メキニスト錠 0.5mg メキニスト錠 2mg 製造販売承認申請書添付資料 第 2 部 ( モジュール 2)CTD の概要 ( サマリー ) 2.6. 非臨床試験の概要文及び概要表 薬物動態試験の概要文 薬物動態試験概要表 ノバルティスファーマ株式会社

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1 メキニスト錠 0.5mg メキニスト錠 2mg 製造販売承認申請書添付資料 第 2 部 ( モジュール 2)CTD の概要 ( サマリー ) 2.6. 非臨床試験の概要文及び概要表 薬物動態試験の概要文 薬物動態試験概要表 ノバルティスファーマ株式会社

2 非臨床概要薬物動態試験の目次 項目 - 頁 薬物動態試験の概要文 p まとめ p 分析法 p 吸収 p 分布 p 代謝 p 排泄 p 薬物動態学的薬物相互作用 p その他の薬物動態試験 p 考察及び結論 p 図表 p 参考文献 p 薬物動態試験概要表 p 薬物動態試験 : 一覧表 p 分析法及びバリデーション試験 p 薬物動態試験 : 単回投与後の吸収 p 薬物動態試験 : 反復投与後の吸収 p 薬物動態試験 : 分布 p 薬物動態試験 : 蛋白結合 p 薬物動態試験 : 妊娠または授乳動物における試験 p 薬物動態試験 : その他の分布試験 p 薬物動態試験 :In Vivo における代謝 p 薬物動態試験 :In vitro における代謝 p 推定代謝経路 p 薬物動態試験 : 薬物代謝酵素の誘導 / 阻害 p 薬物動態試験 : 累積排泄 p 薬物動態試験 : 胆汁中排泄 p 薬物動態試験 : 薬物動態学的薬物相互作用 p 薬物動態試験 : その他 p. 50

3 2.6.4 及び の略号等一覧 略語 ( 略称 ) 内容 AAG 1- 酸性糖蛋白質 AChE アセチルコリンエステラーゼ AUC 血漿中濃度 - 時間曲線下面積 BChE ブチリルコリンエステラーゼ BCRP ヒト breast cancer resistance protein BDC 胆管カニュレーション処置 BSEP ヒト bile salt export pump CH チャイニーズハムスター卵巣細胞 Cmax 最高血漿中濃度 CLb 血液クリアランス CLint 固有クリアランス CLp 血漿クリアランス CYP チトクローム P450 DMS ジメチルスルホキシド EC50 50% 有効濃度 F 経口バイオアベイラビリティ hces ヒトカルボキシルエステラーゼ HEK293 細胞 ヒト胎児由来腎臓 293 細胞 HepG2 細胞 ヒト肝癌細胞株 HPLC 高速液体クロマトグラフィー HPMC ヒドロキシプロピルメチルセルロース HSA ヒト血清アルブミン IC50 50% 阻害濃度 LC/MS 液体クロマトグラフ / 質量分析 LC-MS/MS 液体クロマトグラフ / タンデム質量分析 LSC 液体シンチレーションカウンター MATE1 Multidrug and toxin extrusion 1 MDCKII 細胞 Madin-Darbyイヌ腎臓由来細胞 Ⅱ MDR1 ヒト multidrug resistance protein 1 mra メッセンジャーリボ核酸 MRP2 ヒト multidrug resistance associated protein 2 ADPH 還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸 MR 核磁気共鳴 AT ヒト organic anion transporter ATP ヒト organic anion transporting polypeptide CT ヒト rganic Cation Transporter PDA フォトダイオードアレイ検出器 Pgp P- 糖蛋白質 PXR Pregnane X receptor qrt-pcr 定量的リアルタイム polymerase chain reaction QWBA 定量的全身オートラジオグラフィー S 2 細胞 近位尿細管分節 2 細胞 SD 標準偏差 SDラット Sprague Dawleyラット SDS ドデシル硫酸ナトリウム SLS ラウリル硫酸ナトリウム tmax 最高血漿中濃度到達時間 t1/2 消失半減期 Vdss 定常状態における分布容積 Apr :41:41

4 薬物動態試験の概要文 まとめ GSK B の吸収 分布 代謝及び排泄について検討するため マウス ラット イヌ及びサルに GSK B の非標識体及び [ 14 C] 標識体 ([ 14 C]GSK B) を投与した試験並びに in vitro 試験を実施した また イヌに GSK B 及び GSK Bを併用反復経口投与したときの吸収について検討した 動物は Balb/c-nu/nu( アルビノ ) マウス SD( アルビノ ) 及び Long Evans( 有色 ) ラットを使用した 更に ビーグル犬及びカニクイザルを使用した 投与経路は 臨床投与経路である経口投与及び一部の試験では静脈内投与とした また 一部の試験では GSK の遊離塩基 (GSK A) 及び酢酸付加物 (GSK H) を使用した 更に 吸収の項では特記しない限り微粉化した GSK Bを使用した 投与量及び血漿中濃度は 特記しない限り遊離塩基量として示す 吸収マウス ラット イヌ及びサルに GSK H 又は GSK Bを単回経口投与したとき 未変化体は速やかに吸収され Fはそれぞれ 及び 49% であった また マウス ラット イヌ及びサルに GSK A 又は GSK B を単回静脈内投与したとき 血漿 ( サル : 血液 ) 中未変化体の t1/2 はそれぞれ 及び 6.7 時間であった CLp( サル :CLb) はそれぞれ 及び 14.5 ml/min/kg であり 各動物の肝血漿流量 ( サル : 肝血流量 ) よりも低く Vdssはそれぞれ 及び 5.1 L/kg と各動物の総体液量に比べ同程度 ~ 高かった 更に マウスに GSK Hの 0.3~3 mg/kg を単回経口投与したときの曝露量は 0.3 と 1 mg/kg の間では投与量増加の割合を上回って増加したが 1と 3 mg/kg の間ではおおむね投与量増加に比例して増加した ラットに GSK H の 0.1~3 mg/kg を単回経口投与したときの曝露量は 0.1~3 mg/kg の範囲で投与量増加の割合を上回って増加した マウス ラット及びイヌに GSK B のそれぞれ 0.1~ ~0.125 及び ~ mg/kg/ 日を最長 13 週間反復経口投与したときの曝露量は投与量増加に伴い増加し マウスでは投与 7 及び 14 日で ラットでは投与 3 4 及び 13 週 イヌでは投与 4 及び 13 週で同程度であった また ラット及びイヌの曝露量に明らかな性差はみられなかった 雌雄イヌに GSK Bと GSK Bを 4 週間併用反復経口投与したときの GSK GSK 及び GSK の代謝物の曝露量にそれぞれを単独投与したときと比べて明らかな差はみられなかった 分布有色ラットに [ 14 C]GSK Bの 1 mg/kg を単回経口投与したとき 薬物関連物質は広く組織に分布し ほとんどの組織で薬物関連物質濃度が投与 2 又は 4 時間後に最も高く おおむね血液中よりも高かった 消化管を除き投与 2 又は 4 時間後の腎臓 肝臓 腎皮質 副腎皮質 ハーダー腺 膵臓及び唾液腺中濃度は 1000 ng eq./g 以上と高く 脳内では低かった その後 いずれの組織においても緩やかに消失し 投与 35 日後にはメラニン含有組織 ( 脈 p. 1

5 絡叢 ブドウ膜 有色皮膚及び髄膜 ) を含むすべての組織で定量下限 (11.0 ng eq./g) 未満であった マウス ラット イヌ サル及びヒトでの GSK B(0.5 μg/ml) の in vitro 血漿蛋白結合率は 95.4~98.1% であり ラット イヌ及びヒトの血漿蛋白結合率は濃度 (0.001~ 5 μg/ml) にかかわらず一定であった また ヒト血漿中の主な代謝物である M5(0.005~ 0.05 μg/ml) のヒト血漿蛋白結合率は 97.8% 以上と高く 濃度に関わらずほぼ一定であった 更に GSK (0.001~0.05 μg/ml) の AAG 及び HSAへの結合率はそれぞれ 13.2~ 19.8 及び 96.1~98.0% であり いずれも濃度に関わらず一定であった In vitro でのマウス ラット イヌ サル及びヒトでの GSK B(0.5 及び 5 μg/ml) の血液 / 血漿比は 0.50 ~0.89と低かった GSK B( 及び 0.05 μg/ml) の in vitro 血球移行率は 健康成人ではそれぞれ 及び 48% で 癌患者ではそれぞれ 及び 49% であり 健康成人と癌患者で明らかな差はみられなかった ph5.5 及び 7.4での GSK の透過係数は それぞれ 186~611 及び 162~595 nm/sec であり 膜透過性の高いラベタロール ( それぞれ 34 及び 160 nm/sec) に比べ すべての時間及び濃度で高かった GSK の Pgp 及び BCRP を介した efflux ratioはそれぞれ 2.23 ~37.5 及び 0.794~1.71であり GSK は Pgp の基質であったが BCRP の基質ではなかった また GSK は BSEP 発現ベシクルに媒体群よりも多く取り込まれたが MRP2 発現ベシクル及び HEK293-MATE1 細胞では媒体群と同程度であったことから GSK は BSEP の基質であるが MRP2 及び MATE1の基質ではなかった 更に GSK はヒト肝細胞に取込まれたが ATP1B1 ATP1B3 ATP2B1 及び CT1の阻害薬カクテルを添加しても肝取込みに明らかな影響を及ぼさず GSK は ATP1B1 ATP1B3 ATP2B1 及び CT1の基質ではなかった GSK Bは Pgp BCRP ATP1B1 ATP1B3 AT1 AT3 及び MATE1を阻害し その IC50はそれぞれ 及び μmであった なお BSEP 及び MRP2 は阻害しなかった 代謝マウス ラット ウサギ ( 雌 ) イヌ サル及びヒトの肝細胞と[ 14 C]GSK Bをインキュベートしたとき マウス及びウサギの肝細胞での主な成分は M5( 脱アセチル体 ) であり ラット及びイヌの肝細胞では未変化体 サルの肝細胞では M6(M5のグルクロン酸抱合体 ) であった その他に動物の肝細胞では M7(M5の酸化体 ) 及び M9(M7のグルクロン酸抱合体 ) を含む 8 種の代謝物が確認された ヒトの肝細胞での主な成分は未変化体であり 代謝物として M5 M6 及び M7の生成が確認された ヒト肝ミクロソームで GSK の ADPH 存在下で生成した共有結合量は 36 pmol/mg であった 雄ラット及びイヌに [ 14 C]GSK Bを単回経口投与したときの血漿中の主な成分は未変化体であり その他に M5 M7 及び M12( 酸化体 ) が検出され 更にラットでは M13 イヌでは M10 も検出された また ラット糞中での主な成分は未変化体であり その他に M5 及び M7を含む 6 種の代謝物も検出され 尿中排泄率は極めて低かったことから 尿中 p. 2

6 代謝物の検討はしなかった イヌ糞中には未変化体が検出され その他に M7 を含む 5 種の代謝物も検出された 尿中には未変化体 M12 M23 M24 及び未同定の代謝物 4 種が少量検出された 雌ラット及びイヌに単回経口投与したときの代謝物の血漿及び尿糞中プロファイルは雄とおおむね同様であった 雄の BDC ラットに [ 14 C]GSK Bを単回経口投与したときの胆汁中には未変化体が少量検出され その他に多くの代謝物 (M2 M4( 酸化体のグルクロン酸抱合体 ) M5 M6 M16 M18( 酸化体のグルクロン酸抱合体 ) 及び M19( 未同定 )) が検出された ヒト肝ミクロソーム及び CYP 発現系での GSK の代謝物の生成はそれぞれ約 1 及び 3% と極めて低く CYP1A2 2C8 2C9 2C19 及び 2D6の発現系ではほとんど代謝されなかった ヒト肝ミクロソームでは CYP3A4 阻害薬である azamulin 添加時に M5 M10 M13 M15 M20( 未同定 ) 及び M21( 未同定 ) が検出され 非添加時にはこれ以外に M7 M12 M17 及び M22( 未同定 ) も検出された CYP3A4 発現系 (ADPH 存在下 ) では これらの代謝物以外に M16も検出された 更に ヒト肝ミクロソーム及び CYP3A4 発現系のいずれでも ADPH 非存在下で M5 M10 M15 M20 及び M21 が検出された また GSK はヒトカルボキシルエステラーゼ 1b(hCES1b) hces1c 及び hces2 で M5 へ代謝され この代謝は CES 及び CES2の阻害薬により阻害された アセチルコリンエステラーゼ (AChE) 及びブチリルコリンエステラーゼ (BChE) でもわずかに代謝されたが 明らかな関与は示されなかった ヒト PXR 発現 HepG2 細胞において GSK (10 μm) による PXR を介した転写活性化能はリファンピシン ( 陽性対照 ) の 33.6~50.4% であった また ヒト肝細胞で CYP3A4 の mra 量はリファンピシン ( 陽性対照 ) の増加量に対し 69% であり EC50 は 1.7 μmであった CYP2B6 の mra 量はフェニトイン ( 陽性対照 ) の増加量に対し 75% であったが EC50 は算出できなかった GSK Bは CYP1A2の mra 量には影響を及ぼさなかった ヒト肝ミクロソームでは GSK Bは CYP2C8 2C9 及び 2C19を阻害し IC50 はそれぞれ 及び 5.0 μm であったが CYP1A2 2A6 2B6 2D6 及び 3A4は阻害しなかった また CYP1A2 2A6 2B6 2C8 2C9 2C19 2D6 及び 3A4 のいずれに対しても 代謝依存的な阻害を示さなかった 排泄雌雄ラットに [ 14 C]GSK Bの 1 mg/kg を単回経口投与したとき 投与 168 時間後までの尿糞中に 雄ではそれぞれ投与量の約 1% 未満及び約 98% が 雌では約 1% 未満及び約 83% が排泄され 排泄に明らかな性差はみられなかった 雌雄イヌに [ 14 C]GSK B の 0.5 mg/kg を単回経口投与したとき 投与 168 時間後までの尿糞中及びケージ洗液中に 雄ではそれぞれ投与量の約 7 59 及び 12% が 雌ではそれぞれ投与量の約 6 66 及び 8% が排泄され 排泄に明らかな性差はみられなかった 雄 BDCラットに [ 14 C]GSK B の 1 mg/kg を単回経口投与したとき 投与 96 時間後までの胆汁及び尿糞中に それぞれ投与量の約 及び 51% が排泄された p. 3

7 分析法 被験物質 GSK B の吸収 分布 代謝及び排泄試験で使用した [ 14 C]GSK Bの構造式を図 に示した 一部の試験では GSK の遊離塩基 (GSK A) 及び酢酸付加物 (GSK H) も使用した H * H F I S *:[ 14 C] 標識位置 図 [14C]GSK B の構造式 分析法試験成績を に示した 血漿中未変化体濃度は LC-MS/MS 法で測定した 動物での未変化体の定量範囲は 0.1~ ~500 又は 1.00~1000 ng/mlであった 生体試料中薬物関連物質濃度は LSC 又は QWBA で測定した 代謝物の構造解析及び同定は LC/MS radio-hplc 又は MR 法で行った 吸収 GSK 単独投与 単回投与 マウス雌ヌードマウスに GSK H の 3 mg/kg 及び GSK A の 1 mg/kg をそれぞれ単回経口及び静脈内投与したときの血漿中未変化体の薬物動態について検討した (UH2007/00035/00) また 雌ヌードマウスに GSK Hの 及び 3mg/kg を単回経口投与したときの曝露量についても検討した 試験成績を に示した 3 mg/kg を経口投与したときの tmax は 2 時間 Cmax は 1662±111 ng/ml AUC(0-inf) は ng hr/ml Fは 111% であった 静脈内投与では t1/2 は 3.7 時間 AUC(0-inf) は 4739 ng hr/mlであった CLp は 3.5 ml/min/kg と肝血漿流量 ( 約 49.5 ml/min/kg)[davies, 1993] よりも低く Vdssは 0.9 L/kg と総体液量 ( 約 0.73 L/kg) [Davies, 1993] と同程度であった また 0.3~3 mg/kg 群の曝露量は 0.3と 1 mg/kg の間では投与量増加の割合を上回って増加したが 1と 3 mg/kg の間ではおおむね投与量増加に比例して増加した p. 4

8 ラット雄ラットに GSK B( 未微粉化 ) の 3 mg/kg 及び GSK A の 1 mg/kg をそれぞれ単回経口及び静脈内投与したときの血漿中未変化体の薬物動態について検討した (UH2007/00035/00) また 雄ラットに GSK H の 及び 3mg/kg を単回経口投与したときの曝露量についても検討した 試験成績を に示した 経口投与したときの tmax は 4.0±0.0 時間 Cmax は 289± 86.2 ng/ml AUC(0-inf) は 3754±677 ng hr/ml Fは 42% であった 静脈内投与では t1/2は 6.1±0.9 時間 AUC(0-inf) は 3016±308 ng hr/mlであった CLp は 5.7±0.50 ml/min/kg と肝血漿流量 ( 約 ml/min/kg)[davies, 1993] よりも低く Vdssは 2.9±0.4 L/kg と総体液量 ( 約 0.67 L/kg)[Davies, 1993] より高かった また 0.1~3 mg/kg 群の曝露量は 投与量増加の割合を上回って増加した なお GSK Hの 3 mg/kg での Cmax 及び AUC(0-inf) は それぞれ 249.2± 32.0 ng/ml 及び 3699±732 ng hr/mlであり GSK Bと GSK Hの曝露量に明らかな差はみられなかったことから 曝露量に塩の違いによる差はないと考えられた 開発初期には未微粉化の GSK Bを使用していたが その後微粉化した GSK Bを使用したため 未微粉化 GSK H の 0.1 mg/kg と微粉化 GSK Bの mg/kg (CD2007/00787/00) を単回経口投与したときの曝露量を比較した その結果 未微粉化 GSK H(0.1 mg/kg) の Cmax 及び AUC(0-t) はそれぞれ 1.85±0.62 ng/ml 及び 49.2± 6.15 ng hr/mlであったのに対し 微粉化 GSK B(0.125 mg/kg) の Cmax 及び AUC(0- t) はそれぞれ 8.92±0.81 ng/ml 及び 140±13.7 ng hr/mlであり 曝露量は微粉化 GSK Bの方が高いと考えられた 更に 雄ラットに開発初期に使用された GSK A( 非溶媒和体 ) の 3 又は 10 mg/kg 並びに GSK B( ジメチルスルホキシド付加物 ) の 3 mg/kg を単回経口投与したときの曝露量を比較した その結果 GSK Bを投与したときの曝露量 (Cmax 及び AUC(0-24)) は GSK A を投与したときよりも高かったことから GSK Aと比較して GSK Bの経口投与後では曝露の改善が認められた そのため 以後の開発では GSK B( ジメチルスルホキシド付加物 ) が使用された イヌ雄イヌに GSK Hの 0.3 mg/kg 及び GSK A の 0.3 mg/kg をそれぞれ単回経口及び静脈内投与したときの血漿中未変化体の薬物動態について検討した (UH2007/00035/00) 試験成績を に示した 経口投与したときの tmax は 2.7±1.2 時間 Cmax は 80± 12.3 ng/ml AUC(0-inf) は 1723±431 ng hr/ml Fは 86% であった 静脈内投与では t1/2は 14.5±4.1 時間 AUC(0-inf) は 2031±61.5 ng hr/mlであった CLp は 2.5±0.0 ml/min/kg と肝血漿流量 ( 約 ml/min/kg)[davies, 1993] よりも低く Vdssは 3.0±0.8 L/kg と総体液量 ( 約 0.60 L/kg)[Davies, 1993] より高かった p. 5

9 サル雄サルに GSK B( 未微粉化 ) の 0.3 mg/kgを単回経口及び静脈内投与したときの血液中未変化体の薬物動態について検討した (UH2007/00095/02) 試験成績を に示した 経口投与したときの tmax は 0.2~1.0 時間 Cmax は 34± 16 ng/ml AUC(0-inf) は 276±197 ng.hr/ml Fは 49±25% であった 静脈内投与では t1/2は 6.7±4.3 時間 AUC(0-inf) は 350±117 ng hr/mlであった CLb は 14.5±4.9 ml/min/kg と肝血流量 ( 約 ml/min/kg)[davies, 1993] よりも低く Vdssは 5.1±1.4 L/kg と総体液量 ( 約 0.69 L/kg)[Davies, 1993] よりも高かった 以上のことから マウス ラット イヌ及びサルに GSK H 又は GSK B を単回経口投与したとき 未変化体は速やかに吸収され Fはいずれも 40% 超と吸収は良好であると考えられた マウス ラット イヌ及びサルに GSK A 又は GSK B を単回静脈内投与したとき いずれの動物種でも CLp( サル :CLb) は肝血漿流量 ( サル : 肝血流量 ) に比べて小さかった また Vdss は総体液量に比べて同程度 ~ 高かったことから 組織移行性は良好であると考えられた また マウスに GSK Hの 0.3~3 mg/kg を単回経口投与したときの曝露量は 0.3と 1 mg/kg の間では投与量増加の割合を上回って増加したが 1と 3 mg/kg の間ではおおむね投与量増加に比例して増加した ラットに GSK H の 0.1~3 mg/kg を単回経口投与したときの曝露量は 0.1~3 mg/kg の範囲で投与量増加の割合を上回って増加した 反復投与 マウス雌ヌードマウスに GSK Bの 及び 1 mg/kg/ 日を 14 日間反復経口投与したときの血漿中未変化体の薬物動態について検討した ( _00) 試験成績を に示した 未変化体の曝露量は投与量増加に伴い増加した 投与 7 日の Cmax 及び AUC(0-24) は投与 1 日に比べ増加したが 投与 7 及び 14 日の曝露量 (Cmax 及び AUC(0-24)) は同程度であり 少なくとも投与 7 日までに定常状態に達すると考えられた ラット 週間雌雄ラットに GSK Bの 及び mg/kg/ 日を 3 週間反復経口投与したときの血漿中未変化体の薬物動態について検討した (CD2007/00984/00) 試験成績を表 及び に示した 未変化体の曝露量は投与量増加に伴い増加した mg/kg/ 日以下の投与量では雌雄の曝露量に明らかな差は (2 倍超 ) みられなかった 高用量 (0.125 mg/kg/ 日 ) 群の投与 1 及び 21 日における雌の Cmax 及び AUC(0-t) は雄に比べ増加した ( 最大で 3 倍 ) そのため その後の反復投与試験では雌の投与量を雄より低く設定した p. 6

10 雄 雌 表 パラメータ Cmax (ng/ml) AUC(0-t) (ng hr/ml) Cmax (ng/ml) AUC(0-t) (ng hr/ml) 雌雄ラットに GSK B を 3 週間反復経口投与したときの 投与期間 血漿中未変化体の曝露量 投与量 (mg/kg/ 日 ) 日 C 日 日 C 3.65 a 日 日 a 日 日 C 日 Data source: CD2007/00984/00 の Appendix 1 Table 2 及び 3 平均値 ± 標準偏差 (n=3) C: 算出できず a: 平均値 (n=2) 週間雄ラットに GSK Bの 及び mg/kg/ 日 雌ラットに 及び mg/kg/ 日を 13 週間反復経口投与したときの血漿中未変化体の薬物動態について検討した なお 雄の mg/kg/ 日及び雌の mg/kg/ 日は全身状態悪化のためいずれも投与 48 日で投与を中止した (CD2010/00178/00) 試験成績を表 及び に示した 未変化体の曝露量は投与量増加に伴い増加した 雌雄のいずれの用量群でも投与 4 週の Cmax 及び AUC(0-t) は投与 1 日に比べ増加した また 投与 4 及び 13 週では曝露量に明らかな差はみられなかった 更に 及び mg/kg/ 日群の雌雄の曝露量にも明らかな差はみられなかった 雄 雌 表 パラメータ Cmax (ng/ml) AUC(0-t) (ng hr/ml) Cmax (ng/ml) AUC(0-t) (ng hr/ml) 雌雄ラットに GSK B を 13 週間反復経口投与したときの 投与期間 血漿中未変化体の曝露量 投与量 (mg/kg/ 日 ) 日 週 週 a A 1 日 - C 週 週 a A 1 日 C 週 週 5.30 a A - 1 日 C 週 週 102 a A - Data source: CD2010/00178/00 の Appendix5 Table 3 及び 4 平均値 ± 標準偏差 (n=3) C: 算出できず A: 投与 48 日で投与中止 a: 平均値 (n=2)-: 実施せず p. 7

11 以上のことから ラットに GSK B を最長 13 週間反復経口投与したとき 0.016~ mg/kg/ 日の範囲の曝露量は投与量増加に伴い増加することが示された また 投与 3 4 及び 13 週の曝露量に明らかな差はみられなかったことから おおむね投与 3 週までに定常状態に達すると考えられた イヌ雌雄イヌに GSK Bの 及び mg/kg/ 日を 13 週間反復経口投与したときの血漿中未変化体の薬物動態について検討した なお mg/kg/ 日投与群では全身状態悪化のため 雌では試験 11 又は 12 日 雄では 12 日に投与を中止し その後雌では試験 21 又は 22 日 雄では試験 22 日から mg/kg/ 日に減量して投与を再開した (CD2010/00179/00) 試験成績を表 及び に示した 未変化体の曝露量は投与量増加に伴い増加した 雌雄の曝露量に明らかな差はみられなかった いずれの用量でも投与 4 週の Cmax 及び AUC(0-t) は投与 1 日に比べ増加した また いずれの群でも投与 4 及び 13 週の曝露量は同程度であり 少なくとも投与 4 週までに定常状態に達すると考えられた 雄 雌 表 パラメータ Cmax (ng/ml) AUC(0-t) (ng hr/ml) Cmax (ng/ml) AUC(0-t) (ng hr/ml) 雌雄イヌに GSK B を 13 週間反復経口投与したときの 投与期間 血漿中未変化体の曝露量 投与量 (mg/kg/ 日 ) / a 1 日 /A 4 週 A/ 週 A/ 日 C /A 4 週 A/ 週 A/ 日 /A 4 週 A/ 週 A/ 日 C /A 4 週 A/ 週 A/ Data source: CD2010/00179/00 の Appendix4 Table 3~6 平均値 ± 標準偏差 (n=4~6) C: 算出できず A: 該当せず a: mg/kg/ 日投与群は雌雄それぞれ投与 11 及び 12 日で投与を中止し その後それぞれ 21 及び 22 日から mg/kg/ 日に減量して投与を再開した 以上のことから マウス ラット及びイヌにそれぞれ 0.1~ ~0.125 及び ~ mg/kg/ 日を反復経口投与したとき 曝露量は投与量増加に伴い増加することが示され た また マウスでは少なくとも投与 7 日までに ラットではおおむね投与 3 週までに イ ヌでは少なくとも投与 4 週までに定常状態に達すると考えられた また 雌雄の曝露量に明 らかな差はないと考えられた p. 8

12 GSK との併用投与 GSK の曝露量に対する影響雌雄イヌに GSK B/GSK Bの /5(2.5 mg/kg/ 日を 1 日 2 回 ) 又は /20(10 mg/kg/ 日を 1 日 2 回 )mg/kg/ 日を 4 週間併用反復経口投与したときの血漿中 GSK の曝露量 ( 投与 1 日及び 4 週 ) について 雌雄イヌに GSK Bの 及び mg/kg/ 日 (CD2010/00179/00) を 4 週間反復経口投与したときの曝露量と比較検討した ( _00) 試験成績を表 及び に示した いずれの投与群及び投与期間においても 単独投与群と併用投与群の血漿中 GSK の曝露量に明らかな差はみられなかった また 雌雄の曝露量は同程度であった 表 #1 投与量 (mg/kg) / /20 パラメータ Cmax (ng/ml) AUC(0-t) (ng hr/ml) Cmax (ng/ml) AUC(0-t) (ng hr/ml) 雌雄イヌに GSK B 単独投与及び GSK B と併用投与 したときの血漿中 GSK の曝露量 投与期間 GSK B 併用投与単独投与雄雌雄雌 1 日 週 日 C C 4 週 日 A A 4 週 11.5 # 日 A A 4 週 223 # Data source: CD2010/00179/00 の Appendix 4 Table 3~ _00 の Appedix 1 Table 11 及び 12 平均値 ± 標準偏差 (n=3~6) A: 適用なし C: 算出できず #1:GSK B/GSK B #2: 平均値 (n=2) GSK の曝露量に対する影響雌雄イヌに GSK B/GSK Bの 5(2.5 mg/kg/ 日を 1 日 2 回 )/ 又は 20 (10 mg/kg/ 日を 1 日 2 回 )/ mg/kg/ 日を 4 週間併用反復経口投与したときの血漿中 GSK 及び GSK の主代謝物 3 種 ( 水酸化体 脱メチル体及びカルボン酸体 ) の曝露量 ( 投与 1 日及び 4 週 ) について 雌雄イヌに GSK B の 5(2.5 mg/kg/ 日を 1 日 2 回 ) 及び 20(10 mg/kg/ 日を 1 日 2 回 ) mg/kg/ 日 (CD2010/00051/00) をそれぞれ 4 週間反復経口投与したときの曝露量と比較検討した ( _00) 試験成績を表 及びタフィンラー CTD に示した いずれの投与群及び投与期間においても 単独投与群と併用投与群の血漿中 GSK 及びその主代謝物の曝露量に明らかな差はみられなかった また 雌雄の曝露量はおおむね同程度であった p. 9

13 表 #1 投与量 (mg/kg) 5/ / パラメータ Cmax (ng/ml) AUC(0-t) (ng hr/ml) Cmax (ng/ml) AUC(0-t) (ng hr/ml) 雌雄イヌに GSK B 単独投与及び GSK B と併用投与 したときの血漿中 GSK の曝露量 投与期間 GSK B 併用投与単独投与雄雌雄雌 1 日 週 日 週 日 週 6.18 # 日 週 82.1 # Data source: CD2010/00051/00 の Appendix 4 Table 10 及び _00 の Appemdix 1 Table 13 及び 14 平均値 ± 標準偏差 (n=3~6) #1:GSK B/GSK B #2: 平均値 (n=2) 以上のように GSK B と GSK B を併用投与したときの GSK GSK 及び GSK の代謝物の曝露量にそれぞれを単独投与したときと比べて明らかな差はみられなかったことから 併用投与しても互いの曝露量及び GSK の代謝物の曝露量に影響しないと考えられた 分布 組織内分布雄の有色ラットに [ 14 C]GSK Bの 1 mg/kgを単回経口投与したときの組織内分布について QWBAを用いて検討した (CD2008/00024/00) 試験成績を に示した 薬物関連物質は広く組織に分布し ほとんどの組織で薬物関連物質濃度が投与 2 又は 4 時間後に最も高く おおむね血液中よりも高かった 消化管を除き 投与 2 又は 4 時間後の腎臓 肝臓 腎皮質 副腎皮質 ハーダー腺 膵臓及び唾液腺中濃度は 1000 ng eq./g 以上と高く 脳内では低かった その後 いずれの組織においても緩やかに消失し 投与 35 日後にはメラニン含有組織 ( 脈絡叢 ブドウ膜 有色皮膚及び髄膜 ) を含むすべての組織で定量下限 (11.0 ng eq./g) 未満であった 以上のことから 有色ラットに [ 14 C]GSK B を単回経口投与したとき 薬物関連物質は広く組織に分布し ほとんどの組織で薬物関連物質濃度が投与 2 又は 4 時間後に最も高く おおむね血液中よりも高かった その後緩やかに組織から消失し 投与 35 日後にはすべての組織で定量下限未満であった 投与 2~8 時間後までの脳内薬物関連物質濃度は 16.4 ~31.7 ng eq./g であったことから わずかに脳内へ移行すると考えられた 更に メラニン含有組織と特異的な結合はしないと考えられた p. 10

14 蛋白結合 血漿蛋白結合率 GSK B マウス ラット イヌ サル及びヒトの血漿に GSK Bの 0.5 及び 5 μg/ml 又はラット イヌ及びヒトの血漿に [ 14 C]GSK B(0.001~0.05 μg/ml) を添加したときの血漿蛋白結合率を平衡透析法及び迅速平衡透析法で検討した (UH2007/00095/02 及び _00) 試験成績を に示した GSK (0.5 μg/ml) のマウス ラット イヌ サル及びヒトの血漿蛋白結合率はそれぞれ 及び 97.4% と高かった ラット イヌ及びヒトの血漿蛋白結合率は 0.001~5 μg/mlの濃度に関わらず一定であった M5 ヒトの血漿に M5(0.005~0.05 μg/ml) を添加したときの血漿蛋白結合率を迅速平衡透析法で検討した ( _00) 試験成績を に示した M5 の血漿蛋白結合率は 97.8% 以上と高く 濃度に関わらずほぼ一定であった 蛋白結合の検討健康成人の血漿に AAG 又は HSAを添加し それぞれ 20 及び 700 μmとなるように調整した後 [ 14 C]GSK B(0.001~0.05 μg/ml) を添加したときの蛋白結合率を迅速平衡透析法により検討した ( _00) 試験成績を に示した GSK の AAG への結合率は 13.2~19.8% HSA では 96.1~98.0% であり GSK は主に HSA に結合すると考えられた また いずれも濃度に関わらず一定であった 血球移行性 In vitro マウス ラット イヌ サル及びヒトの血液に GSK B(0.5 及び 5 μg/ml) を添加したときの血液 / 血漿比について検討した (UH2007/00095/02) また 健康成人( 男性 ) 及び癌患者 ( 男性 ) の血液に GSK B( 及び 0.05 μg/ml) を添加したときの血球移行率について検討した ( _00) 試験成績を に示した マウス ラット イヌ サル及びヒトでの血液 / 血漿比は 0.5 μg/mlではそれぞれ 及び 0.50 で 5 μg/mlではそれぞれ 及び 0.56 であり 低いことが示された 健康成人の血球移行率 ( 及び 0.05 μg/ml) はそれぞれ 及び 48% で 癌患者ではそれぞれ 及び 49% であり 健康成人と癌患者で明らかな差はみられず 血球への分布は疾患の影響を受けないと考えられた また 及び 0.01 μg/mlでの血球移行率は同程度であったが 0.05 μg/mlでは低下した p. 11

15 胎盤通過及び胎児への移行 実施していない 受動的膜透過性ヒト MDR1 を発現させた MDCKⅡ(MDCKⅡ-MDR1) 細胞を用いて ph5.5 及び 7.4で Pgp 阻害薬である GF120918(2 μm) 存在下 最長 120 分インキュベートしたときの GSK B( 及び 8 μg/ml) の受動的膜透過性について検討した ( _00) 陽性対照としてラニチジン ラベタロール ピンドロール及びメトプロロール ( いずれも 10 μm) を用いた 試験成績を に示した ph5.5 及び 7.4 での GSK の透過係数はそれぞれ 186~611 及び 162~595 nm/sec であり 膜透過性の高いラベタロール ( それぞれ 34 及び 160 nm/sec) に比べ すべての時間及び濃度で高かったことから GSK の受動的膜透過性は高いことが示された トランスポーターによる輸送 Pgp 輸送 MDCKⅡ-MDR1 細胞を用いて GSK B( 及び 10.8 μm) のヒト Pgpを介した輸送について Pgp 阻害薬である GF120918(2 μm) の存在又は非存在下で検討した ( _01) なお GF 非存在下での efflux ratioが 10 以上の場合に Pgp の基質と判断した 試験成績を に示した GF 非存在下での GSK ( 及び 10.8 μm) の efflux ratioはそれぞれ 及び 2.23で GF 存在下では 及び であり GSK は Pgpの基質であることが示された BCRP 輸送ヒト BCRP を発現させた MDCKⅡ(MDCKⅡ-BCRP) 細胞を用いて GSK B( 及び 10.8 μm) の BCRP を介した輸送について GF120918(2 μm) 存在又は非存在下で検討した ( _01) なお GF 非存在下での efflux ratioが 2 以上の場合に BCRP の基質と判断した 試験成績を に示した GF 非存在下での GSK ( 及び 10.8 μm) の efflux ratioはそれぞれ 及び で GF 存在下では 及び 0.699であり GSK は BCRP の基質ではないことが示された BSEP MRP2 及び MATE1 輸送 ヒト BSEP 又は MRP2 を発現させたベシクル (BSEP 又は MRP2 発現ベシクル ) 並びに MATE1 を発現させた HEK293(HEK293-MATE1) 細胞を用いて [ 14 C]GSK B( p. 12

16 又は 1 μm) の BSEP MRP2 及び MATE1を介した輸送について検討した ( _01) 試験成績を に示した GSK は BSEP 発現ベシクルに媒体群よりも多く取り込まれたが MRP2 発現ベシクル及び HEK293-MATE1 細胞では媒体群と同程度であったことから GSK は BSEP の基質であるが MRP2 及び MATE1 の基質ではないことが示された ATP1B1 ATP1B3 ATP2B1 及び CT1 輸送ヒト肝細胞を用いて [ 14 C]GSK B( 又は 0.7 μm) の肝取込みにおける ATP1B1 ATP1B3 ATP2B1 及び CT1を介した輸送について 阻害薬カクテル (ATP1B1 及び ATP1B3 阻害薬 : リファマイシン及びシクロスポリン A ATP2B1: モンテルカスト並びに CT1: キニジン ) を用いて検討した ( _00) 試験成績を に示した GSK は肝細胞に取込まれたが 阻害薬カクテルを添加しても肝取込みに明らかな影響を及ぼさず GSK は ATP1B1 ATP1B3 ATP2B1 及び CT1の基質ではないことが示された 以上のことから GSK の受動膜透過性は高く GSK は Pgp 及び BSEP の 基質であるが BCRP MRP2 MATE1 ATP1B1 ATP1B3 ATP2B1 及び CT1 の基 質ではないことが示された トランスポーター阻害 Pgp 阻害 MDCKⅡ-MDR1 細胞を用いて GSK B(0.1~50 μm) の Pgp を介した [ 3 H] ジゴキシン (30 nm) 輸送に対する阻害作用について検討した (CD2007/00975/00) 試験成績を に示した GSK は Pgp を阻害し IC50 は 5.5 μm であった BCRP 阻害 MDCKⅡ-BCRP 細胞を用いて GSK B(0.3~100 μm) の BCRP を介した [ 3 H] シメチジン (80 nm) 輸送に対する阻害作用について検討した (RD2007/01466/00) 試験成績を に示した GSK は BCRP を阻害し IC50は 1.1 μm であった ATP1B1 及び ATP1B3 阻害ヒト ATP1B1を発現させた CH(CH-ATP1B1) 細胞及びヒト ATP1B3を発現させた HEK-MSRⅡ(HEK-MSRⅡ-ATP1B3) 細胞を用いて GSK B(0.1~30 μm) の ATP を介した [ 3 H]Estradiol 17β-D-glucuronide([ 3 H]EG 0.02 μm) 輸送に対する阻害作用について検討した (CD2007/01007/00) 試験成績を に示した GSK は ATP1B1 及び 1B3 を阻害し IC50はそれぞれ 1.3 及び 0.94 μmであった p. 13

17 BSEP MRP2 AT1 AT3 CT2 及び MATE1 阻害 BSEP 又は MRP2 発現ベシクル AT1 又は AT3 を発現させた S 2 (S 2 -AT1 又は S 2 - AT3) 細胞並びに CT2 又は MATE1 を発現させた HEK293(HEK293-CT2 又は HEK293- MATE1) 細胞を用いて GSK B(0.03~30 μm) の BSEP MRP2 AT1 AT3 CT2 及び MATE1 を介した各基質 ( それぞれ [ 3 H] タウロコール酸 ([ 3 H]TCA 2 μm) [ 3 H]EG(10 μm) [ 3 H]p-アミノ馬尿酸 ([ 3 H]PAH 1 μm) [ 3 H] 硫酸エストロン ([ 3 H]ES 0.05 μm) [ 14 C] メトホルミン (10 μm) 及び [ 14 C] メトホルミン (10 μm)) 輸送に対する阻害作用について検討した ( _01) 試験成績を に示した GSK は BSEP 及び MRP2を阻害しなかったが AT1 AT3 及び MATE1 阻害し IC50はそれぞれ 及び μmであった また CT2 では 30 μmで 44% 阻害した 以上のことから GSK B は Pgp BCRP ATP1B1 ATP1B3 AT1 AT3 及 び MATE1 を阻害し IC50 はそれぞれ 及び μm であ った 代謝 In vitro 肝ミクロソーム及び肝細胞による代謝マウス ラット イヌ サル及びヒトの肝ミクロソーム又は肝細胞に GSK Bの 0.5 μmを添加し 37 で 30 分間インキュベートしたときの CLintについて検討した (UH2007/00111/00) 試験成績を に示した マウス ラット イヌ サル及びヒトの肝ミクロソームでの GSK の CLintは それぞれ 0.8 ml/min/g 肝 0.5 ml/min/g 肝未満 0.5 ml/min/g 肝未満 21 ml/min/g 肝以上及び 0.9 ml/min/g 肝であった また マウス ラット イヌ サル及びヒトの肝細胞でも GSK の CLint は同様であった 肝細胞による代謝マウス ラット ウサギ ( 雌 ) イヌ サル及びヒトの肝細胞に[ 14 C]GSK Bの 12.5 μmを添加し 最長 24 時間インキュベートしたときの代謝物について検討した (CD2008/00819/00) 試験成績を に示した マウス及びウサギの肝細胞での主な成分は M5( 脱アセチル体 ) であり ラット及びイヌでは未変化体 サルでは M6(M5のグルクロン酸抱合体 ) であった その他に M2( 酸化体のグルクロン酸抱合体 ) M3 及び M8( いずれも未同定 ) M7(M5の酸化体 ) M9(M7のグルクロン酸抱合体 ) M10( 脱ヨード体 ) M13( 脱メチル体 ) 及び M14(M5の酸化体のグルクロン酸抱合体 ) がいずれかの動物で確認された ヒトの肝細胞での主な成分は未変化体であり 代謝物として M5 M6 及び M7 の生成が確認された ヒトでみられたこれらの代謝物はいずれかの動物で生成が確認された p. 14

18 共有結合性試験ヒトの肝ミクロソームに [ 14 C]GSK Bの 10 μmを添加し ADPH 存在下で最長 60 分間インキュベートしたときの反応性代謝物による共有結合量について検討した (CD2007/00194/00) 陽性対照として[ 14 C] アセトアミノフェン (10 μm) を用いた 共有結合量が 50 pmol/mg 未満の場合に 反応性代謝物が生成される可能性は低いと判断した 試験成績を に示した GSK の共有結合量は 36 pmol/mg で アセトアミノフェン ( 陽性対照 ) では 129 pmol/mg であった 以上のことから 肝ミクロソーム中で GSK から反応性代謝物が生成される可能性は低く GSK の投与により臨床で予期せぬ有害事象が起こる可能性は低いと考えられた In vivo 試験 血漿中代謝物 ラット雌雄ラットに [ 14 C]GSK Bの 1 mg/kg を単回経口投与したときの血漿中代謝物について検討した (CD2010/00229/00) 試験成績を に示した 血漿中の主な成分は未変化体 ( 血漿中薬物関連物質濃度の約 64~94%) であった その他に M5(4.0% 以下 ) M7 M12( 酸化体 ) 及び M13(M7 M12 及び M13 の合計が 7.5% 以下 ) も検出された イヌ雌雄イヌに [ 14 C]GSK B の 0.5 mg/kg を単回経口投与したときの血漿中代謝物について検討した (CD2008/01199/00) 試験成績を に示した 血漿中の主な成分は未変化体 ( 血漿中薬物関連物質濃度の約 58~79%) であった その他に M5(5.3% 以下 ) M7 M12(M7 及び M12の合計が 8.9% 以下 ) 及び M10(9.7% 以下 ) も検出された 尿糞中代謝物 ラット雌雄ラットに [ 14 C]GSK Bの 1 mg/kg を単回経口投与したときの糞中代謝物について検討した (CD2010/00229/00) なお 尿中に排泄された薬物関連物質は投与量の 1% 未満であったため 尿中代謝物に関しては検討していない 試験成績を に示した 雄の糞中の主な成分は未変化体 ( 投与量の約 46%) であった その他に M7 M13 及び M17( 酸化体 )(M7 M13 及び M17 の合計が約 10%) M5(BLQ) M12( 約 3.0%) 及び M16( 酸化体 約 6.6%) も検出された 雌の糞中代謝物プロファイルもおおむね同様であった p. 15

19 イヌ雌雄イヌに [ 14 C]GSK B の 0.5 mg/kg を単回経口投与したときの尿糞中代謝物について検討した (CD2008/01199/00) 試験成績を に示した 雄の糞中には未変化体 ( 投与量の約 9.3%) が検出され その他に M7 M12 及び M13(M7 M12 及び M13 の合計が約 14%) M23( 脱ヨード体の酸化体 約 9.0%) 及び M24( 酸化体 約 4.2%) も検出された 尿中には未変化体 M12 M23 M24 及び未同定の代謝物 4 種がいずれも投与量の 1% 未満検出された 雌の尿糞中代謝物のプロファイルもおおむね同様であった 胆汁中代謝物 ラット雄の BDC ラットに [ 14 C]GSK Bの 1 mg/kgを単回経口投与したときの胆汁中代謝物について検討した (CD2010/00229/00) 試験成績を に示した 未変化体は少量 ( 投与量の 0.9%) 検出された その他に M4 M6 及び M18( 酸化体のグルクロン酸抱合体 )(M4 M6 及び M18 の合計が約 12%) M2(3.1%) M5(2.0%) M16(0.7%) 及び M19( 未同定 1.6%) が検出された In situ 代謝麻酔下で雄ラットの肝臓に [ 14 C]GSK Bの 30 mg/kg を門脈側から 4 時間灌流させたときの胆汁中代謝物について検討した (CD2008/01198/00) 試験成績を に示した 投与量の約 1~5% が胆汁中から回収された 胆汁中には未変化体 M2 及び M4( いずれも酸化体のグルクロン酸抱合体 ) M5 並びに M1 及び M3 ( いずれも未同定 ) が検出された 以上のことから ラット及びイヌに [ 14 C]GSK B を単回経口投与したとき 血漿中の主な成分は未変化体であった ラットでは GSK は主に未変化体として糞中に排泄された また ラット胆汁中では代謝物が多く検出され 吸収された GSK は肝臓で主に脱アセチル化 酸化やグルクロン酸抱合を受けたのちに 胆汁中に移行し 糞中に排泄されると考えられた イヌでは GSK は未変化体及び代謝物として糞中に排泄されると考えられた 代謝酵素の同定 CYP 肝ミクロソームヒトの肝ミクロソームに [ 14 C]GSK B の 5 μm を添加し CYP3A4 2C9 2D6 2C8 2C19 及び 1A2の阻害薬 ( それぞれ azamulin(5 μm) スルファフェナゾール(10 μm) キニジン (1 μm) モンテルカスト(1 μm) -3-benzylnirvanol(5 μm) 及びフラフィリ p. 16

20 ン (10 μm)) の存在下又は非存在下で 37 で 60 分間インキュベートしたときの代謝物の生成に対する CYP 阻害薬の影響について検討した (CD2008/00864/00) 試験成績を に示した 肝ミクロソームにおける代謝物の生成は約 1% と極めて低かった CYP 阻害薬非存在下かつ ADPH 存在下では M5 M7 M10 M12 M13 M17 M20( 未同定 ) M21( 未同定 ) 及び M22( 未同定 ) が検出されたが CYP3A4 阻害薬である azamulin 添加時には M5 M10 M13 M15 M20 及び M21 が検出された また CYP 阻害薬及び ADPH 非存在下では M5 M10 M15 M20 及び M21が検出された CYP 発現系 CYP 発現系 (Supersomes TM :CYP1A2 2C8 2C9 2C19 2D6 及び 3A4) に [ 14 C]GSK Bの 5 μm を添加し 37 で 60 分間インキュベートしたときの代謝物の生成について検討した (CD2008/00864/00) 試験成績を に示した CYP 発現系における代謝物の生成は約 3% と極めて低く CYP1A2 2C8 2C9 2C19 及び 2D6 の発現系ではほとんど代謝されなかった CYP3A4 発現系の ADPH 存在下では M5 M7 M10 M12 M13 M15 M16 M17 M20 M21 及び M22 が検出され ADPH 非存在下では M5 M10 M15 M20 及び M21 が検出された 以上のことから GSK は肝ミクロソーム及び CYP 発現系でほとんど代謝されないと考えられた M7 M12 M17 及び M22 の生成には CYP3A4が関与し CYP に依存しない代謝物 (M5 M10 M15 M20 及び M21) の生成には他の代謝経路が存在する可能性が考えられた エステラーゼ GSK は脱アセチル化により M5 へ代謝され この経路は CYP に依存していないことが示されている M5 の生成に関与する酵素について検討するため GSK Bの 0.5 μmと hces1b hces1c hces2 AChE 又は BChE をエステラーゼ阻害薬の存在又は非存在下で 37 で最長 120 分間インキュベートした なお 阻害薬 ( それぞれ 100 μm) には BPP(CES 阻害薬 ) エゼリン(hCES2 AChE 及び BChE 阻害薬 ) テルミサルタン (hces2 阻害薬 ) 及びロペラミド ( 特異的 hces2 阻害薬 ) を単独又はこれらのカクテルを用いた ( _00) 試験成績を に示した GSK は hces1b hces1c 及び hces2 で M5 へ代謝され この代謝は 4 種の各阻害薬及び阻害薬カクテルにより阻害された AChE 及び BChEでの M5 生成はわずかであり 明らかな関与は示されなかった 以上のことから in vitro での M5の生成には hces1b hces1c 及び hces2が関与していると考えられた p. 17

21 推定代謝経路 GSK のラット イヌ及びヒトにおける推定代謝経路を図 に示す ラット イヌ及びヒトの血漿中では未変化体が主な成分であった GSK は脱アセチル化されて M5が生成し M5が更にグルクロン酸抱合されて M6が生成する 又は M5 が更に酸化されて M7が生成すると考えられた 更に GSK から直接 M7が生成される経路も考えられた M5 の生成には hces1b hces1c 及び hces2が M7 の生成には CYP3A4 が関与していると考えられた H 2 H F H 2 H F H I I M7 血漿 : R(<8 #1 ), D(<9 #2 ), H(~10) 糞 : R(<11 #3 ), D(<15 #1 ), H(<11) 尿 : R(A), D(D), H(<3) M5 血漿 : R(<5), D(<6), H(~10) 糞 : R(<3), D(D), H(<8) 尿 : R(A), D(D), H(<1) H H F H 2 Gluc H F I GSK 血漿 : R(<94), D(<80), H(>75) 糞 : R(<53), D(<12), H(<17) 尿 : R(A), D(<1), H(<0.1) I Gluc H H F I M9 血漿 : R(D), D(D), H(D) 糞 : R(D), D(D), H(D) 尿 : R(A), D(D), H(<0.1) M6 血漿 : R(D), D(D), H(D) 糞 : R(D #4 ), D(D), H(D) 尿 : R(A), D(D), H(D) R = ラット D = イヌ H = ヒト D = 検出されず A = 該当せず ( ラットは尿排泄が少なかったため測定せず ) ( ) = 血漿 : 血漿中薬物関連物質に対する割合 (%) ( ラット及びイヌ : 単回投与 ヒト : 反復投与 ) 糞及び尿 : 投与量に対する割合 (%) ( ラット イヌ及びヒト : 単回投与 ) #1 = M12 及び M13 と共溶出 #2 = M12 と共溶出 #3 = M13 及び M17 と共溶出 #4 = 糞中では検出されなかったが BDC ラットの胆汁中からは M4 及び M18 と共溶出された 図 動物及びヒトでの GSK の推定代謝経路 p. 18

22 肝代謝酵素に及ぼす影響 酵素誘導 PXR ヒト PXR 及び CYP3A4 遺伝子プロモーターの PXR 応答領域を含むルシフェラーゼレポーター遺伝子を共導入した HepG2 細胞に GSK Bの 0.2 nm~10 μmを添加し 37C で 20 時間インキュベートしたときの PXR を介した転写活性能について検討した (RR2007/00033/00) なお リファンピシン( 陽性対照 ) による転写活性能 (100%) に対し 30% 未満 30~70% 及び 70% 超で それぞれ転写活性能は弱い 中程度及び高いと判断した 試験成績を に示した GSK (10 μm) による PXR を介した転写活性能はリファンピシンの 33.6~50.4% であったことから 中程度と判断された mra ヒト肝細胞に GSK B(0.01~10 μm) を添加し 2 日間インキュベートしたときの CYP1A2 2B6 及び 3A4の mra 量について qrt-pcr(taq Man TM ) 法を用いて検討した (CD2007/01330/00) なお オメプラゾール フェニトイン及びリファンピシン( それぞれ CYP1A2 2B6 及び 3A4 の陽性対照 ) による mra 増加量を 100% とした 試験成績を に示した GSK B による CYP3A4 の mra 増加量はリファンピシンの増加量に対し 69% であり EC50は 1.7 μmであった GSK B の 10 μm で CYP2B6の mra 増加量はフェニトインの増加量 (100%) に対し 75% であり 反応がプラトーにならなかったため EC50は算出できなかった 一方 CYP1A2の mra 量には影響を及ぼさなかった 以上のことから GSK の PXRを介した転写活性能は中程度であり CYP3A4 の mraを増加させたことから CYP3A4 を誘導する可能性が考えられた また GSK の 10 μmは CYP2B6の mra 量を 75% 増加させたことから CYP2B6 を誘導する可能性が考えられた なお CYP1A2 は誘導しないと考えられた 酵素阻害ヒト肝ミクロソームに GSK B(0.01~10 μm) を添加し 37 で最長 10 分間インキュベートしたときの CYP1A2 2A6 2B6 2C8 2C9 2C19 2D6 及び 3A4 の活性に対する阻害作用について検討した (CD2008/00124/00) また 代謝依存的な阻害についても検討した 試験成績を に示した GSK Bは CYP2C8 2C9 及び 2C19を阻害し IC50 はそれぞれ 及び 5.0 μm であった いずれの CYP においても 代謝依存的な阻害はみられなかった p. 19

23 排泄 尿糞中排泄 ラット雌雄ラットに [ 14 C]GSK B の 1 mg/kg を単回経口投与したときの 投与 168 時間後までの薬物関連物質の尿糞中排泄について検討した (CD2008/00024/00) 試験成績を に示した 投与 24 時間後までの糞中排泄率は 雄では投与量の 64.1 ±12.7% 雌では 30.7±24.5% であった 投与 168 時間後までの尿糞中排泄率は 雄ではそれぞれ投与量の 0.63±0.06 及び 97.6±2.96% 雌ではそれぞれ投与量の 0.91±0.77 及び 82.8 ±22.3% であった イヌ雌雄イヌに [ 14 C]GSK B の 0.5 mg/kg を単回経口投与したときの 投与 168 時間後までの薬物関連物質の尿糞中排泄について検討した (CD2007/00279/00) 試験成績を に示した 投与 168 時間後までの尿及び糞中排泄率並びにケージ洗液回収率は 雄ではそれぞれ投与量の 6.74± ±18.36 及び 12.41±7.11% 雌ではそれぞれ投与量の 及び 7.75% であった 胆汁中排泄雄 BDCラットに [ 14 C]GSK B の 1 mg/kg を単回経口投与したときの 投与 96 時間後までの薬物関連物質の胆汁及び尿糞中排泄について検討した (CD2008/00024/00) 試験成績を に示した 投与 96 時間後までの胆汁 尿及び糞中排泄率はそれぞれ投与量の 40.6± ±0.04 及び 50.5±3.40% であった 以上のことから 雌雄ラット及びイヌに [ 14 C]GSK Bを経口投与したときの主な排泄経路は糞中であると考えられ 排泄速度及び経路に明らかな性差はみられなかった 雄 BDCラットに [ 14 C]GSK B を単回経口投与したときの結果から 吸収された薬物関連物質は主に胆汁を介して糞中に排泄されると考えられた また 胆汁及び尿中排泄率から 投与量の少なくとも約 41% が吸収されると考えられた 乳汁中への移行 実施していない 薬物動態学的薬物相互作用 実施していない その他の薬物動態試験 実施していない p. 20

24 考察及び結論 考察 GSK B の薬物動態試験は薬理試験及び毒性試験で用いたマウス ラット イヌ及びサルで行った 動物の系統としては Balb/c-nu/nu( アルビノ ) マウス SD( アルビノ ) 及び Long Evans( 有色 ) ラット ビーグル犬並びにカニクイザルを使用した 吸収マウス ラット イヌ及びサルに GSK H 又は GSK Bを単回経口投与したときの Fはいずれの動物でも 40% 超であり 吸収は良好であると考えられた また マウス ラット イヌ及びサルに GSK A 又は GSK Bを単回静脈内投与したとき 血漿 ( サル : 血液 ) 中未変化体の t1/2 は 3.7~14.5 時間であり CLp( サル :CLb) は 2.5~ 14.5 ml/min/kg と各動物の肝血漿流量 ( サル : 肝血流量 ) よりも低く Vdssは 0.9~5.1 L/kg と各動物の総体液量に比べ同程度 ~ 高かったことから 組織移行性は良好であると考えられた 更に マウスに GSK H の 0.3~3 mg/kg を単回経口投与したときの曝露量は 0.3 と 1 mg/kg の間では投与量増加の割合を上回って増加したが 1と 3 mg/kgの間ではおおむね投与量増加に比例して増加した ラットに GSK H の 0.1~3 mg/kg を単回経口投与したときの曝露量は 0.1~3 mg/kg の範囲で投与量増加の割合を上回って増加した マウス ラット及びイヌに GSK B のそれぞれ 0.1~ ~0.125 及び ~ mg/kg/ 日を最長 13 週間反復経口投与したときの曝露量は投与量増加に伴い増加し マウスでは少なくとも投与 7 日 ラットではおおむね投与 3 週 イヌでは少なくとも投与 4 週で定常状態に達すると考えられた また ラット及びイヌの曝露量に明らかな性差はみられなかった なお ラットの 3 週間反復投与試験では高用量群 (0.125 mg/kg/ 日 ) でのみ雌の曝露量が雄より高かったことから 13 週間反復投与試験では雌の用量を減量したが 13 週間反復投与試験では同じ用量 (0.031 及び mg/kg/ 日 ) 群の雌雄での曝露量は同程度であり 更に 3 週間反復投与試験と 13 週間反復投与試験の同じ用量群でも曝露量は同程度であった 3 週間反復投与試験の高用量群 (0.125 mg/kg/ 日 ) の雌でのみ曝露量が高かった原因として媒体 原末ロット及びバラツキの可能性が考えられたが ロットは異なるものの媒体は同じであり バラツキも 2 試験間で大きく異ならなかったことから ラット 3 週間反復投与試験の高用量群 (0.125 mg/kg/ 日 ) でのみ性差がみられた理由については不明である 雌雄イヌに GSK Bと GSK Bを 4 週間併用反復経口投与したときの GSK GSK 及び GSK の代謝物の曝露量にそれぞれを単独投与したときと比べて明らかな差はみられなかったことから 併用投与しても互いの曝露量及び GSK の代謝物の曝露量に影響しないと考えられた 分布有色ラットに [ 14 C]GSK Bを単回経口投与したとき 薬物関連物質は広く組織に分布し ほとんどの組織で薬物関連物質濃度が投与 2 又は 4 時間後に最も高く おおむね血液中よりも高かった その後緩やかに組織から消失し 投与 35 日後にはすべての組織で定量 p. 21

25 下限未満であった GSK はわずかに脳内へ移行すると考えられ メラニン含有組織と特異的な結合はしないと考えられた GSK Bの in vitro 血漿蛋白結合率は動物及びヒトで高く 濃度に関わらず一定であった また ヒト血漿蛋白結合率は 97.4% であり AAG 及び HSAへの結合率はそれぞれ約 13~20 及び約 96~98% であったことから GSK は主に HSA に結合すると考えられた また ヒト血漿中の主な代謝物である M5 のヒト血漿蛋白結合率は 97.8% 以上と高く 濃度に関わらずほぼ一定であった 更に in vitro でのマウス ラット イヌ サル及びヒトでの GSK B(0.5 及び 5 μg/ml) の血液 / 血漿比は 0.50~0.89と低かった また 健康成人及び癌患者の血球移行率 ( それぞれ 48~83 及び 49~92%) に明らかな差はみられなかったことから 血球への分布は疾患の影響を受けないと考えられた 代謝 In vitro 及び in vivo 試験の成績より GSK は動物 ( サルを除く ) 及びヒトで肝代謝を受けにくいと考えられた また ヒト肝ミクロソームで GSK から反応性代謝物が生成される可能性は低かったことから 臨床で反応性代謝物により予期せぬ有害事象が起こる可能性は低いと考えられた 動物及びヒトの肝細胞での試験で 未変化体の他に代謝物 (M5 M6 及び M7 等 ) の生成がみられ ヒトでみられたこれらの代謝物はいずれかの動物で生成が確認された ラット及びイヌに [ 14 C]GSK Bを単回経口投与したとき 血漿中の主な成分は未変化体であった ラットでは GSK は主に未変化体として糞中に排泄された また ラット胆汁中では未変化体は少量であり 代謝物 ( 酸化体及び脱アセチル体 ) が多く検出されたことから GSK は肝で代謝を受けたのち 胆汁中に排泄されると考えられた また イヌでは未変化体及び代謝物として糞中に排泄されると考えられた 更に ラット及びイヌの血漿及び尿糞中プロファイルに性差はみられなかった In vitro での GSK の主な代謝経路は脱アセチル化 (M5) 及び M5のグルクロン酸抱合 (M6) 又は M5の酸化 (M7) であると考えられた In vitro で M7 M12 M17 及び M22 の生成には CYP3A4 が関与している可能性が考えられ CYP に依存しない代謝物 (M5 M10 M15 M20 及び M21) の生成がみられたことから 他の代謝経路が関与している可能性が考えられた また GSK は hces1b hces1c 及び hces2 で M5 へ代謝され この代謝は CES 及び CES2の阻害薬により阻害されたことから in vitro では M5 の生成には hces1b hces1c 及び hces2 が関与していると考えられた なお AChE 及び BChEでもわずかに代謝されたが 明らかな関与は示されなかった 一般的に CES やアミダーゼ等の加水分解酵素に関連した薬物相互作用を起こす可能性はないことが知られている [Madan, 2007] ため GSK が CESに関連した薬物相互作用を起こす可能性は低いと考えられた また M7の生成には CYP3A4 の関与が考えられたが M7 の生成経路には GSK から直接 M7が生成される経路と M5を経て M7へ代謝される経路の 2 種類があること M5への代謝には CESが関与していると考えられたことから CYP3A4 の阻害剤と併用投与しても薬物相互作用を引き起こす可能性は低いと考えられた p. 22

26 排泄雌雄ラット及びイヌに [ 14 C]GSK B を経口投与したとき 主な排泄経路は糞中であり 排泄に明らかな性差はみられなかった 排泄は ラットでは比較的速やかであり イヌでは緩やかであると考えられた 雄 BDCラットに [ 14 C]GSK B を単回経口投与したとき 吸収された薬物関連物質の大部分は胆汁を介して糞中に排泄され 尿中排泄はわずかであると考えられた 吸収された GSK は肝臓で主に脱アセチル化 酸化やグルクロン酸抱合を受けたのちに 胆汁中に移行し 糞中に排泄されると考えられた また 胆汁及び尿中排泄率から 投与量の少なくとも約 41% が吸収されると考えられた 薬物動態学的薬物相互作用 GSK B(10 μm) の PXR を介した転写活性化能は中程度であり CYP3A4 の mra 量を増加させた (EC50:1.7 μm) ことから CYP3A4 を誘導する可能性が考えられた また GSK Bは 10 μm で CYP2B6の mra 量を増加させた (EC50 は算出できず ) ことから CYP2B6を誘導する可能性も考えられた しかしながら これらの濃度は BRAF 遺伝子変異黒色腫を有する患者 (BRF 試験 ) に GSK Bの 2 mg/ 日を反復投与したときの定常状態における Cmax(22.4~22.6 ng/ml 0.04 μm)( ) の 100 倍以上であることから 臨床で CYP3A4 及び 2B6の誘導により薬物相互作用を引き起こす可能性は低いと考えられた なお CYP1A2は誘導しないと考えられた GSK は in vitro で CYP2C8 2C9 及び 2C19 を阻害し IC50はそれぞれ 及び 5.0 μmであった CYP2C8を最も強く阻害したが その IC50(0.34 μm) は癌患者 (BRF 試験 ) の Cmax(0.04 μm ) の 8 倍以上であることから 臨床で GSK がこれら CYP を阻害することにより薬物相互作用を引き起こす可能性は低いと考えられた また CYP1A2 2A6 2B6 2D6 及び 3A4を阻害せず CYP1A2 2A6 2B6 2C8 2C9 2C19 2D6 及び 3A4 のいずれに対しても 代謝依存的な阻害を示さなかった GSK は Pgp の基質であったが 受動的膜透過性が高く F は大きかったことから Pgp 阻害薬と併用投与しても薬物動態学的相互作用を起こす可能性は低いと考えられた また BSEP の基質であったが BCRP MRP2 MATE1 ATP1B1 ATP1B3 ATP2B1 及び CT1の基質ではなかったことから これらのトランスポーターの阻害薬と併用投与しても薬物動態学的相互作用を起こす可能性は低いと考えられた GSK は Pgp BCRP ATP1B1 ATP1B3 AT1 AT3 及び MATE1を阻害し IC50はそれぞれ 及び μm であった MATE1に関し 本薬は最も強い阻害作用を示したが 癌患者 (BRF 試験, ) に本薬の 2 mg を反復投与した際の定常状態における Cmax は 22.4 ng/ml(0.04 μm) であり ヒトでの血漿蛋白結合率 (97.4%) から算出した非結合型 Cmax は μmと IC50 よりも 50 倍以上低かった このことから 本薬の MATE1 の阻害を介した薬物動態学的相互作用が p. 23

27 生じる可能性は低いと考えられる なお GSK は BSEP 及び MRP2 を阻害しなかっ た 結論マウス ラット及びイヌに GSK B を経口投与したとき Fは良好であり 速やかに吸収された 反復経口投与すると曝露量は投与量増加に伴い増加し マウスでは少なくとも投与 7 日 ラットではおおむね投与 3 週 イヌでは少なくとも投与 4 週で定常状態に達すると考えられた また GSK B 及び GSK B を併用反復経口投与しても 互いの曝露量及び GSK の代謝物の曝露量に影響を及ぼさないと考えられた GSK B は広く組織に分布し その後緩やかに組織から消失すると考えられた GSK はわずかに脳内へ移行すると考えられ メラニン含有組織と特異的な結合はしないと考えられた 動物及びヒトの血漿蛋白結合率はいずれも高く ヒト血漿蛋白結合率は 97.4% であった GSK は代謝されにくいものの 一部は加水分解酵素 (hces1b hces1c 及び hces2) による脱アセチル化 その他に CYP3A4による酸化を受けると考えられた ラット及びイヌの主な排泄経路は胆汁を介した糞中であると考えられた GSK は Pgp 及び BSEP の基質であったが 臨床で薬物動態学的相互作用を起こす可能性は低いと考えられた なお BCRP MRP2 MATE1 ATP1B1 ATP1B3 ATP2B1 及び CT1の基質ではなかった In vitro で GSK は CYP3A4 及び 2B6の誘導 CYP2C8 2C9 及び 2C19の阻害並びに Pgp BCRP ATP1B1 ATP1B3 AT1 AT3 及び MATE1の阻害を示したが 臨床で薬物相互作用が起こる可能性は低いと考えられた なお CYP1A2 は誘導せず CYP1A2 2A6 2B6 2D6 及び 3A4を阻害せず CYP1A2 2A6 2B6 2C8 2C9 2C19 2D6 及び 3A4のいずれに対しても 代謝依存的に阻害せず BSEP 及び MRP2を阻害しなかった 図表本文中に記載した 参考文献 Davies B, Morris T. Physiological Parameters in Laboratory Animals and Humans. Pharm Res. 1993;10: Madan A, Fisher A, Jin L et al. In vitro metabolism of indiplon and an assessment of its drug interaction potential. Xenobioticia. 2007;37: p. 24

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32 p 分析法及びバリデーション試験 Location in CTD: m Report o.: _00 CD2007/01033/ _00 CD2007/01034/ _00 Analyte: GSK Method: LC-MS/MS Matrix (volume): mouse plasma (25 μl) rat plasma (50 μl) rat plasma (50 μl) dog plasma (50 μl) dog plasma (100 μl) Matrix dilution (fold) 20 A A A 10 Calibration model: Linear weighted 1/x Linear weighted 1/x 2 Linear weighted 1/x 2 Linear weighted 1/x 2 Linear weighted 1/x 2 Validated range: 1.00 to 1000 ng/ml 0.5 to 500 ng/ml 0.5 to 500 ng/ml 0.5 to 500 ng/ml 0.1 to 100 ng/ml Precision (%CV) within-assay: 5.4% 11.5% 4.8% 11.2% 4.0% Precision (%CV) between-assay: 7.1% 5.5% ot assessed ot assessed 2.2% Accuracy (% bias): -9.7% Bias 3.8% -8.1% Bias 14.4% -3.9% Bias 3.2% -4.1% Bias 12.2% 1.3% Bias 9.5 % At least 24 days at 4 C At least 626 days at 4 C Stability in At least 23 hours at ambient At least 62 days at 4 C ot assessed At least 62 days at 4 C At least 6 hours at ambient dimethylformamide: room temperature conditions Stability in plasma Stability in whole blood At least 22 hours at ambient room temperature At least 49 days at -20 C Stable on wet ice for up to 4 hours At least 24 hours at room temperature Freeze-thaw stability At least 3 cycles at -20 C At least 3 cycles at -20 C Processed extract stability At least 4 days at 4 C A: ot applicable. ot assessed At least 24 hours at room temperature ot assessed ot assessed ot assessed At least 3 days at room temperature ot assessed ot assessed At least 3 cycles at -20 C At least 3 days at room temperature At least 24 hours at ambient conditions Unstable at 37 C for 4 hours Stable on wet ice for 4 hours At least 3 cycles from -20 C to ambient conditions At least 216 hours at ambient conditions

33 薬物動態試験 : 単回投与後の吸収 Test Article: GSK A, GSK B, GSK H Report o.: UH2007/00035/00 UH2007/00035/00 UH2007/00035/00 UH2007/00095/02 Location in CTD: m m m m Species (Strain): Mouse (Balb/c-nu/nu) Rat (SD) Dog (beagle) Monkey (cynomogus) Gender (M/F)/ 3F 3M 3M 3M umber of Animals Feeding Condition: Fed Fed Fasted Fasted Sample: plasma plasma plasma blood Analyte: GSK GSK GSK GSK Analysis: LC-MS/MS LC-MS/MS or LC-PDA/MS LC-MS/MS LC-MS/MS Method of Administration: IV ral IV ral IV ral IV ral Dose (mg/kg): Salt form: A H A B A H B B Vehicle/Formulation: DPW/solution PCW/solution DMS/solution 0.5% MC/ suspension DMS/solution PEG 400/solution PPD/solution PPW/solution p. 6 PK Parameters: Mouse Rat Dog Monkey IV ral IV ral IV ral IV ral Dose (mg/kg): Vdss (L/kg) CLp (ml/min/kg) a F (%) Cmax (ng/ml) b AUC(0-inf) (ng hr/ml) t½ (hr) Tmax (hr) - 1 [1-2] - 4 [4-4] - 2 [2-4] Values are the mean ± SD or mean. A: GSK A (parent form), B: GSK B (dimethylsulfoxide solvate form), H: GSK H (acetic acid solvate form) a: Monkey is CLb b: IV is C5 min c: median [range] or range C: ot calculated DMS: Dimethylsulfoxide, PEG: Polyethylene glycol, PCW: PEG 400: 12.5 vol% Cremephor EL: water (1:8:1), DPW: DMS: PEG 400: water (1:2:7), MC: Methylcellulose, PPD: 25% PEG400:25% propylene glycol in 5% dextrose, PPW: 25% PEG400:25% propylene glycol in water

34 薬物動態試験 : 単回投与後の吸収 ( 続き ) Report o.: UH2007/00035/00 UH2007/00035/00 Location in CTD: m m Species (Strain): Mouse (Balb/c-nu/nu) Rat (SD) Method of Administration: ral ral Dose (mg/kg): Test Article: GSK H Dose (mg/kg) Mouse Rat Cmax (ng/ml) AUC(0-inf) (ng hr/ml) Tmax (hr) Cmax (ng/ml) AUC(0-inf) (ng hr/ml) Tmax (hr) ± ± [2-8] ± [1-1] ± ± [4-8] ± [1-1] ± ± [4-8] ± [1-2] ± ± [4-4] Values are the mean ± SD or mean or median [range] p. 7

35 薬物動態試験 : 単回投与後の吸収 ( 続き ) Report o.: CD2007/00787/00 Location in CTD: m Species (Strain): Rat (SD) Gender (M/F)/umber of Animals: 3M Vehicle: 1.5% HPMC, 5% Mannitol, 0.2% SLS/suspension Method of Administration: ral Dose (mg/kg/day): 0.125, Sample: Plasma Analyte: GSK Analysis: LC-MS/MS Test Article: GSK B p. 8 Micronized Values are the mean ± SD -: ot applicable Parameters Dose (mg/kg) Cmax (ng/ml) 8.92± ±25.5 AUC(0-t) (ng hr/ml) 140± ±158

36 薬物動態試験 : 単回投与後の吸収 ( 続き ) Test Article: GSK A, GSK B Report o.: UH2007/00095/02 Location in CTD: m Species (Strain): Rat (SD) Gender (M/F)/umber of Animals: 3M 3M 3M 2M Vehicle: GSK A:0.5% w/v HPMC GSK A: 1% SDS GSK B: 0.5% w/v MC GSK B: 0.5% w/v MC and 0.2% v/v Tween 80 Method of Administration: ral Dose (mg/kg): GSK A: 10 GSK A: 3 GSK B: 3 GSK B: 3 Sample: Blood Plasma Plasma Plasma Analyte: GSK Analysis: LC-MS/MS p. 9 Parameters GSK A 10 mg/kg GSK A #1 3 mg/kg GSK B (fed) 3 mg/kg GSK B (fasted) 3 mg/kg Cmax (ng/ml) 5.7 ± ± ± (425, 212 #2 ) AUC(0-24) (ng.hr/ml) 81, # ± ± DAUC(0-24) (ng.hr/ml/mg/kg) 8.4, 10.7 # ± ± Values are the mean ± SD (n=3) and mean (n=2) #1: micronized #2: individual data DAUC: dose normalised AUC

37 薬物動態試験 : 反復投与後の吸収 マウス 日間 Report o.: _00 Location in CTD: m Species (Strain): Mouse (nude) Gender (M/F)/umber of Animals: 3F/timepoint Vehicle: 0.5% HPMC, 0.2% Tween 80 Method of Administration: ral Dose (mg/kg/day): 0.1, 0.3, 1 Duration of Dosing: 14 Days Sample: Plasma Analyte: GSK Analysis: LC-MS/MS Test Article: GSK B p. 10 Parameter Period ominal Dose of GSK (mg/kg/day) a AUC(0-24) (ng hr/ml) Day Day Day AUC(0-96) (ng hr/ml) Day Cmax (ng/ml) Day b Day Day Tmax (hr) Day Day Day Values are the mean ± SD or mean. a: n=2 at 72 and 96 hours b: ne animal was insufficient plasma sample for reanalysis

38 ラット 週間 Report o.: CD2007/00984/00 Location in CTD: m Species (Strain): Rat (SD) Gender (M/F)/umber of Animals: 3M/3F Vehicle: 1.5% HPMC, 5% Mannitol P60, 0.2% SDS Method of Administration: ral Dose (mg/kg/day): 0.016, 0.031, , Duration of Dosing: 3 Weeks Sample: Plasma Analyte: GSK Analysis: LC-MS/MS Test Article: GSK B p. 11 Dose (mg/kg/day) Period Male Female AUC(0-t) (ng hr/ml) Day 1 C 3.65 a C Day Cmax (ng/ml) Day 1 C a Day Tmax (hr) Day 1 C , 8.00 a Day Values are the mean ± SD or mean. Tmax: range a: n=2, o or insufficient quantifiable plasma concentration data in the third animal. C: ot calculated

39 週間 Report o.: CD2010/00178/00 Location in CTD: m Species (Strain): Rat (SD) Gender (M/F)/umber of Animals: 3M/3F Vehicle: 1.5% HPMC, 5% Mannitol P60, 0.2% SLS Method of Administration: ral Dose (mg/kg/day): Male: 0.031, , Female: 0.016, 0.031, Duration of Dosing: 13 Weeks Sample: Plasma Analyte: GSK Analysis: LC-MS/MS Test Article: GSK B p. 12 Daily Dose (mg/kg/day) Period Male Female AUC(0-t) (ng hr/ml) Day 1 C C Week Week a A 102 a A Cmax (ng/ml) Day C Week Week a A 5.30 a A Tmax (hr) Day C Week Week , 4.00 a A 1.00, 4.00 a A Values are the mean ± SD or mean. Tmax: range a: n=2 C: ot calculated A: ot applicable. Dosing for these animals was discontinued with the last dose given on Day 48.

40 イヌ 週間 Report o.: CD2010/00179/00 Location in CTD: m Species (Strain): Dog (beagle) Gender (M/F)/umber of Animals: 4-6M/4-6F Vehicle: 1.5% HPMC, 5% Mannitol P60, 0.2% SLS Method of Administration: ral Dose (mg/kg/day): , 0.015, 0.03/ Duration of Dosing: 13 Weeks Sample: Plasma Analyte: GSK Analysis: LC-MS/MS Test Article: GSK B p. 13 Dose (mg/kg/day) Period Male Female / a / a AUC(0-t) (ng hr/ml) Day 1 C /A C /A Week A/ A/ Week A/ A/ Cmax (ng/ml) Day /A /A Week A/ A/ Week A/ A/ Tmax (hr) Day /A /A Week A/ A/ Week A/ A/ Values are the mean ± SD or mean. Tmax: range a: Dosing of 0.03 mg/kg/day was stopped on Day 11 for the main study female animals and on Day 12 for the main study male animals and recovery male and female animals. Dosing resumed at a lower dose of mg/kg/day on Day 21 for the main study female animals and on Day 22 for the main study male animals and recovery male and female animals. C: ot calculated

41 GSK /GSK 併用投与 週間 Report o.: _00 CD2010/00179/00 CD2010/00051/00 Location in CTD: m m m Species (Strain): Dog (beagle) Dog (beagle) Dog (beagle) Gender (M/F)/umber of 3M/3F 4-6M/4-6F 4M/4F Animals: Vehicle: GSK B; 1.5% HPMC, 5% D-mannitol, 0.2% SLS GSK B; 1.5% HPMC, 5% Mannitol P60, 0.2% SLS Test Article: GSK B, GSK B GSK B; gelatin capsules p. 14 GSK B; gelatin capsule Method of ral ral ral Administration: Dose (mg/kg/day): GSK B/GSK B; , , /5, /20 Frequency: GSK B; once daily GSK B; once daily GSK B; twice daily GSK B; twice daily Duration of Dosing: 4 Weeks 13 Weeks 13 Weeks Sample: Plasma Plasma Plasma Analyte: GSK , GSK , GSK , GSK , GSK , GSK , GSK GSK , GSK GSK Analysis: GSK ; LC-MS/MS LC-MS/MS UHPLC-MS/MS Remarks GSK , GSK , GSK , GSK ; UHPLC-MS/MS Data of GSK , GSK , GSK , GSK reffer to Tafinlar CTD Data of GSK , GSK , GSK , GSK reffer to Tafinlar CTD2.6.5.