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1 九州卒後教育セミナー第 27 回博多シンポジウム 目で考える症例カンファレンス 症例 3 長崎大学病院検査部 長崎大学病院血液内科 中川典子 波多智子

2 30 歳代女性 < 主訴 > 微熱 口腔内 下肢 右前腕の出血斑 検査結果 ( 入院時 ) 血液検査 生化学検査 WBC /μl CRP 0.3 mg/dl TP 6.0 g/dl RBC /μl Na 135 meq /dl ALB 3.2 g/dl Hb 10.4 g/dl K 3.5 meq /dl A/G 1.1 Hct 32.3 % Cl 103 meq /dl TB 0.8 mg/dl MCV 85.7 fl Ca 8.2 mg/dl AST 134 IU/L MCH 27.6 pg BUN 13 mg/dl ALT 77 IU/L MCHC 32.2 % CRE 0.63 mg/dl ALP 175 IU/L RDW 15.8 % UA 3.4 mg/dl LDH 627 IU/L PLT /μl AMY 87 IU/l γ GTP 12 IU/L Reti 2.98 % Reti 実数 /μl IPF 30.8 % 凝固検査 その他の検査 PT(%) 79 % Hp <5.0 mg/dl PT(INR) 1.14 APTT( 秒 ) 41.2 sec Fib 213 mg/dl FDP 7.4 μg/ml

3 末梢血液像 ( 入院時 )

4 末梢血液像 ( 入院時 ) MG 染色弱拡大 ( 400) MG 染色強拡大 ( 1000)

5 骨髄像 ( 入院時 ) CD45/SSC cy. MG 染色弱拡大 ( 200) MG 染色弱拡大 ( 400)

6 骨髄像 ( 入院時 ) MG 染色弱拡大 ( 400)

7 骨髄像 ( 入院時 ) MG 染色強拡大 ( 1000)

8 入院時の検査結果から考えられる診断は? 必要な追加検査は?

9 検査結果 (day30) 血液検査 生化学検査 WBC /μl CRP 1.47 mg/dl TP 4.7 g/dl RBC /μl Na 125 meq /dl ALB 2.0 g/dl Hb 9.8 g/dl K 5.0 meq /dl A/G 0.7 Hct 28.5 % Cl 92 meq /dl TB 14.0 mg/dl MCV 81.9 fl Ca 7.6 mg/dl DB 11.6 mg/dl MCH 28.2 pg BUN 36 mg/dl IDB 2.4 mg/dl MCHC 34.4 % CRE 0.93 mg/dl AST 736 U/L RDW 17.2 % UA 3.9 mg/dl ALT 500 U/L PLT /μl P-AMY 72 IU/l ALP 1789 U/L Reti 0.85 % LDH 4739 U/L Reti 実数 /μl γ GTP 396 U/L IPF 15.3 % 凝固検査 その他の検査 PT(%) 72 % Hp <5.0 mg/dl PT(INR) 1.20 sil-2r U/ml APTT( 秒 ) 54.0 sec フェチリン ng/ml Fib 106 mg/dl FDP 19.6 μg/ml

10 末梢血液像 (day30) (day30) MG 染色強拡大 ( 1000) MG 染色弱拡大 ( 400)

11 骨髄像 (day30) MG 染色弱拡大 ( 200)

12 骨髄像 (day30) MG 染色弱拡大 ( 200)

13 骨髄像 (day30) MG 染色強拡大 ( 1000)

14 骨髄像 (day30) MG 染色強拡大 ( 1000)

15 day30 の検査結果から考えられる診断は? 必要な追加検査は?

16 症例 30 歳代女性 < 主訴 > 微熱 口腔内 下肢 右前腕の出血斑 < 既往歴 > 19XX 年より視神経脊髄炎にて治療中 < 現病歴 > 20XX 年 4 月下旬より咽頭痛 咳嗽にて近医受診 同年 5 月下旬に肝機能障害 血小板減少を指摘され 7 月中旬には出血斑が出現し血小板数が 0/μl であったため当院血液内科に紹介入院となった

17 身体所見 ( 入院時 ) 157.8cm 50.2kg 血圧 120/87 体温 38.2 脈拍 128/min 整 意識清明 貧血なし 黄疸なし 両眼球の結膜下出血 下口唇に点状出血あり 全身の皮膚に点状出血 ( とくに下腿前面と右前腕に多数 ) 呼吸音正常 心雑音なし 腹部肝脾は触知しづらいがsplenic dullness enlargementあり 表在リンパ節は触知せず 下肢浮腫なし

18 検査結果 ( 入院時 ) 血液検査 生化学検査 WBC /μl CRP 0.3 mg/dl TP 6.0 g/dl RBC /μl Na 135 meq /dl ALB 3.2 g/dl Hb 10.4 g/dl K 3.5 meq /dl A/G 1.1 Hct 32.3 % Cl 103 meq /dl TB 0.8 mg/dl MCV 85.7 fl Ca 8.2 mg/dl AST 134 IU/L MCH 27.6 pg BUN 13 mg/dl ALT 77 IU/L MCHC 32.2 % CRE 0.63 mg/dl ALP 175 IU/L RDW 15.8 % UA 3.4 mg/dl LDH 627 IU/L PLT /μl AMY 87 IU/l γ GTP 12 IU/L Reti 2.98 % Reti 実数 /μl IPF 30.8 % 凝固検査 その他の検査 PT(%) 79 % Hp <5.0 mg/dl PT(INR) 1.14 APTT( 秒 ) 41.2 sec Fib 213 mg/dl FDP 7.4 μg/ml 白血球減少 貧血 網赤血球増加 著明な血小板減少 APTT 若干延長 FDP 増加 AST,ALT,LDH 増加 ハプトグロビン低下

19 末梢血液像 ( 入院時 ) Blast % Lymph % Atypical-lymph % Pro-myelo % Mono % Abnomal-lymph % Myelo % Eosino % Other % Meta % Baso % Erythroblast (/100WBC) Stab % Seg % 形態所見 白血球系 左方移動あり 顆粒を持つ異型リンパ球が散見された 赤血球系 大小不同あり 血小板系 ほとんど認められない 12

20 ここまでの検査で考えられる診断 汎血球減少 白血球減少 異型リンパ球出現 正球性正色素性貧血 Reti 増加 血小板減少著減 IPF 増加 肝障害 (AST ALT LDH 上昇 ) ハプトグロビン減少 #1.ITP #2. ウイルス感染症 血球貪食症候群 #3.ITP+ 溶血性貧血 必要な追加検査 骨髄検査 血液細胞マーカー検査 染色体遺伝子検査 フェリチン sil-2r ウイルス抗体 PAIgG ピロリ菌検索 ( 尿素呼気試験 ) クームス試験 画像検査 (CT)

21 追加検査 ( 入院時 ) 免疫血清検査 フェリチン 257 ng/ml 血清鉄 80 μg/dl UIBC 190 μg/dl sil-2r 1763 U/ml EBV VCA-IgM <10 EBV VCA-IgG 320 倍 EBNA 40 倍 HSV-IgM 0.40(-) HSV-IgG 80.2(+) CMV-IgM 0.55(-) CMV-IgG 84.3(+) C7-HRP (-) その他 ピロリ菌陽性 ( 尿素呼気試験 42.9 ) 直接クームス間接クームス 陰性陰性 特異的直接クームス試験抗 IgG(-), 抗 IgA(-), 抗 IgM(-), 抗 C3b3b(-) 赤血球結合 IgG 分子数 28 IgG 分子 /1 赤血球 ( 成人参考正常値 :33±13 分子 /1 赤血球 )

22 画像所見 ( 腹部 CT) 著明な脾腫あり 肝腫大も認める 脾静脈の拡張 脾門部には副脾と思われる腫瘤あり

23 血液細胞マーカー検査 ( 入院時 ) 骨髄 CD45 芽球領域 2.5% T cell associated Myelo/Mono cell associated CD % CD % CD % CD % CD % CD % CD % CD % CD11b 30.3 % B cell associated CD % CD % CD % Other CD % CD % CD % NK cell associated HLA-DR 78.5 % CD % CD % CD %

24 骨髄所見 ( 入院時 ) CD45/SSC cy. MG 染色弱拡大 ( 200)

25 骨髄所見 ( 入院時 ) MG 染色弱拡大 ( 400)

26 骨髄検査 ( 入院時 ) NCC:157,000/μl Myeloid M/E:0.70 Lymphoid My-Blast 0.4 % Lymph 6.0 % Neu-Pro 1.0 % Aty-Lymph 0.6 % Neu-Myel 7.6 % Erythroid Neu-Meta 16.6 % Pro-Erythro 0.2 % Neu-Stab 8.4 % Baso-Erythro 2.6 % Neu-Seg 1.0 % Poly-Erythro 31.8 % Eosino 1.6 % Orth-Erythro 17.8 % My-total 36.6 % Ery-total 52.4 % Mono 3.2 % Other 染色体検査 46, XX [20/20] Mgk:330 個 / 全視野 Macrophage 0.4 % Plasma 0.8 %

27 (1)cellularity 低形成 正形成 過形成 (2) 脂肪滴 減少 正 増加 (3) 骨髄巨核球分布密度 減少 正 増加 (4) 血小板産生像 減少 正 増加 (5) 血小板分布密度 減少 正 増加 (6) 血小板凝集像 減少 正 凝集有 (7) 骨髄巨核球と 無 有 血小板の形態異常 小型巨核球 無 有 幼若巨核球 無 有 分離多核巨核球 無 有 巨大血小板 無 有 その他 (8)M/E 比 0.7 (9) 顆粒球系 1. 分布密度 減少 正 増加 2. 芽球増減 減少 正 増加 3. 形態異常 無 有 (10) 赤芽球系 1. 分布密度 減少 正 増加 2. 芽球増減 減少 正 増加 3. 形態異常 無 有 (11) 異常細胞の出現 無 有 形態的特徴 直径 約 30μm N/C 比 低 正 高 核小体 無 有 核の変形 無 有 Auer 小体 無 有 その他 細胞質豊富で 顆粒のある異型リンパ球と思われた 骨髄所見 ITP として矛盾しない 診断 ITP

28 PDN 7mg 50mg mpsl 1g Γ グロブリン ピロリ除菌 エルトロンボパグ Hb(g/dl) WBC( / μl) PLT( / μl) PC 10 RCC 2 入院 FFP LDH(IU/l) AST(IU/l)

29 検査結果 (day30) 血液検査 生化学検査 WBC /μl CRP 1.47 mg/dl TP 4.7 g/dl RBC /μl Na 125 meq /dl ALB 2.0 g/dl Hb 9.8 g/dl K 5.0 meq /dl A/G 0.7 Hct 28.5 % Cl 92 meq /dl TB 14.0 mg/dl MCV 81.9 fl Ca 7.6 mg/dl DB 11.6 mg/dl MCH 28.2 pg BUN 36 mg/dl IDB 2.4 mg/dl MCHC 34.4 % CRE 0.93 mg/dl AST 736 U/L RDW 17.2 % UA 3.9 mg/dl ALT 500 U/L PLT /μl P-AMY 72 IU/l ALP 1789 U/L Reti 0.85 % LDH 4739 U/L Reti 実数 /μl γ GTP 396 U/L IPF 15.3 % 凝固検査 その他の検査 PT(%) 72 % Hp <5.0 mg/dl パルボウイルスB19 IgM PT(INR) 1.20 sil-2r U/ml (-) APTT( 秒 ) 54.0 sec フェチリン ng/ml EBV Fib 106 mg/dl EA-DR IgG 20 倍 FDP 19.6 μg/ml VCA-IgG 40 倍 VCA-IgM <10 倍

30 末梢血液像 (day30) Blast % Lymph % Atypical-lymph % Pro-myelo % Mono % Abnomal-lymph % Myelo % Eosino % Other % Meta % Baso % Erythroblast (/100WBC) 6 71 Stab % Seg % 異常細胞の形態学的特徴 大型で 細胞質の塩基性が強く N/C 比が小 核は類円形で一部核形不整があり 核小体を 1~2 個 細胞質には大小様々な顆粒を有するリンパ球を認めた

31 骨髄像 (day30) MG 染色弱拡大 ( 200)

32 骨髄検査 (day30) MG 染色強拡大 ( 1000)

33 骨髄検査 (day30) NCC:66,500/μl M/E 1.61 Mgk:18 個 / 全視野 Myeloid Lymphoid My-Blast 0.2 % Lymph 9.2 % Neu-Pro 1.4 % Ab-Lymph 22.4 % Neu-Myel 3.8 % Erythroid Neu-Meta 22.2 % Pro-Erythro 0.0 % Neu-Stab 3.6 % Baso-Erythro 2.4 % Neu-Seg 1.0 % Poly-Erythro 12.8 % Eosino 5.8 % Orth-Erythro 8.4 % Baso 0.0 % Ery-total 23.6 % My-total 38.0 % Pro-Mono 0.4 % Other Mono 4.8 % Macrophage 1.6 % Plasma 0.0 %

34 (1)cellularity 低形成 正形成 過形成 (2) 脂肪滴 減少 正 増加 (3) 骨髄巨核球分布密度 減少 正 増加 (4) 血小板産生像 減少 正 増加 (5) 血小板分布密度 減少 正 増加 (6) 血小板凝集像 減少 正 凝集有 (7) 骨髄巨核球と 無 有 血小板の形態異常 小型巨核球 無 有 幼若巨核球 無 有 分離多核巨核球 無 有 巨大血小板 無 有 その他 (8)M/E 比 1.61 (9) 顆粒球系 1. 分布密度 減少 正 増加 2. 芽球増減 減少 正 増加 3. 形態異常 無 有 (10) 赤芽球系 1. 分布密度 減少 正 増加 2. 芽球増減 減少 正 増加 3. 形態異常 無 有 (11) 異常細胞の出現 無 有 形態的特徴 直径 約 30μm N/C 比 低 正 高 核小体 無 有 核の変形 無 有 Auer 小体 無 有 その他 大型で細胞質豊富 顆粒を有する異常リンパ球の増加が認められた マクロファージも認められた

35 FCM 検査 (day30) FSC/SSC cytogram CD45/SSC cytogram T cell associated CD % CD % TCR α/β 7.7 % TCR γ/σ 2.0 % BM gate 率 :17.7% FCM 所見 cytogram 所見 CD45/SSC cytogram 上 CD45 bright で FSC/SSCcytogram 上では 大型細胞領域に存在していた NK cell associated CD % CD % CD % CD % 抗原形質解析表面抗原 :CD2,CD7,CD56,CD94,CD38,CD26(+), CD57(-) であり 成熟 NK 細胞の特徴を示していた Other CD % HLA DR 96.9 % CD % CCR4 3.8 %

36 染色体検査 (day30) 90,XXXX,add(5)(q31),add(6)(q15),-9,-9,-9,add(9)(q34), add(10)(p11.2) 2,add(10)(p13),-16,+2mar [ 1/20] 91,XXXX,+X,add(5)(q31),add(6)(q15),-9,-9,-9,add(9)(q34), add(10)(p11.2) 2,add(10)(p13),-18,+2mar [ 1/20] 91,XXXX,+X,add(5)(q31),add(6)(q15),-9,-9,-9,add(9)(q34), add(10)(p11.2) 2,add(10)(p13),-16,+2mar [ 1/20] 91,XXXX,+X,add(5)(q31),add(6)(q15),-9,-9,-9,add(9)(q34), add(10)(p11.2) 2,add(10)(p13),-16,+2mar [ 1/20] 46XX [16/20]

37 染色体検査 (day30) 91, XXXX,add(5)(q31),add(6)(q15),-9,-9,-9,add(9)(q34), add(10)(p11.2)x2,add(10)(p13),-16,+2mar[4/20] 46, XX [16/20] 90,XXXX,add(5)(q31),add(6)(q15),-9,-9,-9,add(9)(q34), add(10)(p11.2) 2,add(10)(p13),-16,+2mar [1/20]

38 染色体検査 (day30) 91, XXXX,add(5)(q31),add(6)(q15),-9,-9,-9,add(9)(q34), add(10)(p11.2)x2,add(10)(p13),-16,+2mar[4/20] 46, XX [16/20] 91,XXXX,+X,add(5)(q31),add(6)(q15),-9,-9,-9,add(9)(q34), add(10)(p11.2) 2,add(10)(p13),-18,+2mar [1/20]

39 染色体検査 (day30) 91, XXXX,add(5)(q31),add(6)(q15),-9,-9,-9,add(9)(q34), add(10)(p11.2)x2,add(10)(p13),-16,+2mar[4/20] 46, XX [16/20] 91,XXXX,+X,add(5)(q31),add(6)(q15),-9,-9,-9,add(9)(q34), add(10)(p11.2) 2,add(10)(p13),-16,+2mar [1/20]

40 染色体検査 (day30) 91, XXXX,add(5)(q31),add(6)(q15),-9,-9,-9,add(9)(q34), add(10)(p11.2)x2,add(10)(p13),-16,+2mar[4/20] 46, XX [16/20] 91,XXXX,+X,add(5)(q31),add(6)(q15),-9,-9,-9,add(9)(q34), add(10)(p11.2) 2,add(10)(p13),-18,+2mar [2/20]

41 病理検査 ( 骨髄病理 ) 久留米大学第二病理大島孝一先生よりご提供 病理診断 NK/Tcell lymphoma/leukemia,bone marrow,aspiration HE CD3 CD56 GranzymeB TIA-1 EBV-ISH 診断 Aggressive NK cell leukemia

42 考察 本症例は入院時 血小板減少 (ITP) と溶血所見 原因不明の肝脾腫を認め 約 1 か月後 急激な臨床経過を辿った 入院時の末梢血 骨髄を詳細に観察するとわずかながら顆粒リンパ球が認められた 従って 本症例は 初期の ANKL ステージを捉えていた可能性 ITP に続発した ANKL 慢性 NK 細胞増多症からの増悪 などの可能性が示唆された ANKL は腫瘍細胞が少ない場合も報告されており 血小板減少などに加え 原因不明の肝脾腫がある場合は より注意深く末梢血 骨髄を観察する必要があると感じた

43 PDN 7mg 50mg mpsl 1g Γ グロブリン ピロリ除菌 エルトロンボパグ Hb(g/dl) WBC( / μl) PLT( / μl) PC 10 RCC 2 入院 FFP LDH(IU/l) AST(IU/l)

44 九州卒後教育セミナー第 27 回博多シンポジウム 目で考える症例カンファレンス 症例 3 長崎大学病院血液内科波多智子

45 初診時末梢血塗抹標本 MG 染色

46 初診時骨髄塗抹標本

47 骨髄塗抹標本 (Day30)

48 骨髄塗抹標本 (Day30)

49 顆粒リンパ球 細胞質にアズール顆粒を有する大型リンパ球 (15-18μm) 正常の末梢血にも存在 250/μL (Zhang R, Hematol Oncol 2010,28: ) 10% 程度存在 (Rabbani GR, BrJ Haematol.1999; 106:960-6) 細胞障害性 T 細胞 (cytotoxic T cell) 顆粒中に細胞障害性分子であるパーフォリンやグランザイムを持つ MHC 拘束性細胞障害作用細胞表面に TCR を有する Natural killer cell MHC 非拘束性細胞障害細胞表面には CD3-, TCR-

50 顆粒リンパ球増多症 granular lymphocyte-proliferative disorder (GLPD) NK-LGL が一過性に増加する疾患 ウイルス感染症 自己免疫疾患 悪性腫瘍, dasatinib 投与中 クローン性 cytotoxic T cell scd3+, CD8+, TIA-1+ T-cell large granular lymphocytic leukemia (T-LGL) T/NK 細胞性 cycd3+ hepatosplenic T-cell lymphoma (HSTCL) 白血化 Enteropathy-associated T-cell lymphoma 白血化 NK cell scd3-, CD56+ extranodal NK/T-cell lymphoma, nasal type(enkl) aggressive NK-cell leukemia(ankl) 白血化 Chronic lymphoproliferative disorders of NK cells (CLPD-NK)

51 顆粒リンパ球増多症 granular lymphocyte-proliferative disorder (GLPD) NK-LGL が一過性に増加する疾患 ウイルス感染症 自己免疫疾患 悪性腫瘍, dasatinib 投与中 クローン性 cytotoxic T cell scd3+, CD8+, TIA-1+ T-cell large granular lymphocytic leukemia (T-LGL) T/NK 細胞性 cycd3+ hepatosplenic T-cell lymphoma (HSTCL) 白血化 Enteropathy-associated T-cell lymphoma 白血化 NK cell scd3-, CD56+ aggressive Indolent extranodal NK/T-cell lymphoma, nasal type(enkl) aggressive NK-cell leukemia(ankl) Chronic lymphoproliferative disorders of NK cells (CLPD-NK) 白血化

52 WHO 分類による LGL leukemia (Mature T- and NK-cell neoplasms) T 細胞性 LGL 白血病 T-cell large granular lymphocytic leukemia (T-LGL) アグレッシブ NK 細胞白血病 (ANKL) 慢性 NK 細胞増加症 : 暫定疾患 Chronic lymphoproliferative disorders of NK cells (CLPD-NK)

53 LGL leukemia の診断 臨床状況 脾腫 血球減少好中球減少貧血 リンパ球増多 自己免疫疾患 (RA) 末梢血 LGL < 500 / µl 末梢血 LGL > 500 / µl FCM BM Clonality assessment T cell TCR γ PCR and/or VβFCM repertorie analysis NK cell Kir expression FCM (Lamy T, BLOOD 117: , 2011)

54 LGL leukemia の特徴 T-LGL CLPD-NK ANKL 主な浸潤部位 まれな浸潤部位 血球減少 合併 Chronic / indolent 6 か月以上持続 LGL: /μL PB, BM 肝 脾 リンパ節 好中球減少貧血 (PRCA) 関節リウマチ自己抗体高 γ グロブリン血症 6 か月以上持続 NK cell>2000/μl PB, BM リンパ節肝脾 皮膚 好中球減少貧血 固形腫瘍血液腫瘍血管炎自己免疫疾患 Aggressive アジア 中央アフリカ PB, BM 肝 脾 皮膚 好中球減少貧血血小板減少 HPS DIC

55 FCM (+) T-LGL CLPD-NK ANKL CD2, CD3, CD8, CD16, CD57, CD94, TCRαβ cycd3, CD8+/-, CD16, CD56-/dim, CD94 CD2, cycd3, CD8, CD16, CD56, CD94 FCM ( -) Genetics Cytotoxic molecule その他 CD4, CD5, CD7, CD62 CD2, scd3, CD4, CD5, CD7, CD57+/-, TCRαβ TCRγ gene rearragement STAT3 変異 40% STAT3 変異 30% TIA-1 Granzyme B Granzyme M TIA-1 Granzyme B Granzyme M scd3, CD4, CD5, CD8, CD57 TIA-1 Granzyme B perforin EBV+

56 Aggressive NKcell leukemia(ankl) 定義 :NK 細胞の腫瘍で 白血病の形をとり 急激に進行する 疫学 : アジアに多い 本邦での頻度は年間 10 例以下と極めて稀 20~30 歳 60 歳にピークあり 病因 :EB ウイルスとの強い関連がある 臨床像 : 発熱 全身倦怠感 体重減少など消耗性症状を示す 主に末梢血 骨髄 肝臓 脾臓などに浸潤する 貧血 好中球減少 血小板減少や肝脾腫がみられ 時にリンパ節腫脹を認める DIC 血球貪食症候群 多臓器不全を合併することが多い

57 予後 : 生存中央値は2か月以内 多剤併用療法が実施され 一時的に有効であるが 完全寛解には至らず 死亡する例がほとんど 造血幹細胞移植の有効性が報告されているが その有効性は未確立である

58

59 血液細胞マーカー検査 ( 入院時 ) 骨髄 : リンパ球領域 gate 率 :13.3% T cell associated Myelo/Mono cell associated CD % CD % CD % CD % CD % CD % CD % CD % CD11b 1.4 % B cell associated CD % CD % CD % Other CD % CD % CD % NK cell associated HLA-DR 50.2 % CD % CD % CD %

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