MDV 薬物動態試験の概要文 目次 薬物動態試験の概要文 まとめ 分析法 吸収及び血中濃度 分布 代謝 排泄...35

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1 2.6.4 薬物動態試験の概要文 目次 薬物動態試験の概要文 まとめ 分析法 吸収及び血中濃度 分布 代謝 排泄 薬物動態学的薬物相互作用 その他の薬物動態試験 考察及び結論 図表 参考文献...39 表 表 略号及び用語の定義一覧...3 表 非臨床試験における生体試料中薬物濃度測定法...10 表 ラット又はイヌに 14 C-を投与したときの試料分析法...12 表 をヒト, マウス, ラット, イヌ又はサルに単回若しくは反復 経口投与したときの血漿中 の薬物動態パラメータ...13 表 イヌに を種々の製剤として単回経口投与したときの相対バ イオアベイラビリティ...21 表 第 I 相代謝物の化学構造...25 表 第 II 相代謝物の化学構造...26 表 ヒト, ラット及びイヌに を反復経口投与したときの血漿中 M1 の薬物動態パラメータ...34 表 ヒト, ラット及びイヌに を反復経口投与したときの血漿中 M2 の薬物動態パラメータ...35 表 ラットに 14 C-を単回経口投与したときの放射能排泄率...36 表 イヌに 14 C-を単回経口投与したときの放射能排泄率...37 アステラス製薬 1

2 2.6.4 薬物動態試験の概要文 図 図 の化学構造...8 図 マウスに を 50 mg/kg 単回経口投与したときの血漿中 濃度...14 図 マウスに を単回経口投与したときの投与量補正した AUC 24h と投与量の関係...15 図 ラットに を 20 mg/kg 単回経口若しくは静脈内投与したとき の血漿中 濃度...16 図 ラットに を反復経口投与したときの投与量補正した AUC 24h と投与量の関係...17 図 イヌに を 3 mg/kg 単回経口若しくは静脈内投与したときの 血漿中 濃度...18 図 イヌに を反復経口投与したときの投与量補正した AUC 24h と 投与量の関係...19 図 サルに を単回経口投与したときの血漿中 濃度...20 図 ラットにおける推定代謝経路...30 図 イヌにおける推定代謝経路...32 図 ラット, イヌ及びヒトにおける推定代謝経路

3 2.6.4 薬物動態試験の概要文 薬物動態試験の概要文 本項で使用した略号及び用語の定義一覧を表 に示す 表 AUC 24h AUC 7d BCS Caco-2 細胞 C b /C p 比 略号及び用語 略号及び用語の定義一覧 定義 Area Under the Plasma Concentration versus Time Curve from Time Zero to 24 Hours after Dosing: 投与後 0~24 時間における血漿中濃度 時間曲線下面積 Area Under the Plasma Concentration versus Time Curve from Time Zero up to 7 Days: 投与後 0~7 日目における血漿中濃度 時間曲線下面積 Biopharmaceutics Classification System Human Colon Cancer Cells: ヒト結腸癌由来細胞 Blood-to-Plasma Radioactivity Concentration Ratio: 全血 / 血漿中放射能濃度比 CMC C max eq GLP Gluc HPLC IV LC-MS/MS LC-MS n LSC M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 M9 Carboxymethylcellulose: カルボキシメチルセルロース Maximum Concentration: 最高濃度 Equivalents: 当量 Good Laboratory Practice Glucuronic Acid: グルクロン酸 High-Performance Liquid Chromatography: 高速液体クロマトグラフ法 Intravenous: 静脈内 Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry: 液体クロマトグラフィー タンデム質量分析法 Liquid Chromatography Multiple-Stage Mass Spectrometry: 液体クロマトグラフィー 多段階質量分析法 Liquid Scintillation Counting: 液体シンチレーション検出法 Metabolite MDPC0001: 代謝物 MDPC0001, カルボン酸体 Metabolite MDPC0002: 代謝物 MDPC0002, N- 脱メチル体 Metabolite MDPC0003: 代謝物 MDPC0003,M4 N- 脱メチル体 Metabolite MDPC0004: 代謝物 MDPC0004, ヒダントイン体 Metabolite MDV3105: 代謝物 MDV3105,M4 カルボン酸体 Metabolite MDV3106: 代謝物 MDV3106, 水酸化体 Metabolite MDPC196: 代謝物 MDPC196, シアノ水和体 M2 シアノ水和体,M7 N- 脱メチル体 3

4 2.6.4 薬物動態試験の概要文 M10 M11 M12 M13 M14 M15 M16 M17 NA ND NS P app QD QWBA S9 画分 略号及び用語 定義 M1 シアノ水和体,M7 カルボン酸体,M9 カルボン酸体 Metabolite MDPC197: 代謝物 MDPC197,M1 グルクロン酸抱合体 Metabolite MDPC198: 代謝物 MDPC198,M5 グルクロン酸抱合体 Metabolite MDPC200: 代謝物 MDPC200, N- メチル -S- グルタチオン抱合体 N- メチル -S- システイニルグリシン N- メチル -S- システイン N- メチル -S- アセチルシステイン M5 タウリン抱合体 Not Applicable: 該当せず Not Determined: 測定せず Not Sampled: 採取せず Apparent Permeability Coefficient: 透過係数 Once Daily:1 日 1 回 Quantitative Whole-Body Autoradiography: 定量的全身オートラジオグラフ法 9000 g Supernatant:9000 g 上清画分 SD Standard Deviation or Sprague-Dawley : 標準偏差若しくは Sprague-Dawley SSC t 1/2 Tau TK t max Solid Scintillation Counting: 固体シンチレーション検出法 Elimination Half-Life: 消失半減期 Taurinyl Toxicokinetics: トキシコキネティクス Time to Maximum Plasma Concentration: 最高血漿中濃度到達時間 4

5 2.6.4 薬物動態試験の概要文 まとめマウス, ラット, イヌ及びサルに を投与したときの吸収, 分布, 代謝及び排泄の特徴を明らかにするために, 放射性標識体及び非標識体を使用して, 種々の in vitro 及び in vivo 試験を実施した これらの試験で使用された動物種はいずれも本薬の薬理及び毒性試験で使用されたものと同じであり, 投与経路は薬理及び毒性試験と同様に臨床での投与経路である経口投与を主体とした (2.6.2 薬理試験の概要文 ;2.6.6 毒性試験の概要文 ) 経口投与に用いた投与液は, 投与形態の検討試験を除き, 毒性試験や臨床試験と同じく溶液とした 一部の試験においては, 薬物動態の検討に主眼をおいて投与経路, 投与液及び投与量を適宜選択した 複数の非臨床薬物動態試験ではヒト主要代謝物 MDPC0001(M1) 及び MDPC0002(M2) も合わせて評価した ( 表 ) M1 は のアミド基が加水分解されカルボン酸となった代謝物であり,M2 は の N-メチル基が脱メチル化された代謝物である M1 は 様の薬理活性を示さないが,M2は と同程度の薬理活性を示すことが明らかとなっている ( 代謝物の効力を裏付ける薬理作用 ) 分析法マウス, ラット, イヌ及びサルの血漿中及び脳内,M1 及び M2 濃度は液体クロマトグラフィー タンデム質量分析法 (LC-MS/MS) により測定した 14 C で標識された 及び代謝物を用いた試験における試料中放射能は, 液体シンチレーション検出法 (LSC) 又は定量的全身オートラジオグラフ法 (QWBA) により測定した 代謝物プロファイルは高速液体クロマトグラフ法 (HPLC) により得られた画分を固体シンチレーション検出法 (SSC) により定量して検討し, 代謝物同定は液体クロマトグラフィー 多段階質量分析法 (LC-MS n ) により実施した 吸収及び血中濃度 は水への溶解性が低い低分子であり (3.2.S.3.1. 構造その他の特性の解明 ), ヒト結腸癌由来細胞 (Caco-2 細胞 ) 単層膜において透過係数 (P app ) が cm/s 以上と高い透過性を示すことから, 本薬は Biopharmaceutics Classification System(BCS) クラス 2に分類される ( Biopharmaceutics Classification System(BCS)) イヌに を溶液として経口投与したときのバイオアベイラビリティは, 懸濁液, カルボキシメチルセルロース (CMC) 懸濁液やナノ粒子懸濁液として投与した場合と比べて高かった また, 溶液に他の溶媒や界面活性剤を加えてもバイオアベイラビリティの更なる改善はみられなかった 以上の結果から, 非臨床及び臨床試験では溶液を使用することとした マウス, ラット, イヌ及びサルにおいて は良好な吸収性を示した 低用量の を経口投与したときの絶対バイオアベイラビリティは, ラットで 97%, イヌで 73% であった ま 5

6 2.6.4 薬物動態試験の概要文 た,をマウス, ラット, イヌ及びサルに経口投与したとき, バイオアベイラビリティは投与量の増大とともに減少した ラット及びイヌに を単回静脈内投与したときの分布容積の平均値は体内総水分量の約 2 倍に相当し, 薬物が血管外まで広く分布していることが示唆された の消失半減期 (t 1/2 ) はげっ歯類において 8~12 時間, イヌとサルにおいて 28~50 時間であり, いずれの動物種においても消失は緩やかであった 全身クリアランスはラット及びイヌにおいて肝血漿流量の 5% 以下と小さかった を 1 日 1 回反復経口投与したとき, 平均蓄積係数は, ラットで約 1~3, イヌで約 1 ~4 であった 本結果は投与間隔に比し t 1/2 が長いことを反映しているものと考えられた なお, ヒトの蓄積係数は 8.3 であり, ラット及びイヌの蓄積係数よりも高値であった ( 患者を対象とした第 I 相用量漸増試験 ( 第 I 相試験 [S ])) 動物の単回及び反復経口投与後の血漿中濃度から, 代謝の自己誘導や自己阻害は示唆されなかった ラットでは血漿中薬物濃度に性差が認められたが ( 雌の AUC 24h は雄の約 2 倍 ), マウス, イヌ及びサルでは性差は認められなかった ヒトにおいては性差の有無は不明である 分布ラットに の 14 C 標識体 ( 14 C-) を単回経口投与したとき, 放射能は全身に速やかに分布した 多くの組織において, 放射能濃度は投与後 4 時間に最高値を示し, そのときの濃度は消化管を除くと肝臓で最も高く, 次いで脂肪及び副腎の順であった 放射能濃度の t 1/2 は肝臓で最も長く (29.5 時間 ), 視床下部で最も短かった (7.27 時間 ) ラットに 14 C-を 1 日 1 回 21 日間反復経口投与したとき, 血漿中放射能濃度に反復投与による明確な変化は認められなかった 最終投与後の組織内放射能濃度は投与初日の 0.8~2.3 倍であり, 最終投与後 168 時間には最高濃度 (C max ) の 3.83% 以下に低下した マウス及びラットに 又は 14 C-を経口投与したとき,,M1 及び M2 が脳において検出され, これらが血液脳関門を透過することが明らかとなった マウスにおいては脳 / 血漿中濃度比から,と M2は血液脳関門を容易に透過できると考えられたが, M1 は血液脳関門の透過性が低いと考えられた の in vitro 血漿蛋白結合率はマウスで 95%~97%, ラットで 94%, ウサギで88%~90%, イヌで 94%~96%, ヒトで 97%~98% であり, いずれの動物種でも高値を示した また, 検討した薬物濃度範囲 [0.05~25 µg/ml( 雌性ウサギのみ 0.5~25 µg/ml)] では, の蛋白結合率に明らかな濃度依存性は認められなかった ヒトの血漿における主要結合蛋白はアルブミンであった ( 蛋白結合及び血球移行性,9785-ME-0008) M1の in vitro 血漿蛋白結合率はマウス, ラット, ウサギ, イヌ及びサルにおいて 92%~97% であり, ヒトでは 98% であった M2 の in vitro 血漿蛋白結合率はマウス, ラット, ウサギ, イヌ及びサルにおいて 86%~94% であり, ヒトでは 95% であった 検討した薬物濃度範囲 (0.5~25 µg/ml) では,M1 及び M2 の蛋白結合率に明らかな濃度依存性は認められなかった 6

7 2.6.4 薬物動態試験の概要文 14 C- をラット及びイヌに経口投与したときの全血 / 血漿中放射能濃度比 (C b /C p 比 ) は 0.456~0.660 であり, 血球移行性は極めて低いと考えられた 血球移行性に関しては, ヒトにお いても同様の結果が得られている (C b /C p 比 =0.55; 蛋白結合及び血球移行性 ) 代謝 14 C-をラット, ウサギ, イヌ及びヒトの血液, 肝 9000 g 上清画分 (S9 画分 ) 及び凍結保存肝細胞とインキュベートしたとき, ヒト特異的な代謝物の生成は認められなかった 血液においてはラット, ウサギ, イヌのいずれにおいても M1 が主代謝物として検出されたが, ヒトでは M1 は検出されなかった 肝 S9 画分では M6が, 凍結保存肝細胞では M1 及び M2がラット, ウサギ, イヌ及びヒトのいずれにおいても主代謝物として認められた は, ラット, イヌ及びヒトのいずれにおいても同様の第 I 相代謝 ( 脱メチル化, 酸化及び加水分解 ) を受けると考えられた いずれの動物種においてもカルボン酸を官能基に持つ代謝物が主たる第 I 相代謝物であり, 更に第 II 相抱合代謝を受けると考えられた 第 II 相代謝物としてはグルクロン酸抱合体とその転位体, グルタチオン抱合体とその逐次代謝物, 及びタウリン抱合体が検出されているが, いずれも動物の胆汁のみで認められた ヒトでは第 II 相代謝物は検出されていないが, ヒトでは胆汁中の代謝物を分析していないことが一因として考えられた なお, 現時点までに反応性代謝物の生成を示唆するデータは得られていない ヒトで観察されたほとんどの代謝物はラット及びイヌでも検出された ヒト特異的な代謝物はいずれもシアノ水和体 (M7,M9 及び M10) であり, これらはヒトの尿及び糞において検出されたが, ヒト血漿にはほとんど認められなかった ヒト血漿中の主要代謝物は M1 及び M2 であり, これらはいずれもラット及びイヌの血漿中で検出された ラット 1 週トキシコキネティクス (TK) 試験 ( ラット 1 週間反復投与 TK 試験,9785-TX-0011) 及びイヌ 39 週毒性試験の TK 中間報告 ( イヌ 39 週間反復投与毒性試験投与 8 週 TK 中間成績,9785-TX-0013) におけるこれら代謝物の最高曝露量の平均値は, ヒト臨床用量 (160 mg) における定常状態の曝露量の平均値と比較して,M1 ではそれぞれ 31%~62% 及び 96%~125% であり,M2 では両動物種とも 10% 未満であった 排泄 14 C-を経口投与したとき, ラットでは尿中排泄と糞中排泄は同程度に重要な排泄経路であった イヌでは, ラットと異なり, 尿中排泄が主要な放射能排泄経路であり, ヒトと類似していた ( 健康被験者を対象とした単回投与マスバランス試験 ( マスバランス試験 [CL-0001])) また, ラットでは薬物由来成分の腸肝循環も認められた すべての動物種において, 尿中の放射能の主成分はカルボン酸体 (M1 及び M5) であった 未変化体や M2 はヒトの尿では極微量検出されたが, ラット及びイヌの尿では全く検出されなかった 未変化体は糞中にはわずかしか検出されず ( ラットで投与量の 2%, イヌで同 9%), 本薬の吸収性が極めて良好である 7

8 2.6.4 薬物動態試験の概要文 ことが示唆された また, 尿及び糞のいずれにおいても未変化体がほとんど検出されず, 代謝物 が主であることから, 本薬の主消失経路は代謝であると考えられた 分析法添付資料 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, , 5, , 3, , 2, 3, 4, 5 は図 に示す化学構造式を有する低分子であり, その分子量は である 一部の非臨床薬物動態試験では の 14 C 標識体 ( 14 C-) も使用しており, その放射化学的純度は 95% 以上であった 図 の化学構造 NOTE: Asterisk denotes position of the 14 C label. 動物の血漿中及び脳内,M1 及び M2 濃度は LC-MS/MS 法により測定した ( 表 ) これらの測定法の多くはバリデーション試験が実施されている 一部の測定法(PRO3100NC19, PRO3100NC98 及び MEI- -009) については少なくとも直線性, 日内真度及び精度が合格基準を満たすことが確認されている 分析実施施設の名称及び所在地を表 に示した 表 には, バリデーション試験結果 ( 選択性 / 特異性, 定量下限, 回収率, 日内及び日間の精度及び真度, 希釈妥当性, 安定性 ) 及び適格性確認試験結果を示した 表 に放射能の組織分布, マスバランス及び生体内変換 ( 代謝 ) に関する試験で用いた分析法を示した 放射能は LSC 及び QWBAにより測定した 代謝物プロファイルは HPLC により得られた画分を SSCにより定量して検討した 標準物質が利用可能な場合は LC-MS n を用いて代謝物の化学構造を同定した 標準物質がない場合は LC-MS n で得られたマススペクトルから代謝物の化学構造を推定した 本薬の研究開発後期において, げっ歯類の血漿では, エステラーゼにより M2 が M1 へ変換されることが明らかとなった 採血後速やかにジクロルボス ( リン酸ジメチル 2,2-ジクロロビニル ) を血液に添加することにより, この変換を完全に停止させることが可能であるが, この試料採取手順は ラットの脳における代謝物同定試験 (PRO3100NC84, 表 ) 及び ラットにおける代謝物プロファイリング試験 (9785-ME-0007, 表 ) の終了後に確立されたため, 当該 8

9 2.6.4 薬物動態試験の概要文 試験で報告された M1 及び M2 濃度は不正確である可能性が考えられた 他の試験においては適 切な試料採取手順が用いられたため,M1 及び M2 濃度は正確に測定されていると考えられる 9

10 2.6.4 薬物動態試験の概要文表 非臨床試験における生体試料中薬物濃度測定法 Method a in mouse plasma (Table , PRO3100NC19), M1, and M2 in mouse plasma (Table , 9785-ME-5001), M1, and M2 in mouse plasma (Table , 9785-ME-5011), M1, and M2 in mouse brain (Table , 9785-ME-5014) in rat plasma (Tables and , PRO3100NC02) in rat plasma (Table , PRO3100NC98), M1, and M2 in rat plasma (Table , 9785-ME-5003), M1, and M2 in rat plasma (Table , 9785-ME-5012) in dog plasma (Table , MEI- -009) in dog plasma (Tables and , PRO3100NC07) Qualification of Method Lower Limit of Quantitation (μg/ml) Long Term Frozen Stability Nonclinical Studies in which the Method was Used Qualified b ND Table , PRO3100NC21 Validated c (Table , 20 C, 6 months 9785-ME-5005) Validated c ND Validated c, d (Table , 20 C, 6 months 9785-ME-5015) 80 C, 12 months; Validated C, 12 months (Table , PRO3100NC03) Table , 9785-TX-0002 Table , 9785-ME-5016 Table , 9785-TX-0005 Table , 9785-TX-0007 Table , 9785-TX-0008 Table , 9785-TX-0009 Table , 9785-ME-5016 Table , PRO3100NC15 Table , PRO3100NC17 Table , PRO3100NC31 Table , PRO3100NC39 Qualified b ND Table , PRO3100NC108 Validated c (Table , 20 C, 6 months 9785-ME-5007) Validated c ND Table , 9785-TX-0011 Qualified b ND Table , PRO3100NC11 Validated C, 12 months; 20 C, 12 months (Table , PRO3100NC06) NA Table , PRO3100NC14 Table , PRO3100NC18 Table , PRO3100NC38 Table , PRO3100NC53 10

11 2.6.4 薬物動態試験の概要文表 非臨床試験における生体試料中薬物濃度測定法 ( 続き ) a Method a in dog plasma (Table , PRO3100NC97), M1, and M2 in dog plasma (Table , 9785-ME-5010), M1, and M2 in monkey plasma (Table , 9785-ME-5002) Qualification of Method Lower Limit of Quantitation (μg/ml) Long Term Frozen Stability Validated C, 6 months; 20 C, 1 month Validated c (Table , 20 C, 6 months 9785-ME-5009) Validated c (Table , 20 C, 6 months 9785-ME-5006) All bioanalytical methods used LC-MS/MS. Full details, including the analytical testing facility, are provided in Section b Assessed for analytical reliability prior to use in non-glp studies. c Applies to all 3 analytes. d Expressed in µg/g GLP, good laboratory practices; LC-MS/MS, liquid chromatography tandem mass spectrometry; NA, not applicable; ND, not determined Nonclinical Studies in which the Method was Used Table , PRO3100NC94 Table , 9785-TX-0013 Table , 9785-TX

12 2.6.4 薬物動態試験の概要文 表 ラット又はイヌに 14 C- を投与したときの試料分析法 Species Study Number a Tissue Metabolite Metabolite Excretion Distribution Profiling Identification LSC and 9785-ME-0003 Rat QWBA b LSC b HPLC and SSC b LC-MS n c (9785-ME-0015, (9785-ME-0007) 9785-ME-0034) PRO3100NC84 LSC b NA HPLC and SSC b LC-MS n d Dog 9785-ME-0002 NA LSC b HPLC and SSC b a (9785-ME-0006) LC-MS n c (9785-ME-0014, 9785-ME-0034) Study number for in-life phase. In cases where the metabolite profiling and metabolite identification were performed under separate study numbers, the corresponding numbers are indicated in parentheses beneath the analytical method. b Analytical testing facility:. c Analytical testing facility: d Analytical testing facility: HPLC, high-performance liquid chromatography; LC-MS n, liquid chromatography in combination with multiple-stage mass spectrometry; LSC, liquid scintillation counting; NA, not applicable; QWBA, quantitative whole-body autoradiography; SSC, solid scintillation counting 吸収及び血中濃度本薬は水溶性が低く, 膜透過性が良いことから,BCSクラス 2に分類される 種々の吸収試験の結果から,Caco-2 細胞単層膜を受動拡散により容易に透過し, マウス, ラット, イヌ及びサルにおいて良好な吸収性を示すことが明らかとなっている In vitro 吸収性添付資料 メンブレンフィルター上に培養した Caco-2 細胞を用いて, 14 C-の膜透過性及び双方向透過性を評価した ( Caco-2 細胞膜透過性, 9785-ME-0031) は Caco-2 細胞単層膜に対して P app が cm/s 以上と良好な膜透過性を示した また, 頂端膜 [apical(a)] 側から基底膜 [basolateral(b)] 側への輸送と,B 側から A 側への輸送の間に大きな違いは認められなかった 以上の結果から,の膜透過性は良好であり, 受動拡散により Caco-2 細胞単層膜を透過すると考えられた In vivo 吸収性及びバイオアベイラビリティ 若しくは 14 C- をマウス, ラット, イヌ及びサルに静脈内又は経口投与したときの血漿及び血液中濃度を測定した 経口投与時の投与形態は特別な場合を除いて毒性試験や臨床試験で用いた溶液とし, 食餌の条件は非絶食とした 12

13 2.6.4 薬物動態試験の概要文 をラット及びイヌに単回経口投与したとき, 低用量における絶対バイオアベイラビリティはそれぞれ 97% 及び 73% であった をマウス, ラット, イヌ及びサルに経口投与したとき, 投与量の増大とともにバイオアベイラビリティは減少した ラットにおいては血漿中濃度に性差が認められた ( 雌性ラットにおいて AUC 24h が約 2 倍であった ) が, マウス, イヌ及びサルにおいては性差は認められなかった マウス, ラット, イヌ, サル及びヒトに を経口投与したときの薬物動態パラメータを表 に示す 表 Species (Study No.) Human a (Section , 9785-CL-0007) Mouse a (Table , 9785-TX-0007) Rat a (Table , PRO3100NC39) Dog a (Table , PRO3100NC38) Monkey (Table , 9785-TX-0003) a をヒト, マウス, ラット, イヌ又はサルに単回若しくは反復経口投与したときの血漿中 の薬物動態パラメータ Dose Schedule Gender C max (µg/ml) Systemic Plasma Exposure C max Ratio to Human b AUC 24h AUC 24h (µg h/ml) Ratio to Human b 160 mg/day QD 49 days Male 16.6 NA 322 NA 30 mg/kg/day 1 week Male Female mg/kg/day 1 week Male Female mg/kg/day QD 26 weeks Male Female mg/kg/day QD 26 weeks Male Female mg/kg/day QD 26 weeks Male Female mg/kg/day QD 5 weeks Male Female mg/kg/day QD 13 weeks Male mg/kg/day QD 13 weeks Male mg/kg/day QD 10 weeks Male mg/kg single dose Male Female mg/kg single dose c Male Female mg/kg single dose Male Female Reported from studies where high dosages were administered for long dosing period and C max and AUC 24h values are available. b Ratio of animal C max or AUC 24h value to the typical exposure value reported for humans in this table. c Two 30 mg/kg doses given 4 hours apart AUC 24h, area under the plasma concentration versus time curve from time zero to 24 hours after dosing; C max, maximum observed plasma concentration; NA, not applicable; QD, once daily. 13

14 2.6.4 薬物動態試験の概要文 マウス添付資料 , 雄性 CD-1(ICR) マウスに を 50 mg/kg 単回経口投与したとき, 最高血漿中濃度到達時間 (t max ) は投与後約 4 時間であり,t 1/2 は約 11 時間であった ( 表 , 図 , PRO3100NC21) 図 マウスに を 50 mg/kg 単回経口投与したときの血漿中 濃度 100 concentration g/ml (μg/ml) Time Hours (h) Source: Table , PRO3100NC21 NOTE: Each point corresponds to the mean (± SD) of determinations in 3 male ICR mice. SD, standard deviation 雌雄の ICR マウスに を 50,100,200,400,800 及び 1600 mg/kg 単回経口投与したときの吸収性を評価した ( 表 ,9785-TX-0002) 50~800 mg/kg の投与群では は溶液として投与したが,1600 mg/kg の投与群では溶解度の限界により懸濁液として投与した 800 mg/kg 投与群においては死亡率が高く TKは十分に評価できなかった 400 mg/kg までは投与量の増加に応じて血漿中濃度は増大するものの, その程度は投与量比よりも小さいことから, バイオアベイラビリティは投与量増加とともに減少したと考えられた ( 図 ) 1600 mg/kg 投与群における血漿中濃度は 400 mg/kg 投与群のそれとほぼ同等か, 又は下回ったことから,1600 mg/kg を懸濁液として投与しても曝露量は増大しないことが明らかとなった また, 本試験において, 薬物動態パラメータに性差は認められなかった 14

15 2.6.4 薬物動態試験の概要文 図 マウスに を単回経口投与したときの投与量補正した AUC 24h と投与量の関係 Dose-normalized AUC 24h ( g.h/ml)/(mg/kg) Males Females 50 mg/kg 100 mg/kg 200 mg/kg 400 mg/kg 1600 mg/kg (Dose) Source: NOTE: Table , 9785-TX-0002 Each point corresponds to an estimate based on pooled plasma concentration data from multiple ICR mice. NOTE: Although the study included an 800 mg/kg dose group, AUC 24h values are not available for that treatment due to unscheduled deaths (9785-TX-0002). NOTE: was dosed as a solution in all dose groups except 1600 mg/kg, in which it was dosed as a suspension. AUC 24h, area under the plasma concentration versus time curve from time zero to 24 hours after dosing;, ラット添付資料 , 3, , 5, 6, 雄性 Sprague-Dawley(SD) ラットに を 20 mg/kg 単回静脈内投与したとき, は約 9 時間の t 1/2 で血漿中から消失した ( 図 , 表 ,PRO3100NC108) 分布容積は 1.03~1.17 L/kg であり, 全身クリアランスは ~ L/h/kg であった 分布容積の平均値 (1.11 L/kg) はラットの体内総水分量 (0.668 L/kg,Davies,1993) の 1.7 倍に相当した また, 全身クリアランスの平均値 ( L/h/kg) は, ラットにおける肝血漿流量 (1.79 L/h/kg,Davies, 1993) の約 5% に相当した 雄性 SD ラットに を 20 mg/kg 単回経口投与したとき,t max は投与後 6 時間であり,t 1/2 は約 10 時間であった 絶対バイオアベイラビリティの平均値は 97% ( 範囲 :71%~117%) であった 15

16 2.6.4 薬物動態試験の概要文 図 ラットに を 20 mg/kg 単回経口若しくは静脈内投与したときの血漿中 濃度 30 Linear Scale Log Scale concentration g/ml (μg/ml) Source: Table , PRO3100NC108 NOTE: Each point corresponds to the mean (± SD) of determinations in 6 male Sprague-Dawley rats. IV, intravenous; SD, standard deviation. IV Bolus Oral Gavage Time hours (h) 雌雄の SDラットに を 10,30 及び 100 mg/kg/day 反復経口投与したとき (PRO3100NC15, PRO3100NC17,PRO3100NC31 及び PRO3100NC39), 血漿中濃度は投与量の増加に応じて増大するものの, その程度は投与量比よりも小さかった ( 図 ) したがって, バイオアベイラビリティは投与量の増大に応じて減少すると考えられた また, の曝露量は反復投与により増加する傾向を示し, 平均蓄積係数 ( 反復投与後の AUC 24h / 単回投与後の AUC 24h ) は約 1 ~3 であった (PRO3100NC31 及び PRO3100NC39) なお, ラットにおける反復投与後の の AUC 24h には性差が認められ, 雌の方が雄と比較して約 2 倍高かった ( 図 ) ラットの単回及び反復投与後の血漿中濃度から, 代謝の自己誘導や自己阻害は示唆されなかった 16

17 2.6.4 薬物動態試験の概要文 図 ラットに を反復経口投与したときの投与量補正した AUC 24h と投与量の関係 35 Dose-normalized AUC 24h ( g.h/ml)/(mg/kg) Females Males 5 10 mg/kg 30 mg/kg 100 mg/kg (Dose) NOTE: Each point corresponds to the mean of determinations in PRO3100NC15, PRO3100NC17, PRO3100NC31, and PRO3100NC39; within each study, dose-normalized AUC 24h estimates were based on pooled concentration data from multiple Sprague-Dawley rats. AUC 24h, area under the plasma concentration versus time curve from time zero to 24 hours after dosing. 雄性 SDラットに 14 C-を 30 mg/kg(108 µci/kg) 単回経口投与したとき, 血液及び血漿中の平均放射能濃度の t max はともに投与後 8 時間であり ( 表 ,9785-ME-0003), の血漿中濃度の t max とよく一致していた ( 表 ,9785-ME-0007) 胆管にカニューレを挿入した雄性 SDラットに 14 C-を 30 mg/kg(108 µci/kg) 単回経口投与したとき, 投与した放射能の 87.2% が尿及び胆汁中に回収された したがって, 投与した放射能の少なくとも 87.2% は吸収されたと考えられた ( 表 ,9785-ME-0003) イヌ添付資料 , 5, , 10 雄性ビーグル犬に を 3 mg/kg 単回静脈内投与したとき,は約 35 時間の t 1/2 で血漿中から消失した ( 図 , 表 ,PRO3100NC11) 分布容積は 0.727~2.080 L/kg であり, 全身クリアランスは ~ L/h/kg であった 分布容積の平均値 (1.20 L/kg) はイヌの体内総水分量 (0.604 L/kg,Davies,1993) の約 2 倍に相当し, 全身クリアランスの平均値 ( L/h/kg) はイヌにおける肝血漿流量 (1.08 L/h/kg,Davies,1993) の約 2% に相当した 雄性ビーグル犬に を 3 mg/kg 単回経口投与したとき,t max は投与後 4~8 時間であり,t 1/2 は約 33 時間であった 絶対バイオアベイラビリティの平均値は 73%( 範囲 :46%~109%) であった 17

18 2.6.4 薬物動態試験の概要文 図 イヌに を 3 mg/kg 単回経口若しくは静脈内投与したときの血漿中 濃度 5 Linear Scale 10 Log Scale concentration g/ml (μg/ml) IV Bolus Oral Gavage Time (h) hours Source: Table , PRO3100NC11 NOTE: Values are the means (± SD) of observations in 3 male beagle dogs. NOTE: These graphs depict plasma concentrations after oral administration of as solution. ; IV, intravenous; SD, standard deviation. 雌雄のビーグル犬に の 10 及び 30 mg/kg/dayを 28 日間,60 mg/kg/dayを 21 日間反復経口投与したとき, 血漿中 濃度は投与量の増大に応じて増加するものの, その程度は投与量比以下であり, バイオアベイラビリティは投与量の増大に応じて減少すると考えられた ( 図 , 表 ,PRO3100NC18) の曝露量は 1 日 1 回の反復投与により増加する傾向が認められ, 平均蓄積係数は約 1~4 であった ( 表 ,PRO3100NC18; 表 ,PRO3100NC38) イヌでは, の曝露量に性差は認められなかった また, イヌの単回及び反復投与後の血漿中濃度から, 代謝の自己誘導や自己阻害は示唆されなかった 18

19 2.6.4 薬物動態試験の概要文 図 イヌに を反復経口投与したときの投与量補正した AUC 24h と投与量の関係 45 Dose-normalized AUC 24h ( g.h/ml)/(mg/kg) Males Females mg/kg 30 mg/kg 60 mg/kg (Dose) Source: Table , PRO3100NC18 NOTE: Values are the means of observations in 4 to 6 beagle dogs. AUC 24h, area under the plasma concentration versus time curve from time zero to 24 hours after dosing. 雄性ビーグル犬に 14 C-を 20 mg/kg(54 µci/kg) 単回経口投与したとき, 血液及び血漿中放射能濃度の平均 t max はそれぞれ投与後 7 及び 6 時間であり ( 表 ,9785-ME-0002), 血漿中 濃度の t max は 8 時間であった ( 表 ,9785-ME-0006) 胆管にカニューレを挿入した雄性ビーグル犬に 14 C- を 20 mg/kg(54 µci/kg) 単回経口投与したとき, 投与した放射能の 68.3% が尿及び胆汁に回収された したがって, 投与した放射能の少なくとも 68.3% が吸収されたと考えられた ( 表 ,9785-ME-0002) サル添付資料 雌雄のカニクイザルに の 30 mg/kgを単回経口投与, 投与間隔を 4 時間あけて 30 mg/kg を 2 回経口投与 ( すなわち 60 mg/kg 投与 ), あるいは 100 mg/kg を単回経口投与した ( 表 , 9785-TX-0003) いずれの投与群でも血漿中の 濃度は同程度であり ( 図 ), 投与量の増加に応じてバイオアベイラビリティが減少していると考えられた サルでは の薬物動態パラメータに性差は認められなかった t max は概して投与後 8 時間であり,t 1/2 は 28~ 38 時間であった ( 表 ) 19

20 2.6.4 薬物動態試験の概要文 図 サルに を単回経口投与したときの血漿中 濃度 mg/kg 60 mg/kg 100 mg/kg concentration g/ml (μg/ml) Males Females Time hours(h) Source: 9785-TX-0003 NOTE: Values are the means (± SD) of observations in 3 cynomolgus monkeys. SD, standard deviation 製剤処方検討と in vivo 吸収試験 添付資料 , 6 非臨床及び臨床試験での投与形態を 溶液に決定するに際し, 雄性ビーグル犬に を種々の製剤として単回経口投与したときの相対バイオアベイラビリティを評価した ( 表 , PRO3100NC11; 表 ,PRO3100NC53;3.2.P 製剤設計 ) 投与条件はいずれの試験にお いても非絶食下の単回経口投与とし, 溶液を比較対象に, 懸濁液のほか, 以外の溶 媒や界面活性剤を添加した 溶液などを検討した イヌにおける のバイオアベイ ラビリティは, 懸濁液よりも 溶液として投与した場合の方が高かった ( 表 ) また, 溶液に他の溶媒や界面活性剤を添加しても吸収性の更なる改善は認められなかった 20

21 2.6.4 薬物動態試験の概要文 表 イヌに を種々の製剤として単回経口投与したときの相対バイオアベイラビリティ Study Dose Group Composition of Formulation % Relative Bioavailability a Solution 1 100% ± 48% Table , PRO3100NC11 Solution 2 b 114% ± 54% Particulate Formulation 25% ± 24% Solution 1 c 100% ± 36% Solution 2 b, c 112% ± 69% Solution 3 b, c 90% ± 79% Table , PRO3100NC53 Solution 4 b, c 64% ± 26% Emulsion b 73% ± 35% Particulate Formulation d 8% ± 1% a b c d The mean dose-normalized AUC 7d postdose for Solution 1 in each study was used as the reference treatment in the calculations of % Relative Bioavailability. Formulation in which is combined with other solvents or surfactants. Proprietary nanoparticle formulation. NOTE: Values are the means ± SD of 3 dogs. AUC 7d, area under the concentration versus time curve from time zero up to 7 days; ; SD, standard deviation. 21

22 2.6.4 薬物動態試験の概要文 マウスで記載したとおり, マウスにおいては, 溶液として 400 mg/kg を経口投与したときの血漿中 濃度は, 懸濁液として 1600 mg/kg を経口投与したときとほぼ同等か, 又は下回った ( 表 ,9785-TX-0002) 同様の現象 ( 溶液を用いた中用量の投与群が懸濁液を用いた高用量群と同様の曝露量を示す ) は, ラット及びイヌを用いた複数の毒性試験でも観察されている ( ラット反復投与毒性試験, イヌ反復投与毒性試験 ) これらの知見より, のバイオアベイラビリティは懸濁液よりも溶液を用いた場合の方が高いと考えられた 分布 組織分布 単回投与時のラットにおける組織分布添付資料 雄性 SDラットに 14 C-を 30 mg/kg(108 µci/kg) 単回経口投与し, 投与後 168 時間まで経時的に組織内放射能濃度測定及び QWBAを行った ( 表 , 表 ,9785-ME-0003) 組織内放射能濃度測定では, 採取したすべての組織において投与後 1 時間に 14 C- 由来の放射能が検出され, 組織への分布が速やかであることが示された ( 表 ) 放射能は多くの組織において投与後 4 時間に C max に到達したが, 胃では投与後 1 時間, 血液, 血漿, 副腎, 骨髄, 精巣上体, 眼球, 脂肪, 大腸及び皮膚では投与後 8 時間に C max に到達した 投与後 4 時間における放射能濃度は, 消化管を除くと肝臓で最も高く, 次いで脂肪, 副腎, ハーダー腺及び腎臓で高かった 放射能濃度が最も低かった組織は眼球であり, 次いで骨髄, 骨, 血液, 大脳及び小脳であった 放射能はすべての組織において投与後 48 時間まで検出可能であったが, その後緩やかに減少し, 投与後 168 時間までに C max の 0.89% 未満若しくは検出限界未満となった 組織内放射能濃度の t 1/2 は肝臓の 29.5 時間が最も長く, 視床下部の 7.27 時間が最も短かった QWBA では, 組織内放射能濃度測定の結果と同様の結果が得られた すなわち, 投与後 1 時間までに 14 C- 由来の放射能が水晶体と骨を除くすべての組織で検出された 放射能は多くの組織において投与後 48 時間まで検出可能であったが, その後緩やかに減少し, 投与後 168 時間までに水晶体と肝臓を除くすべての組織で検出限界未満となった ( 表 ) 多くの組織では投与後 4 時間に C max に到達したが, 胆汁, 骨, 皮下脂肪及び尿では投与後 8 時間, 水晶体では投与後 24 時間に C max に到達した 投与後 4 時間における放射能濃度は, 消化管を除くと肝臓で最も高く, 次いで尿, 副腎皮質, 腎臓皮質, 皮下脂肪, 腎臓, 腎臓髄質及び副腎が高かった 放射能濃度が最も低かった組織は骨であり, 次いで水晶体, 眼球, 鼻甲介及び眼球血管膜であった 反復投与時のラットにおける組織分布 添付資料

23 2.6.4 薬物動態試験の概要文 雄性ラット (SD ラット ) に 14 C- を 30 mg/kg(67.6 µci/kg),1 日 1 回 21 日間反復経口投与したときの放射能の組織内分布パターンは単回投与時と類似していた ( 表 , 9785-ME-0003; 表 ,9785-ME-0016) 最終投与後 4 時間における組織内放射能濃度は, 前立腺, 胃, 大腸において投与初日に比べ 1.5~1.7 倍高かったが, それ以外の組織においては反復投与による大きな濃度変化は認められなかった ( 同 0.8~1.4 倍 ) また, 最終投与後 24 時間における放射能濃度は, 脾臓, 副腎, 甲状腺, 動脈, 肝臓, 皮膚, 脂肪, 骨髄, 胃, 眼球, 心臓及び前立腺において投与初日に比べ 1.5~2.3 倍高かったが, それ以外の組織においては反復投与による大きな濃度変化は認められなかった ( 同 1.0~1.4 倍 ) 最終投与後の組織内放射能濃度は, 多くの組織において投与後 4 時間に最高値を示した後, 経時的に減少した 最終投与後 168 時間において, すべての組織内放射能濃度は C max の 3.83% 以下となり, 組織内放射能の残留性は認められなかった 全身オートラジオグラムにおいても反復投与後に組織内放射能の顕著な残留性は認められなかった 中枢移行性添付資料 , 3 雄性 ICRマウスに の 400 mg/kg を単回経口投与, 若しくは 60 又は 200 mg/kg/dayを反復経口投与したときの脳及び血漿中薬物濃度を測定したところ,,m1 及び M2が脳に移行することが確認された ( 表 ,9785-ME-5016) 及び M2の脳 / 血漿中濃度比 ( 平均値 ±SD) はそれぞれ 0.72 ± 0.47 及び 1.4 ± 0.82 であり, これらは血液脳関門を容易に通過できると考えられた 一方,M1の脳/ 血漿中濃度比は極めて低く (0.048 ± 0.025), M1は血液脳関門の透過性が低いと考えられた 更に, 雄性 SD ラットに 14 C-を 100 mg/kg/day(250 µci/kg/day),7 日間反復経口投与したときの血漿, 脳及び脳脊髄液における代謝物プロファイルを検討したところ,, M1 及び M2が脳において検出され, これらがラットにおいても血液脳関門を通過できることが確認された ( 表 ,PRO3100NC84) 蛋白結合及び血球移行性添付資料 , 5, , 4, , 2 マウス, ラット, ウサギ, イヌ, サル及びヒトにおける,M1 及び M2の in vitro 血漿蛋白結合率を平衡透析法により測定した ( 表 ,PRO3100NC32,9785-ME-0021; 表 , 9785-ME-0018) の in vitro 血漿蛋白結合率は, マウス, ラット, ウサギ, イヌ及びヒトでそれぞれ 95% ~97%,94%,88%~90%,94%~96% 及び 97%~98% と高かった いずれの動物種においても, 検討した薬物濃度範囲 [0.05~25 µg/ml( 雌性ウサギのみ 0.5~25 µg/ml)] で蛋白結合率に明ら 23

24 2.6.4 薬物動態試験の概要文 かな濃度依存性は認められなかった また, のヒト血漿での主要結合蛋白はアルブミンであると考えられた ( 蛋白結合及び血球移行性,9785-ME-0008) M1 の in vitro 血漿蛋白結合率は, マウス, ラット, ウサギ, イヌ, サル及びヒトでそれぞれ 92%, 95%~96%,93%~95%,93%~95%,97% 及び 98% と高かった いずれの動物種においても, 検討した薬物濃度範囲 (0.5~25 µg/ml) で蛋白結合率に明らかな濃度依存性は認められなかった M2 の in vitro 血漿蛋白結合率は, マウス, ラット, ウサギ, イヌ, サル及びヒトでそれぞれ 93%, 90%,86%~87%,93%~94%,93% 及び 95% と高かった いずれの動物種においても, 検討した薬物濃度範囲 (0.5~25 µg/ml) で蛋白結合率に明らかな濃度依存性は認められなかった 雄性 SDラットに 14 C-の 30 mg/kg(108 µci/kg) を単回経口投与あるいは 30 mg/kg/day (67.6 µci/kg/day) を 21 日間反復経口投与したときの C b /C p 比の平均値は, 単回投与試験では ~0.659 であり ( 表 , 表 ,9785-ME-0003), 反復投与試験では 0.610~0.660 であった ( 表 ,9785-ME-0016) いずれの試験においても,C b /C p 比は試料採取時点や放射能濃度によらずおおむね一定の値を示した 雄性ビーグル犬に 14 C-を 20 mg/kg(54 µci/kg) 単回経口投与したときの C b /C p 比の平均値は 0.456~0.552 であり, 試料採取時点や放射能濃度によらずおおむね一定の値を示した ( 表 ,9785-ME-0002) 以上の結果から, ラット及びイヌにおける血球移行性は極めて低いと考えられた また, ヒトにおいても同様に血球移行性は低いとの試験成績が得られている (C b /C p 比 =0.55; 蛋白結合及び血球移行性 ) 胎盤移行 該当なし 代謝ラット, ウサギ及びイヌを用いて in vitro 代謝試験を, ラット及びイヌを用いて in vivo 代謝試験を実施した ヒトにおける in vitro 及び in vivo 代謝試験の成績についてはそれぞれ ヒト生体試料を用いた in vitro 試験及び 臨床試験に示した これらの代謝試験で化学構造が明らかとなった の第 I 相及び第 II 相代謝物の構造式をそれぞれ表 及び表 に示す 24

25 2.6.4 薬物動態試験の概要文 表 第 I 相代謝物の化学構造 M1 (MDPC0001) M2 (MDPC0002) NC M3 (MDPC0003) O F O OH M4 (MDPC0004) F 3 C N N O M5 (MDV3105) M6 (MDV3106) M7 (MDPC196) M9 a a M10 a A compound identification number has not been issued. Source: 9785-ME-0020 and 9785-ME

26 2.6.4 薬物動態試験の概要文 表 第 II 相代謝物の化学構造 M11 (MDPC197) M12 (MDPC198) M13 (MDPC200) M14 a M15 a M16 a a M17 a A compound identification number has not been issued. Source: 9785-ME-0020 and 9785-ME

27 2.6.4 薬物動態試験の概要文 In Vitro 代謝添付資料 C- 及び 14 C-M2( 各々 10 µmol/l) をラット, ウサギ, イヌあるいはヒトの血液, 肝 S9 画分並びに凍結保存肝細胞とインキュベートしたときの代謝物プロファイルを検討した (9785-ME-0039) 14 C-を血液と 24 時間インキュベートしたとき, ラット, ウサギ及びイヌでは M1が主代謝物として検出されたが, ヒトでは代謝物の生成は認められなかった 14 C-を肝 S9 画分と 2 時間インキュベートしたとき, いずれの動物種においても M6( 水酸化体 ; なお,M6が更に生体内変換を受けると M2が生成すると考えられる, In vitro 代謝, 図 ) が主代謝物として検出された 加えて, ラット及びウサギでは M1 の生成も認められた 14 C-を凍結保存肝細胞と 24 時間インキュベートしたとき, いずれの動物種においても M1 及び M2が主代謝物として検出された 加えて, ラットでは M4( ヒダントイン体 ) 及び M5 (M4カルボン酸体), イヌでは M6の生成も認められた ウサギ及びヒトでは,in vivo 代謝試験 ( ラット, イヌ及びヒトの比較 ) においてヒト試料のみに検出された M7( シアノ水和体 ) の生成もわずかに認められた なお, 14 C- の凍結保存肝細胞での代謝速度は, ラットで最も速く, 次いでウサギ, イヌの順であり, ヒトはイヌと同程度であった 以上のとおり, 14 C-をヒト試料とインキュベートしたとき, 肝 S9 画分では M6, 凍結保存肝細胞では M1,M2 及び M7が検出された M1,M2 及び M6 はすべての動物種,M7はウサギでも検出されており, ヒト特異的な代謝物の生成は示唆されなかった 14 C-M2 を血液と 24 時間インキュベートしたとき, ラット, ウサギ及びイヌでは M1が主代謝物として検出されたが, ヒトでは代謝物の生成は認められなかった 14 C-M2 を肝 S9 画分と 2 時間インキュベートしたとき, ラットでは M1 及び M3, ウサギでは M1 が検出されたが, イヌ及びヒトでは代謝物の生成は認められなかった 14 C-M2 を凍結保存肝細胞と 24 時間インキュベートしたとき, いずれの動物種においても M1 が主代謝物として検出された 14 C-M2 の凍結保存肝細胞での代謝速度は, 14 C- と同様に, ラットで最も速く, 次いでウサギ, イヌの順であり, ヒトはイヌと同程度であった 以上のとおり, 14 C-M2 をヒト試料とインキュベートしたとき, 凍結保存肝細胞でのみ M1の生成が認められた 本代謝物はラット, ウサギ及びイヌの血液及び凍結保存肝細胞でも検出されており, ヒト特異的な代謝物の生成は示唆されなかった In Vivo 代謝ラット及びイヌに 14 C- を単回経口投与したときの代謝物プロファイルを評価した また, ラットに 14 C- を反復経口投与して, 中枢神経系に関連する組織における代謝物プロファイルを評価した 27

28 2.6.4 薬物動態試験の概要文 ラット添付資料 , , 2, 3 雄性 SDラットに 14 C-を 30 mg/kg(108 µci/kg) 単回経口投与したときの血漿, 尿, 糞及び胆汁中の代謝物プロファイルを評価した ( 表 ,9785-ME-0007; 表 , 9785-ME-0015;9785-ME-0034) 本試験では, カルボン酸体 (M1 及び M5),N- 脱メチル体 (M2), ヒダントイン体 (M4), 水酸化体 ( M6), グルクロン酸抱合体の転位体 (M11 の 3 つのアイソマー, M12 の 3 つのアイソマー ), グルタチオン抱合体とその逐次代謝物 (M13,M14,M15 及び M16), 及びタウリン抱合体 (M17) 合計 16 種の代謝物が検出された ( 表 ,9785-ME-0015; 9785-ME-0034) 血漿においては 及び M1 が主に認められ,C max はそれぞれ 9.19 µg eq/g ( 投与後 8 時間 ) 並びに 8.43 µg eq/g( 投与後 8 時間 ) であった また, 血漿中には M2,M4, M5 及び M6もわずかに検出され, これらの C max は µg eq/g 以下であった 尿においては M1 及び M5 のみが検出され, 及び M2は検出されなかった 投与後 72 時間までの M1 及び M5の尿中への累積排泄率は, 投与した放射能のそれぞれ 36% 及び 5.7% であった 胆汁においても M1 及び M5が主代謝物であり, 投与後 72 時間までの累積排泄率は投与した放射能のそれぞれ 34% 及び 5% であった 残りの微量成分は,M2,M4,M11 の転位体 3つ,M12 の転位体 3つ,M13,M14,M15,M16 及び M17( 表 ,9785-ME-0015;9785-ME-0034) と推定され, 累積排泄率は合計で, 投与した放射能の 7% 未満であった 糞においては,, M1 及び M5が主に認められ, 投与後 72 時間までの累積排泄率は投与した放射能のそれぞれ 2%, 35% 及び 7% であった 残りの微量成分は, 累積排泄率として合計で, 投与した放射能の 3% 未満であり,M2,M4 及び M6 と推定された 雄性 SDラットに 14 C-の 100 mg/kg/day(250 µci/kg/day) を 7 日間反復経口投与したときの血漿, 脳及び脳脊髄液の代謝物プロファイルを検討した ( 表 ,PRO3100NC84) 試料は定常状態における血漿中濃度の t max と考えられる最終投与後 4 時間に採取した 血漿, 脳及び脳脊髄液において全放射能ピーク面積に占める 由来ピークの割合はそれぞれ 54.6%, 81.2% 及び 59.6% であり, いずれの試料においても が最も大きな割合を占めた M1 は血漿においては同 32.2% と主代謝物であったが, 脳及び脳脊髄液では同 1.20% 及び 5.37% であった M2 は血漿, 脳及び脳脊髄液において同 2.61%,5.21% 及び 5.54% であった 血漿においては, その他の代謝物として M3,M4,M5 及び M6がわずかに検出された 上記 2 試験 (9785-ME-0007 試験及び PRO3100NC84 試験 ) が終了した後, げっ歯類では, 血漿のエステラーゼにより M2が M1へ変換されることが明らかとなった 採血後速やかにエステラーゼ阻害剤であるジクロルボスを血液に添加することにより, この反応を完全に停止させることが可能である ( 分析法 ) が, この試料採取手順は上記 2 試験では使用されていないため, 当該試験で報告された血漿中 M1 濃度が過大評価され,M2 濃度が過小評価されている可能性が考えられた ( 表 及び表 ) 一方, ラットにおける 1 週間 TK 試験 ( ラット 1 週間反復投与 TK 試験,9785-TX-0011) は適切な試料採取手順 ( 採血時にジクロルボスを添加 ) で実施されている 本試験において,に対する M1 並びに M2の曝露量 (C max 及び AUC 24h ) 28

29 2.6.4 薬物動態試験の概要文 の比はそれぞれ 9%~46%,1%~8% であることが明らかとなっている 以上の結果と合わせて考えると,M1 はラットにおいて主要な代謝物であると考えられた 以上のように, ラットにおいては少なくとも 6 種の第 I 相代謝物及び 11 種の第 II 相代謝物が検出された 代謝物の構造から,の受ける第 I 相代謝反応は N- 脱メチル化, 酸化及び加水分解であると考えられた カルボン酸体はラットにおいて の主要な第 I 相代謝物であり, 更に第 II 相抱合代謝を受けると考えられた 由来の第 II 相代謝物としては, グルクロン酸抱合体の転位体, グルタチオン抱合体とその逐次代謝物, 並びにタウリン抱合体が胆汁において認められた 図 にラットにおける推定代謝経路を示す 29

30 2.6.4 薬物動態試験の概要文図 ラットにおける推定代謝経路 Source: Table , 9785-ME-0015, PRO3100NC84 and 9785-ME

31 2.6.4 薬物動態試験の概要文 イヌ添付資料 , 4, 5 雄性ビーグル犬に 14 C-を 20 mg/kg(54 µci/kg) 単回経口投与したときの血漿, 尿, 糞及び胆汁中の代謝物プロファイルを評価した ( 表 ,9785-ME-0006; 表 , 9785-ME-0014;9785-ME-0034) イヌでは合計 13 種の代謝物が認められた ( 表 ,9785-ME-0006) このうちの 8 種の代謝物は,M1,M2,M4,M5,M6 及び M11 とその 2 つの転位体であることが明らかとなっている ( 表 ,9785-ME-0014;9785-ME-0034) これらの代謝物は M11 を除き, いずれもラットでも観察されている ( ラット ) 血漿においては が最大の放射能成分であり,C max は 21.2 µg eq/g( 投与後 8 時間 ) であった 次いで M1 が主要な成分であり,C max は 3.11 µg eq/g( 投与後 24 時間 ) であった 加えて M2,M4 及び M6もわずかに検出されたが, これらの C max はいずれも µg eq/g 以下であった 尿においては M1 及び M5 が認められ, 投与後 216 時間までの累積排泄率は投与した放射能のそれぞれ 59% 及び 1% であった 残りの微量成分は累積排泄率として 1% 未満であった 胆汁においては M1, 及び M5 が認められ, 投与後 144 時間までの累積排泄率は投与した放射能のそれぞれ 43%,2% 及び 1% であった 残りの微量成分は累積排泄率として 1% 以下であり,M6, 及び M11 やその転移体が検出された 糞においては,M1 及び が主に認められ, 投与後 120 時間までの累積排泄率は投与した放射能のそれぞれ 10% 及び 9% であった 残りの微量成分は累積排泄率として合計約 1% であり,M2 及び M4 などが検出された 以上のように, イヌにおいては少なくとも 5 種の第 I 相代謝物及び 3 種の第 II 相代謝物が検出された 代謝物の構造から, の受ける第 I 相反応は N- 脱メチル化, 酸化及び加水分解であると考えられた カルボン酸体はイヌにおいても主要な第 I 相代謝物であった 第 II 相代謝物としては,M11 とその 2つの転位体が胆汁において認められた 図 にイヌにおける推定代謝経路を示す 31

32 2.6.4 薬物動態試験の概要文 図 イヌにおける推定代謝経路 Source: Table , 9785-ME-0014, 9785-ME ラット, イヌ及びヒトの比較添付資料 , , 3, 5, , 9, , 2 健康成人男性の試料を用いた代謝物検索試験により, ヒトにおいては少なくとも M1,M2,M5, M6,M7,M9 及び M10の 7つの第 I 相代謝物が生成することが明らかとなっている ( 健康被験者を対象とした単回投与マスバランス試験 ( マスバランス試験 [CL-0001]),9785-ME-0019, 9785-ME-0020) ヒトの血漿, 尿及び糞において検出された代謝物はシアノ水和体 (M7,M9 及び M10) を除き, すべてラット及びイヌにおいて検出された ヒト血漿中の主要な放射能成分は,M1 及び M2であった M1 はヒト尿糞中においても主要な放射能成分のひとつであったが, 及び M2は極微量検出されたのみであった シアノ水和体はヒトの尿及び糞では検出されたが, 血漿では検出されないか, 検出されても極めてわずかであった ラット, イヌ及びヒトにおける推定代謝経路の比較により, はこれら動物種のいずれにおいても同じ第 I 相代謝 (N- 脱メチル化, 酸化及び加水分解 ) を受けると考えられた カルボン酸体はいずれの動物種においても主たる第 I 相代謝物であり, 更に第 II 相抱合代謝を受けると考えられた ( 図 ) 第 II 相代謝物としてはグルタチオン抱合体, グルクロン酸抱合体及びタウリン抱合体が動物の胆汁において検出されたが, ヒトではこれらの抱合体は検出されなかった これはヒトの胆汁試料がこれまでの臨床試験で採取されず, その代謝物組成が分析されていないことが一因と考えられた ( 健康被験者を対象とした単回投与マスバランス試験 ( マスバランス試験 [CL-0001]),9785-CL-0001) 32

33 2.6.4 薬物動態試験の概要文 図 ラット, イヌ及びヒトにおける推定代謝経路 O NC S F 3C N N O F O N H M14 R(b) H 2N S O NH CO 2H NC F 3C N N O S F O N H M15 R(b) H 2N S O OH NC F 3C N N O S F O N H M16 R(b) S HN O OH NC S F O O Gluc NC O F O O Gluc H 2N CO 2H F 3C N N O M11 isomer R(b), D(b) F 3C N N O M12 isomer R(b) NC S F 3C N N O F O HN N H S M13 R(b) O O NH CO 2H NC F 3C N N M11 D(b) O S F O O COOH O OH OH OH F O NC O O F 3C N N COOH M12 O O OH OH OH NC F 3C N N O O F M17 R(b) O Tau NC S F O NH 2 NC S F O OH NC O F O OH F 3C N N O M2 H(p,u,f), R(p,b,f) D(p,f) F 3C N N O M1 H(p,u,f), R(p,u,b,f) D(p,u,b,f) F 3C N N O M5 H(u), R(p,u,b,f), D(u,b) NC S F 3C N N O F O N H M6 H(p,u), R(p,f) D(p,b) OH NC S F 3C N N O F O N H H(p,u,f), R(p,b,f) D(p,b,f) NC O F 3C N N O F O N H M4 R(p,b,f), D(p,f) NC O F O NH 2 H 2N O S F 3C N N O F O M9 H(u,f) NH 2 H 2N H 2N O S F 3C N N O O S F 3 C N N O F F O M7 H(p,u,f) M10 H(u,f) O N H OH F 3C N N O M3 R(p) R, rat D, dog H, human p, detected in plasma u, detected in urine b, detected in bile f, detected in feces Gluc: glucuronic acid Tau: taurinyl Source: 9785-ME-0015, 9785-ME-0014, PRO3100NC84, 9785-ME-0020 and 9785-ME-0034 なお, 一連の代謝物分析試験において, 生体試料の前処理における放射能回収率はおおむね 100% であったことから, いずれの動物種においても反応性代謝物の生成は示唆されなかった ヒト血漿中の主代謝物である M1 及び M2に関しては, ラット 1 週 TK 試験 ( ラット 1 週間反復投与 TK 試験,9785-TX-0011) 及びイヌ 39 週毒性試験の TK 中間報告 ( イヌ 39 週間反復投与毒性試験投与 8 週 TK 中間成績,9785-TX-0013) において血漿中濃度が測定されている これらの動物試験における最高曝露量の平均値は, ヒト臨床用量 (160 mg) における定常状態の曝露量の平均値と比較して,M1ではそれぞれ 31%~62% 及び 96%~125% であり,M2 では両動物種とも 10% 未満であった ( 表 , 表 ) 33

34 2.6.4 薬物動態試験の概要文 表 Species (Study No.) Human (Section , 9785-CL-0007) Rat (Section , 9785-TX-0011) Dog (Section , 9785-TX-0013) a b c d ヒト, ラット及びイヌに を反復経口投与したときの血漿中 M1 の薬物動態パラメータ Dose Schedule a 160 mg/day QD 49 days Gender C max (µg/ml) Systemic Plasma Exposure of M1 C max Ratio to Human d AUC 24h (µg h/ml) AUC 24h Ratio to Human d Male 8.87 NA 193 NA QD 1 week b Female mg/kg/day Male QD, 56 days c Female mg/kg/day Male Reported for longest dosing period for which C max and AUC 24h values are available Dose groups that showed highest exposures in Study 9785-TX-0011 Dose groups that showed highest exposures in Study 9785-TX-0013 Ratio of animal C max or AUC 24h value to the typical exposure value reported for humans in this table AUC 24h, area under the plasma concentration versus time curve from time zero to 24 hours after dosing; C max, maximum observed plasma concentration; NA, not applicable; QD, once daily. 34

35 2.6.4 薬物動態試験の概要文 表 Species (Study No.) Human (Section , 9785-CL-0007) Rat (Section , 9785-TX-0011) Dog (Section , 9785-TX-0013) a b c d ヒト, ラット及びイヌに を反復経口投与したときの血漿中 M2 の薬物動態パラメータ Dose Schedule a 160 mg/day QD 49 days Gender C max (µg/ml) Systemic Plasma Exposure of M2 C max Ratio to Human d AUC 24h (µg h/ml) AUC 24h Ratio to Human d Male 12.7 NA 278 NA QD 1 week b Female mg/kg/day Male QD, 56 days c Female mg/kg/day Male Reported for longest dosing period for which C max and AUC 24h values are available Dose groups that showed highest exposures in Study 9785-TX-0011 Dose groups that showed highest exposures in Study 9785-TX-0013 Ratio of animal C max or AUC 24h value to the typical exposure value reported for humans in this table AUC 24h, area under the plasma concentration versus time curve from time zero to 24 hours after dosing; C max, maximum observed plasma concentration; NA, not applicable; QD, once daily 排泄 排泄経路及び排泄率 14 C-をラット及びイヌに単回経口投与したときの のマスバランス及び排泄を評価した ラット添付資料 , 雄性 SDラットに 14 C-を 30 mg/kg(108 µci/kg) 単回経口投与し, 投与後 168 時間まで尿, 糞及び胆汁試料を採取し, 本薬の排泄を評価した ( 表 , 表 ,9785-ME-0003) 無処置のラットに 14 C- を単回経口投与したとき, 投与後 168 時間までに投与量の 97.20% が排泄された ( 表 ) 尿及び糞への平均放射能累積排泄率はそれぞれ投与した放射能の 44.20% 及び 49.80% であり, 尿及び糞中に同程度が排泄された また, 尿及び糞中には未変化体はほとんど検出されず ( 表 ,9785-ME-0007), 本薬はほとんどが代謝物として尿及び糞中に排泄されると考えられた 胆管にカニューレを挿入したラットに 14 C- を単回経 35

36 2.6.4 薬物動態試験の概要文 口投与したとき, 尿及び胆汁への平均放射能累積排泄率はそれぞれ投与した放射能の 36.60% 及び 50.60% であり, 尿及び胆汁中に同程度が排泄された 以上の結果より, 本薬は, ラットにおいてほとんどが代謝物として排泄され, 尿中排泄及び胆汁を介した糞中排泄の両方が重要な役割を果たしていると考えられた 表 ラットに 14 C-を単回経口投与したときの放射能排泄率 Percentage of Administered Dose Group Urine Feces Bile Total a Intact ± ± 6.56 NS ± 0.41 Bile duct-cannulated ± ± ± ± 0.57 Source: Table and Table , 9785-ME-0003 a Includes radioactivity in cage wash etc. (2.87% in intact rats and 2.14% in bile-duct cannulated rats). NOTE: Excretion was determined over 168 hours after dosing. NOTE: Values are means ± SD (n = 4 intact rats and n = 3 bile-duct cannulated rats). NS, not sampled; SD, standard deviation. 腸肝循環の評価のため, 14 C-を経口投与したラットから採取した胆汁を別のラットの 十二指腸内に投与し, 尿及び胆汁中への放射能の排泄を評価した その結果, 胆汁及び尿中放射 能排泄率の合計は投与した放射能の 74.10% であり, 胆汁中に排泄された放射能の多くは再吸収さ れると考えられた ( 表 ) イヌ添付資料 , 雄性ビーグル犬に 14 C-を 20 mg/kg(54 µci/kg) 単回経口投与し, 尿, 糞及び胆汁試料を採取し, 本薬の排泄を評価した ( 表 , 表 ,9785-ME-0002) 無処置のイヌに 14 C-を単回経口投与したとき, 投与後 504 時間までに投与量の 92.30% が排泄された ( 表 ) の未変化体は尿においては検出されず, 糞においては微量成分として検出された ( 投与した放射能の約 9%)( 表 ,9785-ME-0006) したがって, イヌにおいては本薬はほとんど代謝物として尿糞中に排泄されることが明らかとなった 尿及び糞への平均放射能累積排泄率はそれぞれ投与した放射能の 62.00% 及び 22.30% であり, 尿中排泄の割合の方が大きかった 胆管にカニューレを挿入したイヌに 14 C-を単回経口投与したとき, 投与後 168 時間までの尿, 糞及び胆汁への平均放射能累積排泄率はそれぞれ投与した放射能の 20.40%,23.30% 及び 47.90% であり, 総排泄率は 96.50% であった 以上の結果より, 本薬は, イヌにおいてほとんどが代謝物として排泄され, 尿中排泄が重要な役割を果たしていると考えられた 36

37 2.6.4 薬物動態試験の概要文 表 イヌに 14 C- を単回経口投与したときの放射能排泄率 Group Percentage of Administered Dose Urine Feces Bile Total a Intact ± ± 4.74 NS ± 1.71 Bile duct-cannulated ± ± ± ± 3.51 Source: Table and Table , 9785-ME-0002 a Includes radioactivity in cage wash etc. (8.09% in intact dogs and 4.90% in bile-duct cannulated dogs). NOTE: Excretion was determined over 504 hours after dosing in intact dogs and over 168 hours after dosing in bile-duct cannulated dogs. NOTE: Values are means ± SD (n = 3). NS, not sampled; SD, standard deviation 乳汁中排泄 該当なし 薬物動態学的薬物相互作用 非臨床において該当する試験はない ヒトにおける in vitro 薬物相互作用試験の結果は臨床薬理 の概要 ( ヒト生体試料を用いた in vitro 試験 ) に記載されている その他の薬物動態試験 該当なし 考察及び結論 の薬物動態試験結果の要点を以下に示す は水溶性が低く,Caco-2 細胞単層膜に対して P app が cm/s 以上と高い透過性を示すことから,BCSクラス 2に分類される はいずれの動物種においても血漿から緩やかに消失し, 長い t 1/2 を示した ラット及びイヌにおける全身クリアランスは肝血漿流量の 5% 以下と低値を示した をマウス, ラット, イヌ及びサルに経口投与したときの吸収性は良好であった 低用量におけるラット及びイヌの絶対バイオアベイラビリティはそれぞれ 97% 及び 73% であった マウス, ラット, イヌ及びサルに経口投与したとき, バイオアベイラビリティは投与量の増加に応じて減少した 1 日 1 回反復経口投与したときの平均蓄積係数はラットで約 1~3, イヌにおいて約 1~4, ヒトで 8.3 であった これらは投与間隔に比し長い t 1/2 を反映していると考えられた 37

38 2.6.4 薬物動態試験の概要文 動物における反復投与時の血漿中濃度から, 代謝の自己誘導や自己阻害は示唆されなかった ラットでは, 血漿中濃度に性差が認められたが ( 雌の AUC 24h は雄の約 2 倍 ), マウス, イヌ 又はサルでは認められなかった ヒトでは性差の有無は不明である 動物においては, 懸濁液,CMC 懸濁液やナノ粒子懸濁液の場合より, 溶液とし て経口投与した場合の方がバイオアベイラビリティが高かった また, 媒や界面活性剤を添加しても, バイオアベイラビリティは改善されなかった 溶液に他の溶 ラット及びイヌにおける の分布容積は体内総水分量の約 2 倍に相当し, 薬物が血 管外まで広く分布していることが示唆された 14 C-をラットに単回経口投与したとき, 放射能はすべての組織に速やかに分布した 高い放射能が検出された組織は消化管を除くと肝臓, 脂肪及び副腎であった ラットの組織 内放射能濃度の t 1/2 は肝臓の 29.5 時間が最も長く, 視床下部の 7.27 時間が最も短かった 14 C-をラットに 21 日間反復経口投与したとき, 血漿中及び組織内放射能濃度に大 きな変化は認められなかった 投与 21 日目の投与後 168 時間ではすべての組織内放射能濃度 は C max の 3.83% 以下となった ラットの脳において,M1 及び M2 が検出され, これらの化合物が血液脳関門を通 過できることが示唆された マウスにおいて, 及び M2 は脳と血漿でおおむね同レ ベルの薬物濃度を示したことから脳への移行性は高いと考えられた 一方,M1 は脳において 血漿よりも薬物濃度が明らかに低値であり, 脳への移行性は低いと考えられた 14 C-をラットとイヌに経口投与したとき,C b /C p 比は 0.456~0.660であり, 血球移 行性は極めて低いことが示唆された の in vitro 血漿蛋白結合率はマウスで 95%~97%, ラットで 94%, ウサギで 88%~ 90%, イヌで 94%~96%, ヒトで 97%~98% であり, いずれの動物種でも高値を示した また, 検討した薬物濃度範囲 [0.05~25 µg/ml( 雌性ウサギのみ 0.5~25 µg/ml)] では, 蛋白結合 率に明らかな薬物濃度依存性は認められなかった ヒトの血漿における主要結合蛋白はアル ブミンであった M1 の in vitro 血漿蛋白結合率はマウス, ラット, ウサギ, イヌ, サル及びヒトでそれぞれ 92%, 95%~96%,93%~95%,93%~95%,97% 及び 98% と, いずれも高値を示した M2 の in vitro 血漿蛋白結合率はマウス, ラット, ウサギ, イヌ, サル及びヒトでそれぞれ 93%,90%,86% ~87%,93%~94%,93% 及び 95% と, いずれも高値を示した 検討した薬物濃度範囲 (0.5 ~25 µg/ml) では, いずれの代謝物においても蛋白結合率に明らかな薬物濃度依存性は認め られなかった 14 C-をラット, ウサギ, イヌあるいはヒトの血液, 肝 S9 画分及び凍結保存肝細胞 とインキュベートしたとき, ヒト特異的な代謝物は認められなかった 血液においてはラッ ト, ウサギ, イヌのいずれにおいても M1 が主代謝物として検出されたが, ヒトでは M1 は 検出されなかった また, いずれの動物種においても, 肝 S9 画分では M6 が, 凍結保存肝細 胞では M1 及び M2 が主代謝物として認められた 38

39 2.6.4 薬物動態試験の概要文 の代謝はラット, イヌ及びヒトの間で類似しており, 主要な代謝反応は脱メチル化, 酸化, 加水分解といった第 I 相代謝反応であった 第 II 相代謝物はグルクロン酸抱合体, グルタチオン抱合体及びタウリン抱合体が検出されているが, いずれも動物の胆汁のみで観察された ヒトにおいて第 II 相代謝物が観察されていない理由としては, ヒトの胆汁試料がこれまでの臨床試験では採取されておらず, その代謝物組成が分析されなかったことが一因と考えられた なお, 一連の代謝物分析試験において, 生体試料の前処理における放射能回収率はおおむね 100% であったことから, いずれの動物種においても反応性代謝物の生成は示唆されなかった ヒトで認められたほとんどすべての代謝物はラット及びイヌでも認められた ヒトでのみ認められた代謝物はいずれもシアノ水和体で, これらは尿及び糞では検出されたが, 血漿ではほとんど認められなかった ヒト血漿中の主要代謝物は M1 及び M2 であり, これらはいずれもラット及びイヌの血漿中でも観察された ラット 1 週 TK 試験及びイヌ 39 週毒性試験における M1 及び M2 の最高曝露量の平均値は, ヒトにおける定常状態の血漿中曝露量の平均値に比較して M1 ではそれぞれ 31%~62% 及び 96%~125%,M2 では両動物種とも 10% 未満であった 14 C- を経口投与したとき, 放射能は主として代謝物として尿及び糞に排泄された ラットでは尿中排泄と糞中排泄は同程度に寄与しており, イヌ及びヒトでは尿中排泄が主要な経路であった すべての動物種において, カルボン酸体 (M1 及び M5) が尿中の主要な薬物由来成分であり, 未変化体や M2は検出されないか, 検出されても微量であった 図表 図表は各項の本文中の適切な場所に挿入した 参考文献 Davies B and Morris T. Physiological parameters in laboratory animals and humans. Pharm. Res. 1993; 10(7):

40 2.6.5 目次 薬物動態試験 : 一覧表 分析方法及びバリデーション試験 薬物動態試験 : 吸収 : 単回投与 薬物動態試験 : 吸収 : 反復投与 薬物動態試験 : 分布 薬物動態試験 : 蛋白結合 薬物動態試験 : 妊娠又は授乳動物における試験 薬物動態試験 : その他の分布試験 薬物動態試験 : 代謝 :In vivo 薬物動態試験 : 代謝 :In vitro 薬物動態試験 : 推定代謝経路 薬物動態試験 : 薬物代謝酵素の誘導 / 阻害 薬物動態試験 : 排泄 薬物動態試験 : 排泄 胆汁中 薬物動態試験 : 薬物相互作用 薬物動態試験 : その他 アステラス製薬 1

41 薬物動態試験 : 一覧表 Analytical Methods and Validation Reports Type of Study Test System Method of Administration Testing Facility Qualification of an LC-MS/MS Assay for Mouse Plasma NA Validation of an Analytical Method for, M1, and M2 Mouse Plasma NA Partial Validation of an Analytical Method for, M1, and M2 Mouse Plasma NA Long Term Stability of, M1, and M2 Mouse Plasma NA Validation of an LC-MS/MS Assay Method for, M1, and M2 Mouse Brain NA Long Term Stability of, M1, and M2 in Brain Mouse Brain NA Validation of an LC-MS/MS Assay for Rat Plasma NA Cross-Validation of an LC-MS/MS Assay for Rat Plasma NA Long Term Stability of Rat Plasma NA Qualification of an LC-MS/MS Assay for Rat Plasma NA Validation of an LC-MS/MS Method for, M1, and M2 Rat Plasma NA Partial Validation of an Analytical Method for, M1, and M2 Rat Plasma NA Long Term Stability of, M1, and M2 Rat Plasma NA Table continued on next page 被験物質 : Study Number, CTD No. PRO3100NC19, ME-5001, ME-5011, ME-5005, ME-5014, ME-5015, PRO3100NC02 Part 1, PRO3100NC02 Part 2, PRO3100NC03, PRO3100NC98, ME-5003, ME-5012, ME-5007,

42 薬物動態試験 : 一覧表 ( 続き ) Analytical Methods and Validation Reports (continued) Type of Study Test System Method of Administration Testing Facility Qualification of an LC-MS/MS Assay for Dog Plasma NA Validation of an LC-MS/MS Assay for Dog Plasma NA Partial Validation of an LC-MS/MS Assay for Dog Plasma NA Validation of an LC-MS/MS Assay for Dog Plasma NA Long Term Stability of Dog Plasma NA Validation of an LC-MS/MS Method for, M1, and M2 Long Term Stability of, M1, and M2 Validation of an LC-MS/MS Method for, M1, and M2 Long Term Stability of, M1, and M2 Absorption Single-Dose Pharmacokinetics of Single-Dose Pharmacokinetics of Single-Dose Pharmacokinetics of 14 C- Single-Dose Pharmacokinetics of Single-Dose Pharmacokinetics of 14 C- Single-Dose Pharmacokinetics of in Several Formulations Table continued on next page Dog Plasma Dog Plasma Monkey Plasma Monkey Plasma Mouse/CD-1(ICR) NA NA NA NA Oral Gavage Rat/Sprague-Dawley Intravenous and Oral Gavage Medivation, Inc. Rat/Sprague-Dawley Dog/Beagle Dog/Beagle Oral Gavage Intravenous and Oral (Gavage and Capsule) Oral Capsule Dog/Beagle Oral (Gavage and Capsule) Medivation, Inc. Study Number, CTD No. MEI PRO3100NC07 Part 1, PRO3100NC07 Part 2, PRO3100NC97, PRO3100NC06, ME-5010, ME-5009, ME-5002, ME-5006, PRO3100NC21, PRO3100NC108, ME-0003, PRO3100NC11, ME-0002, PRO3100NC53,

43 薬物動態試験 : 一覧表 ( 続き ) Distribution Type of Study Test System Method of Administration Testing Facility Tissue Distribution of Radioactivity after a Single Oral Dose of 14 C- Rat/Sprague-Dawley Oral Gavage Tissue Distribution of Radioactivity by Whole-Body Autoradiography after a Single Rat/Sprague-Dawley Oral Gavage Oral Dose of 14 C- Tissue Distribution of Radioactivity after Repeated Oral Doses of 14 C- Rat/Sprague-Dawley Oral Gavage Blood:Plasma Radioactivity Concentration Ratio in Dogs after a Single Oral Dose of Dog/Beagle Oral Capsule 14 C- Plasma and Whole Brain Concentration of, M1, and M2 Plasma and Whole Brain Concentration of and Metabolites after 7-Day Repeat Dosing In Vitro Plasma Protein Binding of In Vitro Plasma Protein Binding of in Female Rabbits In Vitro Plasma Protein Binding of M1 and M2 Table continued on next page Mouse/CD-1(ICR) Rat/Sprague-Dawley Mouse/CD-1(ICR), Rat/Sprague-Dawley, Rabbit/ New Zealand White, Dog/Beagle, Human Rabbit/ New Zealand White Mouse/CD-1(ICR), Rat/Sprague-Dawley, Rabbit/ New Zealand White, Dog/Beagle, Cynomolgus Monkey, Human Oral Gavage Oral Gavage NA NA NA Study Number, CTD No ME-0003, ME-0003, ME-0016, ME-0002, ME-5016, PRO3100NC84, PRO3100NC32, ME-0021, ME-0018,

44 薬物動態試験 : 一覧表 ( 続き ) Metabolism Type of Study Test System Method of Administration Testing Facility Rat/Sprague-Dawley, Rabbit/ New Zealand White, NA Dog/Beagle, Human In Vitro Metabolism of 14 C- and 14 C-M2 Using Cryopreserved Hepatocytes, Liver S9, and Blood Metabolite Profiles in Plasma, Urine, Bile and Feces after a Single Oral Dose of 14 C- Metabolite Profiles in Plasma, Urine, Bile and Feces after a Single Oral Dose of 14 C- LC-MS Analysis of Plasma, Urine, Bile and Feces after a Single Oral Dose of 14 C- LC-MS Analysis of Plasma, Urine and Bile after a Single Oral Dose of 14 C- Supplemental LC-MS Analysis of Plasma, Urine, Bile and Feces after a Single Oral Dose of 14 C- Excretion Excretion after a Single Oral Dose of 14 C- Excretion after a Single Oral Dose of 14 C- Excretion into Bile after a Single Oral Dose of 14 C- Enterohepatic Recirculation after Administration of Bile from 14 C--treated Rats Excretion into Bile after a Single Oral Dose of 14 C- Table continued on next page Rat/Sprague-Dawley Dog/Beagle Rat/Sprague-Dawley Dog/Beagle Rat/Sprague-Dawley Dog/Beagle Rat/Sprague-Dawley Dog/Beagle Rat/Sprague-Dawley Rat/Sprague-Dawley Dog/Beagle Oral Gavage Oral Capsule Oral Gavage Oral Capsule Oral Gavage or Oral Capsule Oral Gavage Oral Capsule Oral Gavage Intraduodenal Oral Capsule Study Number, CTD No ME-0039, ME-0007, ME-0006, ME-0015, ME-0014, ME-0034, ME-0003, ME-0002, ME-0003, ME-0003, ME-0002,

45 薬物動態試験 : 一覧表 ( 続き ) Pharmacokinetic Drug Interactions: None Other: None th ; Medivation Inc., 525 Market Street, 36 Floor, San Francisco, CA 94105, USA; LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; NA: not applicable. 6

46 分析方法及びバリデーション試験 マウス血漿中 定量法の適格性確認試験 被験物質 : Study Number, CTD No. PRO3100NC19, Nonclinical Studies in which the Method was Used PRO3100NC21, Species Mouse Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 2 EDTA plasma Analyte Assay LC-MS/MS Internal Standard Dextromethorphan hydrobromide Regression Type, Weighting Quadratic, 1/X Sample Volume ( L) 100 Quantitation Range (ng/ml) Qualification Data Within-Run Precision (%CV) Within-Run Accuracy (% Deviation) Calibration Curve to 11.6 QC (n=5) to 11.6 Selectivity No interference ---: not reported or not calculated; LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry 7

47 マウス血漿中,M1 及び M2 定量法のバリデーション試験 被験物質 : Study Number, CTD No ME-5001, Nonclinical Studies in which the Method was Used 9785-TX-0002, , 9785-TX-0005, , 9785-TX-0007, , 9785-ME-5016, Species Mouse/CD-1 (ICR) Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 2 EDTA plasma with DDVP Assay LC-MS/MS Regression Type, Weighting Linear, 1/X 2 Sample Volume ( L) 50 Quantification Range (ng/ml) Lower Limit of Quantification (ng/ml) 20 Analyte M1 (MDPC0001) M2 (MDPC0002) Internal Standard N- 13 CD 3 - MDPC0001-[ 13 CD 3 ] MDPC0002-[ 13 CD 3 ] Validation Data Nominal n Concentration Intra-Day Reproducibility (ng/ml) Analyte %CV %RE to M to , 60, 1000, M to to 1.3 Inter-Day Reproducibility 18 M to 2.0 M to 4.6 Selectivity 6 No interfering peaks were detected near the retention times of M2 and the IS. Interfering peaks detected near the retention times of and M1 were less than 1.9% and 2.5% of the peak area of the LLOQ, respectively; however, results met the acceptance criteria for selectivity. n Fold Analyte %CV %RE Dilution Reproducibility 6 10 a M M Table continued on next page 8

48 マウス血漿中,M1 及び M2 定量法のバリデーション試験 ( 続き ) Validation Data (continued) Recovery Carryover Matrix Effects Stability Data Whole Blood n Concentration (ng/ml) Analyte %Recovery, Analyte %Recovery, IS b 17.9 to , 1000, M to M to n 6 Less than 11.4% of the peak area of the LLOQ for, M1, and M2. Not observed for the IS. n Concentration (ng/ml) Analyte %CV %RE to , M to 8.8 M to 3.0 n Nominal Concentration (ng/ml) 3 60, Matrix 3 60, Table continued on next page Analyte Temperature (ºC) Duration %Stability 101, 102 M1 4 2h 100, 104 M2 100, , 97 M1 37 2h 96, 97 M2 103, , 92 M1 4 24h 103, 97 M2 110, , 95 M1 6h 106, 93 M2 97, 103 Room temp 96, 91 M1 24h 107, 100 M2 103, 99 9

49 マウス血漿中,M1 及び M2 定量法のバリデーション試験 ( 続き ) Stability Data (continued) a b c Freeze-Thaw Matrix n Nominal Concentration (ng/ml) 3 60, Frozen Matrix 3 60, Post-preparative c 3 60, Nominal concentration of ng/ml. Recovery of IS is based on a concentration of 100 ng/ml only. Post-preparative in an autosampler at 5ºC. Analyte Temperature (ºC) Duration %Stability 103, 93 M1 NA NA 94, 96 M2 102, , 90 M d 90, 93 M2 102, , 93 M1 25h 105, 100 M2 106, , 91 M1 50h 96, 93 M2 100, 100 DDVP: 2,2-Dichlorovinyl dimethyl phosphate (dichlorvos); IS: internal standard; LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; LLOQ: lower limit of quantification; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; NA: not applicable; %RE: relative error = [(measured concentration nominal concentration) /nominal concentration] 100; %Stability (for whole blood stability) = mean measured concentration (after storage) / mean measured concentration (initial) 100; %Stability (for the other stability) = (mean measured concentration/nominal concentration)

50 マウス血漿中,M1 及び M2 の長期安定性試験 被験物質 : Study Number, CTD No ME-5005, Species Mouse/CD-1 (ICR) Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 2 EDTA plasma with DDVP Assay LC-MS/MS RegressionType, Weighting Linear, 1/X 2 Sample Volume ( L) 50 Quantification Range (ng/ml) Lower Limit of Quantification (ng/ml) 20 Analyte M1 (MDPC0001) M2 (MDPC0002) Internal Standard N- 13 CD 3 - MDPC0001-[ 13 CD 3 ] MDPC0002-[ 13 CD 3 ] Nominal Concentration (ng/ml) n Duration Analyte %Stability 99.1, d M1 106, 98.6 M2 104, 101 Storage Stability Data at 20 C 102, , d M1 99.1, 102 M2 102, , d M1 109, 93.2 M2 102, 103 DDVP: 2,2-Dichlorovinyl dimethyl phosphate (dichlorvos); LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; % Stability = (mean measured concentration/nominal concentration)

51 マウス血漿中,M1 及び M2 定量法の部分バリデーション試験 Intra-Day Reproducibility 被験物質 : Study Number, CTD No ME-5011, Nonclinical Studies in which the Method was Used 9785-TX-0008, , 9785-TX-0009, Species Mouse/CD-1 (ICR) Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 2 EDTA plasma with DDVP Assay LC-MS/MS Regression Type, Weighting Linear, 1/X 2 Sample Volume ( L) 50 Quantitation Range (ng/ml) Lower Limit of Quantification (ng/ml) 20 Analyte M1 (MDPC0001) M2 (MDPC0002) Internal Standard -[CD 3 ] 2 MDPC0001-[CD 3 ] 2 MDPC0002-[CD 3 ] 2 Validation Data Nominal n Concentration Analyte %CV %RE (ng/ml) 6 20, 60, 1000, to to 9.4 M1 4.2 to to 11.6 M2 4.3 to to 10.4 Selectivity 6 Met the acceptance criteria (<3.3% of LLOQ). Carryover 2 Less than 4.3% of the peak area of the LLOQ for, M1 and M2. Not observed for all IS. Stability Data Post-Preparative Table continued on next page n Nominal Concentration (ng/ml) 3 60, Analyte Temperature ( C) Duration %Stability 105.9, 95.1 M1 29h 101.1, 90.0 M , , 99.2 M1 49h 105.3, 95.4 M ,

52 マウス血漿中,M1 及び M2 定量法の部分バリデーション試験 ( 続き ) Stability Data (continued) Storage Stability of IS Stock Solution n Concentration (µg/ml) Storage Stability of IS Storage Stability of ISW 3 2 Analyte Temperature ( C) Duration %Stability -[CD 3 ] MDPC0001-[CD 3 ] d MDPC0002-[CD 3 ] [CD 3 ] Room MDPC0001-[CD 3 ] 2 6h 97.4 temp MDPC0002-[CD 3 ] [CD 3 ] MDPC0001-[CD 3 ] d 96.2 MDPC0002-[CD 3 ] [CD 3 ] Room MDPC0001-[CD 3 ] 2 6h temp MDPC0002-[CD 3 ] [CD 3 ] MDPC0001-[CD 3 ] d MDPC0002-[CD 3 ] [CD 3 ] Room MDPC0001-[CD 3 ] 2 6h 93.1 temp MDPC0002-[CD 3 ] DDVP: 2,2-Dichlorovinyl dimethyl phosphate (dichlorvos); IS: internal standard; LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; LLOQ: Lower limit of quantification; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; %RE: relative error = [(measured concentration nominal concentration) /nominal concentration] 100; %Stability (for post-preparative stability) = mean measured concentration (after storage) / nominal concentration 100; %Stability (for IS solution stability) = (mean peak area ratios of samples after storage / mean peak area ratios of reference samples) 100; 13

53 マウス脳内,M1 及び M2 定量法のバリデーション試験 被験物質 : Study Number, CTD No ME-5014, Nonclinical Studies in which the Method was Used 9785-ME-5016, Species Mouse/CD-1(ICR) Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) Mouse brain homogenate with DDVP Assay LC-MS/MS Regression Type, Weighting Linear, 1/X 2 Sample Volume ( L) 300 (as 20% brain homogenate) Quantification Range (ng/g) Lower Limit of Quantification (ng/g) 10 Analyte M1 (MDPC0001) M2 (MDPC0002) Internal Standard N- 13 CD 3 - MDPC0001-[ 13 CD 3 ] MDPC0002-[ 13 CD 3 ] Validation Data n Nominal Concentration (ng/g) Analyte %CV %RE Intra-Day Reproducibility to M to , 30, 500, M to to 3.8 Inter-Day Reproducibility 18 M to 5.6 M to 7.5 Selectivity 6 Less than 2.7% of the peak area of the LLOQ for, M1, and M2. Not observed for all IS. n Fold Analyte %CV %RE Dilution Reproducibility 6 10 a M M Table continued on next page 14

54 マウス脳内,M1 及び M2 定量法のバリデーション試験 ( 続き ) Validation Data (continued) n Concentration (ng/g) Analyte % Recovery, Analyte % Recovery, IS b Recovery 3 30, 500, to M to M to Carryover 4 Less than 6.2% of the peak area of the LLOQ for, M1, M2, and IS for M1. Not observed for other IS. Stability Data Matrix n Nominal Concentration (ng/g) 3 30, Freeze-Thaw Matrix 3 30, Frozen Matrix 3 30, Table continued on next page Analyte Temperature (ºC) Duration %Stability 97.6, 91.8 M1 4 24h 103, 95.5 M2 102, , 93.1 M1 NA 3 cycles 102, 98.2 M2 97.2, , 95.7 M d 100, 104 M2 102,

55 マウス脳内,M1 及び M2 定量法のバリデーション試験 ( 続き ) Stability Data (continued) n Nominal Concentration Temperature Analyte (ng/g) (ºC) Duration %Stability 105, 95.5 Post-Preparative c M1 24h 105, 97.7 M2 106, , , 97.5 M1 50h 110, 106 M2 105, 101 n Concentration Temperature Analyte (μg/ml) (ºC) Duration %Stability a b c Storage Stability of Analyte in Standard Solution: SW Storage Stability of IS Solution: ISW Nominal concentration of ng/g. Recovery of IS is based on a concentration of 50 ng/g only. Post-preparative in an autosampler at 5ºC. 105 M1 4 16d 98.4 M M1 Room temp 6h 94.7 M N- 13 CD MDPC0001-[ 13 CD 3 ] 4 16d 98.2 MDPC0002-[ 13 CD 3 ] 96.3 N- 13 CD MDPC0001-[ 13 CD 3 ] Room temp 6h 97.1 MDPC0002-[ 13 CD 3 ] 103 DDVP: 2,2-Dichlorovinyl dimethyl phosphate (dichlorvos); IS: internal standard; LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; NA: not applicable; %RE: relative error = [(mean measured concentration nominal concentration) /nominal concentration] 100; %Stability (for standard solution and IS solution) = (mean peak area ratios of samples after storage / mean peak area ratios of reference samples) 100; %Stability (for the other stability) = (mean measured concentration/nominal concentration)

56 マウス脳内,M1 及び M2 の長期安定性試験 Frozen Matrix Stability at 20 C 被験物質 : Study Number, CTD No ME-5015, Species Mouse/CD-1 (ICR) Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) Mouse brain homogenate with DDVP Assay LC-MS/MS Regression Type, Weighting Linear, 1/X 2 Sample Volume ( L) 300 (as 20% brain homogenate) Quantification Range (ng/g) Lower Limit of Quantification (ng/g) 10 Analyte M1 (MDPC0001) M2 (MDPC0002) Internal Standard N- 13 CD 3 - MDPC0001-[ 13 CD 3 ] MDPC0002-[ 13 CD 3 ] Nominal Concentration (ng/g) n Duration Analyte %Stability 108, 92 33d M1 98, 98 30, d 187d M2 108, , 96 M1 104, 99 M2 108, , 95 M1 107, 101 M2 105, 100 DDVP: 2,2-Dichlorovinyl dimethyl phosphate (dichlorvos); LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; %Stability = (mean measured concentration/nominal concentration)

57 ラット血漿中 定量法のバリデーション試験 Study Number, CTD No. PRO3100NC02 Part 1, Nonclinical Studies in which the Method was Used PRO3100NC15, Species Rat Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 2 EDTA plasma Analyte Assay LC-MS/MS Internal Standard Dextromethorphan hydrobromide Regression Type, Weighting Quadratic, 1/X Sample Volume ( L) 100 Quantitation Range (ng/ml) Validation Data a Nominal Between-Run Precision Within-Run Precision Concentration n (%CV) (%CV) (ng/ml) Between-Run Accuracy (% Deviation) 被験物質 : Within-Run Accuracy (mean% Deviation) QC Samples 50, 500, b to 4.1 b 9.0 to 9.7 Extraction Recovery: Analyte (%) Extraction Recovery: Internal Standard (%) 3 88 Selectivity 6 No interference Dilution Integrity Lower Limit of Quantification (ng/ml) Precision and Accuracy at LLOQ: %CV / % Deviation Table continued on next page n Fold %CV % Deviation to to /

58 ラット血漿中 定量法のバリデーション試験 ( 続き ) Stability Data n Nominal Concentration (ng/ml) Temperature (ºC) Duration %CV mean% Deviation Reinjection c 5 50, 500, 5000 Ambient 24h to 2.6 e Stock d d f 14d g 4h to 5.7 Plasma, Room Temperature 5 50, 500, h to 10 48h h to 20 4h to 4.9 Plasma, Refrigeration Temperature 5 50, 500, h to 12 48h to 1.9 1d to d to 1.1 Plasma, Frozen 5 50, 500, d to 8.4 1d to d to d to 0.4 Freeze-Thaw 5 50, 500, 5000 NA 3 cycles to 3.5 a Observed values that deviated from expected concentration in excess of ±15% (±20% for LLOQ) were not used for calculations of mean and %CV. b Between-run precision and accuracy were assessed using 25 samples (n=5 per day, 5 days). c Observed % deviations in excess of ±15% were not used for calculations of mean and %CV. d Stock solution of contained 1 g/ml of Dextromethorphan hydrobromide in deionized water. e % Deviation of individual data f The mean peak area of in stored solution was 102% of that in freshly prepared solution. g The mean peak area of in stored solution was 109% of that in freshly prepared solution. h in plasma samples stored for up to 48 h at room temperature were observed to exceed ±15% deviation from expected concentrations. Storage of at room temperature is not recommended to exceed 24 h. ---: not reported or not calculated; LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; LLOQ: lower limit of quantification; NA: not applicable 19

59 ラット血漿中 定量法のクロスバリデーション試験 Study Number, CTD No. PRO3100NC02 Part 2, PRO3100NC17, Nonclinical Studies in which the Method was Used PRO3100NC31, PRO3100NC39, Species Rat Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 3 EDTA plasma Analyte Assay LC-MS/MS Internal Standard N- 13 CD 3 - Regression Type, Weighting Quadratic, 1/X Sample Volume ( L) 100 Quantitation Range (ng/ml) and Validation Data a Nominal Concentration (ng/ml) n Between-Run Precision (%CV) Within-Run Precision (%CV) Between-Run Accuracy (mean% Deviation) 被験物質 : Within-Run Accuracy (mean% Deviation) 10, 20, 50, 100, 500, 1000, 5000, b to 6.6 b 10 to 15 Calibration 5000, 8000, 10000, 20000, 40000, 60000, 11 Standard to to , QC Samples 20, 5000, b to 4.9 b 6.9 to , 20000, b to 1.5 b 8.2 to 4.0 Extraction Recovery: Analyte (%) 5 96 Extraction Recovery: Internal Standard (%) Selectivity 6 No interference Lower Limit of Quantification (ng/ml) Precision and Accuracy at LLOQ: %CV / % Deviation Table continued on next page /

60 ラット血漿中 定量法のクロスバリデーション試験 ( 続き ) Stability Data Nominal Concentration (ng/ml) n Temperature (ºC) Duration %CV % Deviation Reinjection c 20, 500, 8000 Ambient 24h to , 20000, Ambient 24h to 2.9 Stock d d d h to h to h to 8.1 Plasma, Room Temperature c , 500, 8000, 20000, Plasma, Refrigeration Temperature c h to h to h to 0.7 Freeze-Thaw c 5 NA 3 cycles to 8.3 a Observed values that deviated from expected concentration in excess of ±15% (±20% for LLOQ) were not used for calculations of mean and %CV. b Between-run precision and accuracy were assessed using 25 samples (n=5 per day, 5 days). c Observed % deviations in excess of ±15% were not used for calculations of mean and %CV. d Stock solution of N- 13 CD 3 - at a nominal concentration of 1 g/ml in acetonitrile. LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; LLOQ: lower limit of quantification; NA: not applicable; QC: quality control 21

61 ラット血漿中 の長期安定性試験 Storage Stability Data a 20, 500, 8000, 20000, 被験物質 : Study Number, CTD No. PRO3100NC03, Species Rat Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 3 EDTA plasma Analyte Assay LC-MS/MS Internal Standard N- 13 CD 3 - Regression Type, Weighting Quadratic, 1/X Sample Volume ( L) 100 Quantification Range (ng/ml) Lower Limit of Quantification (ng/ml) 10 Nominal Concentration (ng/ml) n Temperature (ºC) Duration %CV %Deviation 1d to 1.7 7d to d to 6.1 3mo to 0.6 6mo to mo to 14 a b 5 80 Observed % deviation values in excess of ±15% were not included in calculations of mean and %CV. All observed % deviations for 20 ng/ml exceeded ±15% for this time point; calculations were not performed for this sample concentration. LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry 1d to 2.1 7d to d to 5.6 3mo b 6.5 b 6.6 to 1.1 b 6mo to mo to

62 ラット血漿中 定量法の適格性確認試験 被験物質 : Study Number, CTD No. PRO3100NC98, Nonclinical Studies in which the Method was Used PRO3100NC108, Species Rat Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) Plasma Analyte Assay LC-MS/MS Internal Standard N- 13 CD 3 - Regression Type, Weighting Linear, 1/X 2 Sample Volume ( L) 50 Quantification Range (ng/ml) a Qualification Data n Within-Run Precision (%CV) Within-Run Accuracy (%Bias) Calibration Standard 2 NC 3.90 to 2.60 QC Samples b to 5.25 Lower Limit of Quantification (ng/ml) 10 Precision and Accuracy at LLOQ: 6 %CV / % Bias c 5.22 / 5.00 a The method appeared to be precise, accurate, and sensitive over the concentration range studied (10 to ng/ml). b All values were within acceptance criteria: ±15% bias for low, mid, and high QC samples, 30, 300 and 8000 ng/ml, respectively. c All values were within acceptance criteria: ±20% bias for LLOQ LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; LLOQ: lower limit of quantification; NC: not calculated; QC: quality control 23

63 ラット血漿中,M1 及び M2 定量法のバリデーション試験 被験物質 : Study Number, CTD No ME-5003, Nonclinical Studies in which the Method was Used Not applicable Species Rat/Sprague-Dawley Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 2 EDTA plasma with DDVP Assay LC-MS/MS Regression Type, Weighting Linear, 1/X 2 Sample Volume ( L) 50 Quantitation Range (ng/ml) Lower Limit of Quantification (ng/ml) 20 Analyte M1 (MDPC0001) M2 (MDPC0002) Internal Standard N- 13 CD 3 - MDPC0001-[ 13 CD 3 ] MDPC0002-[ 13 CD 3 ] Validation Data Nominal n Concentration Analyte %CV %RE Intra-Day Reproducibility (ng/ml) 3.0 to to , 60, 1000, M1 3.7 to to -1.2 M2 3.1 to to -4.2 Selectivity 6 Met the acceptance criteria ( 2.6% of LLOQ) Dilution Reproducibility Recovery Table continued on next page n Fold Analyte %CV %RE 6 10 a M M n Concentration (ng/ml) 3 60, 1000, Analyte % Recovery, Analyte % Recovery, IS 18.9 to M to M to

64 ラット血漿中,M1 及び M2 定量法のバリデーション試験 ( 続き ) Validation Data (continued) Carryover n 4 Less than 7.9% of the peak area of the LLOQ for and M1. Not observed for M2 and all IS. n Concentration (ng/ml) Analyte %CV %RE Matrix Effects 1.7, , , M1 6.4, , -1.2 M2 4.6, , -8.9 Stability Data n Nominal Concentration Temperature Analyte (ng/ml) (ºC) Duration %Stability 108, 109 M1 4 2h 94.8, 94.9 Whole Blood M2 110, , , 104 M1 37 2h 100, 95.3 M2 103, , 87.5 M1 4 24h 89.0, 94.9 M2 98.1, , 95.2 Matrix 3 M1 6h 102, , M2 91.4, 96.9 Room temp 93.4, 88.8 M1 24h 101, 93.4 M2 92.4, , 89.1 Freeze-Thaw Matrix 3 M1 NA 3 cycles 90.5, 96.7 M2 97.4, 87.9 Table continued on next page 25

65 ラット血漿中,M1 及び M2 定量法のバリデーション試験 ( 続き ) Stability Data (continued) n Nominal Concentration Temperature Analyte (ng/ml) (ºC) Duration %Stability Frozen Matrix 100, , M d 107, 89.9 M2 94.7, , 93.3 M1 27h 93.6, 101 Post-Preparative 3 60, M2 95.0, , 88.2 M1 49h 95.5, 97.8 M2 98.3, 95.6 a Nominal concentration of ng/ml. DDVP: 2,2-Dichlorovinyl dimethyl phosphate (dichlorvos); IS: internal standard; LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; LLOQ: lower limit of quantification; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; NA: not applicable; %RE: relative error = [(mean measured concentration nominal concentration) /nominal concentration] 100; %Stability (for whole blood stability) = mean measured concentration (after storage) / mean measured concentration (initial) 100; %Stability (for the other stability) = mean measured concentration / nominal concentration

66 ラット血漿中,M1 及び M2 定量法の部分バリデーション試験 Intra-Day Reproducibility 被験物質 : Study Number, CTD No ME-5012, Nonclinical Studies in which the Method was Used 9785-TX-0011, Species Rat/Sprague-Dawley Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 2 EDTA plasma with DDVP Assay LC-MS/MS Regression Type, Weighting Linear, 1/X 2 Sample Volume ( L) 50 Quantitation Range (ng/ml) Lower Limit of Quantification (ng/ml) 20 Analyte M1 (MDPC0001) M2 (MDPC0002) Internal Standard -[CD 3 ] 2 MDPC0001-[CD 3 ] 2 MDPC0002-[CD 3 ] 2 Validation Data Nominal n Concentration Analyte %CV %RE (ng/ml) 6 20, 60, 1000, to to 5.2 M1 3.8 to to 4.7 M2 3.1 to to 8.1 Selectivity 6 Met the acceptance criteria ( 2.0% of LLOQ) Carryover 2 Less than 3.8% of the peak area of the LLOQ for, M1 and M2. Not observed for all IS. Stability Data Post-Preparative n Nominal Concentration (ng/ml) 3 60, Analyte Temperature ( C) Duration %Stability 106.4, 94.0 M1 29h 111.7, 95.6 M , , 93.0 M1 49h 112.3, 96.1 M , DDVP: 2,2-Dichlorovinyl dimethyl phosphate (dichlorvos); IS: internal standard; LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; LLOQ: lower limit of quantification; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; %RE: relative error = [(mean measured concentration nominal concentration) /nominal concentration] 100; %Stability = (mean measured concentration / nominal concentration)

67 ラット血漿中,M1 及び M2 の長期安定性試験 被験物質 : Study Number, CTD No ME-5007, Species Rat/Sprague-Dawley Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 2 EDTA plasma with DDVP Assay LC-MS/MS Regression Type, Weighting Linear, 1/X 2 Sample Volume ( L) 50 Quantitation Range (ng/ml) Lower Limit of Quantification (ng/ml) 20 Analyte M1 (MDPC0001) M2 (MDPC0002) Internal Standard N- 13 CD 3 - MDPC0001-[ 13 CD 3 ] MDPC0002-[ 13 CD 3 ] Nominal Concentration (ng/ml) n Duration Analyte %Stability 96.8, d M1 101, 96.1 M2 97.7, 101 Storage Stability Data at 20 C 96.9, , d M1 97.4, 98.6 M2 96.1, , d M1 112, 96.1 M2 97.1, 96.7 DDVP: 2,2-Dichlorovinyl dimethyl phosphate (dichlorvos); LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; %Stability = (mean measured concentration/nominal concentration)

68 イヌ血漿中 定量法の適格性確認試験 Study Number, CTD No. MEI- -009, Nonclinical Studies in which the Method was Used PRO3100NC11, Species Dog Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 2 EDTA plasma Analyte Assay LC-MS/MS Internal Standard Dextromethorphan hydrobromide Regression Type, Weighting Quadratic, 1/X Sample Volume ( L) 100 Quantification Range (ng/ml) Qualification Data n Between-Run Precision (%CV) Within-Run Precision (%CV) Between-Run Accuracy (mean% Deviation) 被験物質 : Within-Run Accuracy (mean% Deviation) Calibration Standard to QC Samples (50, 500, 5000 ng/ml) to to 6.4 Extraction Recovery: Analyte (%) 3 80 Extraction Recovery: Internal Standard (%) 3 98 Selectivity 6 No interference Stability Data Nominal Concentration (ng/ml) 50, 500, 5000 n Temperature (ºC) Duration %CV %Deviation h to 14 Short-Term 5 4 h to h to d to 8.3 Long-Term 5 7 d to d to 8.4 Freeze-thaw cycles to 8.5 LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; QC: quality control Note: Because a number of LLOQ sample failure was observed, this method was judged qualified but not validated. 29

69 イヌ血漿中 定量法のクロスバリデーション試験 被験物質 : Study Number, CTD No. PRO3100NC07 Part 1, Nonclinical Studies in which the Method was Used PRO3100NC14, PRO3100NC38, PRO3100NC18, PRO3100NC53, Species Dog Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 2 EDTA plasma Analyte Assay LC-MS/MS Internal Standard N- 13 CD 3 - Regression Type, Weighting Quadratic, 1/X Sample Volume ( L) 100 Quantification Range (ng/ml) Validation Data a QC Samples Nominal Concentration (ng/ml) n Between-Run Precision (%CV) Within-Run Precision (%CV) Between-Run Accuracy (mean% Deviation) Within-Run Accuracy (mean% Deviation) to to 13 Extraction Recovery: Analyte (%) 20, 500, Extraction Recovery: Internal Standard (%) Selectivity 6 No interference Lower Limit of Quantification (ng/ml) 10 Precision and Accuracy at LLOQ: 9 %CV / % Deviation 10 / 1.7 n Fold %CV mean %Deviation Dilution Integrity Table continued on next page 30

70 イヌ血漿中 定量法のクロスバリデーション試験 ( 続き ) Stability Data b Nominal Concentration n Temperature (ºC) Duration %CV % Deviation (ng/ml) Reinjection 20, 500, Ambient 24h to 11 4h to 2.3 Plasma, Room h to 0.4 Temperature 48h to 4.0 a b Plasma, Refrigeration Temperature 20, 500, h to h to 16 48h to 6.2 Freeze-Thaw 5 NA 3 cycles to 22 Observed values that deviated from expected concentration in excess of 15% (±20% for LLOQ) were not used for calculations of mean and %CV. Observed % deviation in excess of 15% were not used for calculations of mean and %CV. LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; LLOQ: lower limit of quantification; NA: not applicable; QC: quality control 31

71 イヌ血漿中 定量法の部分バリデーション試験 被験物質 : Study Number, CTD No. PRO3100NC07 Part 2, Species Dog Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 3 EDTA plasma Analyte Assay LC-MS/MS Internal Standard N- 13 CD 3 - Regression Type, Weighting Quadratic, 1/X Sample Volume ( L) 100 Quantification Range (ng/ml) Validation Data a Nominal Concentration Run 1 Precision Run 2 Precision Run 1 Accuracy Run 2 Accuracy n (ng/ml) (%CV) (%CV) (mean% Deviation) (mean% Deviation) QC Samples 20, 500, to to 5.1 Selectivity 6 No interference Stability Data Temperature (ºC) Duration %CV mean% Deviation a Frozen 20, 500, d to 11 Run 1 information represents data from Batch 02/01/08; Run 2 information represents data from Batch 03/14/08. LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry 32

72 イヌ血漿中 定量法のバリデーション試験 被験物質 : Study Number, CTD No. PRO3100NC97, Nonclinical Studies in which the Method was Used PRO3100NC94, Species Dog Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 2 EDTA plasma Analyte Assay LC-MS/MS Internal Standard N- 13 CD 3 - Regression Type, Weighting Linear, 1/X 2 Sample Volume ( L) 50 Quantification Range (ng/ml) Validation Data n Between-Run Precision Within-Run Between-Run Within-Run (%CV) Precision (%CV) Accuracy (%Bias) Accuracy (%Bias) Calibration Standard to QC Samples b to 8.33 b 4.50 to 10.7 QC Samples a to Extraction Recovery: Analyte (%) QC Sample Concentration (ng/ml) 30, 300, 8000 Extraction Recovery: Internal Standard (%) Lower Limit of Quantification (ng/ml) 10 Precision and Accuracy at LLOQ: 6 %CV / % Bias 4.10 / 1.00 Selectivity Mean Matrix Factor c / %CV / 2.04 Matrix Blanks --- No interference Interference Screen M3 M4 3 %CV / %Bias 2.06 / / 9.67 Table continued on next page 33

73 イヌ血漿中 定量法のバリデーション試験 ( 続き ) Stability Data Concentration (ng/ml) n Temperature (ºC) Duration %CV %Bias Post-preparative Ambient 89h to , 300, 8000 Reinjection Ambient 89h to 10.0 Short-Term Ambient 28h to 10.3 Long-Term to d to , d to d to 1.67 Freeze-Thaw to cycles to 8.67 Dilution Integrity: Fold / %CV / %Bias 6 10 / 1.36 / 7.13 Hemolysis No discernible effect a QC results from non-precision and accuracy runs qualified as valid validation runs according to acceptance criteria. b Between-run precision and accuracy were assessed using 18 samples (n=6 per day, 3 days). c (Plasma Area Ratio) / (Mean Neat Area Ratio). ---: not reported or not calculated; LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; LLOQ: lower limit of quantification; M3: MDPC0003; M4: MDPC0004; QC: quality control 34

74 イヌ血漿中 の長期安定性試験 被験物質 : Study Number, CTD No. PRO3100NC06, Species Dog Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 2 EDTA plasma Analyte Assay LC-MS/MS Internal Standard N- 13 CD 3 - Regression Type, Weighting Quadratic, 1/X Sample Volume ( L) 100 Quantification Range (ng/ml) Lower Limit of Quantification (ng/ml) 10 Nominal Concentration (ng/ml) n Temperature (ºC) Duration %CV % Deviation 1d to 4.8 7d to 7.6 Storage Stability Data a 29d to mo to 13 20, 500, 8000, b, b 6mo to 13 12mo to 11 3mo to mo to mo to 7.2 a b Observed % deviation values in excess of ±15% were not included in calculations of mean and %CV. Sample prepared with 10 times dilution; % deviation calculated based on expected diluted concentration. LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry 35

75 イヌ血漿中,M1 及び M2 定量法のバリデーション試験 被験物質 : Study Number, CTD No ME-5010, Nonclinical Studies in which the Method was Used 9785-TX-0013, Species Dog/Beagle Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 2 EDTA plasma with DDVP Assay LC-MS/MS Regression Type, Weighting Linear, 1/X 2 Sample Volume ( L) 50 Quantitation Range (ng/ml) Lower Limit of Quantification (ng/ml) 20 Analyte M1 (MDPC0001) M2 (MDPC0002) Internal Standard -[CD 3 ] 2 MDPC0001-[CD 3 ] 2 MDPC0002-[CD 3 ] 2 Validation Data Nominal n Concentration Analyte %CV %RE Intra-Day Reproducibility (ng/ml) 5.0 to to , 60, 1000, M1 8.4 to to 3.8 M2 5.1 to to 12.0 Selectivity 6 Met the acceptance criteria (2.7% of LLOQ) Dilution Reproducibility Recovery Table continued on next page n Fold Analyte %CV %RE 6 10 a M M n Concentration (ng/ml) 3 60, 1000, Analyte % Recovery, Analyte % Recovery, IS 17.7 to M to M to

76 イヌ血漿中,M1 及び M2 定量法のバリデーション試験 ( 続き ) Validation Data (continued) Carryover n 5 Less than 3.7% of the peak area of the LLOQ for, M1, and M2. Not observed for IS. n Concentration (ng/ml) Analyte %CV %RE Matrix Effects 5.9, , , M1 7.8, , 1.4 M2 4.6, , -4.1 Stability Data n Nominal Concentration Temperature Analyte (ng/ml) (ºC) Duration %Stability 95.6, 102 M1 4 2h 100, 101 Whole Blood M2 111, , , 99.0 M1 37 2h 94.4, 94.5 M2 102, , 87.8 M1 4 24h 96.3, 99.4 M2 94.1, , 95.0 Matrix 3 M1 6h 99.7, , M2 Room 101, 98.8 temperature 98.3, 89.4 M1 24h 98.2, 87.0 M2 97.7, , 95.7 Freeze-Thaw Matrix 3 M1 NA 3 cycles 93.5, 96.7 M2 102, 98.3 Table continued on next page 37

77 イヌ血漿中,M1 及び M2 定量法のバリデーション試験 ( 続き ) Stability Data (continued) n Nominal Concentration Temperature Analyte (ng/ml) (ºC) Duration %Stability Frozen Matrix 99.2, , M1 20 8d 104, 98.5 M2 106, , 88.5 M1 25h 90.3, 86.3 Post-Preparative 3 60, M2 101, , 93.2 M1 50h b 105, 95.9 M2 94.8, 99.3 a b Nominal concentration of ng/ml. Duration was 51h for M1. DDVP: 2,2-Dichlorovinyl dimethyl phosphate (dichlorvos); IS: internal standard; LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; LLOQ: lower limit of quantification; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; NA: not applicable; %RE: relative error =[(mean measured concentration nominal concentration) /nominal concentration] 100; %Stability (for whole blood stability) = mean measured concentration (after storage) / mean measured concentration (initial) 100; %Stability (for the other stability) = (mean measured concentration/nominal concentration)

78 イヌ血漿中,M1 及び M2 の長期安定性試験 被験物質 : Study Number, CTD No ME-5009, Species Dog/beagle Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 2 EDTA plasma with DDVP Assay LC-MS/MS Regression Type, Weighting Linear, 1/X 2 Sample Volume ( L) 50 Quantitation Range (ng/ml) Lower Limit of Quantification (ng/ml) 20 Analyte M1 (MDPC0001) M2 (MDPC0002) Internal Standard -[CD 3 ] 2 MDPC0001-[CD 3 ] 2 MDPC0002-[CD 3 ] 2 Nominal Concentration (ng/ml) n Duration Analyte %Stability 98.6, d M1 103, 91.8 M2 112, 99.8 Storage Stability Data at 20 C 99.2, , d M1 102, 96.9 M2 99.8, , d M1 95.7, 99.5 M2 98.3, 97.3 DDVP: 2,2-Dichlorovinyl dimethyl phosphate (dichlorvos); LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; %Stability = (mean measured concentration/nominal concentration)

79 サル血漿中,M1 及び M2 定量法のバリデーション試験 被験物質 : Study Number, CTD No ME-5002, Nonclinical Studies in which the Method was Used 9785-TX-0003, Species Monkey/Cynomolgus Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 2 EDTA plasma Assay LC-MS/MS Regression Type, Weighting Linear, 1/X 2 Sample Volume ( L) 50 Quantification Range (ng/ml) Lower Limit of Quantification (ng/ml) 20 Analyte M1 (MDPC0001) M2 (MDPC0002) Internal Standard N- 13 CD 3 - MDPC0001-[ 13 CD 3 ] MDPC0002-[ 13 CD 3 ] Validation Data Nominal n Concentration Analyte %CV %RE Intra-Day Reproducibility (ng/ml) to , 60, 1000, M to 4.0 M to 0.7 Selectivity 6 No interference Dilution Reproducibility Recovery Table continued on next page n Fold Analyte %CV % Deviation 6 10 a M M n Concentration (ng/ml) 3 60, 1000, Analyte % Recovery, Analyte % Recovery, IS b 16.0 to M to M to

80 サル血漿中,M1 及び M2 定量法のバリデーション試験 ( 続き ) Validation Data (continued) Carryover n 4 Less than 10.0% of the peak area of the LLOQ for, M1, and M2. Not observed for IS. n Nominal Concentration (ng/ml) Analyte %CV %RE Matrix Effects 4.8, , , M1 6.2, , 3.7 M2 5.0, , 5.8 Stability Data Whole Blood Matrix 3 Freeze-Thaw Matrix 3 Table continued on next page n Nominal Concentration (ng/ml) 3 60, , Analyte Temperature (ºC) Duration %Stability 96.5, 106 M1 4 2h 90.2, 103 M2 99.1, , 101 M1 37 2h 97.1, 99.6 M2 91.7, , 86.3 M1 4 24h 108, 86.1 M2 97.7, , 95.0 M1 NA 3 cycles 104, 93.5 M2 97.8,

81 サル血漿中,M1 及び M2 定量法のバリデーション試験 ( 続き ) Stability Data (continued) n Nominal Concentration Temperature Analyte (ng/ml) (ºC) Duration %Stability Frozen Matrix 96.2, , M d 95.0, 92.5 M2 103, , 91.2 M1 28h 91.8, 93.2 Post-preparative c 3 60, M2 101, , 88.5 M1 52h 104, 96.3 M2 102, 93.6 a b c Nominal concentration of ng/ml. IS concentration 100 ng/ml Post-preparative in an autosampler at 5ºC. IS: Internal standard; LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; NA: not applicable; %RE: relative error = [(mean measured concentration nominal concentration) /nominal concentration] 100; %Stability (for whole blood stability) = mean measured concentration (after storage) / mean measured concentration (initial) 100; %Stability (for the other stability) = (mean measured concentration/nominal concentration)

82 サル血漿中,M1 及び M2 の長期安定性試験 被験物質 : Study Number, CTD No ME-5006, Species Monkey/Cynomolgus Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) K 2 EDTA plasma Assay LC-MS/MS Regression Type, Weighting Linear, 1/X 2 Sample Volume ( L) 50 Quantification Range (ng/ml) Lower Limit of Quantification (ng/ml) 20 Analyte M1 (MDPC0001) M2 (MDPC0002) Internal Standard N- 13 CD 3 - MDPC0001-[ 13 CD 3 ] MDPC0002-[ 13 CD 3 ] Nominal Concentration (ng/ml) n Duration Analyte %Stability 99.1, d M1 105, 98.1 M2 101, 98.1 Storage Stability Data at 20 C 99.7, , d M1 97.2, 98.5 M2 107, , d M1 104, 98.2 M2 104, 98.4 LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; %Stability = (mean measured concentration/nominal concentration)

83 薬物動態試験 : 吸収 : 単回投与 マウスに を単回経口投与したときの血漿中濃度 被験物質 : Study Number, CTD No. PRO3100NC21, Species Mouse/CD-1 (ICR) Gender (M/F) / Number of Animals M/33 per group (3 per time point) Feeding Condition Ad libitum Method of Administration Oral gavage Sample (e.g. Whole blood, plasma, serum, etc.) Plasma Analyte Assay LC-MS/MS Vehicle/Formulation CMC, Tween a /Suspension /Solution Dose (mg/kg) PK Parameters b,c t max (h) C max (µg/ml) AUC (µg h/ml) t 1/2 (h) Table continued on next page 44

84 マウスに を単回経口投与したときの血漿中濃度 ( 続き ) PK Parameters (continued) Vehicle/Formulation CMC, Tween a Dose (mg/kg) C min ( g/ml) Predicted d, at steady state with repeat dosing a CMC/Tween: 1% CMC, 0.1% Tween 80 in deionized water. b Time-concentration data were analyzed in WinNonlin using a 1-compartment PK model. c Plasma was collected at 1, 2, 3, 5, 6, 8, 10, 12, 24, 36, and 48 hours after dosing. d Predicted values obtained by PK modeling of single-dose data using WinNonlin in simulation mode. CMC: carboxymethylcellulose; LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry Note:

85 ラットに を単回静脈内及び経口投与したときの血漿中濃度 a b c d Study Number, CTD No. PRO3100NC108, Species Rat/Sprague-Dawley Gender (M/F) / Number of Animals M/6 per group Feeding Condition Ad libitum Dose (mg/kg) 20 Sample (e.g. Whole blood, plasma, serum, etc.) Plasma a,b Analyte Assay LC-MS/MS Vehicle/Formulation 50% PEG400, 20% Ethanol, 30% Water/Solution /Solution Method of Administration IV (bolus) Oral Gavage PK Parameters Mean (SD) Mean (SD) CL (ml/h/kg) 86.7 (6.03) NA V c (ml/kg) 737 (164) NA V ss (ml/kg) 1110 (58.2) NA MRT (h) 12.9 (0.967) NA c t max (h) NA 6.0 ( ) C max ( g/ml) NA 11.1 (1.11) AUC inf ( g h/ml) 232 (16.1) 225 (41.7) AUC t ( g h/ml) NA 224 (40.6) t 1/2 (h) 9.10 (0.605) d 9.79 (1.60) F (%) NA 97.4 (18.1) IV: Plasma was collected at 0.25, 0.5, 1, 3, 6, 12, 24, 36, 48, 60, and 72 hours post-dose. PO: Plasma was collected at 1, 3, 6, 12, 24, 36, 48, 60, and 72 hours post-dose. The median and range of observed values (minimum to maximum) are reported rather than mean and SD. Beta half life (t 1/2 ). LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; MRT: mean residence time; NA: not applicable; PEG: polyethylene glycol 被験物質 : 46

86 ラットに 14 C- を単回経口投与したときの血液及び血漿中濃度 被験物質 : Study Number, CTD No ME-0003, Species Rat/Sprague-Dawley Gender (M/F) / Number of Animals M/21 (3 per time point) Feeding Condition Not fasted Vehicle/Formulation /Solution Method of Administration Oral gavage Dose (mg/kg) 30 Sample (e.g. Whole blood, plasma, serum, etc.) Blood and plasma Radionuclide 14 C- Specific Activity 57.6 mci/mmol Analyte/Assay Total radioactivity ( 14 C)/Liquid scintillation counting PK Parameters Tissue or Matrix t max (h) C max AUC t ( g eq/g) 1/2 (h) last AUC inf AUC last tissue/ ( g eq h/g) ( g eq h/g) AUC last plasma Blood Plasma Note: The dose was approximately 4 MBq/kg (108 Ci/kg). 47

87 イヌに を単回静脈内及び経口投与したときの血漿中濃度 被験物質 : Study Number, CTD No. PRO3100NC11, Species Dog/Beagle Gender (M/F) / Number of Animals M/12 (3 per dose group) Feeding Condition Not fasted Dose (mg/kg) 3 Sample (e.g. Whole blood, plasma, serum, etc.) Plasma a,b Analyte Assay LC-MS/MS Vehicle/Formulation 50% PEG400, CMC,Tween c / 20% Ethanol, 100% /Solution Suspension Tween/Solution 30% Water/Solution Method of Administration IV (bolus) Oral Gavage Oral, Gel Capsule Oral, Gel Capsule PK Parameters Mean (SD) C max ( g/ml) 4.60 (1.14) (0.344) 3.03 (1.27) 2.99 (2.13) t max (h) NA 11 (11) 5 (2) 3 (1) AUC last ( g h/ml) NA 21.9 (20.8) 88.5 (41.9) 101 (47.8) t 1/2 (d) 1.46 (0.800) 1.34 (0.710) 1.39 (0.288) 1.71 (0.205) V ss (ml/kg) 1200 (762) NA NA NA CL (ml/h/kg) 23.9 (5.01) NA NA NA CL/F (ml/h/kg) NA 413 (536) 37.5 (15.2) 31.7 (11.8) F (%) d NA 18.3 (16.6) 72.5 (32.9) 85.4 (40.6) a b c d IV: Plasma was collected predose, and at 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, and 168 hours postdose. PO: Plasma was collected predose, and at 2, 4, 6, 8, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, and 168 hours postdose. CMC/Tween: 1% CMC, 0.1% Tween 80 in deionized water. Derived by dividing the mean CL with IV dosing (23.9 ml/h/kg) by individual CL/F. CMC: carboxymethylcellulose; LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; NA: not applicable; PEG: polyethylene glycol 48

88 イヌに 14 C- を単回経口投与したときの血液及び血漿中濃度 Study Number, CTD No ME-0002, Species Dog/Beagle Gender (M/F) / Number of Animals M/3 Feeding Condition Not fasted Vehicle/Formulation /Solution Method of Administration Oral, capsules Dose (mg/kg) 20 Sample (e.g. Whole blood, plasma, serum, etc.) Blood and plasma Radionuclide 14 C- Specific Activity 57.6 mci/mmol Analyte/Assay Total radioactivity ( 14 C)/Liquid scintillation counting PK Parameters Matrix t max (h) C max ( g eq/g) t 1/2 (h) AUC last ( g eq h/g) 被験物質 : AUC inf ( g eq h/g) Blood Mean SD Median 6.00 NC NC NC NC Plasma Mean SD Median 8.00 NC NC NC NC Note: The dose was approximately 2 MBq/kg (54 Ci/kg). NC: not calculated 49

89 イヌに を種々の製剤として単回経口投与したときの血漿中濃度 Study Number, CTD No. PRO3100NC53, Species Dog/Beagle Gender (M/F) / Number of Animals M/18 (3 per group) Feeding Condition Not fasted Formulation A: Formulation B: Formulation C: Vehicle/Formulation Formulation D: Formulation E: 被験物質 : Formulation F: Method of Administration Oral gavage; oral (capsules) Dose (mg/kg) 6, 20 Sample (e.g. Whole blood, plasma, serum, etc.) K 3 EDTA Plasma Analyte/Assay /LC-MS/MS Mean (SD) Plasma PK Parameters Dose/Formulation C max (µg/ml) a t max (h) AUC 24h (µg h/ml) AUC 7d (µg h/ml) t 1/2 (d) % Relative Bioavailability 6 mg/kg Particulate Formulation: Formulation F (capsule) 1.05 (0.235) 6 (2 to 24) 55.3 (3.28) 14.0 (2.39) 1.68 (0.20) 8 (1) 20 mg/kg Solution 1: Formulation A 15.0 (6.31) 2 (1 to 4) 195 (65.6) 568 (203) 1.43 (0.18) 100 (36) Solution 2: Formulation B 11.9 (5.59) 24 (6 to 24) 163 (82.9) 638 (394) 1.68 (0.36) 112 (69) Solution 3: Formulation C 9.47 (6.97) 2 (0.5 to 24) 130 (110) 512 (447) 2.10 (0.13) 90 (79) Solution 4: Formulation D 7.92 (2.75) 2 (2 to 4) 116 (50.3) 364 (146) 1.67 (0.55) 64 (26) Emulsion: Formulation E 8.85 (3.23) 2 (1 to 2) 133 (58.4) 415 (201) 1.60 (0.61) 73 (35) a For t max, the median and range (minimum to maximum) are reported. LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry 50

90 薬物動態試験 : 吸収 : 反復投与 トキシコキネティクスの概要が TK 試験成績の一覧に記載されている 51

91 薬物動態試験 : 分布 ラットに 14 C- を単回経口投与したときの組織内放射能濃度 Study Number, CTD No ME-0003, Species Rat/Sprague-Dawley Gender (M/F) / Number of Animals M/21 (3 per time point) Feeding Condition Not fasted Vehicle/Formulation /Solution Method of Administration Oral gavage Dose (mg/kg) 30 Radionuclide 14 C- Specific Activity 57.6 mci/mmol Analyte/Assay Total radioactivity ( 14 C)/Liquid scintillation counting PK Parameters Tissue or Matrix t max (h) C max t 1/2 (h) AUC last AUC inf 被験物質 : AUC last tissue/ AUC last plasma ( g eq/g) ( g eq h/g) ( g eq h/g) Adrenal Gland(s) Aorta NC a 491 NC a 1.18 Blood Bone Marrow Cerebellum Cerebrum Epididymis Eye(s) Fat Femur (both) Harderian Gland Heart Hypothalamus Kidney(s) Table continued on next page 52

92 ラットに 14 C-を単回経口投与したときの組織内放射能濃度 ( 続き ) PK Parameters Tissue or Matrix t max (h) C max t 1/2 (h) AUC last AUC inf AUC last tissue/ AUC last plasma (µg eq/g) ( g eq h/g) ( g eq h/g) Large Intestine Liver Lungs Muscle (skeletal) Pancreas Pituitary Gland Plasma Prostate Gland Skin Small Intestine Spleen Stomach Submaxillary Glands Testis(es) Thymus Thyroid Mean (SD) Radioactivity Concentration (ng eq/g) Time Point (h) Tissue or Matrix Adrenal Gland(s) (4500) (9610) (3860) (902) 3460 (1950) 374 (169) 16.4 (28.3) Aorta 6290 (857) (9280) (4220) 7500 (571) 1270 (730) 124 (41.0) 26.8 (46.4) Blood 2970 (385) 8380 (1800) 9030 (1430) 3780 (682) 700 (355) 91.4 (8.56) 0 (0) Bone Marrow 3240 (343) 6960 (3990) 9620 (1080) 3680 (522) 515 (290) 54.2 (14.8) 0 (0) Cerebellum 2830 (322) (2830) (241) 2820 (72.3) 474 (261) 0 (0) 0 (0) Cerebrum 2840 (395) (2440) 9380 (290) 2690 (205) 456 (238) 43.3 (38.4) 0 (0) Epididymis 5100 (1000) (2330) (3590) 9130 (641) 1950 (NA) 138 (42.1) 0 (0) Table continued on next page 53

93 ラットに 14 C-を単回経口投与したときの組織内放射能濃度 ( 続き ) Mean (SD) Radioactivity Concentration (ng eq/g) Time Point (h) Tissue or Matrix Eye(s) 1300 (90.9) 4540 (1130) 4740 (440) 2020 (134) 477 (188) 82.7 (72.6) 0 (0) Fat (4340) (16100) (4830) (4950) 4540 (2230) 350 (87.7) 16.2 (14.1) Femur (both) 2370 (352) 7860 (2820) 7190 (1090) 2620 (303) 420 (218) 58.5 (3.10) 0 (0) Harderian Gland (2510) (8090) (4630) (2660) 2900 (1260) 391 (96.1) 30.0 (13.8) Heart 7710 (1070) (6840) (2590) 7610 (299) 1150 (451) 126 (26.6) 0 (0) Hypothalamus 2900 (412) (2890) 9640 (219) 2770 (189) 469 (246) 28.5 (49.3) 0 (0) Kidney(s) (1250) (9040) (4250) (2860) 5590 (2150) 1170 (348) 116 (35.3) Large Intestine (6420) (2080) (796) (1020) 2220 (1440) 365 (102) 0 (0) Liver (5110) (17600) (3980) (2210) (3940) 4090 (432) 699 (81.3) Lungs 7220 (816) (5310) (1080) 7000 (714) 1170 (447) 132 (29.7) 5.68 (9.85) Muscle (skeletal) 4110 (467) (2810) (1130) 4460 (347) 734 (378) 65.6 (23.4) 0 (0) Pancreas (4630) (6650) (671) (1160) 1800 (816) 195 (33.1) 0 (0) Pituitary Gland 6430 (977) (5850) (1280) 7010 (1160) 1420 (759) 0 (0) 0 (0) Plasma 5940 (545) (3430) (1650) 7010 (1540) 1270 (653) 144 (12.7) 0 (0) Prostate Gland 5430 (900) (6320) (1430) 8660 (1770) 1210 (547) 127 (27.8) 8.36 (7.29) Skin 4120 (262) (3440) (363) 5060 (664) 1130 (456) 216 (80.9) 0 (0) Small Intestine (24900) (13500) (4360) (2210) 4050 (1960) 529 (69.4) 30.5 (52.8) Spleen 4060 (320) (3620) (1160) 4110 (305) 664 (251) 85.4 (15.6) 0 (0) Stomach (24200) (34000) (946) 6990 (555) 1560 (1020) 214 (43.4) 68.4 (118) Submaxillary Glands 9510 (1610) (4310) (4060) 9450 (656) 1690 (581) 175 (67.2) 12.1 (2.10) Testis(es) 3120 (594) (2440) (1150) 3930 (222) 690 (321) 73.8 (15.0) 0 (0) Thymus 4260 (700) (2370) (1010) 4450 (422) 661 (317) 65.4 (15.6) 8.76 (2.94) Thyroid 8640 (1490) (1440) (1390) 7600 (1460) 1280 (623) 207 (47.4) 0 (0) Mean (SD) Blood:Plasma and Tissue:Plasma Radioactivity Concentration Ratio Adrenal Gland(s) 3.76 (0.444) 3.53 (0.220) 3.21 (0.308) 3.07 (0.843) 2.69 (0.554) 2.55 (0.909) NA Aorta 1.08 (0.251) 1.36 (0.411) 1.19 (0.152) 1.10 (0.228) (0.106) (0.201) NA Blood (0.0238) ( ) (0.0472) (0.0351) (0.0115) ( ) NA Bone Marrow (0.0316) (0.313) (0.0507) (0.179) (0.0543) (0.0705) NA Cerebellum (0.0118) (0.0424) (0.0400) (0.107) (0.0453) NA NA Cerebrum (0.0346) ( ) (0.0338) (0.124) (0.0231) (NA) NA Table continued on next page 54

94 ラットに 14 C-を単回経口投与したときの組織内放射能濃度 ( 続き ) Mean (SD) Blood:Plasma and Tissue:Plasma Radioactivity Concentration Ratio Time Point (h) Tissue or Matrix Epididymis (0.104) 1.52 (0.295) 1.47 (0.294) 1.36 (0.397) 1.20 (NA) (0.219) NA Eye(s) ( ) ( ) (0.0151) (0.0730) (0.0848) (NA) NA Fat 1.82 (0.592) 4.68 (0.878) 5.75 (0.503) 4.81 (1.88) 3.66 (0.542) 2.41 (0.381) NA Femur (both) (0.0282) (0.0667) (0.0560) (0.0995) (0.0127) (0.0174) NA Harderian Gland 2.83 (0.173) 3.26 (0.299) 2.79 (0.329) 2.61 (0.925) 2.40 (0.329) 2.70 (0.411) NA Heart 1.30 (0.173) 1.48 (0.111) 1.21 (0.0627) 1.12 (0.270) (0.200) (0.115) NA Hypothalamus (0.0372) (0.0328) (0.0589) (0.115) (0.0374) (NA) NA Kidney(s) 2.06 (0.0252) 2.49 (0.0477) 2.21 (0.0794) 3.16 (0.695) 4.76 (1.05) 8.07 (1.71) NA Large Intestine 1.98 (1.01) 1.30 (0.142) 1.25 (0.0716) 1.55 (0.501) 1.63 (0.545) 2.52 (0.570) NA Liver 5.41 (0.923) 4.98 (0.255) 4.34 (0.184) 6.70 (1.67) 13.8 (5.92) 28.5 (1.24) NA Lungs 1.22 (0.108) 1.24 (0.0733) 1.09 (0.0415) 1.03 (0.254) 1.01 (0.255) (0.127) NA Muscle (skeletal) (0.0236) (0.0179) (0.0446) (0.187) (0.0752) (0.118) NA Pancreas 2.94 (0.712) 2.09 (0.0974) 1.82 (0.191) 1.76 (0.400) 1.47 (0.200) 1.35 (0.136) NA Pituitary Gland 1.08 (0.0713) 1.33 (0.0944) 1.08 (0.168) 1.04 (0.337) 1.13 (0.143) NA NA Prostate Gland (0.0781) 1.36 (0.249) 1.04 (0.140) 1.28 (0.369) (0.193) (0.123) NA Skin (0.0474) (0.247) (0.0725) (0.210) (0.204) 1.48 (0.445) NA Small Intestine 7.64 (3.91) 2.89 (0.210) 2.10 (0.349) 2.94 (0.946) 3.24 (0.196) 3.67 (0.275) NA Spleen (0.0823) (0.0824) (0.0254) (0.188) (0.130) (0.0915) NA Stomach 16.8 (5.58) 4.44 (2.39) 1.23 (0.0800) 1.04 (0.296) 1.16 (0.262) 1.49 (0.242) NA Submaxillary Glands 1.60 (0.170) 1.71 (0.143) 1.45 (0.146) 1.40 (0.393) 1.47 (0.415) 1.20 (0.351) NA Testis(es) (0.0570) ( ) (0.0338) (0.155) (0.0480) (0.0606) NA Thymus (0.0572) (0.179) (0.0806) (0.215) (0.0595) (0.0704) NA Thyroid 1.45 (0.144) 1.64 (0.383) 1.40 (0.187) 1.15 (0.485) 1.02 (0.0875) 1.43 (0.194) NA Mean (SD) Percentage of Radioactivity Cellular Fraction of Blood 1.97 (3.91) 2.20 (3.76) 13.2 (7.5) 2.89 (7.03) 11.1 (6.8) 18.9 (1.8) 0 (0) a Could not be calculated because no discernible terminal elimination phase was observed. Note: The dose was approximately 4 MBq/kg (108 Ci/kg). NA: not applicable; NC: not calculated 55

95 ラットに 14 C- を単回経口投与したときの定量的全身オートラジオグラフィーによる放射能組織分布 被験物質 : Study Number, CTD No ME-0003, Species Rat/Sprague-Dawley Gender (M/F) / Number of Animals M/14 (2 per time point) for blood and plasma, M/7 (1 per time point) for the others Feeding Condition Not fasted Vehicle/Formulation /Solution Method of Administration Oral gavage Dose (mg/kg) 30 Radionuclide 14 C- Specific Activity 57.6 mci/mmol Analyte/Assay Total radioactivity ( 14 C)/Liquid scintillation counting (LSC) and Quantitative whole-body autoradiography (QWBA) Radioactivity Concentration (ng eq/g) determined by QWBA Time Point (h) Tissue or Matrix Adrenal Gland a ND Adrenal Gland Cortex a ND ND Adrenal Gland Medulla a ND ND Bile ND ND ND ND Blood BLQ ND Bone BLQ BLQ BLQ ND ND Bone Marrow ND ND Brain Cerebellum BLQ ND Brain Cerebrum BLQ ND Brain Medulla ND ND Brain Olfactory Lobe BLQ ND Bulbo-Urethral Gland ND ND Cecum ND ND Table continued on next page 56

96 ラットに 14 C- を単回経口投与したときの定量的全身オートラジオグラフィーによる放射能組織分布 ( 続き ) Radioactivity Concentration (ng eq/g) determined by QWBA Time Point (h) Tissue or Matrix Contents, Cecum BLQ Contents, Esophageal BLQ ND ND Contents, Large Intestine BLQ Contents, Small Intestine BLQ Contents, Stomach BLQ ND ND Diaphragm ND ND Epididymis ND ND Esophagus ND ND Exorbital Lacrimal Gland BLQ ND Eye BLQ ND Eye Lens BLQ Eye Uveal Tract ND ND Fat (abdominal) BLQ ND Fat (brown) BLQ ND Fat (subcutaneous) BLQ ND Harderian Gland ND Intra-orbital Lacrimal Gland ND ND Kidney BLQ Kidney Cortex ND Kidney Medulla ND Large Intestine ND Liver Lung ND ND Lymph Nodes ND ND Muscle ND ND Myocardium BLQ ND Nasal Turbinates BLQ ND Pancreas ND Pituitary Gland ND ND Table continued on next page 57

97 ラットに 14 C-を単回経口投与したときの定量的全身オートラジオグラフィーによる放射能組織分布 ( 続き ) Radioactivity Concentration (ng eq/g) determined by QWBA Time Point (h) Tissue or Matrix Preputial Gland BLQ ND Prostate Gland BLQ ND Salivary Gland ND Seminal Vesicle ND ND Skin BLQ ND Small Intestine ND ND Spinal Cord ND ND Spleen BLQ ND Stomach BLQ ND Stomach Mucosa ND ND Stomach Wall ND ND Testis BLQ ND Thymus ND ND Thyroid ND ND Urinary Bladder ND ND Urine ND Mean b Radioactivity Concentration (ng eq/g) determined by LSC Blood Plasma Mean b Blood:Plasma Radioactivity Concentration Ratio Blood NA Tissue:Plasma Radioactivity Concentration Ratio Adrenal Gland NA Adrenal Gland Cortex NA NA Adrenal Gland Medulla NA NA Bile NA NA NA NA Blood NA NA Bone NA NA NA NA NA Bone Marrow NA NA Table continued on next page 58

98 ラットに 14 C-を単回経口投与したときの定量的全身オートラジオグラフィーによる放射能組織分布 ( 続き ) Tissue:Plasma Radioactivity Concentration Ratio Time Point (h) Tissue or Matrix Brain Cerebellum NA NA Brain Cerebrum NA NA Brain Medulla NA NA Brain Olfactory Lobe NA NA Bulbo-Urethral Gland NA NA Cecum NA NA Diaphragm NA NA Epididymis NA NA Esophagus NA NA Exorbital Lacrimal Gland NA NA Eye NA NA Eye Lens NA NA Eye Uveal Tract NA NA Fat (abdominal) NA NA Fat (brown) NA NA Fat (subcutaneous) NA NA Harderian Gland NA Intra-orbital Lacrimal Gland NA NA Kidney NA Kidney Cortex NA Kidney Medulla NA Large Intestine NA Liver NA Lung NA NA Lymph Nodes NA NA Muscle NA NA Myocardium NA NA Nasal Turbinates NA NA Pancreas NA Pituitary Gland NA NA Table continued on next page 59

99 ラットに 14 C-を単回経口投与したときの定量的全身オートラジオグラフィーによる放射能組織分布 ( 続き ) Tissue:Plasma Radioactivity Concentration Ratio Time Point (h) Tissue or Matrix Preputial Gland NA NA Prostate Gland NA NA Salivary Gland NA Seminal Vesicle NA NA Skin NA NA Small Intestine NA NA Spinal Cord NA NA Spleen NA NA Stomach NA NA Stomach Mucosa NA NA Stomach Wall NA NA Testis NA NA Thymus NA NA Thyroid NA NA Urinary Bladder NA NA a Tissue or organ was saturated with fat. b Mean values; two animals per time point. Note: The dose was approximately 4 MBq/kg (108 Ci/kg). BLQ: below limit of quantitation (<243 ng eq/g); LSC: liquid scintillation counting; NA: not applicable; ND: not detectable (sample shape not discernible from background or surrounding tissues); QWBA: quantitative whole-body autoradiography 60

100 ラットに 14 C- を反復経口投与したときの組織内放射能濃度 Study Number, CTD No ME-0016, Species Rat/Sprague-Dawley Gender (M/F) / Number of Animals M/30 (3 per time point) Feeding Condition Not fasted Vehicle/Formulation /Solution Method of Administration Oral gavage Dose (mg/kg/day) 30 Radionuclide 14 C- Specific Activity 58.4 mci/mmol Analyte/Assay Total radioactivity ( 14 C)/Liquid scintillation counting Mean (SD) Radioactivity Concentration (ng eq/g) 被験物質 : Day Time Point (h) Tissue or Matrix Adrenal Gland(s) (4897) (2331) (1714) (836) (14354) (7427) (3960) (19179) Aorta (2566) 8561 (2723) (9160) 6318 (420) (2297) (4286) (845) (8925) Blood (2418) 5181 (1376) (2287) 3857 (169) (642) 4881 (702) (671) 6466 (2385) Bone Marrow (1633) 4879 (994) (1860) 3716 (474) (1517) 5579 (1651) (1178) 7636 (3205) Cerebellum (2326) 2677 (342) 8538 (1367) 1652 (143) 9808 (1291) 2581 (661) 9526 (893) 3255 (1508) Cerebrum (2119) 2710 (440) 8922 (1110) 1586 (90) (1591) 2649 (733) 9472 (446) 3300 (1445) Epididymis (4002) 9713 (1843) (2936) 5985 (226) (4233) 9198 (1417) (1743) (7935) Eye(s) 5721 (1016) 2316 (138) 6103 (502) 1925 (113) 6312 (1088) 2725 (759) 6213 (383) 3426 (1271) Fat (30636) (5139) (5897) (1505) (23923) (18765) (2738) (29542) Femur 6750 (1336) 1958 (454) 5825 (927) 1505 (252) 6623 (561) 1503 (251) 5264 (2256) 2323 (1037) Harderian Gland (7005) (3455) (6276) (1363) (7054) (8531) (2524) (11128) Heart (3750) 9605 (1392) (3441) 7042 (808) (3002) (3240) (1354) (6128) Hypothalamus (2728) 2900 (559) 8991 (1274) 1668 (135) 9151 (2342) 2586 (759) 9556 (838) 3690 (1788) Kidney(s) (4159) (4517) (6256) (552) (4069) (7166) (1913) (8299) Table continued on next page 61

101 ラットに 14 C-を反復経口投与したときの組織内放射能濃度 ( 続き ) Mean (SD) Radioactivity Concentration (ng eq/g) Day Time Point (h) Tissue or Matrix Large Intestine (2959) (155) (6719) (3983) (4715) (4356) (4688) (3551) Liver (12658) (5004) (10062) (6926) (5315) (5965) (4520) (12473) Lungs (2889) 7941 (1138) (2927) 6327 (476) (1830) 9034 (2649) (3877) (4102) Muscle (skeletal) (2218) 4945 (609) (2066) 3456 (324) (2643) 5227 (1460) (1241) 6707 (2472) Pancreas (5491) (1359) (7016) 9703 (786) (6296) (4287) (2863) (9423) Pituitary Gland (842) 7288 (1724) (3626) 5779 (681) (3954) 6256 (1068) (2062) (3844) Plasma (3412) 8273 (2098) (4472) 6253 (189) (1324) 7801 (1192) (1539) 9802 (3408) Prostate Gland (4972) 8945 (3989) (3793) (7995) (4669) 9185 (1334) (24503) (6725) Skin (2822) 6315 (1850) (5491) 4022 (557) (3346) 5932 (1796) (2290) (5474) Small Intestine (3703) (2143) (3648) (2257) (4534) (2481) (5756) (4278) Spleen (1679) 5245 (629) (1630) 3923 (169) (2206) 5879 (1730) (829) (8855) Stomach (5687) 7143 (1582) (10770) 5373 (417) (14692) 6733 (1371) (13577) (3440) Submaxillary Glands (2309) (1565) (1770) 8297 (516) (3016) (2807) (1381) (6275) Testis(es) (2839) 4313 (834) (820) 2963 (121) (1763) 4219 (920) (1032) 5675 (2402) Thymus (2598) 5921 (1181) (2052) 3711 (130) (6806) 5614 (1391) (1413) 7587 (3152) Thyroid (1528) 8397 (1414) (3578) 6808 (437) (7942) 9515 (2270) (1033) (7424) Table continued on next page 62

102 ラットに 14 C- を反復経口投与したときの組織内放射能濃度 ( 続き ) Mean Blood:Plasma and Tissue:Plasma Radioactivity Concentration Ratio Day Time Point (h) Tissue or Matrix Adrenal Gland(s) Aorta Blood Bone Marrow Cerebellum Cerebrum Epididymis Eye(s) Fat Femur Harderian Gland Heart Hypothalamus Kidney(s) Table continued on next page 63

103 ラットに 14 C-を反復経口投与したときの組織内放射能濃度 ( 続き ) Mean Blood:Plasma and Tissue:Plasma Radioactivity Concentration Ratio Day Time Point (h) Tissue or Matrix Large Intestine Liver Lungs Muscle (skeletal) Pancreas Pituitary Gland Plasma Prostate Gland Skin Small Intestine Spleen Stomach Submaxillary Glands Testis(es) Thymus Thyroid Table continued on next page 64

104 ラットに 14 C-を反復経口投与したときの組織内放射能濃度 ( 続き ) Mean (SD) Radioactivity Concentration (ng eq/g) Day 21 Time Point (h) a Tissue or Matrix Adrenal Gland(s) (2290) (3960) (19179) 118 (13) Aorta (1730) (845) (8925) 135 Blood 8163 (977) (671) 6466 (2385) 58.3 (10.8) Bone Marrow (2425) (1178) 7636 (3205) ND Cerebellum 4563 (812) 9526 (893) 3255 (1508) ND Cerebrum 4769 (781) 9472 (446) 3300 (1445) ND Epididymis (1289) (1743) (7935) 67.6 (19.5) Eye(s) 3706 (125) 6213 (383) 3426 (1271) 238 (18) Fat (3695) (2738) (29542) 127 (20) Femur 3274 (478) 5264 (2256) 2323 (1037) 142 (8) Harderian Gland (4850) (2524) (11128) 111 (20) Heart (2154) (1354) (6128) 67.1 (9.9) Hypothalamus 4844 (976) 9556 (838) 3690 (1788) ND Kidney(s) (3769) (1913) (8299) 225 (37) Table continued on next page 65

105 ラットに 14 C-を反復経口投与したときの組織内放射能濃度 ( 続き ) Mean (SD) Radioactivity Concentration (ng eq/g) Day 21 Time Point (h) a Tissue or Matrix Large Intestine (614) (4688) (3551) 91.3 (39.0) Liver (10471) (4520) (12473) 2814 (631) Lungs (914) (3877) (4102) 59.7 (5.1) Muscle (skeletal) 9112 (642) (1241) 6707 (2472) ND Pancreas (2568) (2863) (9423) 69.2 (10.9) Pituitary Gland (1064) (2062) (3844) ND Plasma (1938) (1539) 9802 (3408) ND Prostate Gland (995) (24503) (6725) ND Skin (2349) (2290) (5474) 89.5 (31.8) Small Intestine (3967) (5756) (4278) 61.3 (8.0) Spleen (1101) (829) (8855) 62.6 (7.9) Stomach (22492) (13577) (3440) ND Submaxillary Glands (422) (1381) (6275) 64.3 (16.2) Testis(es) 5895 (865) (1032) 5675 (2402) ND Thymus (2007) (1413) 7587 (3152) ND Thyroid (2399) (1033) (7424) ND Table continued on next page 66

106 ラットに 14 C-を反復経口投与したときの組織内放射能濃度 ( 続き ) Mean Blood:Plasma and Tissue:Plasma Radioactivity Concentration Ratio Day 21 Time Point (h) Tissue or Matrix Adrenal Gland(s) NC Aorta NC Blood NC Bone Marrow NC Cerebellum NC Cerebrum NC Epididymis NC Eye(s) NC Fat NC Femur NC Harderian Gland NC Heart NC Hypothalamus NC Kidney(s) NC Table continued on next page 67

107 ラットに 14 C-を反復経口投与したときの組織内放射能濃度 ( 続き ) Mean Blood:Plasma and Tissue:Plasma Radioactivity Concentration Ratio Day 21 Time Point (h) Tissue or Matrix Large Intestine NC Liver NC Lungs NC Muscle (skeletal) NC Pancreas NC Pituitary Gland NC Plasma NC Prostate Gland NC Skin NC Small Intestine NC Spleen NC Stomach NC Submaxillary Glands NC Testis(es) NC Thymus NC Thyroid NC Note: The dose was approximately 2.5 MBq/kg/day (67.6 µci/kg/day). a When one out of three values are ND, the mean of the other two is displayed and SD is not available. NC: Not calculated; ND: Not detected; SD: Standard deviation. 68

108 イヌに 14 C- を単回経口投与したときの血液 / 血漿中放射能濃度比 被験物質 : Study Number, CTD No ME-0002, Species Dog/Beagle Gender (M/F) / Number of Animals M/3 Feeding Condition Not fasted Vehicle/Formulation /Solution Method of Administration Oral, capsules Dose (mg/kg) 20 Sample (e.g. Whole blood, plasma, serum, etc.) Blood and plasma Radionuclide 14 C- Specific Activity 57.6 mci/mmol Analyte/Assay Total radioactivity ( 14 C)/Liquid scintillation counting Blood:Plasma Radioactivity Concentration Ratio Animal Number Time Point (h) H05551 H05552 H05553 Mean (SD) (0.0232) (0.0203) (0.0258) (0.0314) ( ) (0.0145) (0.0126) ( ) (0.0200) (0.0161) (0.0146) (0.0223) (0.0338) (0.0644) NA (NA) Note: The dose was approximately 2 MBq/kg (54 Ci/kg). NA: not applicable 69

109 薬物動態試験 : 蛋白結合 付録に蛋白結合の試験成績が記載されている 70

110 薬物動態試験 : 妊娠又は授乳動物における試験 該当なし 71

111 薬物動態試験 : その他の分布試験 マウスに を経口投与したときの血漿及び脳内,M1 及び M2 濃度 被験物質 : Study Number, CTD No ME-5016, Species Mouse/CD-1(ICR) Gender (M/F) / Number of Animals M/50 a Sample (Whole blood, plasma, serum, etc.) Brain, K 2 EDTA plasma with DDVP Assay LC-MS/MS Vehicle/Formulation /Solution Negative Control 0.5% MC Method of Administration Oral gavage Analyte, M1 (MDPC0001), M2 (MDPC0002) Plasma and Brain, M1, and M2 Concentration (Low Dose) Analyte Test Substance Convulsion b Last Observation c Dose Animal No. Brain Conc Brain Conc (mg/kg) Plasma Conc (μg/ml) Plasma Conc (μg/ml) (μg/g) (μg/g) Table continued on next page 72

112 マウスに を経口投与したときの血漿及び脳内,M1 及び M2 濃度 ( 続き ) Plasma and Brain, M1, and M2 Concentration (Low Dose) Analyte Test Substance Convulsion b Last Observation c Dose Animal No. Plasma Conc Brain Conc Plasma Conc Brain Conc (mg/kg) (μg/ml) (μg/g) (μg/ml) (μg/g) M M Table continued on next page 73

113 マウスに を経口投与したときの血漿及び脳内,M1 及び M2 濃度 ( 続き ) Analyte Test Substance Table continued on next page Dose (mg/kg) Plasma and Brain, M1 and M2 Concentration (Medium and High Doses) Convulsion b Last Observation d Sampling Day and Time Animal No. Plasma Conc Brain Conc Plasma Conc Brain Conc Time After Dose Day (μg/ml) (μg/g) (μg/ml) (μg/g) Plasma Brain h 06min 9h 12min h 09min 1h 11min h 25min 23h 27min h 55min 10h 59min h 45min 10h 47min h 53min 6h 55min h 20 min 23h 22min h 07min 24h 09min h 58min 24h 00min h 22min 24h 23min h 38min 9h 47min h 29min 23h 31min h 49min 4h 51min

114 マウスに を経口投与したときの血漿及び脳内,M1 及び M2 濃度 ( 続き ) Analyte M1 Test Substance Table continued on next page Dose (mg/kg) Plasma and Brain, M1 and M2 Concentration (Medium and High Doses) Convulsion b Last Observation d Sampling Day and Time Animal No. Plasma Conc Brain Conc Plasma Conc Brain Conc Time After Dose Day (μg/ml) (μg/g) (μg/ml) (μg/g) Plasma Brain h 06min 9h 12min h 09min 1h 11min h 25min 23h 27min h 55min 10h 59min h 45min 10h 47min h 53min 6h 55min h 20 min 23h 22min h 07min 24h 09min h 58min 24h 00min h 22min 24h 23min h 38min 9h 47min h 29min 23h 31min ND h 49min 4h 51min

115 マウスに を経口投与したときの血漿及び脳内,M1 及び M2 濃度 ( 続き ) Analyte M2 Test Substance Dose (mg/kg) a Including animals in a negative control group (10 mice) and a vehicle control group (10 mice) b At the time of convulsions. c 24 hours after the last dose. d 24 hours after last dose (200 mg/kg); 72 hours after last dose (400 mg/kg). Note: The first dosing day was designated as Day 0. Plasma and Brain, M1 and M2 Concentration (Medium and High Doses) Convulsion b Last Observation d Sampling Day and Time Animal No. Plasma Conc Brain Conc Plasma Conc Brain Conc Time After Dose Day (μg/ml) (μg/g) (μg/ml) (μg/g) Plasma Brain h 06min 9h 12min h 09min 1h 11min h 25min 23h 27min h 55min 10h 59min h 45min 10h 47min h 53min 6h 55min h 20 min 23h 22min h 07min 24h 09min h 58min 24h 00min h 22min 24h 23min h 38min 9h 47min h 29min 23h 31min h 49min 4h 51min : No sample; DDVP: 2, 2-dichlorovinyl dimethyl phosphate (dichlorvos); LC-MS/MS: liquid chromatography-tandem mass spectrometry; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; MC: methyl cellulose; ND: not determined 76

116 ラットに 14 C- を反復経口投与したときの血漿及び脳内 及び代謝物濃度 Study Number, CTD No. PRO3100NC84, Species Rat/Sprague-Dawley Gender (M/F) / Number of Animals M/3 Feeding Condition Ad libitum Vehicle/Formulation /Solution Method of Administration Oral gavage Dose (mg/kg/day) 100 Duration of Dosing (days) 7 Radionuclide 14 C- Specific Activity (µci/mg) a Analyte/Assay Total radioactivity ( 14 C) / Liquid scintillation counting Sample and Sampling Time Blood, brain, CSF: 4 hours postdose on Day 7; urine and feces: 0 24 hours postdose on Day 6 Concentration of Radioactivity (ng eq/g) Animal ID B16116 B16117 B16118 Mean (SD) Blood (2000) Plasma (2700) Brain (800) CSF (145) Concentration Ratio of Radioactivity Blood:Plasma (0.013) Brain:Plasma (0.021) Percent Recovery of Radioactive Dose Urine (4.1) Feces (8.4) Total (5.7) Table continued on next page 被験物質 : 77

117 ラットに 14 C-を反復経口投与したときの血漿及び脳内 及び代謝物濃度 ( 続き ) Metabolite Profile Metabolite Designation Unknown d M1 M2 M3 M4 M5 M6 Total (%) HPLC Retention Time (min) b NA Concentration of Radioactivity (ng eq/g) Percent of Sample Radioactivity (%) Plasma ND c Brain ND ND c CSF ND e Plasma ND f Brain ND ND CSF ND Brain:Plasma Ratio NA NC g NA CSF:Plasma Ratio NA NC g NA a Mean specific activity of 14 C- in oral dose formulation was calculated to be 2.55 µci/mg. b HPLC retention time ranges from all matrices analyzed. Values are expressed to the second decimal place. c Extraction recovery. d Metabolite was not identified/characterized by LC-MS. e Centrifugation recovery. f Value is below the established limit of quantitation (1% of run), but was reported due to the presence of M3 in brain and cerebrospinal fluid samples. g Not calculated; the ratio could not be computed because M5 was not detected in the brain or CSF. Note: The target dose was 9.25 MBq/kg/day (250 Ci/kg/day). CSF: cerebrospinal fluid; HPLC: high performance liquid chromatography; LC-MS: liquid chromatography-mass spectrometry; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; M3: MDPC0003; M4: MDPC0004; M5: MDV3105; M6: MDV3106; NA: not applicable; NC: not calculated; ND: not detected 78

118 薬物動態試験 : 代謝 :In vivo ラットに 14 C- を単回経口投与したときの血漿, 尿, 胆汁及び糞中代謝物プロファイル 被験物質 : Study Number, CTD No ME-0007, Species Rat/Sprague-Dawley Gender (M/F) / Number of Animals M/25 (samples from 9785-ME-0003, ) (3 4 per time point) Feeding Condition Not fasted Vehicle/Formulation /Solution Method of Administration Oral gavage Dose (mg/kg) 30 Radionuclide 14 C- Specific Activity 57.6 mci/mmol Analyte and metabolites Assay HPLC and Solid scintillation counting Concentration of Radioactivity as 14 C- or Metabolites Pooled Plasma Samples Intact Male Rats (Phase 1, Group 1, n = 21, 3 per time point) Collection Time (h) Peak Number Tentative Assignment Retention Time (min) Plasma Concentration (ng eq/g) 4 M ND ND ND M M ND ND 14 M M ND ND ND ng eq/g in sample Table continued on next page 79

119 ラットに 14 C-を単回経口投与したときの血漿, 尿, 胆汁及び糞中代謝物プロファイル ( 続き ) Pooled Urine Samples Intact Male Rats (Phase 1, Group 3, n = 4) Collection Interval (h) Peak Tentative Retention Time Percent of Radioactive Dose Number Assignment (min) Total 4 M M Percent of dose in sample Pooled Bile Samples Bile Duct-Cannulated Male Rats (Phase 1, Group 4, n = 3) Collection Interval (h) Peak Tentative Retention Time Number Assignment (min) Percent of Radioactivity Injected (% of Run) ND ND M ND ND M NA ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND M ND ND ND M ND ND ND ND ND Total % radioactivity in sample Table continued on next page 80

120 ラットに 14 C-を単回経口投与したときの血漿, 尿, 胆汁及び糞中代謝物プロファイル ( 続き ) Pooled Bile Samples Bile Duct-Cannulated Male Rats (Phase 1, Group 4, n = 3) a Collection Interval (h) Peak Tentative Retention Time Percent of Radioactive Dose Number Assignment (min) Total ND ND M ND ND M ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND M ND ND ND M ND ND ND ND ND Percent of dose in sample Table continued on next page 81

121 ラットに 14 C- を単回経口投与したときの血漿, 尿, 胆汁及び糞中代謝物プロファイル ( 続き ) Pooled Bile Pellet Extract Samples Bile Duct-Cannulated Male Rats (Phase 1, Group 4, n = 3) a Collection Interval (h) Peak Tentative Retention Number Assignment Time (min) Percent of Radioactivity Injected (% of Run) M M ND 1.13 Total % radioactivity in sample Peak Tentative Retention Percent of Radioactive Dose Number Assignment Time (min) Total M M ND Percent of dose in sample Table continued on next page 82

122 ラットに 14 C-を単回経口投与したときの血漿, 尿, 胆汁及び糞中代謝物プロファイル ( 続き ) Pooled Feces Samples Intact Male Rats (Phase 1, Group 3, n = 4) Collection Interval (h) Peak Tentative Retention Time Percent of Radioactive Dose Number Assignment (min) Total ND ND M M M ND ND M Percent of dose in sample a Total values from bile and bile pellet extracts from bile samples collected from 0 to 72 hours postdose were 33.8% and 4.71% of radioactive dose for M1 and M5, respectively. Note: All retention times are reported to two decimal places. --: No tentative assignment; HPLC: High performance liquid chromatography; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; M3: MDPC0003; M4: MDPC0004; M5:MDV3105; M6: MDV3106; NA: Not applicable; ND: Peak not detected or below established limit of quantitation (1% of run) 83

123 イヌに 14 C- を単回経口投与したときの血漿, 尿, 胆汁及び糞中代謝物プロファイル 被験物質 : Study Number, CTD No ME-0006, Species Dog/Beagle Gender (M/F) / Number of Animals M/6 (samples from 9785-ME-0002, ) (3 per group) Feeding Condition Not fasted Vehicle/Formulation /Solution Method of Administration Oral, capsules Dose (mg/kg) 20 Radionuclide 14 C- Specific Activity 57.6 mci/mmol Analyte and metabolites Assay HPLC and Solid scintillation counting Pooled Plasma Samples Intact Male Dogs (Group 1, n = 3) Collection Time (h) Peak Tentative Retention Time Number Assignment (min) Plasma Concentration of Radioactivity (ng eq/g) 8 M M ND M M ND ng eq/g in Sample Pooled Urine Samples Intact Male Dogs (Group 1, n = 3) a Collection Interval (h) Percent of Radioactivity Injected (% of Run) ND ND ND ND ND ND ND ND ND 4 M NA 8 M Total % Radioactivity in Sample Table continued on next page 84

124 イヌに 14 C-を単回経口投与したときの血漿, 尿, 胆汁及び糞中代謝物プロファイル ( 続き ) Pooled Urine Samples Intact Male Dogs (Group 1, n = 3) a Collection Interval (h) Peak Tentative Retention Time Percent of Radioactive dose Number Assignment (min) Total ND ND ND ND ND ND ND ND ND M M Percent of Dose in Sample Pooled Urine Pellet Extract Samples Intact Male Dogs (Group 1, n = 3) a Collection Interval (h) Peak Tentative Retention Number Assignment Time (min) Percent of Radioactivity Injected (% of Run) 4 M ND ND ND ND M NA Total % Radioactivity in Sample Peak Tentative Retention Number Assignment Time (min) Percent of Radioactive Dose 4 M ND ND ND ND M Percent of Dose in Sample Pooled Bile Samples Bile Duct-Cannulated Male Dogs (Group 2, n = 3) Collection Interval (h) Peak Tentative Retention Time NA Percent of Radioactive Dose Number Assignment (min) 4 M ND ND ND M M ND ND ND ND ND ND Percent of Dose in Sample Table continued on next page 85

125 イヌに 14 C-を単回経口投与したときの血漿, 尿, 胆汁及び糞中代謝物プロファイル ( 続き ) Pooled Feces Samples Intact Male Dogs (Group 1, n = 3) Collection Interval (h) Peak Tentative Retention Time Percent of Radioactive Dose Number Assignment (min) Total ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND ND M ND ND M ND ND ND ND M ND ND Percent of Dose in Sample a Total values from urine and urine pellet extracts from urine samples collected from 0 to 216 hours postdose were 58.8% and 0.808% of radioactive dose for M1 and M5, respectively. Note: All retention times are reported to two decimal places. --: No tentative assignment; HPLC: High performance liquid chromatography; M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; M3: MDPC0003; M4: MDPC0004; M5: MDV3105; M6: MDV3106; NA: Not applicable; ND: Peak not detected or below established limit of quantitation (1% of run) 86

126 薬物動態試験 : 代謝 :In vitro 付録に記載されている 87

127 薬物動態試験 : 推定代謝経路 ラットに 14 C- を単回経口投与したときの血漿, 尿, 胆汁及び糞中代謝物構造同定及び推定 被験物質 : Study Number, CTD No ME-0015, , 9785-ME-0034, Species Rat/Sprague-Dawley Gender (M/F) / Number of Animals M/10 (Samples from 9785-ME-0003, ) (3 4 per time point) Feeding Condition Not fasted Vehicle/Formulation /Solution Method of Administration Oral gavage Dose (mg/kg) 30 Radionuclide 14 C- Specific Activity 57.6 mci/mmol Analyte and metabolites Assay LC-MS Matrix Plasma Urine Feces Bile Sampling Time 24h postdose 0 8h postdose 0 24h postdose 0 8h and 48 72h postdose Table continued on next page LC-MS: liquid chromatography- mass spectrometry 88

128 ラットに 14 C- を単回経口投与したときの血漿, 尿, 胆汁及び糞中代謝物構造同定及び推定 ( 続き ) Proposed Biotransformation Pathways in Rats M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; M3: MDPC0003; M4: MDPC0004; M5: MDV3105; M6: MDV3106; M11: MDPC197; M12: MDPC198; M13: MDPC200 89

129 イヌに 14 C- を単回経口投与したときの血漿, 尿及び胆汁中代謝物構造同定及び推定 被験物質 : Study Number, CTD No ME-0014, , 9785-ME-0034, Species Dog/Beagle Gender (M/F) / Number of Animals M/6 (samples from 9785-ME-0002, ) Feeding Condition Not fasted Vehicle/Formulation /Solution Method of Administration Oral, capsules Dose (mg/kg) 20 Radionuclide 14 C- Specific Activity 57.6 mci/mmol Analyte and metabolites Assay LC-MS Matrix Plasma Urine Bile Sampling Time 4h postdose 0 8h postdose 0 8h postdose Table continued on next page LC-MS: liquid chromatography-mass spectrometry 90

130 イヌに 14 C- を単回経口投与したときの血漿, 尿及び胆汁中代謝物構造同定及び推定 ( 続き ) Proposed Biotransformation Pathways in Dogs M1: MDPC0001; M2: MDPC0002; M4: MDPC0004; M5: MDV3105; M6: MDV3106; M11: MDPC197 91

131 薬物動態試験 : 薬物代謝酵素の誘導 / 阻害 非臨床において該当する試験はない ヒトの生体試料を用いた試験の成績は 付録に記載されている 92

132 薬物動態試験 : 排泄 ラットに 14 C- を単回経口投与したときの尿及び糞中放射能排泄 被験物質 : Study Number, CTD No ME-0003, Species Rat/Sprague-Dawley Gender (M/F) / Number of Animals M/4 Feeding Condition Not fasted Vehicle/Formulation /Solution Method of Administration Oral gavage Dose (mg/kg) 30 Radionuclide 14 C- Specific Activity 57.6 mci/mmol Analyte/Assay Total radioactivity ( 14 C)/Liquid scintillation counting Excretion Route Urine Feces Other a Total Time Interval (h) Mean (SD) Percent of Radioactive Dose (2.70) NA NA 5.12 (2.70) (4.35) 22.2 (4.84) 1.46 (0.99) 55.0 (3.58) (6.65) 44.2 (6.16) 1.87 (0.99) 87.4 (1.68) (6.99) 48.3 (6.39) 2.02 (1.05) 93.8 (1.08) (7.04) 49.2 (6.49) 2.06 (1.05) 95.2 (0.79) (7.04) 49.5 (6.50) 2.10 (1.06) 95.6 (0.71) (7.03) 49.7 (6.54) 2.13 (1.07) 95.9 (0.66) (7.03) 49.8 (6.56) 2.87 (1.91) 97.2 (0.41) a Sum of cage rinse, cage wash, and cage wipe, as applicable. Note: The dose was approximately 4 MBq/kg (108 Ci/kg). In the carcass, 0.39% (0.05%) of the radioactive dose was detected at 168 hours. NA: not applicable 93

133 イヌに 14 C- を単回経口投与したときの尿及び糞中放射能排泄 被験物質 : Study Number, CTD No ME-0002, Species Dog/Beagle Gender (M/F) / Number of Animals M/3 Feeding Condition Not fasted Vehicle/Formulation /Solution Method of Administration Oral, capsules Dose (mg/kg) 20 Radionuclide 14 C- Specific Activity 57.6 mci/mmol Analyte/Assay Total radioactivity ( 14 C)/Liquid scintillation counting Excretion Route Urine Feces Other a Total Time Interval (h) Mean (SD) Percent of Radioactive Dose (0.84) NA NA 1.67 (0.84) (2.01) 9.07 (5.28) 0.97 (0.14) 20.4 (3.41) (6.36) 14.0 (4.86) 1.89 (1.04) 43.6 (2.95) (7.28) 16.9 (5.02) 3.33 (1.17) 58.8 (4.58) (7.98) 18.7 (4.47) 4.05 (1.45) 68.8 (5.17) (8.07) 19.9 (4.42) 4.83 (1.73) 76.4 (5.14) (7.80) 20.6 (4.45) 5.35 (1.79) 81.0 (4.57) (7.69) 21.1 (4.47) 6.32 (1.34) 85.0 (3.92) (7.26) 21.4 (4.59) 6.83 (1.37) 87.2 (3.62) (6.97) 21.7 (4.62) 7.07 (1.35) 88.8 (3.02) (6.81) 21.9 (4.65) 7.27 (1.36) 89.9 (2.52) (6.69) 22.0 (4.67) 7.39 (1.38) 90.6 (2.30) (6.65) 22.1 (4.69) 7.47 (1.36) 91.0 (2.12) (6.58) 22.1 (4.70) 7.53 (1.36) 91.3 (1.99) (6.54) 22.2 (4.71) 7.58 (1.38) 91.5 (1.92) Table continued on next page 94

134 イヌに 14 C-を単回経口投与したときの尿及び糞中放射能排泄 ( 続き ) Excretion Route Urine Feces Other a Total Time Interval (h) Mean (SD) Percent of Radioactive Dose (6.51) 22.2 (4.72) 7.62 (1.39) 91.7 (1.87) (6.50) 22.2 (4.73) 7.67 (1.40) 91.8 (1.82) (6.49) 22.2 (4.73) 7.69 (1.40) 91.8 (1.80) (6.48) 22.2 (4.74) 8.08 (1.42) 92.3 (1.74) (6.47) 22.3 (4.74) 8.08 (1.42) 92.3 (1.73) (6.47) 22.3 (4.74) 8.08 (1.42) 92.3 (1.72) (6.47) 22.3 (4.74) 8.09 (1.43) 92.3 (1.71) a Sum of cage rinse, cage wash, cage wipe, and cage debris, as applicable. NA: not applicable 95

135 薬物動態試験 : 排泄 胆汁中 胆管にカニューレを挿入したラットに 14 C- を単回経口投与したときの胆汁, 尿及び糞中放射能排泄 被験物質 : Study Number, CTD No ME-0003, Species Rat/Sprague-Dawley Gender (M/F) / Number of Animals/Special Features M/3/ Bile duct-cannulated Feeding Condition Not fasted Vehicle/Formulation /Solution Method of Administration Oral gavage Dose (mg/kg) 30 a Radionuclide 14 C- Specific Activity 57.6 mci/mmol Analyte/Assay Total radioactivity ( 14 C)/Liquid scintillation counting Excretion Route Urine Feces Bile Other b Bile + Urine Total Time Interval (h) Mean (SD) c Percent of Radioactive Dose (1.12) NA 6.70 (2.06) NA 11.7 (1.09) 11.7 (1.09) (4.21) 4.52 (1.26) 32.1 (8.50) 1.09 (0.87) 55.6 (4.30) 61.2 (2.67) (8.01) 7.60 (1.68) 47.4 (11.3) 1.53 (1.23) 81.4 (3.35) 90.5 (0.85) (8.48) 8.23 (1.81) 49.8 (11.3) 1.70 (1.31) 85.8 (2.84) 95.7 (0.25) (8.61) 8.32 (1.84) 50.3 (11.3) 1.72 (1.31) 86.6 (2.65) 96.7 (0.24) (8.68) 8.35 (1.85) 50.4 (11.3) 1.75 (1.33) 87.0 (2.58) 97.1 (0.29) (8.71) 8.37 (1.85) 50.5 (11.2) 1.78 (1.35) 87.1 (2.54) 97.3 (0.37) c 36.6 (8.72) 8.39 (1.86) 50.6 (11.2) 2.14 (1.54) 87.2 (2.53) 98.0 (0.57) a Nominal dose; actual volume of dose formulation administered to each animal was calculated based on body weight. b Sum of cage rinse, cage wash, cage wipe, bile cannula, and jacket rinse, as applicable. c In the carcass, 0.28% (0.01%) of the radioactive dose was detected at 168 hours. Note: The dose was approximately 4 MBq/kg (108 Ci/kg). NA: not applicable 96

136 ラットにおける腸肝循環 被験物質 : Study Number, CTD No ME-0003, Species Rat/Sprague-Dawley Gender (M/F) / Number of Animals/Special Features M/4/Bile duct-cannulated Feeding Condition Not fasted Vehicle/Formulation/Amount Bile a /0.5 ml[0.391 (0.006) Ci]/animal Method of Administration Intraduodenal Radionuclide 14 C- Specific Activity 57.6 mci/mmol Analyte/Assay Total radioactivity ( 14 C)/Liquid scintillation counting Excretion Route Urine Feces Bile Other b Bile + Urine Total Time Interval (h) Mean (SD) Percent of Radioactive Dose (5.88) NA 36.6 (3.85) NA 54.6 (2.91) 54.6 (2.91) (7.76) 16.3 (6.88) 46.2 (6.82) 0.53 (0.39) 73.5 (2.00) 90.3 (5.69) (7.80) 16.5 (6.42) 46.2 (6.82) 0.57 (0.47) 74.1 (2.06) 91.2 (5.13) (7.80) 16.5 (6.42) 46.2 (6.82) 0.57 (0.47) 74.1 (2.06) 91.2 (5.13) (7.80) 16.5 (6.42) 46.2 (6.82) 0.57 (0.47) 74.1 (2.06) 91.2 (5.13) (7.80) 16.5 (6.42) 46.2 (6.82) 0.57 (0.47) 74.1 (2.06) 91.2 (5.13) (7.80) 16.5 (6.42) 46.2 (6.82) 0.57 (0.47) 74.1 (2.06) 91.2 (5.13) c 27.9 (7.80) 16.5 (6.42) 46.2 (6.82) 0.57 (0.47) 74.1 (2.06) 91.2 (5.13) a Pooled bile from rats that had received a single 30 mg/kg dose of 14 C- by oral gavage. The radioactive dose was expressed as mean (SD). b Sum of cage rinse, cage wash, cage wipe, bile cannula, and jacket rinse, as applicable. c The radioactive concentrations in all samples collected at 172 hours postdose were below the limit of quantitation. NA: not applicable 97

137 胆管にカニューレを挿入したイヌに 14 C- を単回経口投与したときの胆汁, 尿及び糞中放射能排泄 被験物質 : Study Number, CTD No ME-0002, Species Dog/Beagle Gender (M/F) / Number of Animals/Special Features M/3/ Bile duct-cannulated Feeding Condition Not fasted Vehicle/Formulation /Solution Method of Administration Oral, capsules Dose (mg/kg) 20 a Radionuclide 14 C- Specific Activity 57.6 mci/mmol Analyte/Assay Total radioactivity ( 14 C)/Liquid scintillation counting Excretion Route Urine Feces Bile Other b Bile + Urine Total Time Interval (h) Mean (SD) c Percent of Radioactive Dose (1.04) NA 3.73 (1.12) NA 6.14 (2.14) 6.14 (2.14) (1.48) 16.0 (4.20) 15.2 (1.38) 1.20 (0.99) 22.1 (2.02) 39.3 (4.35) (1.28) 20.7 (2.02) 31.4 (1.68) 1.96 (1.79) 45.0 (2.22) 67.7 (1.13) (2.72) 22.2 (1.41) 40.4 (1.18) 3.29 (3.04) 56.7 (2.64) 82.2 (4.16) (3.45) 22.8 (1.41) 44.4 (1.52) 3.73 (2.86) 62.8 (2.90) 89.3 (4.30) (3.93) 23.1 (1.49) 46.4 (1.86) 3.92 (2.92) 66.0 (2.72) 93.1 (4.17) (3.84) 23.3 (1.50) 47.4 (2.01) 4.03 (2.93) 67.5 (2.33) 94.8 (3.76) c 20.4 (3.91) 23.3 (1.52) 47.9 (2.11) 4.90 (2.76) 68.3 (2.25) 96.5 (3.51) a Nominal dose; actual volume of dose formulation administered to each animal was calculated based on body weight. b Sum of cage rinse, cage wash, cage wipe, cage debris, bile cannula, and jacket rinse, as applicable. c Urine and bile collections for Animal No. H05554 continued until approximately 173 hours postdose, and the cumulative values at 168 hours include values from these additional samples. NA: not applicable 98

138 薬物動態試験 : 薬物相互作用 非臨床において該当する試験はない ヒトの生体試料を用いた試験の成績は 付録に記載されている 99

139 薬物動態試験 : その他 該当なし 100