Cell Sorting S3e セルソーター

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がんまはしかわ
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1 Cell Sorting S3e セルソーター

2 Meet the S3e Cell Sorter 人に優しいデザインコンパクトサイズ自動化された各種プロセスデータ品質の向上信頼のサポート体制 1 S3eセルソーター

3 高性能使いやすいコンパクト S3e Jet-in-Air / S3e 3 4 FSCSSC 高高高ン Jet-in-Air 100,000 eps 30,000 eps 99% 使いやすいトコンパクトン *= イベント / 秒 S3e 2

Jet-in-Air3 1 高速ソーティング Jet-in-Air 方式キュベット方式 250 430m パルスパルスレーザーレーザー Jet-in-Air S3e30,000/ 3 S3e10 /3/

10 0 10 0 CD90- CD73- CD90+ CD73+ 10 1 10 2 10 3 10 4 CD90 PerCP-Cy5.

5 10 4 10 3 10 2 CD90- CD73- CD90+ CD73+ 10 1 97% 10 0 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 CD90 PerCP-Cy5.

4 Jet-in-Air3 1 高速ソーティング Jet-in-Air 方式キュベット方式 m パルスパルスレーザーレーザー Jet-in-Air S3e30,000/ 3 S3e10 /3/ % 高純度ソーティング Jet-in-Air 99% ACD90/CD73 B C CD73 ReadiLink 555/ CD90- CD73- CD90+ CD CD90 PerCP-Cy CD90- CD73- CD90+ CD73+ 95% CD90 PerCP-Cy CD90- CD73- CD90+ CD % CD90 PerCP-Cy5.5 MSC ソーティング MSCCD90-PerCP-Cy5.5CD75 ReadiLink 555/570S3eA S3eB-C Bulletin 6688 Sorting Bone Marrow Mescenchymal Stem Cells with the S3e Cell Sorter 3 S3e

3 高生存率ソーティング Jet-in-Air CD34 /CD45 HSPC ソーティング

4%B CD34 PE ACD45/CD34 10 4 R4 10 3 10 2 10 1 10 0 10 0 10 1 10 2 10 3

10 2 10 3 10 4 7-AAD Bulletin 7055 Identifying Heterogeneity within

Jet-in-Air Jet-in-Air 方式キュベット方式レーザー蛍光側方散乱光前方散乱光キュベットドロップディレイが一定

5 3 高生存率ソーティング Jet-in-Air CD34 /CD45 HSPC ソーティング PBMCCD34-PECD45-FITC7-AAD S3e A 7-AAD 98.4%B CD34 PE ACD45/CD R CD45 FITC Count B 2,494 1,871 1, Live Dead R AAD Bulletin 7055 Identifying Heterogeneity within Rare Cell Populations by Pairing Single-Cell RNA with Cell Sorting Jet-in-Air Jet-in-Air 方式キュベット方式レーザー蛍光側方散乱光前方散乱光キュベットドロップディレイが一定ドロップディレイがばらつく断面図ブレークオフポイント Jet-in-AirSense in Air Sense in Cuvette2 Jet-in-Air / S3eJet-in-Air / Jet-in-Air S3e Jet-in-Air S3e 4

S3eセルソーターのソーティングの仕組みと AutoGimbalシステムセルソーティングの仕組み 1 細胞はノズル内で流体力学的絞り込み Sample injection Hydrodynamic Focusing によって細い流束の中に絞り込まれ一列に並べられますこのことにより単一の細胞に 1 レーザーを照射し解析することが可能 Nozzle tip となります

6 S3eセルソーターのソーティングの仕組みと AutoGimbalシステムセルソーティングの仕組み 1 細胞はノズル内で流体力学的絞り込み Sample injection Hydrodynamic Focusing によって細い流束の中に絞り込まれ一列に並べられますこのことにより単一の細胞に 1 レーザーを照射し解析することが可能 Nozzle tip となります Hydrodynamic focus Fluorescence signal 2 ノズルを通過した細胞は流束中を運ば PM T れレーザー照射点に到達しますレーザー照射点からの散乱光と蛍光はPMT Light scatter Laser Photomultiplier tube によって検出さ 2 れあらかじめ設定された基準と照合し Interrogation point て目的の細胞かどうか判別されます Constant Stream Velocity 3 目的の細胞がブレークオフポイントに達すると細胞を含んだ液滴が荷電され偏向板によって落下方向が偏向されて Droplet break-off point TMシステム回収容器にソーティングされます AutoGimbal 高度に洗練されたAutoGimbalシステムはピコモーターと画像並びにソフトウェアの組み合わせによりストリームと光軸の完全自動位置合わせを可 4 目的以外の細胞を含む液滴や空の液滴能にします 5軸電動モーターはカメラ画像を使用してソフトウェアアルゴは荷電されずに垂直に落下し廃液ポーリズムによりマイクロメーター単位での調整を自動で行います 3 Deflection plate トに入ります AutoGimbalシステムの主な機能は以下の通りですソフトウェアによる高精度自動アライメントソフトウェアによる画像処理とアルゴリズムを使用しての制御 5軸ピエゾ駆動モーターによるノズルとストリームのサブミクロンレベル Sorted cells での正確な微調整レーザーと検出器の交点に適切にノズルを配置するための3軸 X,Y,Z 軸モーター制御正確なドロップディレイ決定に必要なストリーム軌道を調整するための Waste stream 2軸ロールピッチモーター制御 light source 容易にメンテナンスでき再現性と信頼性の高い機構 Sorted cells Waste tube 4 Fiber optic collection AutoGimbalシステムにより日毎ユーザー毎で再現性良く常に適切なノズル位置に自動調整することができます AutoGimbalシステム垂直方向 Z ストリーム位置が固定されていないJet-in-Air方式では水平方向 X 焦点方向 Y 従来使用する度に手動でのストリームの位置合わせが必要でしたしかしS3eセルソーターではAutoGimbal システムによりこの煩雑な位置合わせ作業を自動化していますソフトウェアが各カメラの画像を元に 5軸に搭載されたピコモーターを制御しノズル位置をマイクロメーター単位で自動調整しますロール Roll 5軸制御の模式図 5 S3eセルソーターピッチ Pitch このAutoGimbalシステムにより日間差ユーザー間差の小さい適切なノズル位置を毎回再現することができます

ProDrop ProDrop30 Jet-in-AirS3eProDrop ProDrop ProLine Universal 1 2 3 ProDrop S3e ProDrop99% A Side scatter,

scatter, relative cell size 256 192 128 64 0 B R3 R3 R3 HTB-70 99.88% HTB-70 64.81% HEK 293 GFP 33.

R4 R4 GFP area, log HEK 293 GFP 99.36% Counts 1 2 3 2 1 A, B HEK 293-GFPHTB-70XY A C, D HTB-7099.

7 ProDrop ProDrop30 Jet-in-AirS3eProDrop ProDrop ProLine Universal ProDrop S3e ProDrop99% A Side scatter, relative cell complexity C Side scatter, relative cell complexity R Forward scatter, relative cell size B R3 R3 R3 HTB % HTB % HEK 293 GFP 33.75% GFP area, log GFP area, log D R4 R4 R4 GFP area, log HEK 293 GFP 99.36% Counts A, B HEK 293-GFPHTB-70XY A C, D HTB %HEK-293-GFP99.36% Bulletin 6806 Uncovering Actionable Correlations in Heterogeneous Cell Populations for Drug Discovery and Development S3e 6

8 AutoGimbal 5 3X,Y,Z 2 8DI ml ml well12 70 cm S3eProSortDI Run 850 S3e 7 S3e

9 A/B ND 60 cm cm Run Wash S3e S3e S3e S3e 8

柔軟な機能をあなたの研究室へ画期的な科学は研究室からもたらされます海外の研究者たちはS3eセルソーターで成果をあげています - これまでに幹細胞 CRISPR そしてシングルセル分析などの分野でS3eセルソーターを使った200報以上の論文が発表されていますここでは高純度で高い生存率を維持した細胞をソーティングすることの重要性を実証するいくつかの重要な論文をご紹介いたしますがん

ゲノム編集 CRISPR ander N et al. (2015). CRISPR/Cas9-induced L disruption of paraflagellar rod protein 1 and 2 genes in Trypanosoma cruzi reveals their role in flagellar attachment. mbio.

10 柔軟な機能をあなたの研究室へ画期的な科学は研究室からもたらされます海外の研究者たちはS3eセルソーターで成果をあげています - これまでに幹細胞 CRISPR そしてシングルセル分析などの分野でS3eセルソーターを使った200報以上の論文が発表されていますここでは高純度で高い生存率を維持した細胞をソーティングすることの重要性を実証するいくつかの重要な論文をご紹介いたしますがん Cancer J in HJ et al. (2016). Identification and validation of regulatory SNPs that modulate transcription factor chromatin binding and gene expression in prostate cancer. Oncotarget. ゲノム編集 CRISPR ander N et al. (2015). CRISPR/Cas9-induced L disruption of paraflagellar rod protein 1 and 2 genes in Trypanosoma cruzi reveals their role in flagellar attachment. mbio. Duhachek-Muggy S et al. (2017). Metalloproteasedisintegrin ADAM12 actively promotes the stem cell like phenotype in claudin-low breast cancer. Molecular Cancer. Matabaro E et al. (2017). Molecular switching system using glycosylphosphatidylinositol to select cells highly expressing recombinant proteins. Scientific Reports. Frame FM et al. (2016). Harvesting human prostate tissue material and culturing primary prostate epithelial cells. Methods in Molecular Biology. Chen Y et al. (2017). Gene editing in rat embryonic stem cells to produce in vitro models and in vivo reporters. Stem Cell Reports. ゲノミクス Genomics T ang WWC et al. (2015). A unique gene regulatory network resets the human germline epigenome for development. Cell. Alexandrov A et al. (2017). Fluorescence amplification method for forward genetic discovery of factors in human mrna degradation. Molecular Cell. Gil-Cruz C et al. (2016). Fibroblastic reticular cells 免疫学 Immunology regulate intestinal inflammation via IL-15 mediated control of group 1 ILCs. Nature Immunology. Imhof BA et al. (2016). CCN1/CYR61-mediated meticulous patrolling by Ly6Clow monocytes fuels vascular inflammation. Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. Goossens S et al. (2017). Oncogenic ZEB2 activation drives sensitivity toward KDM1A inhibition in T-cell acute lymphoblastic leukemia. Blood. 微生物学 Microbiology B idlingmaier S et al. (2016). Proteome-wide identification of novel ceramide-binding proteins by yeast surface cdna display and deep sequencing. Molecular and Cellular Proteomics. Winer BY et al. (2017). Long-term hepatitis B infection in a scalable hepatic co-culture system. Nature Communications. Vilchèze C et al. (2017). Enhanced respiration prevents drug tolerance and drug resistance in Mycobacterium tuberculosis. Proceedings of the National Academy of Science of the United States of America. 9 S3eセルソーター Chal J et al. (2015). Differentiation of pluripotent 幹細胞 Stem Cells stem cells to muscle fiber to model Duchenne muscular dystrophy. Nature Biotechnology. Chen YW et al. (2017). A three-dimensional model of human lung development and disease from pluripotent stem cells. Nature Cell Biology.

11 S3eセルソーター蛍光対応表 Fluorescence Emission Color Fluorophore or Dye Laser Excitation Maximum, nm 405// // DyLight Alexa Fluor Brilliant Violet BD Horizon V Pacific Blue DAPI ECFP EGFP 507 CFDA-SE ( )* DyLight 493 FITC Alexa Fluor Emission Maximum, nm /561/ /561 / EYFP DyLight PE, , tdtomato RFP (tag) DsRed, mcherry PE Texas Red, , Propidium Iodide ( )*, AAD ( )*, APC Cy PE Alexa Fluor 647, , Alexa Fluor PE-Cy5, , DyLight PerCP PerCP-Cy PE-Cy5.5, , APC-Cy Alexa Fluor DyLight Alexa Fluor APC-Cy PE-Cy7, , * Indicates Bio-Rad catalog number. 7-AAD, 7-aminoactinomycin D; APC, allophycocyanin; CFDA-SE, 5(6)-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester; DAPI, 4',6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride; ECFP, enhanced cyan fluorescent protein; EGFP, enhanced green fluorescent protein; EYFP, enhanced yellow fluorescent protein; FITC, fluorescein isothiocyanate; PE, phycoerythrin; PerCP, peridinin chlorophyll protein; RFP, red fluorescent protein. Filter Set Instrument Filter Configuration Catalog Number S3e Cell Sorter ( nm) J1 S3e Cell Sorter (/561 nm) S3e Cell Sorter (/ nm) 525/30 ( ) 540 LP J1 525/30 ( ) 586/25 ( ) 615/25 ( ) 655LP J1 526/48 ( ) 593/40 ( ) 670/30 ( ) 700LP S3e Cell Sorter (405//561 nm) J1 447/60 ( ) 525/30 ( ) 586/25 ( ) 600LP S3e Cell Sorter (405// nm) J1 447/60 ( ) 526/48 ( ) 593/40 ( ) 650LP S3e Cell Sorter (/561/ nm) J1 525/30 ( ) 586/25 ( ) 615/25 ( ) 655LP S3eセルソーター 10

12 S3 BioSafety Class S3 BioSafety Class I S3/S3eProSort S3 BioSafety HEPA 11 S3e

13 S3 BioSafety ClassS3/S3e ProSort TM BioSafety Class2 BioSafety BioSafety ProSort /HEPA BioSafety mm 4 2 S3/S3e HEPA0.3 m % HEPA Air in Air out Air in Air in System airflow S3e 12

S3e Tel.03-4-0331 Email:life_ps_jp@bio-rad.com

14 S3e Tel BRiCare S3e S3e Technical Q&A FAQTechnical Q&A Technical Brief Easy-to-Use Solutions Easy-to-Use Solutions Basic 10,000 S3/S3e Tips S3/S3e Technical Transfer 100,000 Web URL Bio-Rad Easy-to-Use Solutions セルソーターを使用したフローサイトメトリーの解析とソーティングを講義と実習形式でトレーニングいたしますプロトコールを実践するだけでなくよりよい結果にたどり着くためのを盛り込んでいますセルソーティングは従来の機械操作の煩雑さから敬遠されがちな実験でしたがセルソーターの全自動スタートアップセッティングにより非常に簡便にソーティングができるようになりました基礎的事項原理など見落とされがちな内容についても解説いたしますトレーニング内容時間 :: ~ : * 弊社で用意したビーズを用いた実習になります参加費コースフローサイトメトリー入門 ~ 解析からソーティングまで~ フローサイトメトリーの解説サンプル調製時の注意点セルソーターの操作方法の説明ビーズを用いた実習トラブルシューティングメンテナンス方法の説明円 * 消費税は別途加算いたします弊社代理店経由でのお支払いになりますお申し込み欄に代理店名の記入をお願いします訪問トレーニングをご希望の場合は別途出張費が加算されます申し込み方法からのお申し込みになります検索もしくはを入力していただきのサイト内をご覧ください検索開催場所 < 会場 > 弊社平和島ラボお客様先 ( 東京都大田区平和島京浜トラックターミナル号棟 ): お問合せ先トレーニングコース事務局遺伝子導入機器ユーザーの方を対象に正しく安全に機器をご利用いただくためのトレーニングコースです装置の取り扱いをはじめ遺伝子導入実験の基礎と条件検討のポイントを解説しますトレーニング内容対象製品 :Helios Gene Gun System, PDS-1000/He System, Gene Pulser Xcell / MXcell 時間 :13:00 16:00 (Helios / PDS-1000) 13:00 ~ 14:30 (Gene Pulserシリーズ ) 遺伝子導入の基礎知識様々な遺伝子導入手法とその特徴サンプル調製方法 (Helios Gene Gun System, PDS-1000/He Systemのみ ) 装置の概要と取り扱い方法条件検討の戦略とトラブルシューティング Gene Pulser XcellとMXcellのコースは講義と装置の操作方法の説明のみとなります参加費 20,000 円 (4 名様まで ) 5 名以上の場合は 1 名様につき5,000 円が加算されます * 消費税は別途加算いたします弊社代理店経由でのお支払いになりますお申し込み欄に代理店名の記入をお願いします * 別途出張費が加算されます申し込み方法 Web からのお申し込みになります検索もしくは URL を入力していただき Bio-Rad Easy-to-Use Solutions のサイト内をご覧ください Bio-Rad ETUS 検索お客様先開催場所お問合せ先 Easy-to-Use Solutions Basic コース原理からわかる遺伝子導入 Tel : トレーニングコース事務局 Bio-Rad ETUS URL : 13 S3e

機器の安定稼働のために Bio-Rad Expert Care はじめにバイオラッドは科学の進歩と研究開発の推進に寄与するライフサイエンス製品を 60 年以上にわたって皆様にお届けして参りました私たちは限られた予算の中で正確なデータを確保しなければならない研究現場の皆様のニーズをきめ細かく把握するよう常に心がけており製

15 機器の安定稼働のために Bio-Rad Expert Care はじめにバイオラッドは科学の進歩と研究開発の推進に寄与するライフサイエンス製品を 60 年以上にわたって皆様にお届けして参りました私たちは限られた予算の中で正確なデータを確保しなければならない研究現場の皆様のニーズをきめ細かく把握するよう常に心がけており製品をご購入いただいた後にも十分なケアをご提供することをこれまで以上に大切であると考えています Bio-Rad Expert Care は高度な専門知識を備えたエンジニアによるお客様サポート制度です最新の手順パーツツールをご用意し経験豊富なエンジニアがバイオラッドならではの専門性の高いサポートをご提供致しますバイオラッドでは機器の安定稼動のために様々なサポートプランを提供していますお客様のご要望にあった最適なプランをお選びくださいプランのご紹介 Complete Support Plan MyPlan すべてのサービスメニューが含まれる包括的なプランです機器の性能と安定稼働を最大限に引き出すことができますメンテナンス費用が事前に確定しますので故障等による予想外の費用発生を防止できます計画に基づく点検サービスをご提供します安心の優先対応をご提供しますお好きなサービス内容をお客様がご自由に設定していただくプランですご予算に合わせて選択いただけますバリデーションサービスキャリブレーションなどお客様のニーズにお応えします Performance Plan Extended Cover Plan 機器の点検を行うプランです機器のメンテナンス状態とデータの正確性を点検確認します点検ご希望時にいつでもお申込みいただけます予算に制約のある方へお勧めします機器購入時にリーズナブルな価格で保証期間延長が可能です安心の優先対応をご提供します Proactive Plan Repair Service 機器の点検を行うプランです機器のメンテナンス状態とデータの正確性を点検確認しますお客様の計画に沿って年単位で点検を実施しますスケジュール管理の心配がなく管理が簡単安心です機器の性能と安定稼働を最大限に引き出すことができますオンサイトリペアとセンドバックリペアのうちご都合の良い方をお選びいただけますいつでもお申込みいただけ個別に料金をお支払いいただけます予算に制約のある方へお勧めしますセルソーターはレーザーや光学部品をはじめとする様々な高額部品で構成されますまた装置の特性上機器のメンテナンスは不可欠です Complete Support Planや Performance Planでの点検作業では汚損すると液滴が不安定になるノズルチップ消耗部品であるサンプルチューブシース液やエアーフローの各フィルターの交換が含まれております機器を安定的により永くご使用いただくために Bio-Rad Expert Careをご検討ください点検作業故障発生時その他消耗部品交換費用派遣費用年 2 回点検作業費用交換部品費用レーザー交換費用技術費用派遣費用優先対応契約の有無 Complete Support Plan Proactive Plan Performance Plan プラン名称 S3eセルソーター 14

16 S3e Jet-in-Air 100,000 events/sec 30,000 events/sec 99% FCS ml ml MESF for FITC and PE m 2070% nm 100 mw 405 nm100 mw 561 nm100 mw nm100 mw FSC&SSCPMT 4PMT V, 50/60 Hz 300 W 100 m WDH cm 2 90 kg Ordering Information S3e J J J J J J1 S3e 405// nm 4 S3e 405//561 nm 4 S3e /561/ nm 4 S3e / nm 4 S3e /561 nm 4 S3e nm S3 BioSafety Class ProLine Universal 5 ml ProLine Rainbow5 ml ProFlow 8 4 L ProFlow Sorting Grade Water4 L5 SPHERO is a trademark of Spherotech, Inc. HEPA is a trademark of HEPA Corporation, Inc. Alexa Fluor, DyLight, Pacific Blue, and Texas Red are treadmarks of Thermo Fisher Scientific, Inc. Brilliant Violet and Horizon are trademarks of BD Biosciences. Cy is a trademark of GE Healthcare TEL FAX TEL FAX TEL FAX TEL FAX C10510L 1904c

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