LABScreen による抗体検査 一般財団法人 HLA 研究所 二神貴臣
解析方法 ほとんどの施設が使用している single antigen のデータを中心に解析 抗体特異性の判定結果は参加全施設の結果の 2/3 以上満たしたものを consensus 判定として評価 consensus が得られないものは判定保留とした 判定不一致となった抗原の蛍光値 () を解析し いくつかを例示した
参加施設の検査概要および結果 Lab ID 輸血関連 臓器移植 造血細胞 その他 Mixed I&II Multi I&II LABScreen(Lot) PRA I II single I II combi class-i 抗体有無 (IgG) class-ii G M G M G M G M G M G M 240 2402 2403 2404 240 2402 2403 2404 24S0 7 9 8 8 8 8 8 8 8 8 24S03 7 9 8 8 8 8 8 24S04 7 7 9 8 8 8 8 8 8 8 24S05 4 4 3 3 7 7 9 9 8 8 8 8 8 24S08 4 3 6 8 8 8 8 8 8 24S 3 7 9 8 8 8 8 8 24S2 7 7 9 9 8 8 8 8 8 8 8 8 24S3 7 7 8 8 8 8 8 8 24S4 7 9 8 8 8 8 8 24S5 7 7 8 8 8 8 8 8 24S6 6 7 7 9 9 8 4 8 8 8 4 8 24S2 7 4 3 7 9 8 8 8 8 8 24S22 7 9 8 8 8 8 8 24S23 7 9 8 8 8 8 8 24S24 7 7 8 8 8 24S25 7 8 8 8 8 8 8 8 24S30 7 9 8 8 8 8 8 8 24S3 7 9 8 8 8 8 8 24S32 7 8 8 8 24S33 7 8 8 8 8 8 4 8 24S37 2 7 8 8 8 8 8 8 参加数 6 0 0 3 4 20 4 7 3
参加施設の検査環境 Lab ID 輸血関連 臓器移植 造血細胞 その他 サンプル処理記録 A: 非特異反応吸着処理 D: 希釈 (+ 希釈倍数 ) F: フィルターろ過 H: 熱非働化 E:EDTA 添加 Luminex ver 判定ソフト カットオフ計算方法 O: その他処理 240 2402 2403 2404 24S0 IS2.3 HLA Fusion2.0 デフォルト 24S03 IS2.3 HLA Fusion デフォルト 24S04 F F,A F F IS2.3 HLA Fusion デフォルト 24S05 A,EA A,EA A,EA A,EA IS2.3 HLA Fusion デフォルト 24S08 AE E AE E.7 自家製 蛍光値 PRA:500,single:( 一部 CI900,CII600) 24S IS2.3 HLA Fusion2.0 raw( 変更有 ) 数値あり 24S2 A A A A.7 HLA Fusion BNV( 変更有 ) single:g:500,m: 24S3 IS2.3 HLA Fusion デフォルト 24S4 A A A A IS2.3 HLA Fusion2.0 Baseline() single: 24S5 A A A IS2.3 HLA Fusion BNV( 変更有 ) 数値あり カットオフ値 24S6 A A IS2.3 HLA Fusion BNV( 変更有 ) single:g:2000,m:2000 24S2 A A A A IS2.3 HLA Fusion2.0 B() 24S22 IS2.3 HLA Fusion BNV( 変更有 ) 2000 24S23 IS2.3 HLA Fusion raw( 変更有 ) 24S24 E E E E IS2.3 HLA Fusion BNV( 変更有 ) single:g:,m:5000 24S25 E E E E IS2.3 HLA Fusion デフォルト 24S30 IS2.3 HLA Fusion Baseline( 変更有 ) 数値あり 24S3 IS2.3 HLA Fusion2.0 デフォルト 24S32 A A A A IS2.3 HLA Fusion デフォルト 24S33.7 HLA Fusion デフォルト 24S37 IS2.3 HLA Fusion2.0 BNV&Ratio( 変更有 ) 数値あり,ratio:3
Mixed の反応性 SH240(IgG) SH2402(IgG) SH2403(IgG) SH2404(IgG) S04 S3 S5 S2 S33 0 5 5 20 0 5 5 20 0 5 5 20 0 5 5 20
抗原別陽性率 ClassⅠ (SH240)
抗原別陽性率 ClassⅠ(SH2402)
抗原別陽性率 ClassⅠ(SH2403)
抗原別陽性率 ClassⅠ(SH2404)
4 7 3 6 9 23 26 29 32 35 38 4 44 47 50 53 56 59 62 65 68 7 74 77 80 83 86 89 92 95 98 Single Antigen, Beads 毎の反応性 (SH240) SH240-ClassI (IgG) B53 B75 B5 B75 A23 B8 B35 c u toff( 5 0 0-0 0 0 ) B6 B64 B62 B76 B65 B72 B7 B39 B60 B8 B46 B50 B67 B4 B45 B48 Bead#(lot7+lot6) Cw7 B6 S0 S03 S04 S05 S08 S S2 S3 S3 S4 S5 S6 S2 S22 S23 S24 S25 S30 S3 S32 S32 S37 不一致あり陽性 不一致あり陰性 判定保留
4 7 3 6 9 23 26 29 32 35 38 4 44 47 50 53 56 59 62 65 68 7 74 77 80 83 86 89 92 95 98 Single Antigen, Beads 毎の反応性 (SH2402) A2 A23 A24 A68 A69 B8 SH2402-ClassI (IgG) B37 B44 B82 S0 S03 S04 S04 S S2 c u to ff( 5 0 0-0 0 0 ) S3 S4 S5 S6 S2 S22 S23 S24 S25 S30 S3 S32 Bead#(lot7) S32 不一致あり陽性 不一致あり陰性 判定保留
4 7 3 6 9 23 26 29 32 35 38 4 44 47 50 53 56 59 62 65 68 7 74 77 80 83 86 89 92 95 98 Single Antigen, Beads 毎の反応性 (SH2403) A23 A24 A34 B7 SH2403-ClassI (IgG) B59 Cw2 Cw2 Cw8 S0 S03 S04 S05 S08 S S2 S3 c u to ff( 5 0 0-0 0 0 ) S4 S5 S6 S2 S22 A3 B32 A66 B55 Cw5 Cw6 S23 S24 S25 S30 S3 S32 S32 Bead#(lot7+lot6) S37 不一致あり陽性 不一致あり陰性 判定保留
4 7 3 6 9 23 26 29 32 35 38 4 44 47 50 53 56 59 62 65 68 7 74 77 80 83 86 89 92 95 98 Single Antigen, Beads 毎の反応性 (SH2404) A23 A24 B8 SH2404-ClassI (IgG) B77 Cw9 Cw8 Cw6 S0 S03 S04 S05 S08 S S2 S3 c u toff( 5 0 0-0 0 0 ) S4 S5 S6 S2 S22 S23 B7 Cw6 S24 S25 S30 S3 S32 Bead#(lot7+lot6) S32 S37 不一致あり陽性 不一致あり陰性 判定保留
抗原別陽性率 ClassⅡ(SH240,SH2402)
抗原別陽性率 ClassⅡ(SH2403,SH2404)
4 7 3 6 9 22 25 28 3 34 37 40 43 46 49 52 55 58 6 64 67 70 73 76 79 82 85 88 92 96 4 7 3 6 9 22 25 28 3 35 38 4 44 47 50 53 56 59 62 66 69 72 77 80 83 86 90 93 96 Single Antigen, Beads 毎の反応性 (SH240) DQ4 SH240-ClassII (IgG) DQ2 S0 S03 S04 S05 c u to ff( 5 0 0-0 0 0 ) S S2 S4 S6 S2 DR S22 S23 S3 Bead#(lot9) SH240-ClassII (IgG) c u toff( 5 0 0-0 0 0 ) 24S08 24S3 24S5 24S25 24S37 Bead#(lot8) 不一致あり陽性 不一致あり陰性 判定保留
4 7 3 6 9 22 25 28 3 34 37 40 43 46 49 52 55 58 6 64 67 70 73 76 79 82 85 88 92 96 4 7 3 6 9 22 25 28 3 35 38 4 44 47 50 53 56 59 62 66 69 72 77 80 83 86 90 93 96 Single Antigen, Beads 毎の反応性 (SH2402) SH2402-ClassII (IgG) DQ2 DQ4 DQ4 S0 S03 S04 c u to ff( 5 0 0-0 0 0 ) S04 S2 S4 S6 S2 DR DP28 S22 S23 S3 Bead#(lot9) SH2402-ClassII (IgG) c u toff( 5 0 0-0 0 0 ) 24S3 24S25 Bead#(lot8) 不一致あり陽性 不一致あり陰性 判定保留
4 7 3 6 9 22 25 28 3 34 37 40 43 46 49 52 55 58 6 64 67 70 73 76 79 82 85 88 92 96 4 7 3 6 9 22 25 28 3 34 37 40 43 46 49 52 55 58 6 64 67 70 73 76 79 82 85 88 9 Single Antigen, Beads 毎の反応性 (SH2403) SH2403-ClassII (IgG) DQ2 DQ4 S0 S03 c u to ff( 5 0 0-0 0 0 ) S2 S4 S6 DR53 DQ6 DQ9 DQ7 DQ8 S2 S22 S23 S3 Bead#(lot9) SH2403-ClassII (IgG) c u toff( 5 0 0-0 0 0 ) 24S3 24S25 DQ7 Bead#(lot8) 不一致あり陽性 不一致あり陰性 判定保留
4 7 3 6 9 22 25 28 3 34 37 40 43 46 49 52 55 58 6 64 67 70 73 76 79 82 85 88 92 96 4 7 3 6 9 22 25 28 3 35 38 4 44 47 50 53 56 59 62 66 69 72 77 80 83 86 90 93 96 Single Antigen, Beads 毎の反応性 (SH2404) SH2404-ClassII (IgG) DQ4 DQ4 S0S2 S03S2 S04S2 S05S2 c u toff( 5 0 0-0 0 0 ) SS2 S2S2 S4G2 S6S2 S2P2 S22S2 S23S2 DR52 S3S2 Bead#(lot9) SH2404-ClassII (IgG) c u toff( 5 0 0-0 0 0 ) 24S08 24S3 24S5 24S25 24S37 Bead#(lot8) 不一致あり陽性 不一致あり陰性 判定保留
Cutoff の差による判定不一致例 600 500 400 300 200 0 4500 4000 3500 3000 2500 2000 500 500 0 2500 SH2402(A2) S0 S03 S04 S04 S S2 S3 S4 S5 S6 S2 S22 S23 S24 S25 S30 S3 S32 S32 施設 SH240(A23) S0 S03 S04 S05 S08 S S2 S3 S3 S4 S5 S6 S2 S22 S23 S24 S25 S30 S3 S32 S32 S37 施設 SH2402(B37) 2000 500 500 0 S0 S03 S04 S04 S S2 S3 S4 S5 S6 S2 S22 S23 S24 S25 S30 S3 S32 S32 施設 Cutoff Cutoff Cutoff Cutoff Cutoff Threshold 4? Threshold 6? 500 前後
average 各施設の のバラツキ ClassⅠ Positive Control beads (classi) 20000 8000 6000 SH240 SH2402 SH2403 SH2404 NC 4000 2000 ±2SD 8000 6000 4000 2000 0 ave S0 S03 S04 S04 S05 S08 S S2 S3 S3 S4 S5 S6 S2 S22 S23 S24 S25 S30 S3 S32 S32 S37 施設 200% 80% 60% 40% 20% % 80% 60% 40% 20% 0% ave S0 S03 S04 S05 S08 S S2 S3 S3 S4 S5 HLA positive beads average lab S6 S2 S22 S23 S24 S25 S30 S3 S32 S32 S37 SH240 SH2402 SH2403 SH2404 ±2SD
average 各施設の のバラツキ ClassⅡ 8000 6000 Positive Control beads ( classii ) lot9 lot8 SH240 SH2402 SH2403 SH2404 NC 4000 2000 ±2SD 8000 6000 4000 2000 0 ave(lot9) S0 S03 S04 S04 S05 S S2 S4 S6 S2 S22 施設 S23 S3 ave(lot8) S08 S3 S5 S5 S25 S37 60% 40% HLA positive beads average SH240 SH2402 SH2403 SH2404 20% % 80% 60% 40% 20% 0% ave(lot9) S0 S03 S04 S05 S S2 S4 S6 S2 S22 S23 lab S3 ave(lot8) S08 S3 S5 S25 S37 ±2SD
記入ミスと思われる例 Cw6 と Cw8 を入れ違えて記入? 施設 :24S2 sample:sh2404 判定 :Cw6 = 陽性, Cw8 = 陰性 Cw6 = 9, Cw8 = 643 陰性 と記入するところを と記入 施設 : 24S03 sample:sh2404 A43 = 69
コンタミが疑われる例 Negatve Control Serum の (A*23:0,A*24:02) SH2402 の (A*23:0,A*24:02) 4000 3500 3000 2500 2000 500 500 0 A*23:0 A*24:02 S0 S03 S04 S04 S05 S2 S3 S3 S4 S5 S5 S6 S2 S22 S23 S24 S25 S30 S3 S32 S37 5000 4500 4000 3500 3000 2500 2000 500 500 0 A*23:0 A*24:02 RA2403 S0 S03 S04 S04 S S2 S3 S4 S5 S6 S2 S22 S23 S24 S25 S30 S3 S32 S32 SH2403 の (A*23:0,A*24:02) SH2404 の (A*23:0,A*24:02) 5000 4500 4000 3500 3000 2500 2000 500 500 0 A*23:0 A*24:02 RA2403 S0 S03 S04 S05 S08 S S2 S3 S4 S5 S6 S2 S22 S23 S24 S25 S30 S3 S32 S32 S37 4500 4000 3500 3000 2500 2000 500 500 0 A*23:0 A*24:02 RA2403 S0 S03 S04 S05 S08 S S2 S3 S4 S5 S6 S2 S22 S23 S24 S25 S30 S3 S32 S32 S37 全ての sample で反応していることから元の beads へのコンタミが疑われる
SH2403(S2) SH2404(S2) SH2404( 他の施設 ) コンタミが疑われる例 2 39 40 4 42 44 45 60 63 64 65 66 67 68 72 78 8 83 85 98 反応している beads の特異性が SH2403 と重なっており 検査時に血清がcarry over されたものと考えられる S2(SH2403) S2(SH2404) S0(SH2404) S03(SH2404) S04(SH2404) S05(SH2404) S08(SH2404) S(SH2404) S2(SH2404) S3(SH2404) S4(SH2404) S5(SH2404) S6(SH2404) S22(SH2404) S23(SH2404) S24(SH2404) S25(SH2404) S30(SH2404) S3(SH2404) S32(SH2404) S32(SH2404) S37(SH2404)
LABScreen まとめ LABScreen による抗体スクリーニングの結果は施設により陽性 陰性の差が見られた 抗原毎の判定についても施設間で差が見られた 判定不一致の原因として以下のことが考えられる. 施設間で実測値に差がある 原因 : 検査手技 機械差 検体の前処理法など 2.cutoff の設定に施設間差がある 3. 判定ミスや記入ミス ( と 2 が複合的に作用して不一致の原因になる )
今後の課題 今回の解析で consensus 判定と異なる結果があった施設は 自施設の結果を見直し 必要に応じて検査手技や判定方法を再考することが必要 参加施設が各々のスタンダードで検査しているため sample の前処理方法やプロトコルによる差が出る可能性がある QCWS の sample に限り 統一された方法で検査をする必要もあるのではないかと考える