目次 目次...2 略号一覧 毒性試験の概要文 まとめ 単回投与毒性試験 マウス単回経口投与毒性試験 (GLP 適用 ) ラット単回経口投与毒性試験 (GLP 適用 )..

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1 オングリザ錠 2.5 mg オングリザ錠 5 mg 医薬品製造販売承認申請書添付資料第 2 部 ( モジュール 2):CTD の概要 ( サマリー ) 毒性試験の概要文 大塚製薬株式会社 1

2 目次 目次...2 略号一覧 毒性試験の概要文 まとめ 単回投与毒性試験 マウス単回経口投与毒性試験 (GLP 適用 ) ラット単回経口投与毒性試験 (GLP 適用 ) サル単回投与用量設定毒性試験 (GLP 非適用 ) サル単回投与毒性試験 (GLP 適用 ) 反復投与毒性試験 ラット反復経口投与毒性試験 (GLP 適用, 一部非適用 ) イヌ反復経口投与毒性試験 (GLP 適用, 一部非適用 ) カニクイザル反復経口投与毒性試験 (GLP 適用 ) 遺伝毒性試験 In vitro 試験 (GLP 適用, 一部非適用 ) In vivo 試験 (GLP 適用 ) がん原性試験 マウス 3 ヵ月経口投与用量設定試験 (GLP 適用 ) マウス 104 週間反復強制経口投与がん原性試験 (GLP 適用 ) ラット 3 ヵ月経口投与用量設定試験 (GLP 適用 ) ラット 104 週間反復強制経口投与がん原性試験 (GLP 適用 ) 生殖発生毒性試験 ラット受胎能及び初期胚発生に関する試験 (GLP 適用 ) 胚及び胎児発生に関する試験 (GLP 適用, 一部非適用 ) ラット出生前及び出生後発生に関する試験 (GLP 適用 ) 局所刺激性試験 ウシ角膜の混濁及び透過性試験 (GLP 適用 ) ウサギ皮膚刺激性試験 (GLP 適用 ) その他の毒性試験 抗原性試験 (GLP 適用 ) 免疫毒性試験 (GLP 適用, 一部非適用 ) 探索的中枢神経毒性試験 (GLP 適用, 一部非適用 ) 毒性試験の概要文 2

3 カニクイザル探索毒性試験 (GLP 非適用 ) BMS 分析ブリッジング試験 (GLP 適用 ) 不純物 / 分解物に関する試験 (GLP 適用 ) その他の試験 (GLP 適用, 一部非適用 ) 考察及び結論 図表 毒性試験の概要文 3

4 略号一覧 略号 省略していない表現 APD50 action potential duration at 50% depolarization (50% 再分極時活動電位持続時間 ) APD90 action potential duration at 90% repolarization (90% 再分極時活動電位持続時間 ) AUC area under the concentration versus time curve ( 濃度時間曲線下面積 ) AUEC area under the effect-time curve ( 効果 - 時間曲線下面積 ) BMS Bristol-Myers Squibb CD Caesarean derived ( 帝王切開由来の ) Crl:CD-1 Charles River: CD-1 マウス Crl:SD Charles River: Sprague Dawley ラット C max maximum concentration ( 最高濃度 ) CNS central nervous system ( 中枢神経系 ) CN cyanide ( シアン化物 ) DMSO dimethyl sulfoxide DNA deoxyribonucleic acid ( デオキシリボ核酸 ) DPP dipeptidyl peptidase ECG electrocardiogram ( 心電図 ) E. coli Escherichia coli ( 大腸菌 ) E max maximum effect ( 最大効果 ) E min minimum effect ( 最小効果 ) F female ( 雌 ) F0 maternal generation ( 母世代 ) F1 first generation ( 第一世代 ) F2 second generation ( 第二世代 ) F344 Fischer 344 ラット F344 WT Fischer 344 野生型ラット (DPP-4 酵素活性を持つラット, 雌での活性は 約 13.3~20.6 U/L) F344 DPP-4-def Fischer 344 DPP-4- 欠損型ラット (DPP-4 酵素活性が低下ないし欠損した ラット, 雌での活性は約 2.5~7.6 U/L) FDA Food and Drug Administration ( 米国食品医薬品局 ) GI gastrointestinal ( 胃腸の ) GD gestational day ( 妊娠日数 ) g Gram ( グラム ) GLP Good Laboratory Practice ( 医薬品安全性試験実施基準 ) GLP-1 glucagon-like peptide-1 ( グルカゴン様ペプチド-1) GIP glucose-dependent insulinotropic polypeptide ( グルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド ) herg human ether-a-go-go related gene h hour ( 時間 ) ICH International Conference on Harmonization ( 日米 EU 医薬品規制整合化国際会議 ) IC50 concentration that causes 50% inhibition (50% の抑制をもたらす濃度 ) IgG immunoglobulin G ( 免疫グロブリン G) 毒性試験の概要文 4

5 IgM immunoglobulin M ( 免疫グロブリン M) KLH keyhole limpet hemocyanin ( スカシガイヘモシアニン ) LD lactation day ( 授乳日数 ) LFB Luxol fast blue ( ルクソール ファスト青染色 ) LLOQ lower limits of quantitation ( 定量下限値 ) LOAEL low-observed-adverse-effect level ( 毒性発現最低量 ) MRI magnetic resonance imaging ( 磁気共鳴映像法 ) M male ( 雄 ) μm micromolar ( マイクロモル ) MN-PCE micronucleated polychromatic erythrocytes ( 小核含有多染性赤血球 ) N/A not applicable ( 該当なし ) ng nanogram ( ナノグラム ) No. number ( 番号 ) NOAEL no-observed-adverse-effect level ( 無毒性量 ) NPY neuropeptide Y ( 神経ペプチド Y) NZW New Zealand White PAS periodic acid Schiff ( 過ヨウ素酸シッフ反応染色 ) PCEs polychromatic erythrocytes ( 多染性赤血球 ) PR PR 時間 ( 心電図の P 波の始まりから Q 波の始まりまでの時間 ) QRS QRS 幅 ( 心電図の Q 波の始まりから S 波の終わりまでの時間 ) QT QT 時間 ( 心電図の QRS 群の始まりから T 波の終わりまでの時間 ) RHD recommended human dose ( 推奨臨床用量 ) Sitagliptin シタグリプチン (Januvia, BMS ) S9 9000g 上清分画 ( チトクローム P-450 代謝酵素を高濃度含有する肝臓分画 ) SCN thiocyanate ( チオシアネート ) S. typhimurium Salmonella typhimurium ( ネズミチフス菌 ) SD Sprague Dawley ラット UDS unscheduled DNA synthesis ( 不定期 DNA 合成 ) Vildagliptin ビルダグリプチン (Galvus, BMS ) WT wild-type ( 野生型 ) 毒性試験の概要文 5

6 名称 ( 由来 ) 構造式 サキサグリプチン (BMS ) HO H 2 N N O CN OH BMS [ 代謝物 ] HO H 2 N O N CN 類縁物質 A* [ 不純物及び分解物 ] 類縁物質 E* [ 不純物 ] 類縁物質 C* [ 不純物 ] 類縁物質 D* [ 不純物 ] 毒性試験の概要文 6 *: 新薬承認情報提供時に置き換えた

7 2.6.6 毒性試験の概要文 まとめサキサグリプチン (BMS ) の非臨床安全性を, マウス, ラット, イヌ, カニクイザルを用いた単回及び反復経口投与毒性試験, 一連の in vitro 及び in vivo 遺伝毒性試験, マウス及びラットを用いたがん原性試験, ラット及びウサギを用いた生殖及び発生毒性試験,in vitro 及び in vivo ( マウス及びウサギ ) での局所刺激性試験, ラットを用いた免疫毒性試験, によって評価した 更に, 雄ラットにみられた神経変性脳病変の発生機序の検討, サルにみられた皮膚及びその他の組織における変化 ( 例えば, 単核細胞浸潤 ) の更なる特徴付けのために, 探索的試験も実施した 主要な反復投与毒性, 遺伝毒性試験, 生殖毒性及びがん原性試験の用量選択を目的とした用量設定試験を適切な動物種を用いて実施した 更に, サキサグリプチンの主要活性代謝物 BMS の毒性を明らかにするための試験, サキサグリプチン原薬 / 製剤中の不純物 / 分解物の濃度を規定するための試験も実施した BMS の初期の定量は血漿中濃度を過大評価していた ( 詳細は第 項 ) ため,BMS の暴露評価に与える影響を確認するブリッジングトキシコキネティクス試験を実施した 2 種の測定方法間でその値に違い (43% 以下 ) がみられたが, 重要な試験における無毒性量において BMS の安全域は適切に担保され, ヒトにおける安全性評価に影響は与えなかった BMS の安全域は初期データを用いて示した 暴露の開き ( 倍率 ) はサキサグリプチンの臨床推奨用量 5 mg での定常 AUC 値, サキサグリプチンは 78 ng h/ml, BMS は 214 ng h/ml を基に計算した 非臨床段階での開発中,3 種のサキサグリプチン ( トリフルオロ酢酸塩, 安息香酸塩, フリー体 ) を使用したため, 概要文及び概要表にはそれを特定できる記載を行った すべての主要な非臨床毒性試験は GLP を遵守し,ICH ガイドラインに従って実施した 血漿中 DPP-4 阻害活性 ( 薬力学的エンドポイント ) をいくつかの毒性試験の一部として評価した ラット及びイヌにおいて, 最大血漿中 DPP-4 阻害活性は約 95% であったため, ラット及びイヌの記載時には薬力学的エンドポイントを DPP-4 阻害とした しかしながら, サルにおいては最大血漿中 DPP-4 阻害活性は 70%~80% でプラトーに達した ラット及びイヌとは異なり, サルの血漿中には ex vivo の酵素アッセイに使用した基質を切断する非 DPP-4 酵素を含むことが推定された したがって, サルにおいては薬力学的エンドポイントを DPP 阻害とした 単回経口投与毒性試験において, マウス及びラットでは 2000 mg/kg まで, カニクイザルでは 25 mg/kg まで, サキサグリプチンは臨床的に著明な毒性をもたらさなかった げっ歯類においては, 4000 mg/kg で体重増加量及び活動性の一過性低下及び / 又は死亡がみられた サルでは 50 mg/kg で明らかな毒性と死亡がみられた サキサグリプチンのラットにおける反復経口投与毒性は以下の 3 本の主要な試験において評価した :2,20,200 mg/kg/ 日の用量での 2 週間試験,300,600,1200 mg/kg/ 日の用量での 3 ヵ月がん原性用量設定試験,2,20,100 mg/kg/ 日の用量での 6 ヵ月試験 (3 ヵ月での中間評価, 投与後 1 ヵ月の回復期間を含む ) 更に, ラットにおける 104 週間がん原性試験 (25,75,150,300 mg/kg/ 日 ) で得られた薬物関連の非腫瘍性所見も, サキサグリプチンの慢性毒性評価の一部として含めた 3 ヵ月試験では 300 mg/kg/ 日まで,6 ヵ月試験では 100 mg/kg/ 日まで, サキサグリプチンは臨 毒性試験の概要文 : まとめ 7

8 床的に著明な毒性をもたらさなかった 予期したとおり, サキサグリプチンの薬理学的標的である血漿中 DPP-4 阻害が,2 週目及び 6 ヵ月目の測定の 2 mg/kg/ 日以上の用量でみられた 試験全般において, サキサグリプチン及び BMS の暴露は用量の増加に比例して増加し, 反復投与による増加はみられず, 雌の暴露は雄よりも高く,BMS の暴露はサキサグリプチンよりも低い又は同等 (0.1~1 倍 ) であった ラットにおいて 20 mg/kg/ 日以上の用量で薬物に関連した一連の臨床病理学的変化がみられた みられた所見はごく軽度から軽度な血液学的変化であり, それは 200 mg/kg/ 日以上での血小板数減少,300 mg/kg/ 日以上でのヘモグロビン, 平均ヘモグロビン量, 平均赤血球容積の低下,600 mg/kg/ 日以上での網赤血球比の増加, 雄のみでの白血球数 ( 好中球及びリンパ球 ) 増加であった ごく軽度から軽度な血清生化学的変化もみられ, それは 20 mg/kg/ 日以上でのコレステロール及びカリウムの減少,200 mg/kg/ 日以上でのアルカリフォスファターゼの増加,600 mg/kg/ 日以上での血清アルブミン低下 ( 雌のみ ),1200 mg/kg/ 日での総蛋白質の低下 ( 雄のみ ) 及びトリグリセライドの増加であった 2 週後, 免疫系への影響として,200 mg/kg/ 日で血清 IgM 及び / 又は IgG の増加 ( 雌では 20 mg/kg/ 日でも ), 脾臓の CD3+ T リンパ球及び CD45RA+ B リンパ球の増加がみられた ごく軽度から軽度な病理学的所見も 20 mg/kg/ 日以上でみられ, それは, リンパ性過形成を伴う脾臓重量の増加, 肺の組織球症, 雌における眼付属腺への単核細胞浸潤 (300 mg/kg/ 日以上 ), ストレスに関連した二次的変化としての胸腺リンパ性枯渇 (300 mg/kg/ 日以上 ) 及び胃粘膜糜爛 (1200 mg/kg/ 日のみ ) であった 慢性試験 (3~24 ヵ月 ) において,150 mg/kg/ 日以上の用量を投与された雄ラットには明らかな毒性, シアンの毒性に感受性のある中枢神経系領域である尾状被殻及び脳梁における変性 / 壊死性脳病変がみられたが, 雌ラットにはみられなかった 6 ヵ月試験の 1 ヵ月の回復期間後 (100 mg/kg/ 日以下 ) には, 臨床的及び病理学的変化はみられなかった 6 ヵ月投与後の無毒性量は 20 mg/kg/ 日 ( サキサグリプチンの AUC は 2796 ng h/ml 以上 ) であった 20 mg/kg/ 日におけるサキサグリプチン及び代謝物の全身暴露 AUC は, 臨床推奨用量での AUC と比べてそれぞれ 36 倍及び 6 倍であった サキサグリプチンのイヌにおける反復経口投与毒性は以下の 3 本の主要な試験において評価した :1,5,25 mg/kg/ 日の用量での 2 週間試験,0.2,1,5 mg/kg/ 日の用量での 3 ヵ月試験 ( 投与後 1 ヵ月の回復期間を含む ),1,5,10 mg/kg/ 日の用量での 12 ヵ月試験 (6 ヵ月での中間評価を含む ) 薬理学的作用である血漿中 DPP-4 阻害 (E max において 88% 以上 ) が 0.2 mg/kg/ 日以上の用量でみられた 試験全般において, サキサグリプチン及び代謝物の全身暴露は用量の増加と共に増加し, 明らかな性差も無く, サキサグリプチンと代謝物の暴露は全般的にほぼ同様であった 12 ヵ月試験の経過中にサキサグリプチン及び BMS の全身暴露 (AUC) は 40%~70% 低下した 1 mg/kg/ 日 (286 ng h/ml 以上 ) ではサキサグリプチンは著明な毒性をもたらさなかったが, 高い用量においては胃腸毒性を主とする影響がみられた 25 mg/kg/ 日 (50803 ng h/ml) の用量では明らかな毒性が発現し, 腸管の機能不全 ( 下痢, 嘔吐 ) に関連した二次的なごく軽度から軽度な血清蛋白及び電解質の低下を伴う腸疾患により,9 回投与後には衰弱した雄 1 例を安楽殺した 5 mg/kg/ 日以上では, 臨床症状として赤色軟便及び / 又は形を成さない / 粘液性便, 体重増加量 (25 mg/kg/ 日では体重の減少あり ) 及び摂餌量の用量依存的低下がみられた 全体的にごく軽度から軽度な臨床病理所見が, イヌのすべての試験の 5 mg/kg/ 日以上の用量でみられた その所見は,5 mg/kg/ 日以上における軽度から中等度の好酸球数増加,10 mg/kg/ 日以上における白血球数減少, 毒性試験の概要文 : まとめ 8

9 25 mg/kg/ 日における連銭形成 ( 積重なった赤血球と定義される ; 通常, ガンマグロブリン過剰血症と関連した血清学的状況において見られる, 雄ではグロブリンの増加が見られていた [ 下記参照 ]), であった ほとんどがごく軽度から軽度な血清生化学的及び尿検査所見も以下のようにみられた :5 mg/kg/ 日以上の雄において血清アルブミン及びリンの低下,10 mg/kg/ 日以上で血清コレステロール及びトリグリセライドの増加並びに血清総蛋白及びカリウムの低下,25 mg/kg/ 日では尿蛋白の増加, 免疫学的エンドポイントとして,25 mg/kg/ 日の雄にグロブリン及び免疫グロブリンの増加がみられた 5 及び 10 mg/kg/ 日においてみられた薬物関連の形態学的変化は, 肝臓の中心静脈周囲のごく軽度な細胞浸潤 / 炎症で, 更に 12 ヵ月投与後にはごく軽度から軽度な肉球表皮の表層性糜爛 ( 肉球の亀裂に相当 ) であった 25 mg/kg/ 日では, ごく軽度から中等度の腸疾患, ストレスに関連した二次的な変化である軽度から中等度のリンパ性壊死及び / 又は多リンパ系組織の枯渇がみられた 2 週間及び 12 ヵ月試験においては回復性の検討を行っていないが,3 ヵ月試験の 5 mg/kg/ 日でみられたすべての変化には回復性があることが確認された 12 ヵ月投与後の無毒性量は 1 mg/kg/ 日であり, サキサグリプチン及び代謝物の AUC は臨床推奨用量での AUC のそれぞれ 4 倍及び 2 倍であった サキサグリプチンのカニクイザルにおける反復経口投与毒性は,0.03,0.3,3 mg/kg/ 日の用量での 3 ヵ月試験において特徴づけを行った 0.03 及び 0.3 mg/kg/ 日では薬物に関連した毒性変化はみられなかった 3 mg/kg/ 日において,14 匹中 4 匹の足及び / 又は尾に多病巣性皮膚病変 / 痂皮がみられた すべての用量で用量依存的血漿中 DPP 活性阻害がみられた (E max は 49~70%; カニクイザルにおいては 70~80% が最大 ) サキサグリプチン及び BMS の全身暴露は用量に関連し, 全般的に雌雄でほぼ同様であり,0.3 mg/kg/ 日以上では反復投与によるサキサグリプチン暴露の多少の増加 (2.8 倍まで ) がみられた ラット及びイヌとは対照的に,BMS の AUC はサキサグリプチンの AUC よりも 6.9 倍まで高かった 3 mg/kg/ 日でみられた薬物関連影響は, 皮膚病変, ごく軽度の多組織における単核細胞浸潤 ( 通常みられる背景的変化の悪化と考えられた ), ごく軽度な脾臓, 胸腺及び / 又は骨髄のリンパ性過形成であった 皮膚病変は投与期間中に回復がみられ, すべての所見は 3 ヵ月の回復期間で回復した 無毒性量の 0.3 mg/kg/ 日におけるサキサグリプチン及び代謝物の全身暴露 (AUC) は, 臨床推奨用量での AUC のそれぞれ 1~3 倍及び 2 倍であった サキサグリプチンの遺伝毒性は一連の in vitro 及び in vivo のアッセイで評価した In vitro アッセイでは S9 代謝活性化あり及びなしで細胞毒性用量又は 5000 μg/plate までの用量で実施した サキサグリプチンも BMS も細菌復帰突然変異試験 ( ネズミチフス菌及び大腸菌 ) において 5000 μg/plate の濃度まで遺伝毒性を示さなかった サキサグリプチンはヒトリンパ球を用いた in vitro 染色体異常試験の S9 なし条件において, 最高濃度の 1000 μg/ml において染色体異常を示した 対照的に,DNA 修復試験で 1500 mg/kg/ 日まで投与されたラット, 小核試験で 3 日間 1500 mg/kg/ 日投与されたラット, 又は in vivo/in vitro 染色体異常試験で 1 ヵ月間 500 mg/kg/ 日投与されたラットにおいて, 染色体異常も DNA 傷害性はみられなかった 1 ヵ月試験において,500 mg/kg/ 日での血漿 AUC 暴露量は臨床推奨用量での AUC との比較で未変化体は 1260 倍以上,BMS は 130 倍以上であった したがって, マウス及びラットの高い倍率での暴露においてもがん原性は認められなかったという結果も含めた, 科学的根拠の重要度 (weight of evidence) を考慮すれば, 毒性試験の概要文 : まとめ 9

10 サキサグリプチンに遺伝毒性は無いと考えられた サキサグリプチンのがん原性をマウス及びラットを用いた 104 週間経口投与がん原性試験で評価した マウスには 50,250,600 mg/kg/ 日の用量でサキサグリプチンを投与した サキサグリプチンはいずれの用量においてもマウスにがん原性を示さず, 非腫瘍性組織学的所見も見られなかった 生存率は雄の 250 mg/kg/ 日以上で低下し, 早期の終了となった (600 mg/kg/ 日群の雄は 90 週,250 mg/kg/ 日群の雄は 100 週 ) 雄マウスにおける早期死亡の原因は特定できなかったが, これらの群における生存期間と投与期間はがん原性を評価するのに適切と考えられた 最高用量におけるサキサグリプチン及び BMS の AUC は臨床推奨用量での AUC のそれぞれ 1210 倍及び 690 倍であった ラットの経口投与がん原性試験においては,25,75,150,300 mg/kg/ 日の用量でサキサグリプチンを投与した サキサグリプチンはいずれの用量においてもラットにがん原性を示さなかった 300 mg/kg/ 日群の雄において生存率が低下し, 投与第 68 週に投与を中止せざるを得なくなり, がん原性の評価から除外した 雄の対照群の生存率低下により, 雄のすべての投与群について第 99 週に終了した これらの群における生存期間及び投与期間はがん原性評価に適切であると考えられた 最高用量におけるサキサグリプチン及び主要代謝物の AUC は臨床推奨用量での AUC との比較で, 雄ではそれぞれ 370 倍及び 40 倍, 雌ではそれぞれ 2300 倍及び 130 倍であった 主な薬物関連の非腫瘍性所見は前述したとおり, 雄ラット特異的なシアン関連の神経変性脳病変であり, これが雄の 300 mg/kg/ 日群での死亡増加の原因と思われた 更に, 以前に実施した試験と一致して, 全般にごく軽度な単核細胞浸潤の発現頻度の増加が 75 mg/kg/ 日以上の投与群の肺 ( 肺組織球症 ), 膀胱, 眼付属腺 ( 雌 ), 肝臓 ( 雄 ), 精巣上体にみられた 重要なこととして, これらの所見のいずれもリンパ性増殖疾患, 腫瘍, 自己免疫に進行しなかった サキサグリプチンの生殖及び発生毒性について, ラットでは 900 mg/kg/ 日まで, ウサギでは 200 mg/kg/ 日までの用量で評価した ラットにおける受胎能及び初期胚発生試験 ( 雄は 100,200,400 mg/kg/ 日 ; 雌は 125,300,750 mg/kg/ 日 ) において, 雄では 100 mg/kg/ 日以上, 雌では 125 mg/kg/ 日以上の用量で臨床症状, 体重増加量の減少及び / 又は体重の減少がみられたが, 生殖機能への影響は雄では 400 mg/kg/ 日でのみ ( 受胎率低下 ), 雌では 300 及び 750 mg/kg/ 日でのみみられた ( 胚致死の増加, 更に 750 mg/kg/ 日では性周期の変化, 受胎率 黄体数 着床の低下 ) したがって, サキサグリプチンは明らかな毒性をもたらした用量でのみ生殖機能に影響を及ぼした ラットの生殖に対する無作用量 ( 雄は 200 mg/kg/ 日, 雌は 125 mg/kg/ 日 ) におけるサキサグリプチンの全身暴露 AUC は, 臨床推奨用量での AUC のそれぞれ 630 倍及び 800 倍 (BMS はそれぞれ 66 倍及び 47 倍 ) であった ラット (64,240,900 mg/kg/ 日 ) 及びウサギ (8,40,200 mg/kg/ 日 ) における胚 胎児発生試験において, いずれの投与量においても催奇形性は認められず, 更に, サキサグリプチン及び BMS の母動物の暴露 (AUC) が臨床推奨用量での AUC と比べてラットでは 300 倍及び 30 倍, ウサギでは 160 倍及び 224 倍であった投与量において, 胚 胎児の発生に有害な影響は見られなかった 奇形ではない発達の遅延として, ラットでは 240 及び 900 mg/kg/ 日 ( 臨床での AUC の 1560 倍以上 ) において胎児骨盤の骨化の軽度な減少,900 mg/kg/ 日では胎児体重の減少及び母動物の薬物関連毒性がみられた ウサギでは 200 mg/kg/ 日という母動物毒性のみられた用量 ( 臨床 毒性試験の概要文 : まとめ 10

11 での AUC の 1420 倍 ) においてのみ, 胚 胎児発生にサキサグリプチンの影響がみられ, それは舌骨 ( 翼の屈曲 ) 及び肋骨 ( 骨化部位数の増加 ) の軽度な変異のわずかな増加だけであった サキサグリプチンは 100 mg/kg/ 日以下の用量ではラットにおける出生前後発生に影響を及ぼさなかった 250 及び 500 mg/kg/ 日 ( 臨床用量での AUC の 1690 倍以上 ) の用量において, 母動物毒性 ( 体重増加量及び摂餌量の減少 ) 及び離乳前期間中の出生児体重の減少 ( 出生後 21 日目近くにピークを示した ) がみられた 離乳の 1~2 週後には, 出生児の体重増加量はすべての群で同様であった 出生児の無作用量 (100 mg/kg/ 日 ) における授乳中ラットのサキサグリプチン及び BMS の全身暴露 AUC は, 臨床用量での AUC のそれぞれ 490 倍及び 45 倍であった サキサグリプチンは正常ウサギ皮膚に対して刺激性を示さなかったが, 摘出したウシ角膜には軽度な刺激性を示し (20% w/v),25% までの濃度で実施したマウスの local lymph node assay において皮膚感作性の可能性が示された 免疫毒性をラットを用いて評価した サキサグリプチンの目的とする薬理作用は DPP-4/CD26 蛋白分解酵素活性の阻害を介したインクレチン ( 特に, グルカゴン様蛋白 [GLP-1] 及びグルコース依存性インスリン分泌刺激ポリペプチド [GIP]) 濃度の増加である しかしながら, DPP-4/CD26 は種々の機能を持ち, 受容体,T リンパ球共刺激蛋白でもある 種々の結合特性 特徴を持つ DPP-4 阻害剤の使用において, その作用の中にはリンパ球増殖の抑制という望ましくない活性を示すものもあることより,DPP-4/CD26 蛋白分解酵素活性の共刺激性 T リンパ球伝達系における in vivo での役割の検討が現在も行われている サキサグリプチンの反復投与試験において, 必ずしも一貫したものではなく, また, すべての動物種においてではないが, 免疫学的評価を組み込み, 免疫系に対する作用を観察した サキサグリプチン投与が T リンパ球の共刺激活性を抑制するか否かを評価するために, 抗原誘発及び分裂促進剤誘発のリンパ球増殖反応を以下の 2 試験で評価した 最初のラットを用いた 1 ヵ月試験では,keyhole limpet hemocyanin(klh) を抗原物質として, 10,50,200 mg/kg/ 日の用量のサキサグリプチンが T リンパ球依存性免疫反応を変化させるか否か評価した いずれの用量においても,KLH に対する T リンパ球依存性液性免疫反応に影響は無く, 更に脾臓の汎 T 細胞, ヘルパー T 細胞, 細胞毒性 T 細胞,B リンパ球の数にも影響はみられなかった したがって, サキサグリプチンは 200 mg/kg/ 日までの用量においてラットの T リンパ球依存性免疫反応に有害な作用を持たず, この用量におけるサキサグリプチンの全身暴露 AUC は臨床推奨用量での AUC の 335 倍に相当していた ( 同じ用量を用いて実施した 2 週間反復投与毒性試験から得られたデータの外挿 ) 1 第二の試験として, 野生型及び DPP-4 欠損の雌 F344 ラットを用い, いくつかの免疫学的評価項目に加えて, 分裂促進剤によるリンパ球の増殖反応を評価した この試験の当初の目的は, サキサグリプチンの目的とした薬理作用 (DPP-4/CD26 酵素活性の特異的阻害 ) と DPP-4/CD26 の非酵素的 / 受容体機能又は目的としない非 DPP-4/CD26 関連活性の潜在的な免疫系調節作用との関連性を更に評価することであった 試験は, 正常な血漿 DPP-4 酵素活性を示すラット (WT) と血漿 DPP-4 酵素活性が低下又は欠損したラット (DPP-4-def) にサキサグリプチンを投与し, 分裂促進剤刺激を受けたリンパ球の増殖反応を比較するように計画された しかしながら, 雌の F344 DPP-4-def ラットではすでに報告されていた血漿 DPP-4 活性値と一致した低値 ( 約 2.5~7.6 U/L) 毒性試験の概要文 : まとめ 11

12 であったが,WT では報告されていた値 ( 約 13.3~20.6 U/L) と一致せず, 両系統は同様の値を示したため, この試験の目的は達成できなかった この所見は, 雌の F344 WT 及び DPP-4-def ラットが正常な Charles River Sprague Dawley (Crl:SD) ラットと機能的に同様であったことを示していた T リンパ球分裂促進剤 ( コンカナバリン A) 又は T 及び B リンパ球分裂促進剤 (pokeweed) で刺激後の脾臓細胞反応又はサイトカインの放出に, 両系統の F344 ラット間に差はみられなかった 更に,Harlan Sprague Dawley 系ラットにおける他の反復投与試験と同様に,200 mg/kg/ 日以上の用量で脾臓重量の増加 (400 mg/kg/ 日でのみ ), リンパ節におけるリンパ性過形成を含む, 用量依存的なリンパ系の形態変化が, 評価に使用した F344 ラットの系統に関わらずみられた 更に, ごく軽度な脾臓における髄外造血 (DPP-4-def F344 ラットのみ ) 及びごく軽度から中等度な胸腺皮質性リンパ球枯渇に関連したストレス性胸腺重量低下も 400 mg/kg/ 日でみられたが, これらは非常に高い用量 ( サキサグリプチン及び BMS の AUC は臨床推奨用量での AUC のそれぞれ 2750 倍及び 360 倍 ) に限定された所見であり, 臨床との関連性はないものと考えられた 雄ラットでのみにみられた神経変性脳病変の可能性のある発生機序を解明するために探索試験を実施した 脳病変の特徴及び分布はシアン (CN) 中毒によるものと一致していたため, 急性ラットモデルの開発を含めた in vitro 及び in vivo 試験を実施し, 雄ラットの脳病変発生におけるシアンの役割を評価した 最初の試験では, サキサグリプチン及び BMS の脳内濃度は雌雄とも血漿中濃度に比べて低く, 性差もみられなかった 平行して実施したサキサグリプチンの生体内変換試験において, 雄ラット特異的な肝臓代謝酵素 (CYP2C11) が in vitro でサキサグリプチンからシアン (CN) を放出し, 同様にサキサグリプチンの経口投与後に血中にシアンが検出された 雄ラットにおけるシアン毒性の発生に関する CYP2C11 の in vivo での役割は, その後に実施した去勢 (CYP2C11 はアンドロゲンによって調整される ) 又は CYP2C11 抑制剤 ( シメチジン ) を用いた試験において確認された その結果は,CYP2C11 活性の低下をもたらしたいずれの条件においても, シアン関連性の急性毒性及び血中シアン濃度を十分に防止又は減少したことを示した In vivo でのシアンの放出が雄ラットに限定されていることを確認するために高用量 (2000 mg/kg/ 日以上 ) のサキサグリプチンを雌雄のマウスに投与したところ, いずれの性においても急性毒性はみられず, 血中にシアンは検出されなかった また, シアノ基を持つ代謝物 BMS を用いたラット試験において, サキサグリプチン投与後の脳病変が発生した時の暴露と同等の BMS 暴露においても急性毒性を示す臨床症状も脳病変も発生しないことが示された 最後に, 脳病変の発生における薬理学的機序の潜在的関与又は補助的な役割 { これには DPP-4 基質神経ペプチド Y(NPY) の潜在的役割を含む } を検討するために追加試験を実施した この神経ペプチドは中枢神経系において最も豊富に提示されており, その血管収縮機能によって脳病変の発生に寄与していたかも知れないので, 特別な懸念があった その結果はすべて陰性であり, サキサグリプチンによる DPP-4 阻害と雄ラット特異的脳病変の発生に関連は無いことが確認された 結論として, 雄ラット特異的神経変性脳病変は, 雄ラットにおける CYP2C11 によるサキサグリプチンの肝臓での生体内変換におけるシアンの放出によるものであった サキサグリプチンを投与したカニクイザルにおける皮膚病変及び単核細胞浸潤 / 炎症のさらなる特徴付けとその機序を探索するため, また, カニクイザルにおけるサキサグリプチンの毒性を他の 2 種類の DPP-4 阻害剤 ( ビルダグリプチン [Galvus ], シタグリプチン [Januvia ]) と比 毒性試験の概要文 : まとめ 12

13 較するため, 探索試験を実施した 最初の試験は,1~3 ヵ月経口投与試験として,2 mg/kg/ 日を 13 週間投与,10 又は 30/20 mg/kg/ 日 (30 mg/kg/ 日を 1 又は 2 回投与後に死亡がみられたため, この時点で投与量を 20 mg/kg/ 日に減少した ) を 4~6 週間投与した 30/20 mg/kg/ 日の雄 1 例に著明な血小板減少症 ( 前値の 6%) がみられたため, 第 29 日以後の投与は中止し, その 20 日後から 20 mg/kg/ 日で投与再開したが再発せず, 免疫系を介した機序によるものではないことが示された すべての用量において (AUC 暴露は 580 ng h/ml 以上 ), 潰瘍性皮膚病変, ごく軽度から中等度の多組織血管周囲性単核細胞浸潤 / 炎症, ごく軽度から軽度の脾臓及び骨髄のリンパ性過形成がみられた 微小血管の血管炎が皮膚, 尿生殖路, 胃腸管, 甲状腺, 骨格筋, 及び肺にみられた 免疫系を介しない多病巣性糸球体症 ( 腎臓の糸球体における非炎症性病変 ) が 10 及び 30/20 mg/kg/ 日群の各 1 例でみられた 免疫機能を評価するために計画された以下の項目の結果から, 免疫を介した機序によってこの変化が発生したという証拠はなかった : 末梢血球フェノタイピング, 血清免疫グロブリン, 抗核抗体, 抗赤血球抗体, 抗血小板抗体, 剖検, 組織病理, 免疫組織学, 電子顕微鏡 この試験において無作用量は推定できなかった 毒性発現最低用量の 2 mg/kg/ 日におけるサキサグリプチン及び BMS の AUC は臨床推奨用量での AUC の 7 倍 ~18 倍の範囲であった サキサグリプチンの毒性をビルダグリプチン及びシタグリプチンの毒性と比較する目的でサルを用いた 3 本の経口投与試験を追加実施した 薬物動態と薬力学特性 ( 血漿 DPP 阻害 ) を比較するために, サキサグリプチンは 0.1~10 mg/kg, ビルダグリプチンは 0.1~30 mg/kg, シタグリプチンは 0.3~40 mg/kg, の用量で単回経口投与試験を実施した すべての DPP-4 阻害剤において, その全身暴露に用量依存的な増加及び DPP 阻害がみられた 24 時間にわたる持続的最大血漿 DPP 阻害 (E max が E min に類似 ) は, サキサグリプチンでは 3 mg/kg/ 日 (785 ng h/ml) 以上で, ビルダグリプチンでは 30 mg/kg/ 日 (14895 ng h/ml) で, シタグリプチンでは 40 mg/kg/ 日 (30658 ng h/ml) で発現し, サキサグリプチンはサルにおいて DPP 阻害作用が強いことが示唆された 反復用量漸増試験において, サキサグリプチン, ビルダグリプチン及びシタグリプチンをサルに 3,10,30 mg/kg/ 日と漸増投与したところ, いずれにおいてもサルは著明な毒性反応を示さなかった ほとんどの臨床所見は 60 mg/kg/ 日以上の投与で発現し, それは流涎及び活動性低下 ( サキサグリプチン ), 嘔吐及び後肢跛行 ( ビルダグリプチン, シタグリプチン ), 皮膚病変 ( サキサグリプチン, ビルダグリプチン ) であった ごく軽度から軽度な臨床病理変化は,30 mg/kg/ 日以上での血清アルブミン低下 ( サキサグリプチン, ビルダグリプチン ) 及び尿中ケトン体の増加 ( ビルダグリプチン, シタグリプチン ) であった 病理組織学的に, 糜爛から潰瘍性の皮膚病変 ( サキサグリプチン [ ごく軽度から中等度 ], ビルダグリプチン [ ごく軽度から軽度 ]), ごく軽度から軽度なリンパ性過形成 ( サキサグリプチン, シタグリプチン ) がみられた その後に実施した 6 週間の経口投与比較毒性試験では, ヒト組み換え DPP-4 に対する in vitro 活性及び in vivo での暴露量 / 耐性を基本に,10 mg/kg/ 日のサキサグリプチンと同等であろうと見積もられた用量でビルダグリプチン (40/20 mg/kg/ 日 :40 mg/kg/ 日から開始したが著明な浮腫が発現したため, 途中から 20 mg/kg に減量 ) 及びシタグリプチン (40 mg/kg/ 日 ) を投与した この試験において, ビルダグリプチンでは重度な用量制限急性毒性 ( 浮腫 ) がその原因の一部であったが, すべての薬剤において目標とした血漿暴露は達成できなかった しかし, ある種の毒性は 3 化合物に共通して 毒性試験の概要文 : まとめ 13

14 いた ( 例えば, 脾臓及び骨髄におけるリンパ性過形成 ) しかしながら, その毒性に明確な違いもみられた シタグリプチンはヒトにおける暴露の 10 倍の暴露 ( 臨床用量 100 mg での AUC 比較 ) では著明な毒性をもたらさなかったが, サキサグリプチンはヒトにおける暴露の 60 倍の暴露 ( 臨床推奨用量 5 mg での AUC 比較 ) において皮膚病変を生じた ビルダグリプチンはヒトにおける暴露の 8 倍の暴露 ( 臨床推奨用量 100 mg での AUC 比較 ) において, 重度な用量制限急性浮腫, 特に手及び脚の持続的な浮腫, 及び治癒しなかった潰瘍性 / 糜爛性皮膚病変を生じた サキサグリプチンの 2 種類の不純物 / 分解物 ( 類縁物質 A* 不純物及び分解物 ] 及び類縁物質 E* [ 不純物 ]) は, 原薬中に規格設定された量 ( いずれの化合物も 0.15% 以下 ) よりも高い濃度で実施した細菌の復帰変異試験において変異原性は無いことが確認された 更に, 類縁物質 A* は定型的な遺伝毒性試験で使用したサキサグリプチンのバッチには高い濃度で存在しており,1.36% の類縁物質 A* を加えたサキサグリプチンの 3 日経口投与小核試験でも染色体損傷誘発性はみられなかった 更に, サキサグリプチン単独, 類縁物質 A* を 1.36% 添加したサキサグリプチン, 類縁物質 E* を 0.62% 添加したサキサグリプチン, の 3 ヵ月のラット安全性確認試験においてその毒性に違いは無いことが確認された サキサグリプチン及びメトホルミンのイヌ 3 ヵ月反復経口投与併用毒性試験では, 併用投与による毒性増強はみられなかった サキサグリプチン / メトホルミン併用経口投与によるラット胚 胎児発生試験において,25/200 mg/kg/ 日の胎児に異常は認められなかったが,25/600 mg/kg/ 日の胎児において波状肋骨の増加がみられた この骨格変異はメトホルミンに起因していると推察された サキサグリプチン / メトホルミン併用経口投与によるウサギ胚 胎児発生試験において,40/50 mg/kg/ 日の母動物において死亡及び流産がみられ, 生存母動物の胎児において低胎児体重及び骨化の遅延が認められた この用量における母動物のサキサグリプチン及びメトホルミンの全身暴露 AUC は, 臨床用量でのヒト AUC の約 260 倍及び 1 倍であった サキサグリプチンは 290~700nm の範囲の紫外線及び可視光を吸収しないことより, 光毒性試験は実施していないが, その光化学的性質及び国内外で実施された臨床試験結果より, サキサグリプチンは光毒性のリスクを高める可能性はないと考えられる 結論として, ラットでは 6 ヵ月間 100 mg/kg/ 日まで, イヌでは 12 ヵ月間 10 mg/kg/ 日まで, サルでは 3 ヵ月間 3 mg/kg/ 日まで, サキサグリプチンの投与に十分耐えた ラットにおける主な標的臓器変化として, 全般的にごく軽度な脾臓のリンパ性過形成, 肺組織球症, 眼付属腺及び肝臓における単核細胞浸潤,104 週間投与後には膀胱及び精巣上体にも単核細胞浸潤がみられた これらの所見は, 回復性があり, ごく軽度から軽度な変化であり, 進行性ではないこと, 臨床推奨用量での AUC よりサキサグリプチンは 36 倍以上, 代謝物は 6 倍以上での変化であることから, 毒性学的意義はほとんど無いと考えられた イヌにおける主な所見としては, 血様便 / 粘液性便で特徴付けられる腸管毒性 ( 臨床推奨用量での AUC よりサキサグリプチンは 19 倍,BMS は 9 倍 ) 及び死亡にも関連した全身高暴露時 ( 臨床推奨用量での AUC よりサキサグリプチンは 580 倍以上,BMS は 140 倍以上 ) における腸疾患がみられた サルにおける主な標的臓器変化としては, 皮膚病変 ( 痂皮, 糜爛, 潰瘍 ), リンパ性過形成 ( 主に脾臓及び骨髄 ), 多組織性単核細胞浸潤であったが, これらはすべて回復性があった これらの変化の無作用量でのサキサ 毒性試験の概要文 : まとめ 14 *: 新薬承認情報提供時に置き換えた

15 グリプチン及び代謝物の AUC は, 臨床推奨用量での AUC の 1~3 倍であった イヌにおける消化管毒性及びサルにおける皮膚変化の発生機序はわかっていない イヌでみられた血様 / 粘液性便と関連する変化はヒト臨床試験では見られていない 同様に, サルでみられた皮膚病変と関連する変化もヒト臨床試験では見られていない 注目すべきは, すべての動物種において毒性は血漿 DPP-4/DPP 阻害とは関連せず, 全般的に最大の DPP-4/DPP 阻害は非毒性量でみられた サキサグリプチンは一連の遺伝毒性試験の根拠の重要度評価からヒトに対して遺伝毒性リスクは持たず, げっ歯類においてがん原性も示さなかった 生殖試験において, サキサグリプチンは明らかな毒性用量である臨床的には関係の無い暴露においてのみ, ラットの受胎能に影響を及ぼしたが, ラット及びウサギに催奇形性を示さず,F1 世代の生存率, 発達, 生殖行動に有害な作用を及ぼさなかった 2 種類の不純物 / 分解物は, 原薬に規格設定された量よりも高い濃度で試験を行い, 安全であることが確認された 毒性試験の概要文 : まとめ 15

16 単回投与毒性試験 マウス単回経口投与毒性試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチン安息香酸塩を 1.25%Avicel 溶液 ( 媒体 ) に懸濁し,4000 mg/kg を最高に, 以下,2000,1000,500 mg/kg の投与量で各群雌雄各 5 匹の CD-1 系マウスに経口投与した 対照群には媒体の 1.25%Avicel を 40 ml/kg 投与した すべてのマウスを 2 週間観察した 2 週後, 対照群と 4000 mg/kg 群の剖検を行ったところ,4000 mg/kg に軽度な腹腔内出血がみられた ( 雄 2 例 ) ため,2000 mg/kg 群の雄も剖検した 2000 mg/kg では薬物に関連した臨床症状も剖検所見もみられなかったが,4000 mg/kg 投与において, 活動性の低下 (Day 1 に 3 例 ), 死亡 (Day 2 に 4 例 ) がみられた ラット単回経口投与毒性試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチン安息香酸塩を 1.25%Avicel 溶液 ( 媒体 ) に懸濁し,4000 mg/kg を最高に, 以下,2000,1000,500 mg/kg の投与量で Harlan Sprague Dawley 系雄ラット 5 匹 / 群に経口投与した 媒体 1.25%Avicel を 40 ml/kg 投与した群を対照群とした 2 週後, 対照群と 4000 mg/kg 群の剖検を実施した 2000 mg/kg 以下では薬物に関連した変化はみられなかった 4000 mg/kg 投与において, 死亡 (Day 1 に 1 例 ), 全例が身づくろいされていない外観を呈し (Day 2~6), 一過性の体重増加抑制がみられたが, 剖検で異常はみられなかった サル単回投与用量設定毒性試験 (GLP 非適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチン安息香酸塩を 1.25%Avicel 溶液 ( 媒体 ) に懸濁し,5,25,50 mg/kg の投与量で雌 1 匹 / 群のサルに投与した 投与後, 数日間各動物の状態及び行動を観察した 5,25 mg/kg では薬物に関連した変化はみられなかった 50 mg/kg 投与例では, 投与 6.5 時間後に活動性低下 / 嗜眠状態, 発声がみられ, その後 ( 投与 22 時間後 ) に死亡が発見された 剖検は実施していない 結論として,50 mg/kg の単回投与は明らかな毒性量であり死亡をもたらした サル単回投与毒性試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチン安息香酸塩を 1.25%Avicel 溶液 ( 媒体 ) に懸濁し,5,25 mg/kg の投与量で雄のカニクイザル各 3 匹に投与した 媒体 1.25%Avicel を 1 ml/kg 投与した群を対照群とした 臨床症状, 血圧, 心拍数, 心電図について評価した サキサグリプチン及び主要活性代謝物 BMS の血漿中濃度も投与日に測定した サキサグリプチン及び BMS の全身暴露は用量の増加に伴って増加し,25 mg/kg での AUC はそれぞれ ng h/ml 及び ng h/ml であった BMS の暴露はサキサグリプチンの約 5~6 倍を示した いずれの投与群にもサキサグリプチン投与に関連した臨床的及び心 毒性試験の概要文 : 単回投与毒性試験 16

17 循環系変化はみられなかった 毒性試験の概要文 : 単回投与毒性試験 17

18 反復投与毒性試験 ラット反復経口投与毒性試験 (GLP 適用, 一部非適用 ) サキサグリプチンのラットにおける毒性を 2 週間,3 ヵ月及び 6 ヵ月の GLP 適用 3 試験で評価した 主要な試験の用量設定は 2 週間の探索用量設定試験を基にした 試験すべてで, サキサグリプチン及び BMS の暴露は用量に比例して増加し, 概して反復投与による増加は認められず, 雌は雄よりも高かった ;BMS の暴露はサキサグリプチンよりも低かった ヒトとラットにおける AUC の比較と安全域を以下の表 に示した 動物種 表 試験 用量 (mg/ ラットにおける主要な反復投与試験における定常 AUC 暴露と安全域 AUC (ng h/ml) a ヒト暴露量との比較 ( 倍 ) b サキサク リフ チン BMS サキサク リフ チン BMS kg) 雄雌雄雌雄雌雄雌 ラット 2 週 経口 3 ヵ月 経口 c ヵ月経口 20 c a 計算は 0 時から血漿中に検出された最終時までで実施した その範囲は 4~24 時間 b ヒト 5 mg 投与時の AUC は, サキサグリプチンは 78 ng h/ml,bms は 214 ng h/ml (CV181037) BMS の最初の分析法とより特異的な分析法との違いを評価したブリッジングトキシコキネティクス試 験 ( 詳細は第 項 ) に基づくと, 最初の分析法ではラットの AUC を 4.4%~42.7% まで過大評価してい たことが判明した この暴露の違いはヒトの安全性評価に衝撃を与えるものではなかったので, 最初のデータと暴露倍率を示した c 無毒性量 < 概要表 トキシコキネティクス項より抜粋 > ラット 2 週間経口投与探索毒性試験 (GLP 非適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチントリフルオロ酢酸塩を水に溶解し,1,10,100 mg/kg/ 日の用量で雌雄各 6 匹 / 群の Harlan Sprague Dawley 系ラットに経口投与した 対照群として, 雌雄各 6 匹に水を他の群と同量 (10 ml/kg) 投与した 一般状態観察, 体重, 血液学, 血清生化学, 器官重量, 剖検及び対照群と最高用量群の組織学的検査によって評価を行った サキサグリプチンの血漿中濃度を投与 毒性試験の概要文 : 反復投与毒性試験 18

19 1 日及び 14 日に測定し, 全身暴露を評価した サキサグリプチンの全身暴露は 1 mg/kg/ 日と 10 mg/kg/ 日の間では用量の比率よりも高い割合で増加し,10 mg/kg/ 日と 100 mg/kg/ 日の間では用量の比率よりも高い割合で増加した 反復投与による暴露の増加は認められず, サキサグリプチンの暴露は雌が雄よりも約 3 倍高かった すべての用量において, 軽度から中等度の有害とは考えられない臨床病理学的変化として血清トリグリセライドの低下がみられた 100 mg/kg/ 日の雄において, 血清コレステロール及びグロブリンのごく軽度から軽度の低下がみられた 器官重量, 剖検及び組織学的検査において薬物に関連した変化はみられなかった 無毒性量は 100 mg/kg/ 日と考えられた (AUC は雄 9.0 μg h/ml, 雌 30.2 μg h/ml) ラット 2 週間経口投与毒性試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチン安息香酸塩を 1.25%Avicel 溶液 ( 媒体 ) に懸濁し,2,20,200 mg/kg/ 日の投与量で雌雄各 10 匹 / 群の Harlan Sprague Dawley 系ラットに経口投与した 対照群として, 雌雄各 10 匹に媒体 1.25%Avicel を他の群と同量 (10 ml/kg) 投与した 一般状態観察, 体重, 摂餌量, 摂水量 眼科学的検査, 血液学, 血清生化学, 尿検査, 血漿 DPP 活性, 血清 IgG 及び IgM 濃度, 脾臓リンパ球フェノタイピング, 器官重量, 剖検及び対照群と最高用量群の組織学的検査 ( 肝臓, 肺は全群 ) によって評価を行った サキサグリプチン及び薬理学的に活性のある代謝物 BMS の血漿中濃度を投与 1 日及び 14 日に測定し, 全身暴露を評価した すべての投与量において血漿中サキサグリプチン及び BMS 濃度は用量に比例して増加し, 反復投与による増加はみられなかった ( 表 ) 雌の未変化体及び代謝物の暴露は雄の 2-4 倍であり, 代謝物の暴露は未変化体の 倍であった すべての用量の投与第 1 及び 14 日において, 血漿 DPP 活性の著明な低下 (78% 以上の抑制 ) がみられた 2 mg/kg/ 日においては, サキサグリプチン投与に関連したその他の変化はみられなかった 20 及び 200 mg/kg/ 日では, 有害ではないごく軽度から軽度な薬物に関連した臨床病理パラメーターの変化として, カリウム低下, 血清 IgM 及び IgG の増加 (20 mg/kg/ 日は雌のみ ), 雄で血清コレステロール及びグロブリンの低下がみられた 更に,200 mg/kg/ 日では, ごく軽度な臨床病理変化として血小板数の低下, 血清アルカリフォスファターゼの増加, 雄では脾臓 CD3+ T 細胞及び CD45RA+ B 細胞の増加, 雌では尿量の増加がみられた また,200 mg/kg/ 日では, 脾臓及び肝臓重量の軽度な増加, 肺にごく軽度な組織球症, 肝臓にごく軽度から軽度な単核細胞浸潤が組織学的検査でみられた 結論として,2 及び 20 mg/kg/ 日のサキサグリプチンは著明な毒性をもたらさなかった 20 mg/kg/ 日でみられた薬物関連所見はいくつかの臨床病理パラメーターにおけるごく軽度から軽度な変化に限定されており, 有害な変化とは考えられなかった 予期した通り, すべての用量で血漿 DPP 活性の著明な低下がみられた 200 mg/kg/ 日においてみられた臨床病理所見及び組織所見から, 無毒性量は 20 mg/kg/ 日と考えられた ( サキサグリプチン及び BMS の AUC はそれぞれ, 雄では 1600 及び 506 ng h/ml, 雌では 4353 及び 1227 ng h/ml) 毒性試験の概要文 : 反復投与毒性試験 19

20 ラット 3 ヵ月経口投与用量設定毒性試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチン安息香酸塩を 1.25%Avicel 溶液 ( 媒体 ) に懸濁し,300,600,1200 mg/kg の投与量で 1 日 1 回 3 ヵ月間, 雌雄各 10 匹の Harlan Sprague Dawley 系ラットに経口投与した 対照群 ( 雌雄各 10 匹 ) には同量 (10 ml/kg) の媒体 1.25%Avicel を投与した 一般状態観察, 体重, 摂餌量, 眼科学的検査, 血液学, 血清生化学, 器官重量, 剖検及び組織学的検査によって評価を行った サキサグリプチン及び BMS の血漿中濃度を投与 1 日及び 91 日に測定し, 全身暴露を評価した サキサグリプチン及び BMS の全身暴露は用量に比例して増加した ( 表 ) サキサグリプチンの雌の全身暴露は雄よりも高かった (AUC で 2 倍程度,1200 mg/kg/ 日の Day 91 を除く ) 代謝物の全身暴露は投与 1 日目では雌雄で同様であったが, 投与 91 日目では雌が雄よりも高かった (AUC で 2 倍程度,1200 mg/kg/ 日群を除く ) サキサグリプチンの全身暴露は雌雄とも投与期間の延長につれてごく軽度増加したが, 代謝物の全身暴露は投与期間の延長につれて雌では増加, 雄では全般的に減少した すべての用量において,BMS の暴露はサキサグリプチンの暴露の約 0.4 倍 ~1 倍であった 600 mg/kg/ 日までの用量において, 薬物に関連した臨床症状はみられなかった 投与 70 日に死亡しているのが発見された 600 mg/kg/ 日群の雄 1 例 ( それ以前に臨床症状もなく, 死因は不明であった ) を除き, この用量以下でみられたすべての死亡 (300 mg/kg/ 日群の雌 1 例,600 mg/kg/ 日群の雌雄各 2 例 ) は偶発的なものと考えられた 600 及び 1200 mg/kg/ 日において, 体重及び摂餌量の低下が雄においてみられた 1200 mg/kg/ 日において, 薬物に関連した死亡 (8 例 ) がみられ, 活動性低下, 労作呼吸及び振戦を含む臨床症状 ( 頻度は雌よりも雄で高かった ) がみられた すべての投与群において, 薬物に関連したごく軽度から軽度な臨床病理パラメーターの変化として, 雌でのヘモグロビン, 平均赤血球ヘモグロビン量, 平均赤血球容積, 血小板数の低下, 血清コレステロールの低下, 雄でのカリウムの低下がみられた すべての投与群において, 薬物に関連した病理組織学的変化として, 肝臓及び脾臓重量の増加, ごく軽度の脾臓リンパ性過形成, ごく軽度から著明なリンパ性枯渇 / 壊死を伴う胸腺重量の低下, 下垂体重量の低下 ( 雌で程度が強い ), ごく軽度から軽度な肺組織球症, 雌における眼付属腺へのごく軽度から軽度な単核細胞浸潤がみられた 更に,600 及び 1200 mg/kg/ 日においてごく軽度から軽度な臨床病理所見として網赤血球比の増加, 雄における白血球, リンパ球, 好中球数, 血清アルカリフォスファターゼの増加, 雌におけるごく軽度な血清アルブミンの低下がみられた 病理組織学的に, 慢性シアン中毒と一致する変性脳病変が 600 及び 1200 mg/kg/ 日群の雄にみられた 2, mg/kg/ 日群では, 中等度なトリグリセライドの上昇, 雄において総蛋白及び血清アルブミンのごく軽度な減少並びにストレスによる二次的な変化と考えられた胃の赤色化と糜爛, 雌においてごく軽度なカリウムの低下がみられた 要約すると, すべての投与群においてごく軽度から中等度な臨床病理学的変化及びリンパ系臓器における形態学的変化がみられた 更に,600 mg/kg/ 日以上の用量 ( サキサグリプチンの AUC は ng h/ml 以上 ) では雄特異的な神経変性脳病変も認められた したがって, 本試験において無毒性量は推定できなかった 毒性試験の概要文 : 反復投与毒性試験 20

21 ラット 6 ヵ月経口投与毒性試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチン安息香酸塩を 1.25%Avicel 溶液 ( 媒体 ) に懸濁し,2,20,100 mg/kg の投与量で 1 日 1 回 Harlan Sprague Dawley 系ラットに 3 ヵ月間 ( 各群雌雄 10 匹 ) 及び 6 ヵ月間 ( 各群雌雄 20 匹 ) 投与し, 更に投与後 1 ヵ月間の回復性検討 ( 各群雌雄 5 匹 ) も行った 雌雄各 35 匹からなる対照群には, 媒体 1.25%Avicel を他の群と同量 (5 ml/kg) 投与した 一般状態観察, 体重, 摂餌量, 眼科学的検査, 収縮期血圧及び心拍数, 血液学, 血清生化学, 尿検査, 血漿 glucagon-like peptide-1(glp-1) 濃度, 血漿 DPP 活性, 器官重量, 剖検及び組織学的検査によって評価を行った サキサグリプチン及び BMS の血漿中濃度を投与 1 日,92 日及び 181 日に測定し, 全身暴露を評価した サキサグリプチン及び BMS の全身暴露は,2 mg/kg/ 日と 100 mg/kg/ 日の間では投与量の比率よりも全般に大きい増加を示し, 雌は雄よりも高かった ( 表 ) 更に, すべての用量で投与 1 日の暴露に比べて, 投与期間の延長によりサキサグリプチンは雌雄で 1.2 倍 ~2.1 倍の増加を,BMS は雌では 1.3 倍 ~1.6 倍の増加を, 雄では 0.4 倍 ~0.7 倍に低下していた すべての用量で BMS の暴露はサキサグリプチンの 0.2~0.9 倍であった 血漿中 DPP-4 活性の阻害がすべてのサキサグリプチン投与群で認められた 血漿中 DPP-4 活性阻害の最大 %(E max,70%~91%), 及び効果曲線下面積 (area under the effect curve: AUEC, 経時的血漿 DPP-4 阻害 % 曲線 ) はすべての投与群で全般的に同様であり, 雌雄間も同様であった 1 ヵ月の休薬後の DPP-4 活性値は対照群と同様であった GLP-1 濃度に薬物に関連した変化はみられなかった いずれの用量においても薬物に関連した死亡はみられず,2 mg/kg/ 日では薬物に関連した毒性変化はみられなかった 20 及び 100 mg/kg/ 日の投与 1 週及び 100 mg/kg/ 日の投与 13 週の投与後に, 雄においてのみ平均収縮期血圧が 17%~19% 低下した ( 投与 25 週にはいずれの用量でも認められなかった ) 20 及び 100 mg/kg/ 日群において, ごく軽度な体重増加抑制 ( 試験期間中を通じて ), ごく軽度な血清アルカリフォスファターゼの増加, ごく軽度から軽度な脾臓リンパ性過形成がみられた 100 mg/kg/ 日においては, 更にごく軽度な血清コレステロールの低下, 脾臓重量の増加, 組織学的変化を伴わない肝臓重量の増加 ( 雄 ) 及び甲状腺重量の低下 ( 雌 ) もみられた 1 ヵ月の休薬により, それまでにみられていた変化は全て回復した 20 mg/kg/ 日ではごく軽度の影響がみられただけであったので無毒性量は 20 mg/kg/ 日と考えられた ( サキサグリプチン及び BMS それぞれの全身暴露 AUC は, 雄では 2796 及び 1345 ng h/ml, 雌では 6111 及び 4259 ng h/ml) イヌ反復経口投与毒性試験 (GLP 適用, 一部非適用 ) サキサグリプチンのイヌにおける毒性を 2 週間,3 ヵ月及び 12 ヵ月の GLP 適用 3 試験で評価した 試験の用量設定は 10 日間の探索用量設定試験を基にした 試験すべてで, サキサグリプチン及び BMS の暴露は用量の増加に伴って増加し, 明らかな性差は認められなかった 低用量 (10 mg/kg/ 日以下 ) では, 代謝物の暴露が未変化体より全般に高かったが, 高用量では代謝物の暴露は未変化体より全般に低かった 12 ヵ月試験において, サキサグリプチン及び BMS 毒性試験の概要文 : 反復投与毒性試験 21

22 の全身暴露は試験期間の延長により, 初期の値から 40~60%( サキサグリプチン ) 及び 30~50% (BMS ) 低下した この低下の機序は明確にされていないが, 全身からのクリアランスの変化というよりも胃腸毒性による二次的な吸収の低下がその一因かもしれなかった ヒトとイヌにおける AUC の比較を以下の表 に示した 表 動物種 試験 イヌにおける主要な反復投与試験における定常 AUC 暴露と安全域用量 AUC (ng h/ml) a ヒト暴露量との比較 ( 倍 ) b (mg/ サキサク リフ チン BMS サキサク リフ チン BMS kg) 雄雌雄雌雄雌雄雌 イヌ 2 週 経口 3 ヵ月 経口 1 c c c ヵ月 5 経口 a 計算は 0 時から血漿中に検出された最終時までで実施した その範囲は 4~24 時間 b ヒト 5 mg 投与時の AUC は, サキサグリプチンは 78 ng h/ml,bms は 214 ng h/ml (CV181037) BMS の最初の分析法とより特異的な分析法との違いを評価したブリッジングトキシコキネティクス試 験 ( 詳細は第 項 ) に基づくと, 最初の分析法ではイヌの AUC を 4.7%~36.2% まで過大評価していた ことが判明した この暴露の違いはヒトの安全性評価に衝撃を与えるものではなかったので, 最初のデータと 暴露倍率を示した c 無毒性量 < 概要表 トキシコキネティクス項より抜粋 > イヌ 10 日間反復経口投与探索毒性試験 (GLP 非適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチントリフルオロ酢酸塩を水に溶解し, ゼラチンカプセルに充填して 0.5,5,50 mg/kg/ 日の用量でビーグル犬 ( 各群雌雄 1 例 ) に経口投与した 対照群にはゼラチンカプセルに水を充填して投与した 一般状態観察, 体重, 摂餌量, 神経及び呼吸機能, 間接的血圧測定, 心電図, 眼科学的検査, 動脈酸素飽和度, 血液学, 血清生化学, 剖検及び病理組織学的検査によって評価した サキサグリプチンの血漿中濃度を投与 1 日及び 9 日に測定し, 全身暴露を評価した サキサグリプチンの暴露 (C max 及び AUC) は, 用量依存的に増加し,50 mg/kg/ 日で最大 109 μg h/ml の暴露が認められた いずれの用量においても反復投与による暴露の増加は認められなかった 本試験において代謝物 BMS の測定は実施していない 0.5 及び 5 mg/kg/ 日の用量では, 薬物に関連した変化はみられなかった 50 mg/kg/ 日の用量では雄が 6 日間投与後に死亡した 50 mg/kg/ 日の 1 例又は 2 例において, 嗜眠, 嘔吐, 赤色粘液下痢, 体重及び摂餌量の低下 ( 雄 ) が 毒性試験の概要文 : 反復投与毒性試験 22

23 みられた 死亡した 50 mg/kg/ 日の雄には, 軽度のうっ血, 中等度な絨毛萎縮, 粘膜の壊死, 亜急性炎症, 粘液細胞枯渇を特徴とした中等度な腸疾患 ( 小腸及び大腸 ) がみられた 最高用量の雄のリンパ節及び胸腺には, ストレスに関連した軽度なリンパ性壊死及び枯渇もみられた 最高用量の雌には, 著明な血小板数の減少 ( 投与前値の 25%), ごく軽度な腸疾患 ( 小腸及び大腸 ), 血清尿素窒素及びトリグリセライドの増加並びに血清ナトリウム及び塩素の低下のような腸の機能障害に関連する二次的なごく軽度から軽度な臨床病理変化がみられた 結論として,0.5 及び 5 mg/kg/ 日のサキサグリプチンはイヌに著明な毒性をもたらさなかった 50 mg/kg/ 日の用量では中等度の腸疾患による死亡 (2 例中 1 例 ) 及びこれに関連した嘔吐, 下痢, 電解質アンバランス, 脱水をもたらした 無毒性量は 5 mg/kg/ 日 ( サキサグリプチンの AUC は 5 μg h/ml) であった イヌ 2 週間反復経口投与毒性試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチン安息香酸塩を 1.25%Avicel 溶液 ( 媒体 ) に懸濁し, それをゼラチンカプセルに充填し,1,5,25 mg/kg の投与量で 1 日 1 回, ビーグル犬 ( 各群雌雄 3 例 ) に経口投与した 不純物 / 分解物である類縁物質 A* について, その安全性の確認を目的に投与懸濁液に添加した (1.4%) 対照群にはゼラチンカプセルに媒体 1.25%Avicel を充填して他と同量 (1 ml/kg) 投与した 一般状態観察, 体重, 摂餌量, 神経及び呼吸機能, 間接的血圧測定, 心電図, 眼科学的検査, 動脈酸素飽和度, 血液学, 血清生化学, 尿検査, 血漿 DPP-4 活性, 剖検及び病理組織学的検査について評価した サキサグリプチン及び BMS の血漿中濃度を投与 1 日及び 13 日に測定し, 全身暴露を評価した サキサグリプチン及び BMS の全身暴露は, 用量依存的に増加し, いずれの用量においても性差も反復投与による増加も認められなかった ( 表 ) すべての用量において BMS の暴露は未変化体の 0.17 倍 ~1.86 倍であり,1.86 倍の差は低用量群でみられた すべての投与群で血漿 DPP-4 活性の著明な低下 (E max において 94% 以上の阻害 ) がみられた 1 mg/kg/ 日では薬物に関連した毒性変化はみられず, いずれの用量においても神経及び呼吸機能の変化はみられなかった 25 mg/kg/ 日の雄 1 例が, 投与 9 日に状態悪化のため剖検された 5 及び 25 mg/kg/ 日では, 嘔吐, 赤色便及び / 又は軟便, 好酸球数増加, 肝臓中心静脈周囲のごく軽度な亜急性炎症がみられた 25 mg/kg/ 日では更に, 臨床所見として, 体重の減少 ( 投与前値の 6%~20%), 軽度な摂餌量減少 ( 雄 ), 摂水量の増加がみられた 25 mg/kg/ 日ではごく軽度から軽度な臨床病理変化として, 連銭状赤血球 ( 積重なった赤血球 ), 好酸球数及び尿蛋白の増加, 雄における血清グロブリン及び免疫グロブリン (IgG,IgA) の増加がみられた 25 mg/kg/ 日では血清アルブミン, 血清電解質にも減少がみられたが, 胃腸への作用 ( 下痢及び嘔吐 ) に対する二次的な変化と考えられた 病理組織学検査において, 上皮細胞の壊死, 亜急性炎症, 出血, うっ血, 粘液細胞枯渇, 及び / 又は小腸ないし大腸の絨毛萎縮を特徴としたごく軽度から中等度な腸疾患 ( 剖検では小腸粘膜の暗色 / 赤色化としてみられた ), リンパ性組織の多くにストレスに関連した軽度から中等度なリンパ性壊死及び / 又は枯渇が 25 mg/kg/ 日でみられた 無毒性量は 1 mg/kg/ 日と考えられた ( サキサグリプチン及び BMS それぞれの全身暴露 AUC は, 雄では 1499 及び 1461 ng h/ml, 雌では 961 及び 1735 ng h/ml) 毒性試験の概要文 : 反復投与毒性試験 23 *: 新薬承認情報提供時に置き換えた

24 イヌ 6 週間反復経口投与毒性試験 (GLP 非適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) 以前に実施したイヌの試験 ( 報告書番号 ) でみられた胃腸毒性がサキサグリプチンの用量漸増によって軽減されるのか否かを確認するために本試験を実施した サキサグリプチンフリー体を塩酸溶液に溶解し, 雌雄各 3 匹のビーグル犬に 1 ml/kg の液量で最初の 2 週間は 10 mg/kg/ 日, 次の 2 週間は 20 mg/kg/ 日, 最後の 2 週間は 30 mg/kg/ 日と計 6 週間経口投与した 各 2 週間の投与最終時のトキシコキネティクス, 一般状態観察, 体重, 摂餌量, 剖検及び小腸 大腸の病理組織学的検査について評価した サキサグリプチン及び BMS の全身暴露は用量依存的に増加し,BMS の全身暴露が 20 及び 30 mg/kg/ 日で雌雄差がなかった以外, 全般的に雌より雄で軽度高かった BMS の暴露 (AUC) はサキサグリプチンの 1.7 倍までの値を示した すべての投与量において, その投与量及び投与期間依存的な胃腸毒性 ( 赤色, 粘液性, 形をなさない, ないし液状便 ), 雌雄各 1 例で体重減少 (6 週間の投与期間中に 0.8 kg), 投与 3 週 ~6 週中に雌 1 例で摂餌量の低下 (43%~68%), 雄 1 例の大腸にごく軽度な多発性急性腸疾患がみられた この毒性の全体的な程度は 2 週間 25 mg/kg/ 日投与されたイヌにおけるよりも軽度であり, 段階的なサキサグリプチンの用量増加はイヌにおける胃腸毒性に対して耐性を高めることが示唆された イヌ 3 ヵ月間反復経口投与毒性試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチン安息香酸塩を 1.25%Avicel 溶液 ( 媒体 ) に懸濁し, それをゼラチンカプセルに充填し,0.2,1,5 mg/kg の投与量で 1 日 1 回, ビーグル犬 ( 各群雌雄 5 匹 ) に経口投与した 対照群にはゼラチンカプセルに媒体 1.25%Avicel を充填して他と同量 (0.5 ml/kg) 投与した 各群雌雄 3 匹については投与 3 ヵ月後に剖検し, 残りの各群雌雄 2 匹は 1 ヵ月の休薬後に剖検した 一般状態観察, 体重, 摂餌量, 摂水量, 血液学, 血清生化学, 尿検査, 間接的血圧測定, 心拍数, 心電図, 眼科学的検査, 動脈酸素飽和度, 剖検及び病理組織学的検査によって評価した サキサグリプチン及び BMS の血漿中濃度を投与 1 日及び 90 日に測定した サキサグリプチン投与犬の血漿 DPP-4 活性を投与 1 日及び 90 日, 休薬期間の終了時に測定した サキサグリプチン及び BMS の全身暴露は用量と比例して増加し, 明らかな性差はみられなかった ( 表 ) いずれの用量においても反復投与によるサキサグリプチン暴露の増加はみられなかったが,5 mg/kg/ 日の BMS 暴露は投与期間の延長によって約 1.5 倍になった すべての用量において,BMS の AUC はサキサグリプチンの AUC の 1.4 倍 ~2.3 倍であった 血漿 DPP-4 活性阻害 (E max において 88% 以上 ) がすべての投与群に認められ, 明らかな性差はみられなかった 0.2 mg/kg/ 日では, 薬物に関連した毒性変化はみられなかった 1 及び 5 mg/kg/ 日の雄において, 有害ではないごく軽度から軽度の血清リンの低下がみられた 5 mg/kg/ 日では更に, 全例に赤色軟便 ( 鉄反応陽性 ), 軽度な好酸球数増加, 雄においてごく軽度な血清アルブミ 毒性試験の概要文 : 反復投与毒性試験 24

25 ンの低下及び肝臓中心静脈周囲のごく軽度な亜急性炎症がみられた 1 ヵ月の休薬後, すべての薬物関連所見は回復性を示した 無毒性量は 1 mg/kg/ 日と考えられた ( サキサグリプチン及び BMS それぞれの全身暴露 AUC は, 雄では 787 及び 1484 ng h/ml, 雌では 1004 及び 2124 ng h/ml) イヌ 12 ヵ月間反復経口投与毒性試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチン安息香酸塩を 1.25% Avicel 溶液 ( 媒体 ) に懸濁し,1,5,10 mg/kg/ 日の投与量で 1 日 1 回, ビーグル犬 ( 各群雌雄 7 匹 ) に 6 ヵ月又は 12 ヵ月間経口投与した 対照群には媒体 1.25%Avicel を他と同量 (0.5 ml/kg) 投与した 各群雌雄 3 匹は投与 6 ヵ月後に, 残りの各群雌雄 4 匹は投与 12 ヵ月後に屠殺剖検した 一般状態観察, 体重, 摂餌量, 摂水量, 眼科学的検査, 間接的血圧測定, 心拍数, 心電図, 血液酸素飽和度, 血液学, 血清生化学, 尿検査, 血漿 DPP-4 活性, 器官重量, 剖検及び病理組織検査によって評価した サキサグリプチン及び BMS の血漿中濃度を投与 1 日,6 ヵ月目及び 12 ヵ月目に測定し, 全身暴露を評価した サキサグリプチン及び BMS の全身暴露は用量の増加に伴って増加し, 明らかな性差はみられなかった ( 表 ) BMS の全身暴露 AUC は未変化体より全般に高かった (0.8 倍 ~1.7 倍 ) サキサグリプチン及び BMS の全身暴露の投与期間の延長に伴った低下 ( すべての用量で同様 ) が, 投与 1 日目と 6 ヵ月目の間 (0%~76%), 投与 1 日目と 12 ヵ月目の間 (45% ~67%) にみられ, 最大の低下は全般的には, 投与 6 ヵ月目と 12 ヵ月目の間で生じていた 92% 以上の最大血漿 DPP-4 活性阻害がすべての用量で認められたが, 明らかな性差はみられなかった 1 mg/kg/ 日では, 薬物に関連した毒性変化はみられなかった 雄において 12 ヵ月後に用量依存性のない体重の減少 ( 対照群と比較して 1,5,10 mg/kg/ 日のそれぞれで 16,11,20%) がみられたが, 最高用量では主として 2 例が減少を示していた 5 及び 10 mg/kg/ 日では便の異常 ( 形をなさない / 粘液様及び色調異常 ) 及び足の腹側面にある肉球の裂傷 ( 投与約 7 ヵ月目に初めて観察され, 用量依存的に増加した ) がみられ, この肉球の裂傷は限局性上皮変性 ( 基底部上皮又は基底膜の露出を伴わない表層上皮細胞の空胞化及び剥離 ), 軽度な限局性真皮出血及び単核細胞浸潤によって特徴付けられる糜爛であった 更に 10 mg/kg/ 日では, ごく軽度から軽度な, 体重増加量の減少 ( 雄 ), 好酸球の増加 ( 雌 ), 白血球数 ( 好中球, リンパ球 ) の減少 ( 雄 ), 血清コレステロール及びトリグリセライドの増加 ( 雌 ), リンの低下 ( 雄 ), 血清総蛋白, アルブミン及びカリウムの低下 ( 雄 ) がみられた 要約すると,12 ヵ月間 10 mg/kg/ 日までの投与において腸疾患は組織学的に確認されなかった 5 mg/kg/ 日以上において, 便の変化, 肉球の裂傷, いくつかのごく軽度な臨床病理学的変化がみられた 無毒性量は 1 mg/kg/ 日と考えられた ( サキサグリプチン及び BMS それぞれの全身暴露 AUC は, 雄では 286 及び 359 ng h/ml, 雌では 415 及び 454 ng h/ml) カニクイザル反復経口投与毒性試験 (GLP 適用 ) 4 DPP-4 阻害剤を開発しているすべての企業に対して FDA が出した要求に応えて, サキサグリプチンのカニクイザルにおける毒性を GLP 適用 1 試験で評価した 用量はそれ以前に実施したいくつかの探索試験 ( 第 項参照 ) の結果を基に設定した ヒトとサルにおける AUC の比較 毒性試験の概要文 : 反復投与毒性試験 25

26 を以下の表 に示した 動物種 表 試験 サルにおける主要な反復投与試験における定常 AUC 暴露と安全域用量 AUC (ng h/ml) a ヒト暴露量との比較 ( 倍 ) b (mg/ サキサク リフ チン BMS サキサク リフ チン BMS kg) 雄雌雄雌雄雌雄雌 サル ヵ月 0.3 c 経口 a 計算は 0 時から血漿中に検出された最終時までで実施した その範囲は 8~24 時間 b ヒト 5 mg 投与時の AUC は, サキサグリプチンは 78 ng h/ml,bms は 214 ng h/ml (CV181037) c 無毒性量 < 概要表 トキシコキネティクス項より抜粋 > サル 3 ヵ月間反復経口投与毒性試験 (GLP 適用 ) 毒性試験の概要文 : 反復投与毒性試験 26 ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチンフリー体を酸性水 ( 媒体 ) に溶解し,0.03,0.3,3 mg/kg/ 日の用量で 1 日 1 回, カニクイザル ( 各群雌雄 7 匹 ) に経口投与した 対照群には媒体の酸性水を他と同量 (1 ml/kg) 投与した 各群雌雄 4 匹については投与 3 ヵ月後に剖検し, 残りの各群雌雄 3 匹は 3 ヵ月の休薬 後に剖検した 一般状態観察, 体重, 摂餌量, 眼科学的検査, 心電図 ( 心拍数 ), 動脈酸素飽和度, 血漿 DPP 活性, 血液学, 血清生化学, 尿検査, 剖検及び病理組織検査によって評価した サキサグリプチン及び BMS の血漿中濃度を投与 1 日,36 日及び 85 日に測定し, 全身暴露を評価した サキサグリプチン及び BMS の全身暴露 (AUC) は全般的に用量と比例して増加し, 雌雄で同様であった ( 表 ) 0.3( 雄 ) 及び 3 mg/kg/ 日において, 投与 1 日目と比べて投与 85 日目にはサキサグリプチン暴露の増加 (2.4 倍 ~2.8 倍 ) がみられた いずれの用量においても反復投与による BMS 暴露の増加はみられなかった すべての用量において, 投与 85 日目の BMS の AUC はサキサグリプチンの AUC より高かった (2.2 倍 ~6.9 倍 ) サキサグリプチンはすべての用量で血漿 DPP 活性を抑制 ( 最大 69.8% まで ) し, 明らかな性差はみられなかった 0.03,0.3 mg/kg/ 日では, 薬物に関連した毒性変化はみられなかった 3 mg/kg/ 日において, 投与 50 日 ~53 日に発生し投与期間終了まで継続 ( 雌 1 例では投与 88 日に回復 ) した多発性痂皮形成が,14 例中 4 例の足及び / 又は尾にみられた 影響を受けた 4 例中 2 例のサルは回復性検討に割り当てられ, 休薬 68 日までにすべてのサキサグリプチン関連の皮膚病変は完全に治癒した 以前に実施したいくつかの探索試験でみられたように ( 第 項参照 ), 低頻度の一過性 (1 日 ~3 日の期間 ) 後肢跛行が 3 mg/kg/ 日の雌 2 例にみられた 剖検時, 粗糙な領域 ( 尾 ), 潰瘍 ( 尾先端 ), 及び痂皮 ( 後肢 ) が 3 mg/kg/ 日の 2 例にみられた これらの変化は, 病理組織学的にごく軽度から軽度な皮膚の修復性上皮過形成 ( 尾及び足 ) に相当し, 更に微小血管及び小動脈内皮細胞及び平滑筋の肥大, 血管周囲及び / 又は血管壁内の単核細胞浸潤 / 炎症も伴っていた 更に 3 mg/kg/ 日における薬物関連病理組織学的変化として, 骨格筋におけるごく軽度な非壊死性

27 血管炎症, ごく軽度な慢性膵臓炎症 [ 膵臓機能の障害 ( 体重減少, 下痢, 油性便等の臨床症状 ) を伴わず, 臨床的状況において重篤で明らかな疾患として一般的に理解されている 膵炎 とみなされるものではなかった ], 軽度な乳腺単核細胞浸潤, ごく軽度な脾臓, 胸腺及び / 又は骨髄のリンパ性過形成がみられた これらすべての変化は 3 ヵ月の回復期間後には完全に回復した 要約すると, サキサグリプチン 3 mg/kg/ 日のカニクイザルへの 3 ヵ月までの投与により, 皮膚病変, 膵臓でのごく軽度及び乳腺での軽度な単核細胞浸潤 / 炎症, ごく軽度なリンパ性過形成が生じたが, これらのすべては休薬により完全に回復した 更に, 皮膚病変の治癒は投与継続でもみられた 単核細胞浸潤 / 炎症は, サルに通常みられる自然発生性変化の悪化と考えられた 5, 6 無毒性量は 0.3 mg/kg/ 日と考えられた ( サキサグリプチン及び BMS それぞれの全身暴露 AUC は, 雄では 200 及び 480 ng h/ml, 雌では 79 及び 504 ng h/ml) 毒性試験の概要文 : 反復投与毒性試験 27

28 遺伝毒性試験サキサグリプチン及び代謝物の BMS の遺伝毒性について, ネズミチフス菌及び / 又は大腸菌を用いた探索的及び典型的 Ames 復帰変異試験, ラットを用いた経口投与 DNA 修復及び小核試験を含む, 一連の in vitro 及び in vivo 試験によって評価した 陽性対照及び陰性対照については概要表に記載した In vitro 試験 (GLP 適用, 一部非適用 ) サキサグリプチンの in vitro 試験 (1) ネズミチフス菌における探索的 Ames 復帰変異試験 (GLP 非適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) DMSO に溶解したサキサグリプチンを, ラット肝臓 S9 代謝活性化あり及びなしの条件で Salmonella typhimurium の TA98 及び TA100 株を用いて 5~5000 μg/plate の用量で評価した 適切な陽性及び陰性対照を実験の中で評価した サキサグリプチンは TA100 株の 5000 μg/plate の用量においてのみ細胞毒性 ( 細菌叢の密度減少 ) を示した サキサグリプチン処置でみられた復帰突然変異コロニー数は陰性対照群と同様であった したがって,ICH ガイドラインで要求されている最高用量まで評価したが, サキサグリプチンに変異原性は認められなかった (2) ネズミチフス菌及び大腸菌における Ames 復帰変異試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチン安息香酸塩について,Salmonella typhimurium の TA98,TA100,TA1535 及び TA1537 株,Escherichia coli の WP2uvrA 株におけるフレームシフト又は塩基対置換変異誘発性を評価した 不純物 / 分解物である類縁物質 A* の安全性確認の目的で,0.98%(w/w) の濃度で類縁物質 A* を処置溶液に添加した 適切な陽性及び陰性対照を実験の中で評価した 評価は, 最高 5000 μg/plate までの用量で,Aroclor 誘発ラット肝臓 S9 による代謝活性化あり及びなしの条件でプレート法にて実施した 主試験において,TA98 株でごく軽度な細胞毒性が最高用量 5000 μg/plate でみられた 他の細菌株では用量設定試験及び主試験のいずれにおいても細胞毒性は認められなかった サキサグリプチン処置による復帰突然変異コロニー平均数は陰性対照群と同様であった したがって,ICH ガイドラインで要求されている最高用量まで評価したが, 0.98% の類縁物質 A* を含むサキサグリプチンに変異原性は認められなかった 類縁物質 E* (3) ヒト初代培養リンパ球を用いた染色体異常試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) 不純物 / 分解物であるを 1.6% 含むサキサグリプチン安息香酸塩について,S9 を用いた代謝活性化有又は無の両条件下で, ヒト初代培養リンパ球を用いて染色体異常誘発能を評価した サキサグリプチンの DMSO への溶解性及び用量設定試験で得られた細胞毒性結果を基に, 125~1000 μg/ml の濃度で, 代謝活性化なしで 24 時間処置,Aroclor 誘発ラット肝臓 S9 による代 毒性試験の概要文 : 遺伝毒性試験 28 *: 新薬承認情報提供時に置き換えた

29 謝活性化ありで 5 時間処置その後 19 時間回復, という条件で評価した 適切な陽性及び陰性対照を実験の中で評価した 代謝活性化なしの 24 時間処置において, 染色体構造異常を持つ細胞の出現頻度に統計学的に有意な増加はみられなかった しかしながら, 最高濃度 (1000 μg/ml) でごく軽度な染色体異常頻度の増加 ( 統計学的に有意ではない : 対照群の 1% に対して 6%) がみられた 試験を繰り返したところ, 再度, 最高濃度 (1000 μg/ml) で統計学的に有意な染色体構造異常細胞の出現頻度の増加 ( 対照群の 3.5% に対して 9.5%) がみられた 両試験において, 細胞分裂指数が濃度依存的に減少し,1000 μg/ml では約 40%(1 回目の試験 ) 及び 53%(2 回目試験 ) の最大減少がみられた S9 代謝活性化ありの 5 時間処置では, いずれの濃度においても染色体構造異常細胞の出現頻度に統計学的に有意な増加はみられなかった サキサグリプチン処置群では対照群に比べて約 3~ 9% の細胞分裂指数のごく軽度な低下がみられた 結論として, 不純物 / 分解物である類縁物質 A* を 1.6% 含むサキサグリプチンは, ヒトリンパ球に対して細胞毒性を引き起こす 1000 μg/ml の濃度で染色体異常誘発作用を示した 低濃度において染色体異常誘発作用はみられなかった 主要代謝物 BMS の In vitro 試験 (1) ネズミチフス菌及び大腸菌における復帰変異試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチンの主要活性代謝物である BMS の変異原性を評価した GLP 非適用の用量設定試験において,Salmonella typhimurium の TA98,TA100,TA1535 及び TA1537 株,Escherichia coli の WP2uvrA 株を用い,Aroclor 誘発ラット肝臓 S9 による代謝活性化あり及びなしの条件で, 10~5000 μg/plate までの用量でプレート法にて評価した 細胞毒性が TA1537 株においてのみ,S9 代謝活性化ありの最高用量でみられた BMS 処置による復帰突然変異コロニー平均数は陰性対照群と同様であった 主試験において,Salmonella typhimurium の TA98,TA100,TA1535 及び TA1537 株,Escherichia coli の WP2uvrA 株を用い,S9 代謝活性化あり及びなしの条件で,250,500,1000,1600,3000, 5000 μg/plate の用量でプレート法にて BMS を評価した 細胞毒性が TA100 及び TA1537 株において,S9 代謝活性化あり及びなしの最高用量でみられた BMS 処置による復帰突然変異コロニー平均数は陰性対照群と同様であった 結論として,ICH ガイドラインで要求されている最高用量まで評価したが,BMS に変異原性は認められなかった In vivo 試験 (GLP 適用 ) 雄ラットを用いた経口投与小核試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチンの in vivo 遺伝毒性を評価した 各群雄 5 匹の Harlan Sprague Dawley ラットに 1.25% Avicel 溶液 ( 媒体 ) に懸濁したサキサグリプチン安息香酸塩を,1500 及び 2000 mg/kg/ 日 ( 初回試験 : 不純物 / 分解物である類縁物質 A* を 0.09% 含有 ) で, 又は 500 及び 1000 mg/kg/ 日 (2 回 毒性試験の概要文 : 遺伝毒性試験 29 *: 新薬承認情報提供時に置き換えた

30 目試験 : 不純物 / 分解物である類縁物質 A* を含有しない ) で,3 日連続経口投与した 対照群には 1.25% Avicel 溶液を他と同じように投与した 陽性対照のシクロフォスファミドは 7 mg/kg/ 日を腹腔内投与した 最終投与 24 時間後に大腿骨骨髄を採取し, 多染性赤血球中の小核発現頻度を測定した 初回試験において,1500 mg/kg/ 日では 1 匹が,2000 mg/kg/ 日では 3 匹が死亡した 1500 mg/kg/ 日の用量において, 多染性赤血球 (PCE) 数の減少によって測定される骨髄毒性はみられず, 小核多染性赤血球 (MN-PCE) の発現頻度 ( 対照群と同じ 0.09%) の結果から, 遺伝毒性は認められないことが示された 2000 mg/kg/ 日では死亡例が多く, 意味のある遺伝毒性評価はできなかった 2 回目の試験において, サキサグリプチン 500 及び 1000 mg/kg/ 日では死亡はみられなかった 骨髄毒性はみられず, 平均 MN-PCE 頻度 (500 mg/kg/ 日で 0.13%,1000 mg/kg/ 日で 0.12%) は対照群 (0.13%) と同等であった 結論として, サキサグリプチン ( 類縁物質 A* を 0.09% 含む ) は 3 日間 1500 mg/kg/ 日まで経口投与されたラットの骨髄における小核試験において遺伝毒性を示さなかった 雄ラットを用いた経口投与 DNA 修復試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) 不純物 / 分解物である類縁物質 A* を 0.2% 含有するサキサグリプチン安息香酸塩を 1.25% Avicel 溶液 ( 媒体 ) に懸濁して, 雄の Harlan Sprague Dawley ラットに経口投与し, その肝細胞における不定期 DNA 合成 (UDS) の誘導能を評価した 陰性対照群には 1.25% Avicel 溶液を, 陽性対照群にはジメチルニトロサミンを投与した UDS 評価用の肝細胞は, サキサグリプチンに 2 ~4 時間暴露 (250,500,1000,1500 mg/kg) 又は 12~16 時間暴露 (340,680,1360,1500 mg/kg) されたラットから採取した 2 つの暴露条件での用量の違いは希釈の誤りによる 2~4 時間暴露の 1500 mg/kg で 6 例中 1 例,12~16 時間暴露の 680 mg/kg で 5 例中 1 例及び 1500 mg/kg で 6 例中 2 例が死亡した 類縁物質 A* を 0.2% 含有するサキサグリプチンは,2~4 時間暴露及び 12~16 時間暴露後に分離された肝細胞において, 実質核内粒子数の平均値に有意な増加 ( 陰性対照群と比較し少なくとも 5 以上の増加として定義される ) をもたらさなかった したがって, 類縁物質 A* を 0.2% 含有するサキサグリプチンは 1500 mg/kg までの用量において DNA 傷害 ( 雄ラット肝細胞における UDS によって評価された ) を引き起こさないと結論された ラットを用いた 1 ヵ月経口投与 in vivo/in vitro 末梢リンパ球染色体異常試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチンを 1 ヵ月間反復経口投与されたラットの末梢リンパ球を用い, サキサグリプチンの染色体異常誘発能を評価した サキサグリプチンフリー体を水に溶解し, 各群雌雄 10 匹の Harlan Sprague Dawley 系ラットに 75,150,300,500 mg/kg/ 日の用量で投与した 対照群 ( 雌雄 10 匹 ) には, 逆浸透水を 10 ml/kg 投与した 陽性対照群 ( 雌雄 10 匹 ) として, シクロフォスファミド 60 mg/kg を安楽殺の約 24 時間前に単回経口投与した 投与 28 日目の投与後に血漿中薬物濃度 ( サキサグリプチン及び BMS ) の測定のため, 更に染色体異常分析のために最終投 毒性試験の概要文 : 遺伝毒性試験 30 *: 新薬承認情報提供時に置き換えた

31 与の 24 時間以内にすべての群から末梢血を採取した 150,300,500 mg/kg/ 日の用量で適切な生存例数が確保できたので,75 mg/kg/ 日群では血漿中薬物濃度測定及び染色体異常評価を実施しなかった サキサグリプチン及び BMS の全身暴露 AUC 及び C max は用量に比例し, 雌は雄よりも高かった 500 mg/kg/ 日においてサキサグリプチンの C max は ng/ml まで,AUC は ng h/ml まで達していた すべての用量において,BMS の AUC はサキサグリプチンの 0.1 ~0.3 倍であった 500 mg/kg/ 日を投与された雄 2 匹が投与 1 及び 2 日に死亡した 2 番目の死亡例の死亡前には, 振戦, 横臥, 労作呼吸, 赤色分泌物 ( 鼻 / 口 ), 黄色被毛がみられた 同様な臨床症状が,500 mg/kg/ 日の雄 1-2 例に散発的に観察された サキサグリプチン投与ラットにおける, 染色体構造異常を持つ細胞数の頻度に統計学的に有意な増加は認められず ( 対照群 0.2% に対して 0~0.8%), その頻度はこの試験実施施設における BMS 社用試験での媒体対照背景値の範囲内 (0~2%) であった 結論として,500 mg/kg/ 日までの用量で 1 ヵ月間経口投与された雌雄のラットの末梢リンパ球において, サキサグリプチンは染色体構造異常誘発性を示さなかった ( サキサグリプチンの C max は ng/ml まで,AUC は ng h/ml まで ) 毒性試験の概要文 : 遺伝毒性試験 31

32 がん原性試験サキサグリプチンのがん原性をマウス及びラットを用いた 104 週間経口投与によって評価した サキサグリプチン及び BMS の平均定常状態全身暴露を投与 6 ヵ月後に測定した ヒト, マウス, ラットにおける AUC の比較と安全域を以下の表 ( 表 ) に示した 表 マウス及びラットにおけるがん原性試験における定常 AUC 暴露と安全域用量 AUC (ng h/ml) a ヒト暴露量との比較 ( 倍 ) b 試験動物種 (mg/k サキサク リフ チン BMS サキサク リフ チン BMS ( 採材時期 ) g) 雄雌雄雌雄雌雄雌 マウス ラット 104 週 (26 週 ) 104 週 (26 週 ) c c c a 計算は 0 時から血漿中に検出された最終時までで実施した その範囲は 8~24 時間 初回試験のデータを示している b ヒト 5 mg 投与時の AUC は, サキサグリプチンは 78 ng h/ml,bms は 214 ng h/ml (CV181037) BMS の最初の分析法とより特異的な分析法との違いを評価したブリッジングトキシコキネティクス試験 ( 詳細は第 項 ) に基づくと, 最初の分析法では AUC をマウスでは 9.6~20.8%, ラットでは 4.4~ 42.7% まで過大評価していたことが判明した この暴露の違いはヒトの安全性評価に衝撃を与えるものではなかったので, 最初のデータと暴露倍率を示した c 薬物に関連する腫瘍に対する無作用量 雄ラットにおいては,300 mg/kg/ 日群は早期に終了したためがん原性評価の最高用量は 150 mg/kg/ 日 < 概要表 トキシコキネティクス項より抜粋 > マウス 3 ヵ月経口投与用量設定試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチン安息香酸塩を 1.25%Avicel 溶液 ( 媒体 ) に懸濁し,30,100,300,600,1000, 1500 mg/kg の投与量で 1 日 1 回, 各群雌雄 10 匹の CD-1 マウスに 3 ヵ月間投与した 雌雄各 10 匹からなる対照群 2 群には, 媒体 1.25%Avicel を他の群と同量 (6 又は 8 ml/kg) 投与した 生存段階における各種観察, 血液学, 血清生化学, 器官重量, 剖検, 対照群と最高用量群では組織学的検査によって評価を行った サキサグリプチン及び BMS の血漿中濃度を投与 29 日に測定し, 全身暴露を評価した サキサグリプチン及び BMS の全身暴露は用量に比例して増加し, 性差は見られなかった BMS の暴露 (AUC) は未変化体の 1.5~6.8 倍を示し, 低用量ほどその開きは大きかった 毒性試験の概要文 : がん原性試験 32

33 300 mg/kg までの用量では薬物に関連した変化はみられなかった 600 mg/kg 以上において, 薬物に関連した変化として, 血清アルブミンのごく軽度から軽度の低下, ごく軽度な肺組織球症, 組織学的変化を伴わない肝臓重量の増加 (600 mg/kg/ 日 [ 雄 ],1500 mg/kg/ 日 ), 重量低下を伴うストレス関連の胸腺萎縮 (1500 mg/kg/ 日 ) がみられた 1000 及び 1500 mg/kg/ 日において, 薬物に関連した変化として瀕死及び死亡, 活動性低下, 後肢の腫脹 (1000 mg/kg/ 日の雄 1 例 ), 雄において血清コレステロール及びトリグリセライドのごく軽度から軽度な減少がみられた 更に 1500 mg/kg/ 日では, 虚脱, 無活動, 呼吸困難, 腹部膨満, ごく軽度な血清グロブリンの増加と A/G 比低下, 雄において組織学的変化を伴わない脾臓重量のごく軽度な増加がみられた 無作用量は 300 mg/kg/ 日であった ( サキサグリプチンの全身暴露 AUC は, 雄で ng h/ml, 雌で ng h/ml) マウス 104 週間反復強制経口投与がん原性試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチンフリー体を酸性水に溶解し,50,250,600 mg/kg/ 日の用量で各群雌雄 60 匹の Crl:CD-1 マウスに 104 週間反復経口投与した 対照群として,1 群雌雄 60 匹からなる 2 つの群に酸性水を 5 ml/kg/ 日投与した 投与量はマウスにおける 3 ヵ月用量設定試験の結果に基づいて設定した ( 第 項 ) 死亡, 臨床観察 ( 肉眼的又は触診による腫瘤の観察を含む ), 体重, 摂餌量, 血液学検査 ( 剖検時 : 数例の死亡雄にみられた感染を特徴付けるため ), 剖検及び病理組織学的検査によって評価した 雄では,250 及び 600 mg/kg/ 日において早期に多くの死亡がみられたため, 生存例が約 25% になった段階で投与終了時剖検を実施した (600 mg/kg/ 日群の雄は投与 90 週, 残りの雄全群は投与 100 週 ) 雌は全群,104 週投与後に剖検した サキサグリプチン及び BMS の血漿中濃度を投与 6 ヵ月目にサテライト群のマウスを用いて測定した がん原性の評価として, 生存率に対する薬物の影響及び腫瘍性病変の発生 (Peto-Pike 傾向検定 ) を含めた 50~600 mg/kg/ 日投与後のサキサグリプチン及び BMS のマウスにおける全身暴露は用量の増加に伴って増加したが, その C max 及び AUC は用量の増加よりも大きく増加していた ( 表 ) 暴露に一貫した性差はみられなかった BMS の暴露はサキサグリプチンの暴露の 1.4~3.9 倍であった 薬物に関連した臨床症状はみられず, 体重, 摂餌量, 血液学的パラメーターにも有害な影響はみられなかった 250 及び 600 mg/kg/ 日の雄では, 用量に依存した死亡率の増加がみられ,600 mg/kg/ 日群は投与 90 週に, 残りの雄全群は投与 100 週に早期終了した (250 mg/kg/ 日の雄でその生存率が約 25% に達した時点において,2 つの対照群及び 50 mg/kg/ 日群のそれぞれの生存率は 51,38,36% であった ) 雄マウスにおける早期死亡の原因は特定されていないが, その生存率及び投与期間は以下のことよりがん原性評価に十分なものと考えられた 医薬品のがん原性試験に関するガイドラインの改正について ( 薬食審査発第 号, 平成 20 年 11 月 27 日 ) によれば, マウスの投与期間は 18 ヵ月 (78 週 ) 以上 24 ヵ月以内とされており, 更に, その注釈の記載内容から試験成績の評価には生存率 25% 以上を確保することが望ましいものと考えられた したがって,600 mg/kg/ 日群では生存率が 25% まで低下した投与 90 週に投与を終了し, その後 250 mg/kg/ 日群で生 毒性試験の概要文 : がん原性試験 33

34 存率が約 25% にまで低下した投与 100 週に対照群を含めたすべての雄性群で投与を終了したことは適切であったと考える なお, この早期試験終了は米国 FDA の Executive Carcinogenicity Assessment Committee (ECAC) から承認を得た上で実施した 投与 104 週後, 雌の生存率は 2 つの対照群が 22% 及び 28%,50 mg/kg/ 日群が 33%,250 mg/kg/ 日群が 27%,600 mg/kg/ 日群が 27% であった いずれの用量においても, 腫瘍発生率に対照群と統計学的に有意な差はみられなかった すべての群において, 非腫瘍性所見は同様であった 結論として, サキサグリプチンは約 104 週間 600 mg/kg/ 日までの用量を投与されたマウスに対してがん原性を示さなかった 250 及び 600 mg/kg/ 日の雄で生存率が低下したが, 雄では 90 週以上, 雌では 104 週間, 十分な生存率が維持されたので, これらの用量におけるサキサグリプチンのがん原性の評価に悪影響は与えなかった 更に, いずれの用量においても標的臓器毒性は認められなかった 600 mg/kg/ 日でのサキサグリプチンの定常時全身暴露 AUC は, 雄で ng h/ml, 雌で ng h/ml であった ラット 3 ヵ月経口投与用量設定試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) ラットがん原性試験の用量選択に使用された 3 ヵ月経口投与用量設定試験は, 第 項に記載した ラット 104 週間反復強制経口投与がん原性試験 (GLP 適用 ) ( 概要表 , 報告書番号 ) サキサグリプチンフリー体を酸性水に溶解し,25,75,150,300 mg/kg/ 日の用量で各群雌雄 60 匹の Harlan Sprague Dawley ラットに最長で 104 週間まで反復経口投与した 対照群として,1 群雌雄 60 匹からなる 2 つの群に酸性水を 5 ml/kg/ 日投与した 投与量はラットにおける 3 ヵ月用量設定試験の結果に基づいて設定した ( 第 項 ) 死亡, 臨床観察 ( 肉眼的又は触診による腫瘤の観察を含む ), 体重, 摂餌量, 剖検及び病理組織学的検査によって評価した 300 mg/kg/ 日の雄において早期に多くの死亡がみられたため投与 68 週に剖検し, がん原性の評価からは除外した 雌は全群, 投与 105 週目に剖検した サキサグリプチン及び BMS の血漿中濃度を投与 6 ヵ月目に試験動物の一部を用いて測定した がん原性の評価として, 生存率に対する薬物の影響及び腫瘍性病変の発生 (Peto-Pike 傾向検定 ) を含めた サキサグリプチン及び BMS の平均 C max 及び AUC は雌雄とも, 全般的に用量に比例して増加した ( 表 ) 300 mg/kg/ 日では雌雄で BMS の全身暴露が同様であった以外, サキサグリプチン及び BMS の全身暴露 (AUC) は, 雄に比べて雌が約 1.7~2.9 倍であった BMS の暴露 (AUC) はサキサグリプチンの暴露の約 0.2~0.4 倍であった 300 mg/kg/ 日の雄は, その生存率が 25% に達した投与 68 週に終了させた 残りの雄全群はその生存率が 2 つの対照群で 22% 及び 15%,25 mg/kg/ 日群が 35%,75 mg/kg/ 日群が 27%,150 mg/kg/ 日群が 27% になった投与 99 週に剖検したが, 以下のことよりその生存率及び投与期間は発がん性 毒性試験の概要文 : がん原性試験 34

35 評価に十分なものと考えられた 医薬品のがん原性試験に関するガイドラインの改正について ( 薬食審査発第 号, 平成 20 年 11 月 27 日 ) の注釈には, 最低用量群又は対照群の動物の雌雄いずれか一方において累積死亡率が 75% になった場合には, その時点でその性の生存例を屠殺し, 試験を終了する との記載がある したがって, 雄において対照群の生存率が 25% を下回った時点で雄全群の最終屠殺 ( 投与 99 週 ) が決定されたことは適切であり, その時点での評価対象最高用量 150 mg/kg/ 日群での生存率 27% は, 試験成績の評価に適切と考えられる生存率 25% 以上を確保しており, 本薬のがん原性を評価する上で問題は無いと考える なお, この早期試験終了は米国 FDA の Executive Carcinogenicity Assessment Committee (ECAC) からの推奨に従って実施した 投与 104 週後, 雌の生存率は 2 つの対照群が 43% 及び 42%,25 mg/kg/ 日群が 45%,75 mg/kg/ 日群が 50%,150 mg/kg/ 日群が 47%,300 mg/kg/ 日群が 50% であった 300 mg/kg/ 日の雄では, 死亡率の増加に加えて, 振戦, 呼吸異常 ( 聞き取れる, 不規則又は労作 ), 及び横臥 ( シアン毒性及びサキサグリプチンの同様の用量で以前にみられた変化に一致 ), 体重減少 ( 剖検前において対照群と比べて 21% 減少 ) がみられた 評価したいずれの用量においても, 腫瘍発生率に対照群と統計学的に有意な差はみられなかった 計画屠殺及び非計画的屠殺されたラットにおいて, 薬物に関連した非腫瘍性組織学的所見が脳 ( 雄 ), 肺, 眼付属腺, 精巣上体, 膀胱及び肝臓にみられた 対照群と比べて, 限局性単核細胞浸潤の数及び分布にごく軽度な増加が以下の組織に認められた : 肺 ( 肺組織球症, 雌 75 mg/kg/ 日以上 ), 膀胱 ( 雌 150 mg/kg/ 日以上, 雄 300 mg/kg/ 日 ), 眼付属腺 ( 雌 150 mg/kg/ 日以上 ), 肝臓 ( 雄 150 mg/kg/ 日 ), 精巣上体 ( 雄 300 mg/kg/ 日 ) 単核細胞浸潤は, 以前実施したラット試験の肺, 眼付属腺, 肝臓において同様の程度でみられていた 薬物に関連した脳の組織学的所見は 150 mg/kg/ 日以上の雄に限られ, 脳梁, 尾状核被殻, 頻度は低いが視床,300 mg/kg/ 日では更に梨状 / 側頭皮質にみられた その所見の主な特徴は, 神経網変性 / 粗化, 格子細胞細胞質内にミエリン分解物及び細胞破片を持つ神経膠症であった 脳病変及びそれの発生した用量は慢性探索的 CNS 試験 ( 第 (1) 項参照 ) でみられたものと同じであった この慢性探索的 CNS 試験において, 雄ラット脳病変はシアン毒性によるものとされ,300 mg/kg/ 日の雄ラットにおける生存率の低下のもっともらしい原因と考えられた 更に, 慢性探索的 CNS 試験と同様に, 雌においてはその全身暴露がより高いにも関わらず, このがん原性試験のいずれの用量においても脳病変は発生しなかった 結論として, 雄では 150 mg/kg/ 日まで, 雌では 300 mg/kg/ 日までの用量で約 104 週間投与されたラットに対し, サキサグリプチンはがん原性を示さなかった 300 mg/kg/ 日の雄において生存率が低下したが, 他の雄では 99 週間, 雌では 104 週間, 十分な生存率が維持されたので, その低下はがん原性の評価に悪い影響は及ぼさなかった 短期の試験と一致して, 主な薬物関連の非腫瘍性変化は 75 mg/kg/ 日以上でのごく軽度な多組織性単核細胞浸潤, 慢性 CNS 試験と一致する雄における 150 mg/kg/ 日以上での神経変性脳病変がみられたが, 新たな所見はみられなかった がん原性に対する無作用量におけるサキサグリプチンの全身暴露 AUC は, 雄で ng h/ml, 雌で ng h/ml であった 毒性試験の概要文 : がん原性試験 35