唆する 授乳中のラットに [ 14 C] ダクラタスビルを経口投与したとき 乳汁中放射能は投与後 4 時間で最高濃度に達し 母動物血漿中放射能に対する乳汁中放射能の Cmax 比及び AUC 比は それぞれ 1.27 及び 1.55 であった (CTD ) これらの結果から ダクラタスビルの投与を受けている女性から授乳中の乳児は ダクラタスビルとその代謝物に曝露される可能性のあることが示唆された マウス ラット イヌ サル及びヒト由来の肝ミクロソームにおいて ダクラタスビルの代謝速度は同程度であった (CTD ) しかしながら 肝細胞におけるダクラタスビルの代謝速度はマウス イヌ及びサルよりもラット及びヒトで遅かった (CTD ) ダクラタスビルの 11 種類の代謝物は 各種の肝ミクロソーム 肝 S9 画分及び肝細胞中で生成された ヒトに特有の代謝物は検出されなかった また グルタチオン (GSH) 抱合体は検出されなかった [ 3 H] ダクラタスビル又は [ 14 C] ダクラタスビルとラット イヌ サル及びヒト肝ミクロソームとをインキュベートした結果 肝ミクロソーム蛋白と放射性物質との不可逆的結合がわずかながら認められた (CTD 及び CTD ) ダクラタスビルの in vivo 代謝は多数の酸化物の生成を特徴とし 排泄物中に検出された代謝物の数は ヒトで 8 種類 マウス ラット ウサギ イヌ及びサルでは 8~16 種類であった (CTD 及び ) 未変化体が血漿中の主化合物で マウス ラット ウサギ BDC イヌ及びサルの血漿中放射能のそれぞれ 75%~90% 85%~88% 90%~93% 88%~94% 及び 74%~86% を占めた 無処置のマウス ラット ウサギ及びサルにおいて 投与量のそれぞれ 19% 28% 26% 及び 27% が代謝物として排泄物中から回収された 胆管カニューレを挿入した (BDC) ラット イヌ及びサルでは 投与量のそれぞれ 36% 17% 及び 33% が代謝物として回収された 無処置動物の排泄物中に検出された主要な代謝物は サルで BMS ( 活性代謝物 投与量の 17.5%) マウスで BMS ( 活性代謝物 投与量の 6.3%) マウス ラット及びウサギでは BMS ( それぞれ投与量の 7.4% 9.8% 及び 1%) であった BDC 動物における主代謝物は ラット及びサルで BMS ( それぞれ投与量の 10.5% 及び 12.6%) イヌでは BMS ( 投与量の 6.0%) であった 胆汁中 糞便中又は尿中に検出された他の代謝物は 投与量の 5% 未満に相当した ヒトに [ 14 C] ダクラタスビルを単回経口投与した結果 投与後 240 時間で投与量の 94.24% が回収され そのうち 58.9% 及び 30.1% がそれぞれ未変化体及び代謝物として回収された 代謝物は主として酸化により生成した (CTD ) In vivo での代謝物プロファイルはすべての種で類似

9 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 9 し ヒトに特有の代謝物はなかった (CTD ) ダクラタスビルがヒト血漿中の主たる放射性物質で 血漿中放射能の 97%~100% を占めた BMS はヒト血漿中に検出された唯一の代謝物で 血漿中放射能のわずか 2% を占めた ヒトにダクラタスビル 25 mg を単回経口投与したとき (AI 試験 ) ダクラタスビルに対する BMS の AUC の割合は約 5% で また 60 mg を 1 日 1 回 7 日間反復経口投与したとき (AI 試験 ) ダクラタスビルに対する BMS の AUC の割合は 5% 未満であったことから (CTD ) BMS は血中の微量代謝物であることが示された 尿中及び糞便中の主代謝物は BMS ( 尿中及び糞便中でそれぞれ投与量の 0.2% 及び 15.2%) 及び BMS ( 尿中及び糞便中でそれぞれ投与量の 0.1% 及び 4%) であった ダクラタスビルの消失には 代謝クリアランス 糞便中排泄 胆汁クリアランス及び腸内分泌などの複数の経路が関与する (CTD CTD CTD CTD CTD CTD ) 動物で投与量の 0.4%~0.8% ヒトでは投与量の 6.4% が未変化体として尿中で回収されたことから (CTD ) 腎排泄は主要な消失経路ではないことが示された In vitro 試験データから ダクラタスビルは多剤耐性蛋白 (MRP)2 の基質ではないことが示された (CTD ) チトクローム P450(CYP)3A4 は ダクラタスビルの代謝を担う主酵素であり BMS ( ヒトの主代謝物 ) の生成に関与する ヒトにダクラタスビルを投与したとき 相当な量のダクラタスビルが酸化反応により代謝されるため CYP 活性の変化はダクラタスビルの消失に影響を及ぼす可能性がある ダクラタスビルは P-gp の基質であるため P-gp を介した薬物相互作用が生じる可能性がある 健康被験者に CYP3A4 及び P-gp の阻害剤であるケトコナゾールを併用投与したとき (AI 試験 ) ダクラタスビルの曝露量は増加し また CYP3A4 及び P-gp 誘導剤のリファンピシン又はエファビレンツを併用投与したときには (AI 及びAI 試験 ) ダクラタスビルの曝露量は減少した これらのデータは ダクラタスビルの曝露量が CYP3A4 及び P-gp の阻害剤又は誘導剤により影響を受けることを示すものである In vitro 試験から ダクラタスビルは CYP3A の可逆的及び時間依存的な弱い阻害剤であることが示された (CTD ) 肝細胞を用いた誘導試験データ及びベーシック又はメカニスティックスタティックモデル解析 3) の結果に基づくと ダクラタスビルは CYP1A2 及び CYP2B6 の誘導剤ではないが CYP3A4 を誘導する可能性がある (CTD CTD 及び CTD ) しかしながら AI 試験において ダクラタスビルとミダゾラム ( 親和性の高い CYP3A の基質 ) との間で薬物相互作用はみられなかった さらに ダクラタスビルはヒトの遺伝子組換えウリジン二リン酸グルクロン酸転移酵素 (UGT)1A1 を阻害した [ 50% 阻害濃度 (IC 50 )= 12.7 μm CTD ] しかしながら AI 及び AI 試験において 高ビリルビン血症 [ 総ビリルビン又は間接ビリルビン (UGT1A1 基質 ) の上昇 ] とダクラタスビルの投与との間に相関性がなく ダクラタスビルによる UGT1A1 の in vitro 阻害は in vivo では認められなかった ダクラタスビルは Caco-2 細胞におけるジゴキシン輸送及び OATP1B1 OATP1B3 OATP2B1 有機アニオントランスポーター (OAT)1 OAT3 有機カチオントランスポーター(OCT)1 OCT2 P-gp BCRP MRP2 及び胆汁酸塩輸送ポンプ (BSEP) などの各種の取り込み並びに排出

10 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 10 トランスポーターを阻害し 広範囲の IC 50 値を呈した (CTD CTD CTD CTD CTD CTD CTD 及び CTD ) タウロコール酸ナトリウム共輸送体 (NTCP) の阻害は 認められなかった (CTD ) 総ダクラタスビル ( 結合型ダクラタスビル+ 遊離型ダクラタスビル ) の曝露量又は遊離型ダクラタスビルの曝露量と IC 50 値との比較から ダクラタスビルは P-gp BCRP OATP1B1 OATP1B3 及び BSEP の基質との薬物相互作用を生じる可能性があるものの NTCP OATP2B1 OAT1 OAT3 OCT1 及び OCT2 の基質との薬物相互作用は生じないと考えられた なお AI 試験で HCV 感染患者にダクラタスビル 60 mg を反復投与したときのダクラタスビルの Cmax 値 2.34 μm(1.73 μg/ml) を参考値とし 薬物相互作用の発現の可能性を評価した ヒトでの薬物相互作用試験 (AI 試験 ) において 高親和性 P-gp 基質であるジゴキシンの曝露量に及ぼすダクラタスビルの影響は 軽度から中程度 [AUC(TAU): 1.27 倍増加 Cmax: 1.65 倍増加 ] であった また 別の薬物相互作用試験 (AI 試験 ) において OATP1B1 OATP1B3 及び BCRP の基質であるロスバスタチンの曝露量に及ぼすダクラタスビルの影響は軽度 [AUC(INF): 1.58 倍増加 Cmax: 2.04 倍増加 ] であった さらに 薬物相互作用試験 (AI 試験 ) において ダクラタスビルは 高親和性 OATP 基質であるアスナプレビルの曝露量に対して臨床的意義のある影響を及ぼさなかった これらのデータに基づくと P-gp BCRP 又は OATP の他の基質の PK に及ぼすダクラタスビルの影響は 臨床上わずかであると予測された

11 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 11 2 分析法初期の探索試験において マウス ラット イヌ及びサル由来の各種生体試料を蛋白沈殿法により調製し ダクラタスビルを単独で 又は他の被験物質 (BMS 及び BMS ) を併せて液体クロマトグラフィー タンデム質量分析 (LC-MS/MS) 法により分析した (CTD ) なお 探索試験とその分析法に関する詳細な情報は 各トキシコキネティクス試験報告書に記載した 後期の試験においては マウス (CTD 及び CTD ) ラット (CTD CTD 及び CTD ) ウサギ (CTD 及び CTD ) イヌ(CTD CTD 及び CTD ) 及びサル (CTD 及び CTD ) の血漿中のダクラタスビルを単独で又は他の被験物質を併せて分析するため 妥当性を検証した LC-MS/MS 法を使用した ( 薬物動態試験概要表 Table ) サル血漿中のリバビリン及びペグインターフェロンアルファ-2b は それぞれ LC-MS/MS 法 (CTD ) 及び電気化学発光法 (CTD ) により分析した 同一の動物種に対して複数の分析法が存在するのは 分析対象に複数の被験物質を追加したためであり また ブリストル マイヤーズスクイブ社 (BMS) から外部試験施設社 米国 ) に分析法を引き渡したためである リバビリン及びペグインターフェロンアルファ-2b の分析は それぞれ社 ( 米国 ) 及び社 ( 米国 ) にて実施された 安定同位体標識の内標準を添加した後 GLP 適用毒性試験から得られた動物血漿試料を固相抽出法により前処理し 逆相 LC-MS/MS 法により分析した 質量分析装置による被験物質の検出は ターボイオンスプレー による陽イオン化法により行った すべての動物種の血漿試料において ダクラタスビルを単独で分析するときの標準曲線は 2 又は 5~2000 ng/ml の濃度範囲であった 複数の被験物質とともにダクラスタルビルを分析するときの標準曲線は 2~2000 ng/ml の濃度範囲であった すべての測定において 使用した回帰モデルは 1/x 2 で重み付けした直線であった リバビリンに関しては 標準曲線は 5~1000 ng/ml の濃度範囲で 使用した回帰モデルは 1/x 2 で重み付けした直線であった ペグインターフェロンアルファ-2b に関しては 標準曲線は 500 ~32000 pg/ml の濃度範囲で 使用した回帰モデルは 1/y 2 で重み付けした直線であった 血漿試料が採取時から分析時までの間安定であることを保証するため 血漿試料の長期安定性を検討した 各種の動物及びマトリックスにおける分析法の詳細を薬物動態試験概要表の Table に示す マウス ラット イヌ及びサル血漿中の被験物質の分析法について 分析実施施設間のクロスバリデーション試験を実施した BMS で品質管理 (QC) 試料を調製し 分析した後 社に送付して分析した また 各動物種の実試料も両施設で分析し 比較検討した その結果 両施設で得られた分析結果に有意な差はみられなかった LC-MS/MS 法による血漿試料の分析結果は 予め設定した判定基準 [ 検量線作成用標準試料の少なくとも 4 分の 3 及び QC 試料の少なくとも 3 分の 2 の測定値が理論値の ±15% 以内 ( 最低濃度の標準試料では ±20% 以内 ) である ] を満たした また 血漿中ペグインターフェロンアルファー 2b の分析結果は 予め設定した判定基準 [ 検量線作成用標準試料の少なくとも 4 分の 3 の測定値

12 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 12 が理論値の ±20% 以内 ( 最低濃度の標準試料では ±25% 以内 ) であり 全 QC 試料の少なくとも 3 分の 2 かつ各濃度の QC 試料の少なくとも 2 分の 1 の測定値が理論値の ±20% 以内である ] を満た した

13 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 13 3 吸収 3.1 吸収及びバイオアベイラビリティ In vitroにおける吸収人工膜透過性評価において 濃度 100 μm でのダクラタスビルの透過係数 (Pc) は ph 5.5 及び 7.4 でそれぞれ 442 ± 168 及び 486 ± 183 nm/sec( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) で 高い膜透過性を示し ヒトで良好な吸収性を示す化合物の Pc 値 2) と類似している P-gp を含めたいくつかの排泄及び取り込みトランスポーターを発現する Caco-2 細胞単層膜を用いて ダクラタスビルの双方向透過性を検討した その結果 ダクラタスビル濃度 0.3 μm 及び ph 7.4 で 頂側膜側から側底膜側の方向の Pc 値は 15 nm/sec 未満と小さく 側底膜側から頂側膜側の方向の Pc 値は 364 ± 101 nm/sec と大きかった 流出比 ( 側底膜側から頂側膜側の Pc/ 頂側膜側から側底膜側の Pc) は 24 を上回り ケトコナゾール及びシクロスポリン (P-gp の阻害剤 ) の存在下で それぞれ 1.6 及び 0.8 に低下した ( 薬物動態試験概要表 Table B CTD ) これらのデータから ダクラタスビルは P-gp を含む排出トランスポーターの基質であることが示唆された そこで ダクラタスビルが P-gp の基質であることを確認するため P-gp ノックアウト (mdr 1a/1b) マウスへのダクラタスビル (3 mg/kg) の経口及び静脈内投与試験を実施した P-gp ノックアウトマウスにダクラタスビルを 3 mg/kg の用量で経口及び静脈内投与したときの AUC(0-8 h) 値は 野生型マウスの AUC(0-8 h) 値のそれぞれ 1.7 倍及び 2.3 倍であった ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) これらの結果から ダクラタスビルは P-gp の基質であること また P-gp はダクラタスビルの経口吸収を抑制し ダクラタスビルの排泄を仲介する役割を担う可能性のあることが示された ヒト BCRP 発現 MDCK 細胞及び野生型 MDCK 細胞を用いた [ 3 H] ダクラタスビルの双方向透過性試験において 両細胞での透過比は類似していたことから ダクラタスビルは BCRP の基質ではないことが示された ( 薬物動態試験概要表 Table G CTD ) ヒト MRP2 発現 Sf9 細胞から調製した膜小胞を用いた [ 3 H] ダクラタスビルの取り込み試験において [ 3 H] ダクラタスビルの取り込みはアデノシン一リン酸 (AMP エネルギー輸送なし) 及びアデノシン三リン酸 (ATP エネルギー輸送あり) の存在下で同程度であり MK-571(MRP2 の阻害剤 ) による影響を受けなかったことから ダクラタスビルは MRP2 の基質ではないことが示された ( 薬物動態試験概要表 Table H CTD ) In vivoにおける吸収マウス ラット イヌ及びサルに経口投与後のダクラタスビルの吸収は速やかで Tmax はそれぞれ ± ± 1.6 及び 2.0 ± 0.0 時間であった ( 薬物動態試験概要表 Table A B C 及び D CTD ) ダクラタスビルの絶対バイオアベイラビリティの値は マウスに 3 mg/kg の用量で経口投与したとき 100% 超 イヌに 3 mg/kg の用量で経口投与したときには 100% 超と大きく ( 薬物動態試験概要表 Table A 及び C CTD ) これら動物種でのダクラタスビルの吸収性は良好であることが示された 一方 ラット及びサル

14 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 14 におけるダクラタスビルの絶対バイオアベイラビリティの値は小さく ラットに 5 mg/kg の用量で経口投与したとき 50% サルに 2.83 mg/kg の用量で経口投与したときには 38 ± 17% であった ( 薬物動態試験概要表 Table B 及び D CTD ) なお ヒトにおけるダクラタスビルの絶対バイオアベイラビリティの値は 67% で 良好な吸収性を示した (AI 試験 ) ラットにダクラタスビルを静脈内及び門脈内投与したときの投与後 0 時間から無限時間まで外挿した血中濃度曲線下面積 [AUC(INF)] 値は それぞれ 3.7 ± 0.15 μg h/ml 及び 2.8 ± 0.49 μg h/ml と同程度であったことから ダクラタスビル経口投与時のバイオアベイラビリティは 肝初回通過効果による影響を受けないことが示唆された ( 薬物動態試験概要表 Table B CTD ) イヌを用いたクロスオーバー法による試験において ファモチジン投与で胃内 ph を上昇させたとき ダクラタスビルの絶対バイオアベイラビリティ値は 89%( ペンタガストリン投与時 ) から 48%( ファモチジン投与時 ) に低下したことから ダクラタスビルの経口吸収は ph に依存することが示された ( 薬物動態試験概要表 Table C CTD ) 3.2 単回投与後の吸収 マウス野生型マウス及び P-gp ノックアウトマウスにダクラタスビルを 3 mg/kg の用量で静脈内投与し ダクラタスビルの血中動態を検討した ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) その結果 野生型マウスにおいて ダクラタスビルは半減期 1.1 時間で消失し CLTp 値は 9.3 ml/min/kg で マウスの肝血流 1) の約 10% に相当した 一方 P-gp ノックアウトマウスにおいては ダクラタスビルは半減期 1.6 時間で消失し 野生型マウスのそれと同程度であったが CLTp 値は 4.0 ml/min/kg で マウスの肝血流 1) の 4.4% に相当し 野生型マウスのそれより低かったことから マウスでは P-gp はダクラタスビルの消失の役割を担うことが示された ラット 1 群 3 匹の雄性ラットにダクラタスビルを 2 及び 5 mg/kg の用量で静脈内投与し ダクラタスビルの血中動態を検討した ( 薬物動態試験概要表 Table B CTD ) その結果 ダクラタスビルはそれぞれ半減期 3.3 及び 4.7 時間で消失し 平均滞留時間 (MRT) はそれぞれ 2.2 及び 4.0 時間 CLTp 値はそれぞれ 9.1 及び 14.8 ml/min/kg で ラットの肝血流 1) のそれぞれ約 16% 及び約 27% に相当した イヌ 5 匹の雄性イヌにダクラタスビルを 1 mg/kg の用量で静脈内投与し ダクラタスビルの血中動態を検討した ( 薬物動態試験概要表 Table C CTD ) その結果 ダクラタスビルは半減期 3.9 ± 1.4 時間で消失し MRT 値は 4.8 ± 1.0 時間 CLTp 値は 20.3 ± 21.3 ml/min/kg で イヌの肝血流 1) の約 66% に相当した

15 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page サル 3 匹の雄性カニクイザルにダクラタスビルを 1.13 mg/kg の用量で静脈内投与し ダクラタスビルの血中動態を検討した ( 薬物動態試験概要表 Table D CTD ) その結果 ダクラタスビルは半減期 3.7 ± 0.31 時間で消失し MRT 値は 3.0 ± 0.48 時間 CLTp 値は 12.4 ± 4.2 ml/min/kg で サルの肝血流 1) の約 28% に相当した

16 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 16 4 分布ラット イヌ及びサルにダクラタスビルをそれぞれ 5 1 及び 1.13 mg/kg の用量で静脈内投与したときの Vss 値は それぞれ 3.6 ± ± 4.6 及び 2.2 ± 0.88 L/kg であった ( 薬物動態試験概要表 Table B C 及び D CTD ) これらの Vss 値は各動物種の全身水分量 1) ( ラット イヌ及びサルでそれぞれ 及び L/kg) よりも大きかったことから ダクラタスビルが血管外に分布することが示唆された ダクラタスビル [ 濃度 10 μm(7.389 μg/ml)] を血液中でインキュベートした結果 血漿中濃度に対する血液中濃度の比は ヒトで 0.77~0.82 試験した動物種では 0.56~1.08 であったことから ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) 血液中のダクラタスビルは血漿中に優先的に分布することが示唆された マウス ラット ウサギ イヌ サル及びヒト血清蛋白に対するダクラタスビルの結合率は 濃度 10 μm でそれぞれ 98.2% 98.3% 99.5% 96.5% 95.1% 及び 95.6% であった ( 薬物動態試験概要表 Table CTD ) ダクラタスビルのヒト血漿蛋白結合率は 濃度 及び 10 μm でそれぞれ 97.9% 98.0% 及び 97.7% であった ( 薬物動態試験概要表 Table CTD ) Ex vivo での血漿蛋白結合率は 健康被験者で 99.4% HCV ジェノタイプ 1 感染患者で 98.9%~99.3% Child-Pugh 分類 A B 及び C の肝障害患者ではそれぞれ 99.4% 99.1% 及び 99.0% であった (AI 及び AI 試験 ) [ 3 H] ダクラタスビル又は [ 14 C] ダクラタスビルとラット イヌ サル及びヒト肝ミクロソームをインキュベートした結果 放射性物質と肝ミクロソーム蛋白との不可逆的結合 (40.5~ 71.7 pmol/mg/h) が認められた ( 薬物動態試験概要表 Table D CTD 及び CTD ) GSH の存在下で 不可逆的結合率はわずかに低下した (22~41 pmol/mg/h) ヒト肝細胞へのダクラタスビル (0.01~25 μm) の取り込みは速やかで ロテノン (ATP の枯渇薬 ) 又はブロモスルホフタレイン (BSP トランスポーター阻害剤) により阻害されなかった また 取り込み速度は試験濃度範囲で線形であった ( 薬物動態試験概要表 Table D CTD ) これらの結果から ダクラタスビルの肝への取り込みは エネルギー又はトランスポーターに依存していないことが示唆された さらに BSP の存在下又は非存在下でヒト OATP1B1 OATP2B1 又は OATP1B3 を発現する HEK-293 細胞を用いた in vitro 試験データ 並びに OATP1B3 を発現する Xenopus laevis 卵母細胞を用いた in vitro 試験データから ダクラタスビルは OATP1B1 OATP2B1 及び OATP1B3 の基質ではないことが示唆された ( 薬物動態試験概要表 Table E 及び F CTD 及び CTD ) これらの結果から 受動拡散がダクラタスビルのヒト肝への取り込みの主な機序であることが示唆された ラット肝へのダクラタスビルの取り込みは速やかで 飽和性があり (Km > 50 μm) ロテノン及びカルボニルシアニド-p-トリフルオロメトキシフェニルヒドラゾン (FCCP)(ATP の枯渇薬 ) の添加により最大で約 50% 阻害されたことから エネルギー依存性の能動的過程がラット肝への取り込みに関与することが示唆された ( 薬物動態試験概要表 Table C CTD ) さらに ラット有機アニオン輸送ポリペプチド (roatp)1 roatp2 又は roatp4 を発現する Xenopus laevis 卵母細胞モデルを用いた in vitro 試験データから ダクラタスビルのラット肝への取り込みは 受動拡散に加え 部分的には roatp1

17 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 17 及び roatp2 を介して行われることが示唆された ( 薬物動態試験概要表 Table C CTD ) Long-Evans ラット ( 有色 ) 及び SD ラット ( アルビノ ) に [ 14 C] ダクラタスビルを 10.5 mg/kg (115 μci/kg) の用量で単回経口投与し 定量的全身オートラジオグラフィー (QWBA) 法を用いて放射能の組織分布を検討した ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) その結果 Long-Evans ラットにおいて 放射能は速やかに吸収され 大部分の組織で投与後 0.5 ~4 時間で最高濃度に達し 組織中に広範に分布した 放射能濃度は副腎 胆汁 肝臓 盲腸 小腸及び胃で最も高かった 血管 / リンパ管 分泌器官 脂肪 真皮 生殖器 骨格 / 筋肉 呼吸器及び視覚器官の放射能濃度は低かった 神経組織及び水晶体の放射能は定量下限未満であった 放射能の血漿中濃度に対する組織中濃度の比は 大部分の組織の採取時点で 1 を上回った 副腎 甲状腺 皮膚 ブドウ膜 脾臓 胸腺及び腎臓を除き [ 14 C] ダクラタスビル由来の放射能は投与後 12~96 時間までに組織から完全に消失した 副腎 甲状腺 脾臓 胸腺及び腎臓中の放射能は 時間の経過とともに減少し 投与後 840 時間 (35 日 ) で 0.08~0.147 μg-equivalents/g( 定量下限 μg-equivalents/g に近い値 ) であった SD ラットにおいても 放射能は速やかに吸収された後体内に広範に分布し 放射能の組織内分布は Long-Evans ラットと類似していた SD ラットの組織中放射能濃度は 投与後 1 時間で Long-Evans ラットの約半分であったが 投与後 8 及び 24 時間では Long-Evans ラットと同程度であった Long-Evans ラットにおいて 非有色皮膚中の放射能は速やかに消失し 投与後 12 時間までに定量下限 (0.069 μg-equivalents/g) に達したが 有色皮膚及び眼ブドウ膜中の放射能の消失は緩やかで 放射能は投与後 840 時間 (35 日 ) で検出可能であり その濃度はそれぞれ 及び μg-equivalents/g であった 一方 SD ラットにおいては 眼組織中の放射能の消失は速やかで 投与後 24 時間までに定量下限未満になった これらのデータから 組織に含まれるメラニンに対する [ 14 C] ダクラタスビル由来放射能の特異的かつ可逆的な結合が示唆された 雌雄 SD ラットに [ 14 C] ダクラタスビルを 30 mg/kg(100 μci/kg) の用量で単回経口投与し また 雄性 SD ラットに [ 14 C] ダクラタスビルを 30 mg/kg(40 μci/kg) の用量で 1 日 1 回 14 日間反復経口投与し QWBA 法を用いて放射能の組織分布を詳細に検討した ( 薬物動態試験概要表 Table A 及び Table B CTD ) その結果 雌雄 SD ラットを用いた単回投与試験において 放射能の組織内分布及び消失は雌雄で類似していた 雌雄ラットにおいて 放射能の血漿中濃度に対する組織中濃度の比は 大部分の採取時点の組織で 1 を上回っていた 骨 水晶体 眼 小脳 大脳 脳髄及び嗅葉中の放射能は 雌雄とも定量下限未満であった 他の組織中の放射能濃度は試験期間中徐々に減少したが 雄性ラットの副腎 眼窩外涙腺 ハーダー腺 眼窩内涙腺 腎臓 腎皮質 下垂体 脾臓 胸腺及び甲状腺 並びに雌性ラットの腎臓 腎皮質 包皮腺 脾臓 胸腺及び甲状腺では 投与後 168 時間で放射能が残存していた 雄性 SD ラットを用いた反復投与組織分布試験において [ 14 C] ダクラタスビルを 30 mg/kg の用量で 1 日 1 回 14 日間反復投与した結果 大部分の組織中の放射能は投与後 8 時間で最高濃度に

18 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 18 達した 放射能の蓄積はいずれの組織でも認められず 放射能の組織分布及び消失は単回投与時と同程度であった 単回投与試験でみられたように 骨 水晶体 眼 小脳 大脳 脳髄及び嗅葉中の放射能は 定量下限未満であるか又は検出されなかった 組織中放射能は試験期間中徐々に減少し 最終投与後 168 時間 (7 日 ) まで多くの組織で放射能が検出可能であり 投与後 2016 時間 (84 日 ) までに眼窩外涙腺 眼窩内涙腺 胸腺及び甲状腺を除く大部分の組織で放射能は消失した さらに マウス ラット イヌ及びサル組織中のダクラタスビルの分布について 非標識ダクラタスビル及び LC-MS/MS 法を用いて検討した ( 薬物動態試験概要表 Table B Table C Table D 及び Table E CTD 及び CTD ) その結果 血清中又は血漿中ダクラタスビルに対する肝臓中ダクラタスビルの AUC 比は マウスで 2.35( 静脈内投与時 ) 及び 1.9( 経口投与時 ) ラットで 5.9( 静脈内投与時 ) 及び 6.8( 経口投与時 ) イヌで 10.6( 経口投与時 ) サルでは 17( 経口投与時 ) であった 血漿中ダクラタスビルに対する 心臓や脾臓などの他の組織中ダクラタスビルの AUC 比は おおむね 1 を上回った P-gp ノックアウトマウスにおいて 血漿中ダクラタスビルに対する脳中ダクラタスビルの AUC 比は 野生型マウスのそれの 3.5 倍 ( 静脈内投与時 ) 及び 5.4 倍 ( 経口投与時 ) であった ( 薬物動態試験概要表 Table B CTD ) これらの結果から P-gp はマウス脳へのダクラタスビルの移行を抑制することが示唆された 雌性 SD ラット ( 妊娠 18 日 ) に [ 14 C] ダクラタスビルを 30 mg/kg(100 μci/kg) の用量で単回経口投与し 放射能の組織分布を検討した ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) その結果は 妊娠していない雌性ラットを用いた組織分布試験の結果と一致した 胎盤を含む母動物組織への放射能の移行は速やかで 組織中放射能は投与後 0.5 時間で検出され おおむね 2 時間で最高濃度に達した 胎児において 放射能は投与後 4 時間に肝臓でのみ検出され 血液を含む他の組織中の放射能は 全採取時点で定量下限未満であるか又は検出されなかった 母動物の血漿中放射能に対する組織中放射能の濃度比は 副腎 骨髄 眼窩外涙腺 ハーダー腺 腎臓 腎皮質 腎髄質 肝臓 心筋 膵臓 下垂体 唾液腺 脾臓 胃粘膜及び甲状腺で すべての採取時点で 1 を上回った 羊水 眼 水晶体 小脳 大脳 脳髄 嗅葉及び脊髄中の放射能は定量下限未満であった 投与後 24 時間で 羊膜嚢などの母動物組織のおよそ半分に放射能が残存し 投与後 48 時間では 16 種類の組織で放射能が残存していた これらのデータから [ 14 C] ダクラタスビル由来の放射能は胎盤を通過するものの 胎児組織への移行は抑制されることが示唆された 授乳中 ( 分娩後 4 日 ) の SD ラットに [ 14 C] ダクラタスビルを 30 mg/kg(100 μci/kg) の用量で単回経口投与し 乳汁中への放射能の移行を検討した ( 薬物動態試験概要表 Table B CTD ) その結果 乳汁中及び母動物血漿中の放射能は それぞれ投与後 4 及び 1 時間に最高濃度に達した なお 乳汁中及び母動物血漿中の放射能の T-HALF 及び AUC(INF) 値は 最終消失相がみられなかったため算出できなかった Cmax 及び AUC(0-72 h) 値を基に算出した乳汁中放射能 / 母動物血漿中放射能の曝露量比は それぞれ1.27 及び 1.55 であった これらのデータから ラットにおいてダクラタスビルとその代謝物は乳汁中に移行することが示され また ダクラタスビルの投与を受けている女性から授乳中の乳児は ダクラタスビルとその代謝物に曝露される

19 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 19 可能性のあることが示唆された

20 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 20 5 代謝 In vitro 及び in vivo において ダクラタスビルは多様な酸化物へと代謝された ダクラタスビルの主要な代謝反応として ピロリジン環の酸化的開環とその後の分子内環化 脱カルボキシメチル化及び水酸化が挙げられる ダクラタスビルの化学構造式を図 5-1 に示し 各種動物及びヒトにおける代謝物の構造式を薬物動態試験概要表の Table に示す ヒトに特有の代謝物は検出されなかった BMS 及び BMS の薬理活性を検討した結果 これら代謝物の薬理活性はダクラタスビルの 1/1000~1/10 であった 図 5-1 ダクラタスビルの化学構造式 O O NH N O N N H * * H N N O N HN O O * 14 C 標識位置を示す 5.1 In vitroでの代謝 β-ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸 (NADPH) の存在下で 肝ミクロソームにおけるダクラタスビルの代謝速度を検討した結果 ダクラタスビルの代謝速度はマウス ラット イヌ サル及びヒトで同程度であることが示された (3.6~6.8 pmol/min/mg protein) 肝細胞におけるダクラタスビルの代謝速度は マウス イヌ及びサル (31.7~52.6 pmol/min/10 6 cells) よりもラット及びヒト (5.6~7.0 pmol/min/10 6 cells) で遅かった ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) 濃度 10 μm の [ 14 C] ダクラタスビルを NADPH 及び GSH 存在下で肝ミクロソーム ( マウス ラット ウサギ イヌ サル及びヒト ) と NADPH 存在下で肝 S9 画分 ( マウス ラット イヌ サル及びヒト ) と 又は肝細胞 ( マウス ラット イヌ サル及びヒト ) とそれぞれインキュベートし [ 14 C] ダクラタスビルの代謝を検討した ( 薬物動態試験概要表 Table B CTD ) その結果 肝ミクロソームにおける代謝は動物とヒトで同程度であり インキュベート後の試料中放射能の 73%~84% が未変化体であった マウス ラット イヌ及びヒト由来の肝細胞において インキュベート後の試料中放射能の 78%~89% が未変化体であったのに対し サル由来の肝細胞においては著しい代謝が起こり インキュベート後の試料中放射能の 57.5% が未変化体であった 肝ミクロソーム 肝 S9 画分及び肝細胞とのインキュベートで生成した 11 種類の代謝物は LC-MS/MS 法により同定された ヒトに特有な代謝物は認められなかった 動物種及びヒトで検出された主な代謝物として BMS BMS BMS ( ダクラタスビルの水酸化体 ) BMS ( ダクラタスビルの水酸化体 ) 及び M27( ダクラタスビルの一酸化物 ) が挙

21 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 21 げられる ヒト肝ミクロソーム及び特異的な阻害剤を用いた初期の反応表現型検査からは ダクラタスビル ( 濃度 0.5 μm) は主として CYP3A4 を介して代謝され BMS ( ヒト血漿中に検出された唯一の代謝物で ヒトの排泄物中で最も量の多い代謝物 ) は CYP2C9 を介しても生成される ( スルファフェナゾールにより 38% 阻害 ) 可能性が示された ( 薬物動態試験概要表 Table C CTD ) ヒト肝ミクロソーム及び特異的な阻害剤を用いた さらに包括的な反応表現型検査並びに遺伝子組換えヒト CYP 酵素を用いた試験から ダクラタスビル ( 濃度 2 及び 20 μm) から BMS への代謝は主として CYP3A4 を介して行われ (Km = 2.53 ± 0.34 μm) CYP3A5(Km = 9.14 ± 0.59 μm) もわずかながら寄与することが示された ( 薬物動態試験概要表 Table C CTD ) また CYP2C8 は BMS ( ヒト試料中で未検出の代謝物 ) の生成に寄与する主酵素であることが明らかになった なお これらの試験において CYP2C9 は BMS の生成を触媒せず スルファフェナゾールによる阻害は認めらなかった 5.2 In vivoでの代謝マウス ラット ウサギ イヌ サル及びヒトに [ 14 C] ダクラタスビルを単回経口投与し ダクラタスビルの代謝を検討した 各動物種及びヒトで検出された代謝物とその化学構造式を薬物動態試験概要表の Table に示す マウス雄性 rash2 マウスに [ 14 C] ダクラタスビルを 50 mg/kg の用量で単回経口投与し ダクラタスビルの代謝を検討した ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) 投与後 1 及び 4 時間に採血して得られた血漿 並びに投与後 168 時間までの蓄尿及び糞便を放射能測定及び LC-MS/MS 法で分析し 代謝物を調べた 全体として マウスで 11 種類の酸化物が生成した その他にいくつかの小さな放射能ピークが認められたものの 同定には至らなかった 投与後 1 及び 4 時間の血漿中の主たる放射性物質は未変化体で 血漿中放射能の 75%~90% を占めた BMS 及び BMS が血漿中に検出され 血漿中放射能のそれぞれ 1.6%~4.0% 及び 2.1%~3.2% であった BMS の血漿中濃度は 投与後 1 及び 4 時間でそれぞれ 282 及び 352 ng eq./ml であった 他の数多くの微量代謝物も血漿中に検出され 血漿中放射能の 1.5%~6.7% を占めた 投与量の 0.8% 及び 18.4% がそれぞれ尿中及び糞便中に代謝物として回収された 血漿中と同様に 未変化体が尿中及び糞便中の主化合物で それぞれ投与量の 0.4% 及び 34% を占めた 尿中の主代謝物は BMS 及び M9 (BMS の脱カルボキシメチル化体 ) で それぞれ投与量の 0.4% 及び 0.2% 相当であった 糞便中の主代謝物は BMS 及び BMS で それぞれ投与量の 5.9% 及び 7.3% 相当であった 尿中の微量代謝物は BMS 及び BMS 糞便中の微量代謝物は BMS M6( ダクラタスビルの水酸化体 ) 及び M15( ダクラタスビルの一酸化物 ) であった 排泄物中で回収された BMS 及び M9( 二次代謝物 ) の総量は 投与量の 1.4% であった

22 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page ラット雄性 SD ラットに [ 14 C] ダクラタスビルを 30 mg/kg の用量で単回経口投与し ダクラタスビルの代謝を検討した ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) 投与後 1 2 及び 4 時間に採血して得られた血漿 並びに投与後 168 時間までの蓄尿及び糞便を放射能測定及び LC-MS/MS 法で分析し 代謝物を調べた 全体として ラットで 8 種類の酸化物が生成した その他にいくつかの小さな放射能ピークが認められたものの 同定には至らなかった 投与後 1~4 時間の血漿中の主放射性化合物は未変化体で 血漿中放射能の 85%~88% を占めた BMS 及び BMS が血漿中に検出され 血漿中放射能のそれぞれ 2.6%~2.9% 及び 1.9%~3.0% を占めた 血漿中 BMS 濃度は 投与後 1 2 及び 4 時間でそれぞれ 及び 24.0 ng eq./ml であった その他に複数の種類の微量代謝物が血漿中に検出され 血漿中放射能の 0.3%~4.5% を占めた 投与量の 0.6% 及び 27% がそれぞれ尿中及び糞便中に代謝物として回収された 尿中及び糞便中の未変化体は それぞれ投与量の 0.8% 及び 24.5% を占めた BMS M9 及び BMS は 尿中の主代謝物であった BMS が糞便中の主代謝物で 投与量の 9.4% に相当した その他に複数の種類の微量代謝物が糞便中に検出され 投与量の約 2%~4.9% に相当した 排泄物から回収された BMS の総量は 投与量の 2.2% に相当した 雄性 BDC ラットに [ 14 C] ダクラタスビルを 30 mg/kg の用量で単回経口投与し ダクラタスビルの代謝を検討した ( 薬物動態試験概要表 Table B CTD ) 胆汁は投与後 48 時間かけて採取した その結果 投与放射能の 38.5% が胆汁中から回収され 胆汁中の未変化体は投与量の 11.5% 相当であった 胆汁中で最も量の多い代謝物は BMS で 投与量の 10.1% に相当した また 数多くの微量代謝物が検出され その量は投与量の 0.1%~2.5% に相当した ウサギ雌性ニュージーランドホワイトウサギに [ 14 C] ダクラタスビルを 40 mg/kg の用量で単回経口投与し ダクラタスビルの代謝を検討した ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) 投与後 及び 12 時間で採血して得られた血漿 並びに投与後 168 時間かけて採取した糞便を放射能測定及び LC-MS/MS 法で分析し 代謝物を調べた 全体として ウサギで 16 種類の代謝物 (15 種類の酸化物及び 1 種類の水和物 ) が生成した その他にいくつかの小さな放射能ピークが認められたものの 同定には至らなかった 投与後 1 ~12 時間の血漿中の主たる放射性物質は未変化体で 血漿中放射能の 90%~93% を占めた BMS 及び BMS が血漿中に検出され 血漿中放射能のそれぞれ 1.2%~1.9% 及び 0.5%~0.8% であった BMS の血漿中濃度は 投与後 及び 12 時間でそれぞれ 及び 398 ng eq./ml で AUC(0-12 h) 値は 8121 ng eq. h/ml であった 他の数多くの微量代謝物も検出され その量は痕跡程度から血漿中放射能の 1.9% の範囲であった 投与量の 26.2% が代謝物として糞便中から回収された 糞便中の主化合物は未変化体で その量は投与量の 51.9% に相当した そのほかに数多くの微量代謝物が検出され 投与量の 0.6% から 3.6% に相当した 糞便中の BMS 及び M9( 二次代謝物 ) の総量は 投与量の 4.9% であった

23 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page イヌ雄性 BDC イヌに [ 14 C] ダクラタスビルを 50 mg/kg の用量で単回経口投与し ダクラタスビルの代謝を検討した ( 薬物動態試験概要表 Table B CTD ) 投与後 及び 8 時間で採血して得られた血漿 並びに投与後 72 時間かけて採取した尿 胆汁及び糞便を放射能測定及び LC-MS/MS 法で分析し 代謝物を調べた 全体として 10 種類の代謝物 (9 種類の酸化物及び 1 種類のグルクロン酸抱合体 ) が生成した 投与後 1.5~8 時間の血漿中の主たる放射性物質は未変化体で 血漿中放射能の 87.5%~93.9% を占めた BMS が痕跡程度検出された BMS も血漿中に検出され 血漿中放射能の 2.3% とわずかであった 他の微量代謝物も血漿中に検出され その量は痕跡程度から血漿中放射能の 2.9% の範囲であった 投与放射能の 24.5% 8.75% 及び 29.7% がそれぞれ胆汁中 尿中及び糞便中で回収された 胆汁中 尿中及び糞便中の主化合物は未変化体で それぞれ投与量の 12.5% 7.4% 及び 16.6% に相当した その他に複数の種類の微量代謝物が胆汁中 尿中及び糞便中に検出され その量は投与量の 0.1%~6% に相当した 排泄物中に検出された BMS は 投与量の 6% に相当した サル雄性カニクイザルに [ 14 C] ダクラタスビルを 30 mg/kg の用量で単回経口投与し ダクラタスビルの代謝を検討した ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) 投与後 1 4 及び 8 時間で採血して得られた血漿 並びに投与後 168 時間かけて採取した尿及び糞便を放射能測定及び LC-MS/MS 法で分析し 代謝物を調べた 全体として サルで 9 種類の酸化物が生成した その他にいくつかの小さな放射能ピークが認められたものの 同定には至らなかった 投与後 1~8 時間の血漿中の主たる放射性物質は未変化体で 血漿中放射能の74.2%~85.6% を占めた 血漿中の代謝物は2 種類のみであった BMS が主代謝物で 投与後 1 4 及び 8 時間でそれぞれ血漿中放射能の 21.8% 17.8% 及び 14.4% を占めた BMS の血漿中濃度は 投与後 1 4 及び 8 時間でそれぞれ 及び 130 ng eq./ml であった もう一つの代謝物は M12 で 血漿中放射能の最大で 2.1% であった BMS は 血漿中に検出されなかった 投与量のうちの 1.1% 及び 26% が それぞれ尿中及び糞便中から代謝物として回収された 尿中及び糞便中の未変化体は それぞれ投与量の 0.5% 及び 32.3% を占めた 尿中及び糞便中の主代謝物は BMS で それぞれ投与量の 0.7% 及び 16.8% に相当した その他の代謝物は 最大で投与量の 2.2% であった 排泄物中の BMS は 投与量の 17.5% に相当した また 排泄物中の BMS は 投与量の 0.9% に相当した 雄性 BDC カニクイザルに [ 14 C] ダクラタスビルを 100 mg/kg の用量で単回経口投与し ダクラタスビルの代謝を検討した ( 薬物動態試験概要表 Table B CTD ) 胆汁は投与後 72 時間かけて採取した 投与放射能のうちの 14.7% が胆汁中から回収され 胆汁中の未変化体は投与量の 1.4% に相当した 胆汁中では 19 種類の微量代謝物が検出され その量は投与量の 0.1% か

24 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 24 ら 7.2% に相当した BMS は 胆汁中及び糞便中で投与量の 10.5% を占めた ヒト AI 試験で 6 例の健康被験者に [ 14 C] ダクラタスビル 25 mg(106.9 μci) を単回経口投与し ダクラタスビルの代謝を検討した ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) 投与後 及び 12 時間で採血して得られた血漿 投与後 72 時間かけて採取した尿及び 144 時間かけて採取した糞便を放射能測定及び LC-MS/MS 法で分析し 代謝物を調べた 全体として ヒトで 8 種類の代謝物 (7 種類の酸化物及び 1 種類の水和物 ) が生成した 未変化体が投与後 1~12 時間の血漿中の主たる放射性物質で 血漿中放射能の 96.8%~100% を占めた 唯一の血漿中代謝物は BMS で 投与後 1 及び 2 時間でそれぞれ血漿中放射能の 1.4% 及び 2% を占め 投与後 4 8 及び 12 時間では痕跡程度の量であった AI 試験でダクラタスビル 25 mg を単回経口投与したとき ダクラタスビルの AUC 値に対する BMS の AUC 値の割合は約 5% であり また AI 試験でダクラタスビル 60 mg を 1 日 1 回 7 日間反復経口投与したとき ダクラタスビル曝露量に対する BMS 曝露量の割合は 2.80%(AUC 値を基に算出 ) 及び 3.59%(Cmax 値を基に算出 ) であった (CTD ) これらの試験結果から BMS は血中の微量代謝物であり 反復投与後のダクラタスビルに比べて蓄積しないことが示された AI 試験で ヒトにダクラタスビル 25 mg を単回経口投与したとき BMS は定量下限未満であった 一方 AI 試験で ヒトにダクラタスビル 60 mg を 1 日 1 回 7 日間投与したとき BMS のCmax 及び AUC(TAU) 値はそれぞれ 57.4 ng/ml 及び 370 ng h/ml であった 投与量のうちの 0.3% 及び 29.8% が それぞれ尿中及び糞便中から代謝物として回収された 未変化体は糞便中の主化合物で その量は投与量の 52.5% に相当した BMS は糞便中の主代謝物で その量は投与量の 15.2% に相当した その他の代謝物も検出され その量は投与量の 0.9%~4.0% に相当した 排泄物中から回収された BMS は 投与量の 15.4% に相当した BMS は投与量の 4.1% に相当した

25 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 25 6 排泄 ダクラタスビルの消失経路としては 糞便中排泄 代謝 胆汁中排泄及び腸内分泌などの複数 の経路が挙げられる 腎クリアランスは ダクラタスビルの主要な消失経路ではなかった 6.1 マウス雄性 rash2 マウスに [ 14 C] ダクラタスビルを 50 mg/kg の用量で単回経口投与し ダクラタスビルのマスバランスを検討した ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) 投与後 168 時間までの放射能回収率は 92.4% で 尿中で 1.40% 糞便中では 87.4% が回収された 投与後 24 時間以内に投与量の 81%( 総回収率の 88%) が回収された 代謝試験において 投与量の 34% が未変化体として糞便中に検出されたことから ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) 糞中排泄がマウスにおけるダクラタスビルの主要な消失経路であることが示唆された ただし 糞便中のダクラタスビルの一部は未吸収分である可能性がある 腎クリアランスは マウスにおけるダクラタスビルの主要な消失経路ではなかった また 代謝物として投与量の 0.8% 及び 18.4% がそれぞれ尿中及び糞便中に排泄された 合計で投与量の 19.2% が代謝物として回収されたことから 代謝クリアランスは マウスにおけるダクラタスビルの消失に寄与する経路であることが示唆された 6.2 ラット雄性 SD ラットに [ 14 C] ダクラタスビルを 30 mg/kg の用量で単回経口投与し ダクラタスビルのマスバランスを検討した ( 薬物動態試験概要表 Table B CTD ) 投与後 168 時間での放射能回収率は 96.3% で 尿中で 1.55% 糞便中では 91.1% が回収された 放射能の 74.4% が投与後 24 時間以内に糞便中に回収された 代謝試験において 投与量の 24.5% が未変化体として糞便中で回収されたことから ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) 糞便中排泄がラットにおけるダクラタスビルの主要な消失経路であることが示唆された 雄性 BDC ラットに [ 14 C] ダクラタスビルを 30 mg/kg の用量で単回経口投与した結果 投与放射能の 1.22% 38.5% 及び 42.3% がそれぞれ尿中 胆汁中及び糞便中に投与後 48 時間以内に排泄された ( 薬物動態試験概要表 Table CTD ) 投与量の 11.5% 及び 5.3% がダクラタスビルとしてそれぞれ胆汁中及び糞便中で回収された 代謝物は 主として胆汁中及び糞便中にそれぞれ投与量の 21.8% 及び 14.2% が排泄され 尿中には投与量の 0.4% が排泄された ( 薬物動態試験概要表 Table B CTD ) このことから 無処置ラットにおける糞便中放射能回収率 91.1% は 代謝物の胆汁中及び糞便中排泄によるものであることが示唆された 別の試験で BDC ラットに非標識ダクラタスビルを 5 mg/kg の用量で静脈内投与した結果 投与後 24 時間でダクラタスビルは主に胆汁中 ( 投与量の 29.5%) 及び糞便中 ( 投与量の 27.2%) に排泄され 尿中 ( 投与量の 0.49%) にはわずかに排泄された ( 薬物動態試験概要表 Table CTD ) また 投与量の 53% が代謝物 (BMS 及び BMS ) として胆汁中に排泄され 糞便中及び尿中にはそれぞれ投与量の 5.5% 及び 1.65% が排泄された ダクラタスビル

26 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 26 静脈内投与後の BDC ラットの腸管内にダクラタスビルが存在したことから P-gp 又は他のトランスポーターによる能動的な腸管への汲み出しの関与が示唆された 要約すると ラットにおいて ダクラタスビルは糞便中排泄 腸内分泌及び代謝 ( 代謝物の胆汁中及び糞便中排泄 ) により消失した 腎クリアランスは ラットにおけるダクラタスビルの主要な消失経路ではなかった 6.3 ウサギ雌性ニュージーランドホワイトウサギに [ 14 C] ダクラタスビルを 40 mg/kg の用量で単回経口投与し ダクラタスビルのマスバランスを検討した ( 薬物動態試験概要表 Table C CTD ) 投与後 168 時間での放射能回収率は 92.4% で 尿中で 0.73% 糞便中では 91.6% が回収された 投与後 48 時間以内に投与放射能の 81.4% が回収された 代謝試験において 投与量の 51.9% が未変化体として糞便中に検出されたことから ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) 糞便中のダクラタスビルの一部は未吸収分である可能性があるものの 糞便中排泄がウサギにおけるダクラタスビルの主要な消失経路であることが示唆された また 投与量の 26.2% の代謝物が糞便中に検出されたことから 代謝クリアランスは ウサギにおけるダクラタスビルの消失に寄与する経路であることが示唆された 腎クリアランスは ダクラタスビルの主要な消失経路ではなかった 6.4 イヌ雄性 BDC イヌに [ 14 C] ダクラタスビルを 50 mg/kg の用量で単回経口投与した結果 投与放射能の 24.5% 29.7% 及び 8.75% がそれぞれ胆汁中 糞便中及び尿中に投与後 72 時間で排泄された ( 薬物動態試験概要表 Table CTD ) 投与量の 12.5% 16.6% 及び 7.4% が未変化体としてそれぞれ胆汁中 糞便中及び尿中に排泄されたことから 胆汁中及び糞便中排泄がイヌにおけるダクラタスビルの主要な消失経路であることが示唆された また 代謝物として投与量の 7.5% 8.5% 及び 0.7% がそれぞれ胆汁中 糞便中及び尿中に排泄された 合計で投与量の 16.7% が代謝物として排泄されたことから 代謝クリアランスは イヌにおけるダクラタスビルの消失に寄与する経路であることが示唆された ( 薬物動態試験概要表 Table B CTD ) 別の試験で BDC イヌに非標識ダクラタスビルを 1 mg/kg の用量で静脈内投与した結果 投与後 72 時間でダクラタスビルは主に胆汁中 ( 投与量の 11.4%) 及び糞便中 ( 投与量の 8.05%) に排泄され 尿中 ( 投与量の 0.26%) にはほとんど排泄されなかった ( 薬物動態試験概要表 Table CTD ) また 代謝物の BMS として 投与量の 44% が胆汁中に排泄され 糞便中及び尿中にはそれぞれ投与量の 5.8% 及び 0.57% が排泄された ダクラタスビル静脈内投与後の BDC イヌの腸管内にダクラタスビルとその代謝物が存在したことから P-gp 又は他のトランスポーターによる能動的な腸管への汲み出しの関与が示唆された 要約すると イヌにおいて ダクラタスビルは糞便中排泄 胆汁中排泄 腸内分泌及び代謝 ( 代謝物の胆汁中及び糞便中排泄 ) により消失した 腎クリアランスは イヌにおけるダクラタスビルの主要な消失経路ではなかった

27 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page サル雄性カニクイザルに [ 14 C] ダクラタスビルを 30 mg/kg の用量で単回経口投与し ダクラタスビルのマスバランスを検討した ( 薬物動態試験概要表 Table D CTD ) 投与後 168 時間での投与放射能の回収率は 90.5% で 尿中で 1.35% 糞便中で 69.4% 及びケージ残渣では 19.5% が回収された 投与後 24 時間以内に放射能の 20.1% 投与後 48 時間以内には放射能の 58.9% が回収された 代謝試験において 投与量の 32.3% が未変化体として糞便中に検出されたことから ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) ラットと同様に 糞便中排泄がサルにおける主要な消失経路であることが示唆された ただし 糞便中のダクラタスビルの一部は未吸収分である可能性がある また 代謝物として投与量の 1.1% 及び 26% がそれぞれ尿中及び糞便中に排泄された 合計で投与量の 27.1% が代謝物として排泄されたことから 代謝クリアランスは サルにおけるダクラタスビルの消失に寄与する経路であることが示唆された 雄性 BDC サルに [ 14 C] ダクラタスビルを 100 mg/kg の用量で単回経口投与した結果 投与後 72 時間までに投与放射能の 4.53% 14.7% 及び 52.5% がそれぞれ尿中 胆汁中及び糞便中に排泄された ( 薬物動態試験概要表 Table CTD ) 投与量の 0.1% 1.4% 及び 12.3% がそれぞれ尿中 胆汁中及び糞便中に未変化体として排泄された また 投与量の 3.3% 11.7% 及び 17.9% がそれぞれ尿中 胆汁中及び糞便中に代謝物として排泄された 合計で投与量の 32.9% が代謝物として排泄されたことから 上記のカニクイザルの試験と同様に 代謝クリアランスはサルにおけるダクラタスビルの消失に寄与する経路であることが示唆された ( 薬物動態試験概要表 Table B CTD ) なお BDC サルの糞便中放射能回収率 52.5% は [ 14 C] ダクラタスビルの不完全吸収 [ 無処置サルの経口バイオアベイラビリティ :38%( 薬物動態試験概要表 Table D CTD )] 又はその代謝物の腸内分泌に起因する可能性がある 別の試験で 雄性 BDC サルに非標識ダクラタスビルを 1 mg/kg の用量で静脈内投与した結果 未変化体として投与量の 6.9% 1.9% 及び 0.11% がそれぞれ胆汁中 糞便中及び尿中に排泄された ( 薬物動態試験概要表 Table CTD ) 代謝物は主に胆汁中に排泄され ( 投与量の 58.1%) 糞便中及び尿中にはそれぞれ投与量の 10.5% 及び 1.86% が排泄された ダクラタスビル静脈内投与後の BDC サルの腸管内にダクラタスビルとその代謝物が存在したことから P-gp 又は他のトランスポーターによる能動的な腸管への汲み出しの関与が示唆された 要約すると サルにおいて ダクラタスビルは主に糞便中排泄及び代謝 ( 代謝物の胆汁中排泄 ) により消失した サルにおける薬物関連物質の消失速度は ラットのそれよりも遅かった 腎クリアランスは ダクラタスビルの主要な消失経路ではなかった 6.6 ヒト AI 試験で 6 例の健康被験者に [ 14 C] ダクラタスビル 25 mg を単回経口投与し ダクラタスビルのマスバランスを検討した ( 薬物動態試験概要表 Table E CTD ) 投与放射能の回収率は投与後 240 時間で 94.24%( 尿中 6.60% 糞便中 87.63%) で 投与後 24 時間以内に投与放射能の 14.2% 投与後 72 時間以内に 77% 投与後 120 時間以内には 93% が回収された 投与量の 52.5% が未変化体として糞便中に検出されたことから ( 薬物動態試験概要表 Table

28 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page A CTD ) ラット及びサルと同様に ヒトにおいて 糞便中排泄がダクラタスビルの主要な消失経路であることが示唆された ダクラタスビルがラット及びサルの胆汁中に検出されたことから ヒトでもダクラタスビルの胆汁中排泄が起こる可能性があり また ヒト糞便中に検出されたダクラタスビルは 体内に吸収後排泄されたダクラタスビルと体内に吸収されなかったダクラタスビルとが合わさったものである可能性がある 要約すると ヒトにおいて ダクラタスビルは糞便中排泄及び代謝 ( 代謝物の糞便中排泄 ) により消失した

29 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 29 7 薬物動態学的薬物相互作用 In vitro において ダクラタスビルが各種の CYP 酵素及びトランスポーターの基質 誘導剤又は阻害剤であるかを評価した その結果 CYP3A4 がダクラタスビルの代謝を担う主酵素であることが確認された ( 薬物動態試験概要表 Table C CTD ) BMS ( ヒト血漿中に検出された唯一の代謝物かつヒト排泄物中で最も量の多い代謝物 ) は CYP3A5(Km = 9.14 ± 0.59 μm) によりわずかながら生成したが 主として CYP3A4(Km = 2.53 ± 0.34 μm) により生成した ( 薬物動態試験概要表 Table C CTD ) ダクラタスビルは P-gp の基質であるが BCRP MRP2 OATP1B1 OATP1B3 及び OATP2B1 の基質ではなかった ( 薬物動態試験概要表 Table B Table G H 及び F CTD CTD CTD 及び CTD ) したがって ダクラタスビルと CYP3A 及び P-gp の阻害剤又は誘導剤を併用投与すると 薬物相互作用が起こる可能性がある In vitro において ダクラタスビル ( 濃度 50 μm) はヒトプレグナン X 受容体を活性化させた [ 陽性対照のリファンピシン ( 濃度 10 μm) で引き起こされたトランス活性化の 13.6% 相当 ]( 薬物動態試験概要表 Table C CTD ) ヒト肝細胞において ダクラタスビルは CYP1A2 を誘導しなかったが CYP3A4 及び CYP2B6 の mrna レベルを用量に依存して増加させた ( 薬物動態試験概要表 Table D CTD 及び CTD ) FDA の薬物相互作用に関するガイダンス ( 案 ) 3) で説明されているベーシックモデル (CYP3A4 及び CYP2B6 の解析 ) 及びメカニスティックスタティックモデル (CYP2B6 の解析 ) を用いてこれらデータを解析した結果 ダクラタスビルは CYP3A4 の誘導剤であったが CYP2B6 の阻害剤ではなかった (CTD )

30 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 30 In vitro において ダクラタスビルが各種の CYP 酵素及びトランスポーターの基質 誘導剤又 は阻害剤であるかを評価した試験結果を表 7-1 に示す 表 7-1 In vitro における薬物代謝酵素及びトランスポーターの阻害剤としてのダクラタ スビルの評価の要約 酵素 / トランスポーター IC 50 (μm) 備考 CYP3A 11, 31.8 ヒト肝ミクロソームを用いた試験データ ダクラタスビルは 可逆的かつ時間依存的な CYP3A 阻害作用を有する CYP1A2, CYP2B6, CYP2C8, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6 > 40 ヒト肝ミクロソームを用いた試験データ UGT1A ジゴキシントランスポーター 4.4 Caco-2 細胞を用いた試験データ P-gp > 7 濃度 7 μm での阻害率は 18.7% であった BCRP 10.9 ± 8.6 MRP2 32 ± 7.7 OATP1B1 2.3 OATP1B3 5.7 ± 1.3 OATP2B ± 4.0 NTCP 濃度 16 μm まで NTCP を阻害せず OAT1 > 8 最高試験濃度 8 μm での阻害率は 27.9% であった OAT3 > 8 最高試験濃度 8 μm での阻害率は 25.8% であった OCT1 1.4 OCT2 7.3 BSEP 6.39 出典 :CTD CTD CTD CTD CTD CTD CTD CTD CTD CTD 遺伝子組換え CYP 酵素及び蛍光プローブを用いた予備試験で ダクラタスビルは CYP2C9 及び CYP3A の阻害剤であることが示され IC 50 値はそれぞれ 16.1 μm 及び 7.9~14.8 μm であった ( 薬物動態試験概要表 Table A CTD ) ヒト肝ミクロソームを用いた最終試験において ダクラタスビルは CYP3A を阻害し ミダゾラム及びテストステロンを基質としたときの IC 50 値は それぞれ 31.8 及び 11.0 μm であった その他の CYP 酵素 CYP1A2 CYP2B6 CYP2C8 CYP2C9 CYP2C19 及び CYP2D6 の IC 50 値は 40 μm を上回った ( 薬物動態試験概要表 Table B CTD ) また ヒト肝ミクロソームとダクラタスビルを 30 分間プレインキュベートすると IC 50 値は 31.8 μm( 指標反応 : ミダゾラム 1'- 水酸化 ) から 13.5 μm 及び 11.0 μm ( 指標反応 : テストステロン 6β- 水酸化 ) から 8.9 μm に変わったことから ダクラタスビルは CYP3A を時間依存的に阻害することが示された さらに ダクラタスビルはヒト肝ミクロソームの UGT1A1 を阻害し IC 50 値は 12.7 μm であった ( 薬物動態試験概要表 Table E CTD ) ダクラタスビルは Caco-2 細胞におけるジゴキシン輸送を阻害し MDR1 発現 MDCK 細胞における P-gp を阻害したことから ( 薬物動態試験概要表 Table I 及び Table J CTD

31 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 及び CTD ) ダクラタスビルが P-gp の基質である化合物の吸収及び分布を変化させる可能性がある また ダクラタスビルは 吸収 分布及び排泄に関与する各種トランスポーター BCRP MRP2 OATP2B1 OATP1B1 OATP1B3 OCT1 OCT2 OAT1 OAT3 及び BSEP を阻害した ( 薬物動態試験概要表 Table K Table L Table M Table N Table O Table P 及び Table Q CTD CTD CTD CTD CTD CTD 及び CTD ) NTCP の阻害は認められなかった ( 薬物動態試験概要表 Table Q CTD ) FDA の薬物相互作用に関するガイダンス ( 案 ) 3) 及び International Transporter Consortium の白書 4) に基づくと IC 50 値に対する遊離型ダクラタスビルの Cmax 値の比が 0.1 未満であるため ダクラタスビルと OAT1 OAT3 OCT1 及び OCT2 の基質との相互作用は生じないものと考えられる なお AI 試験で HCV 患者にダクラタスビル 60 mg を反復投与したときの総ダクラタスビル ( 結合型 + 遊離型 ) の Cmax 値 2.34 μm(1.73 μg/ml) を評価で使用した しかしながら P-gp BCRP OATP1B1 OATP1B3 及び BSEP に関しては IC 50 値に対する遊離型ダクラタスビルの Cmax 値の比が 0.1 以上であるため ダクラタスビルとこれらトランスポーターの基質との相互作用は起こる可能性がある OATP2B1 及び NTCP の基質との相互作用は起こらないと考えられる 吸収相では薬物濃度が高いため P-gp 又は BCRP の基質との薬物相互作用は起こる可能性がある

32 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 32 8 考察及び結論マウス ラット イヌ及びサルにおけるダクラタスビルの経口吸収は速やかで サルを除いたマウス ラット及びイヌにおける絶対バイオアベイラビリティは 50% 以上と高かった また ヒトにおける絶対バイオアベイラビリティは 67% と良好であった In vitro 及び in vivo 試験データから ダクラタスビルは P-gp の基質であることが示された ダクラタスビルは P-gp の基質であるものの ダクラタスビルの経口吸収は 試験した用量及び大部分の動物種において良好であった イヌにおけるダクラタスビルの吸収は ph に依存しており ヒトへのファモチジン投与によりダクラタスビルの Cmax 値及び AUC(INF) 値がそれぞれ 44% 及び 18% 低下した試験結果 (AI 試験 ) 並びにヒトへのオメプラゾール投与によりダクラタスビルの Cmax 値及び AUC(INF) 値がそれぞれ 20%~36% 及び 16% 低下した試験結果 (AI 試験 ) と一致した ダクラタスビルは ヒト (60 mg 反復経口投与後の T-HALF = 14 時間 ) よりもマウス ラット イヌ及びサル (T-HALF = 1.1~4.7 時間 ) で速やかに消失した 肝細胞におけるダクラタスビルの代謝速度はマウス イヌ及びサルよりもヒトで遅かったことから ヒトにおけるダクラタスビルの長い消失半減期は 遅い代謝速度が原因である可能性がある ダクラタスビルの血清蛋白結合率は すべての動物種及びヒトで同程度であり 95.1%~99.5% の範囲であった ダクラタスビル ( 濃度 0.1~10 μm) の in vitro ヒト血漿蛋白結合率は 97.7%~ 98.0% で 濃度に依存しなかった 濃度 1 μm(0.739 μg/ml) は HCV 感染患者にダクラタスビル 60 mg を反復投与したときの Cmax 値 2.34 μm(1.73 μg/ml) に最も近いことから 濃度 1 μm (0.739 μg/ml) のダクラタスビルのヒト血漿蛋白結合率 (98.0 ± 0.1%) が ダクラタスビルのヒト血漿蛋白結合率の代表値であると判断された したがって 蛋白結合の違いによるダクラタスビルの体内動態の種差はないと考えられた ダクラタスビル ( 濃度 0.1~10 μm) の in vitro ヒト血漿蛋白結合率 (97.7%~98.0%) 又は ex vivo ヒト血漿蛋白結合率 (98.9%~99.3%) に比べて ダクラタスビル ( 濃度 10 μm) の in vitro ヒト血清蛋白結合率 (95.6%) は低かったが 実験上のばらつきに起因する可能性がある AI 試験において ダクラタスビルの ex vivo 血漿蛋白結合率は 健康被験者と HCV 感染患者で同程度であり 血漿試料中のダクラタスビル濃度の違いによる影響を受けなかった ダクラタスビルの血漿中濃度に対する血液中濃度は ヒトで 0.77 ~0.82 各種試験動物では 0.56~1.08 であったことから 血液中のダクラタスビルは優先的に血漿中に分布することが示唆された マウス ラット イヌ及びサルにおいて ダクラタスビルの Vss 値は全身水分量よりも大きかったことから ダクラタスビルは血管外に分布することが示唆された 雌雄ラットに [ 14 C] ダクラタスビルを単回及び反復経口投与したとき 放射性物質 ( ダクラタスビルとその代謝物 ) は 組織中に速やかに また広範に分布し 血漿中濃度に対する組織中濃度の比は多数の組織で 1 を上回った 血漿中濃度に対する肝臓中濃度の比は 単回及び反復投与後でそれぞれ 5~14 及び 5~21 であった マウス及びラット脳への放射能の移行はわずかであったことから P-gp はダクラタスビルとその代謝物の脳への移行を抑制する役割を担うものと考えられる なお [ 14 C] ダクラタスビルの反復投与後に 放射能の蓄積は認められなかった Long-Evans ラットの有色皮膚及び眼ブドウ膜からの [ 14 C] ダクラタスビルの消失速度は SD ラットに比べて遅かった 放射能濃度は投与後

33 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 時間まで測定可能であったことから 組織に含まれるメラニンに対する [ 14 C] ダクラタスビル由来放射能の特異的で可逆的な結合が示唆され これはダクラタスビルの塩基性及び親油性の性質に起因する可能性がある このような物理化学的諸性質が 有色ラットにおける薬物とメラニンの結合に関与することが文献 5) で報告されているが 薬物とメラニンの結合と有害作用との間 に直接的な因果関係はなく 薬物とメラニンの結合は眼毒性との関連性がないことが文献 6) で報 告されており ダクラタスビルの単回経口投与光毒性試験では Long-Evans ラットの眼及び皮膚に光毒性は認められなかった (CTD ) 妊娠ラットに [ 14 C] ダクラタスビルを経口投与した結果 放射能は投与後 4 時間で胎児の肝臓のみに検出された この試験結果から わずかな量のダクラタスビルとその代謝物が胎盤を通過することが示唆された 授乳中のラットに [ 14 C] ダクラタスビルを経口投与した結果 血漿中放射能に対する乳汁中放射能の AUC 比は 1.55 であったことから ダクラタスビルとその代謝物はラット乳汁中に移行することが示された この試験結果から ダクラタスビルの投与を受けている女性から授乳中の乳児は ダクラタスビルとその代謝物に曝露される可能性があることが示唆された ダクラタスビルは 多様な酸化物に代謝される しかしながら ヒトにおいては 酸化物の BMS が血漿中に検出された唯一の代謝物であった この代謝物は主として CYP3A4 により生成された ヒトに特有の代謝物は認められなかった In vitro 又は in vivo において ダクラタスビルの GSH 付加体は検出されなかったことから 活性代謝物は生成しないと考えられる ラット イヌ サル及びヒトのミクロソーム蛋白と放射性物質のわずかな不可逆的結合が確認された 無処置動物 ( マウス ラット ウサギ サル ) 及び BDC 動物 ( ラット イヌ サル ) において それぞれ投与量の 19%~28% 及び 17%~36% が代謝物として回収された 未変化体が動物血漿中の主化合物で 血漿中放射能の 74%~94% を占めた ヒトにおいて 代謝物として回収されたダクラタスビルは投与量の 30.1% を占め 動物のそれと同程度であり 未変化体が血漿中の主化合物で 血漿中放射能の 97%~100% を占めた BMS はヒト血漿中に検出された唯一の代謝物で 血漿中放射能の 2% と微量であった AI 試験でヒトにダクラタスビルを単回投与したとき 未変化体の AUC に対する代謝物 BMS の AUC の割合は約 5% であり また AI 試験でダクラタスビルを反復投与したときには 5% 未満であったことから BMS は蓄積しないことが示された 動物に [ 14 C] ダクラタスビルを単回経口投与したとき BMS はサル血漿中の主代謝物で 血漿中放射能の 14%~22% を占めたが マウス ラット及びウサギ血漿中では BMS は微量代謝物で それぞれ血漿中放射能の 1.6%~4% 2.6%~2.9% 及び 1.2%~1.9% を占めた イヌにおいて BMS は放射能検出法により定量できなかった ( 質量分析法でのみ検出可能 ) 各種動物に[ 14 C] ダクラタスビルを単回経口投与したときの血漿中 BMS 濃度に基づくと BMS はマウス ラット ウサギ及びサルの血漿中に安全性を評価する上で十分な量存在した また 反復経口投与毒性試験結果に基づくと BMS はイヌ血漿中に安全性を評価する上で十分な量存在した さらに 反復経口投与毒性試験から ヒト血漿中では定量下限未満の代謝物である BMS が サル血漿中濃度よりも高い濃度でイヌ血漿中に存在することが示された すなわち BMS のヒト血漿中濃度は イヌより

34 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 34 もサルの血漿中濃度と同程度であった このことから 当初はイヌが毒性試験の非げっ歯類動物種として選択されたが その後実施された長期投与試験ではサルが選択された ヒト及び動物における代謝物曝露量の詳細な比較検討は 毒性試験の概要文 (CTD 2.6.6) に記載した サル及びヒトにおける代謝の大部分が BMS への代謝であり BMS はサル及びヒトの排泄物中でそれぞれ投与量の 17.5% 及び 15.4% を占めたが マウス及びラットでは比較的少なく マウス及びラットの排泄物中でそれぞれ投与量の 1.2% 及び 2.2% を占めた BMS はサル及びヒトで比較的少ない量の代謝物であったが マウス及びラットでは主要な代謝物であり 排泄物中で投与量の 7.4%~9.8% を占めた ダクラタスビルの消失経路として 糞便中排泄 代謝クリアランス 胆汁クリアランス 腸内分泌及び腎クリアランスが挙げられる ダクラタスビルの糞便中排泄は 動物 ( マウス ラット ウサギ及びサルでそれぞれ投与量の 34% 24.5% 51.9% 及び 32.3%) よりもヒト ( 投与量の 52.5%) で多かった ダクラタスビルの代謝クリアランスは ヒト ( 投与量の 30.1%) と動物 ( 投与量の 19.2%~27.5%) で同程度であった また 胆汁クリアランスはダクラタスビルとその代謝物の主要な消失経路で BDC ラット BDC イヌ及び BDC サルの胆汁中に投与量の相当部分が未変化体 ( それぞれ投与量の 11.5% 12.5% 及び 1.4%) 及び代謝物 ( それぞれ投与量の 21.8% 7.5% 及び 11.7%) として排泄された ダクラタスビルはラット イヌ及びサルの胆汁中に検出されたため ヒトでもダクラタスビルの胆汁中排泄が起こる可能性がある BDC ラット BDC イヌ及び BDC サルにダクラタスビルを静脈内投与したとき 投与量の 27.2% 8.05% 及び 1.9% が未変化体として糞便中に排泄されたことから ダクラタスビルの腸内分泌は P-gp 又は他のトランスポーターに起因することが示唆された したがって 糞便中のダクラタスビルは 不完全な吸収のみならず胆汁中排泄及び腸内分泌が原因である可能性がある 尿中から未変化体として回収された量は 動物で投与量の 0.73%~1.55% ヒトでは 6.60% であったことから 腎クリアランスはダクラタスビルのマイナーな消失経路であることが示された ダクラタスビルは各種の代謝酵素及びトランスポーターの基質であった ダクラタスビルは P-gp の基質であるが BCRP MRP2 OATP1B1 OATP1B3 又は OATP2B1 の基質ではない したがって ダクラタスビルと P-gp の阻害剤又は誘導剤との併用投与は薬物相互作用の原因となる可能性がある ダクラタスビル ( ヒトで投与量の約 30%) の消失が代謝クリアランスに依存することは 他の薬剤によるダクラタスビル代謝の変化が薬物相互作用につながる可能性を高める いくつもの代謝経路がダクラタスビルの代謝に関与するものの CYP3A4 がダクラタスビルの代謝に関与する主たる酵素であることが示された これらは臨床試験にて確認された すなわち (i) ケトコナゾール (CYP3A4 及び P-gp の強力な阻害剤 ) を投与した健康被験者において ダクラタスビルの Cmax 値及び AUC 値はそれぞれ 1.57 及び 2.95 倍に増加し (AI 試験 ) (ii) リファンピシン (CYP3A4 及び P-gp の強力な誘導剤 ) を投与した被験者において ダクラタスビルの Cmax 値及び AUC 値はそれぞれ 56% 及び 79% 低下し (AI 試験 ) また エファビレンツ (CYP3A4 及び P-gp の誘導剤 ) を投与した被験者において ダクラタスビルの Cmax 値及び AUC 値はそれぞれ 17% 及び 32% 低下した (AI 試験 ) ダクラタスビルは CYP3A に対して弱い阻害作用を有し テストステロン及びミダゾラムを基

35 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 35 質としたときの IC 50 値は 11 及び 31.8 μm であった 肝細胞を用いた誘導試験データ及びベーシック又はメカニスティックスタティックモデルに基づくと ダクラタスビルは CYP3A4 の誘導剤であったが CYP1A2 及び CYP2B6 の誘導剤ではなかった AI 試験において ダクラタスビル ( 反復投与 ) と CYP3A の高親和性基質であるミダゾラム ( 経口投与 ) との間で薬物相互作用は生じなかったことから ダクラタスビルは CYP3A を介した相互作用により CYP3A 基質の曝露量に影響を及ぼさないことが示唆された なお 臨床試験において 高ビリルビン血症 [ 総ビリルビン又は間接ビリルビン (UGT1A1 基質 ) の上昇 ] とダクラタスビル曝露量との間に明確な相関性が認められなかったため ダクラタスビルによる UGT1A1 の in vitro 阻害は in vivo ではみられなかった In vitro において ダクラタスビルは Caco-2 細胞におけるジゴキシン輸送 (IC 50 = 4.4 μm) 及び MDR1 発現 MDCK 細胞における P-gp(IC 50 > 7 μm) を阻害した ダクラタスビルは 薬物の吸収 分布及び排泄に関与するいくつかのトランスポーターを阻害した 総ダクラタスビル ( 結合型ダクラタスビル+ 遊離型ダクラタスビル ) の曝露量又は遊離型ダクラタスビルの曝露量と IC 50 値との比較から ダクラタスビルは P-gp BCRP OATP1B1 OATP1B3 及び BSEP の基質との薬物相互作用を引き起こすと予測された 一方 ダクラタスビルは NTCP OATP2B1 OAT1 OAT3 OCT1 及び OCT2 の基質との薬物相互作用を引き起こさないと予測された ヒトでの薬物相互作用試験 (AI 試験 ) において P-gp の高親和性基質であるジゴキシンの曝露量に及ぼすダクラタスビルの影響は 軽度から中程度 [AUC(TAU): 1.27 倍増加 Cmax: 1.65 倍増加 ] であった また 別の薬物相互作用試験 (AI 試験 ) において OATP1B1 OATP1B3 及び BCRP 基質のロスバスタチンの曝露量に及ぼすダクラタスビルの影響は 軽度 [ AUC(INF): 1.58 倍増加 Cmax: 2.04 倍増加 ] であった AI 試験で 健康被験者にダクラタスビルとアスナプレビル (OATP の基質 ) を併用投与したところ アスナプレビルの曝露量に及ぼすダクラタスビルの影響はわずかであったが AI 試験で 健康被験者にリファンピシン (OATP 阻害剤 ) とアスナプレビルを併用投与したところ アスナプレビルの曝露量は増加した (Cmax: 21.1 倍増加 AUC: 14.8 倍増加 ) これらのデータに基づくと P-gp BCRP 又は OATP の他の基質の PK に及ぼすダクラタスビルの影響は 臨床上わずかであると予測された ダクラタスビルは アスナプレビルと併用投与される ヒトにおいて ダクラタスビルは主に CYP3A4 を介した代謝により消失する In vitro において ダクラタスビルは P-gp の基質 CYP3A の誘導剤かつ阻害剤 P-gp BCRP 及び OATP の阻害剤である 同様に アスナプレビルはヒトで主に CYP3A を介した代謝により消失し P-gp 及び OATP の基質かつ阻害剤であり CYP3A の誘導剤かつ阻害剤である これらのデータから ダクラタスビルとアスナプレビルを併用投与した場合 薬物相互作用が起こる可能性が示唆された しかしながら 臨床試験において ダクラタスビル (AI 試験 :1 日 1 回 30 mg AI 試験 :1 日 1 回 60 mg) とアスナプレビル (AI 及び AI 試験 :1 日 2 回 200 mg) を併用投与した結果 健康被験者及び HCV 感染患者に臨床的意義のある薬物相互作用が認められなかった 要約すると 動物において ダクラタスビルは十分に吸収され 経口で生物学的に利用可能であり 体内に広範に分布した ダクラタスビルの消失には 酸化的代謝 胆汁クリアランス 糞

36 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 36 便中排泄及び腸内分泌などの複数の経路が関与する ヒトに特有の代謝物は認められなかった 動物及びヒトにおいて ダクラタスビルが血漿中の主化合物であった In vitro データに基づくと トランスポーターを介した薬物相互作用や CYP3A 及び P-gp の阻害剤又は誘導剤との薬物相互作用が予測されたものの ヒトでの薬物相互作用試験では軽度の薬物相互作用のみが観察された

37 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験の概要文 Page 37 9 参考文献 1) 2) 3) 4) 5) 6) Davies B, Morris T. Physiological parameters in laboratory animals and humans. Pharm Res 1993; 10: Marino A M, Yarde M, Patel H, et al. Validation of the 96 well Caco-2 cell culture model for high throughput permeability assessment of discovery compounds. Intl J Pharmaceut 2005; 297: FDA Guidance for industry: Drug interaction studies- Study design, data analysis, implications for dosing, and labeling recommendations. Draft Guidance, February Giacomini et al. Membrane transporters in drug development. Nature Reviews. 2010; 9: Zane PA, Brindle SD, Gause DO et al., Physicochemical factors associated with binding and retention of compounds in ocular melanin of rats: correlation using data from whole-body autoradiography and molecular modeling for multiple linear regression analyses. Pharmaceutical Research, 1990; 7: Leblanc B, Jezequel S, et al., Binding of drugs to eye melanin is not predictive of ocular toxicity. Regulatory Toxicology and Pharmacology, 1998; 28:

38 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験概要表 Page 1 CTD 第 2 部 2.6 非臨床試験の概要文及び概要表 薬物動態試験概要表 ブリストル マイヤーズ株式会社

39 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験概要表 Page 2 目次 1 薬物動態試験 : 一覧表 分析方法及びバリデーション試験 薬物動態試験 : 単回投与後の吸収 薬物動態試験 : 反復投与後の吸収 薬物動態試験 : 分布 薬物動態試験 : 蛋白結合 薬物動態試験 : 妊娠又は授乳動物における試験 薬物動態試験 : その他の分布試験 薬物動態試験 :In vivo での代謝 薬物動態試験 :In vitro での代謝 薬物動態試験 : 推定代謝経路 薬物動態試験 : 薬物代謝酵素の誘導 / 阻害 薬物動態試験 : 累積排泄 薬物動態試験 : 胆汁中排泄 薬物動態試験 : 薬物相互作用 薬物動態試験 : その他... 88

40 ダクラタスビル塩酸塩 薬物動態試験概要表 Page 3 1 薬物動態試験 : 一覧表 Table : Type of Study Pharmacokinetics: Overview Test System Method of Administration Testing Facility Test Article: Daclatasvir Study Number / DCN Location Absorption Single-dose PK Mouse IV, oral BMS NA / CTD Single-dose PK Rat IV, oral, intraportal BMS NA / CTD Single-dose PK Dog IV, oral BMS NA / CTD Single-dose PK Monkey IV, oral BMS NA / CTD Membrane permeability PAMPA, Caco-2 cells NA BMS NA / CTD Human BCRP substrate MDCK cells NA BMS NA/ CTD Human MRP2 substrate Membrane vesicles from SF-9 cells NA BMS NCPK 22 / CTD Distribution In vitro serum protein binding Mouse, rat, rabbit, dog, monkey, and human NA BMS NA / CTD In vitro plasma protein binding Human NA NCPK 52 / CTD Blood cell partitioning Mouse, rat, dog, monkey, and human NA BMS NA / CTD Tissue distribution (Single dose), QWBA Rat (male) Oral 20N-0711 / CTD Tissue distribution(single and multiple doses), QWBA Rat (male and female) Oral NCPK 26/ CTD Tissue distribution, QWBA Pregnant rat Oral NCPK 26/ CTD Organ distribution, Mouse IV, oral BMS NA / CTD Organ distribution Rat IV, oral BMS NA / CTD Organ distribution Dog Oral BMS NA / CTD Organ distribution Monkey Oral BMS DM07005 / CTD Distribution into milk Rat Oral NCPK 26/ CTD Placental transfer Rat Oral NCPK 26/ CTD Hepatocyte uptake Rat hepatocytes NA BMS NA / CTD Hepatocyte uptake Cryopreserved human hepatocytes NA BMS NCPK 24/ CTD OATP1B1, 1B3, and 2B1 substrate HEK-293 cells NA BMS NCPK 23 / CTD