カビ毒分析関連製品

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ぜんぺいしばもと
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1 カビ毒 ( 総アフラトキシン ) 分析関連製品紹介 2017 年 10 月改定カビ毒 ( 総アフラトキシンなど ) 分析関連製品紹介

総アフラトキシン試験法についてカビ毒は天然の食品汚染物質として多数存在しますがその中でも Aspergillus flavus 等が産生するアフラトキシン類は肝細胞に対する発がん性を有する物質として広く知られていることから近年食品安全の面で特に注目されているカビ毒のひとつですアフラトキシンを含有する食品の取扱いについてはアフラトキシンの指標をアフラトキシン B1

2 総アフラトキシン試験法についてカビ毒は天然の食品汚染物質として多数存在しますがその中でも Aspergillus flavus 等が産生するアフラトキシン類は肝細胞に対する発がん性を有する物質として広く知られていることから近年食品安全の面で特に注目されているカビ毒のひとつですアフラトキシンを含有する食品の取扱いについてはアフラトキシンの指標をアフラトキシン B1 から総アフラトキシン ( アフラトキシン B1 B2 G1 及び G2 の総和 :10 μg/kg を超えて検出してはならない ) と変更することとし平成 23 年 3 月 31 日付けで通知されましたそれに伴い食安発 0816 第 1 号において総アフラトキシンの試験法について詳細の測定方法が提示されています Aflatoxin B 1 M.W.=312 Aflatoxin G 1 M.W.=328 Aflatoxin B 2 M.W.=314 Aflatoxin G 2 M.W.=330 総アフラトキシン試験法に用いられる前処理手法総アフラトキシン試験法の試料調製精製方法では多機能カラム (Multi Functional Column) を用いた精製法とイムノアフィニティカラム (Immunoaffinity Column) を用いた精製法が記載されています MFC 法と IAC 法の違いを簡単にまとめた表を以下に示します特長精製原理対象サンプル多機能カラム Multi Functional Column 逆相樹脂陰イオン交換樹脂及び陽イオン交換樹脂の混合物を充填したものまたはこれと同等の分離特性を有するもの試料抽出液をカラムに流し込み素通りするアフラトキシンを回収 ( 夾雑成分は固相カラムに保持される ) 比較的簡易な試料 ( 穀類豆類及び種実類 ) イムノアフィニティカラム Immunoaffinity Column アフラトキシン特異抗体を結合させた樹脂を充填したものまたはこれと同等の分離特性を有するもの試料抽出液をカラムに流し込みアフラトキシンのみをカラムに保持させる ( 夾雑成分は素通りする ) 溶出操作を行う事で回収が可能比較的難しい試料 ( とうがらしパプリカ等の香辛料や加工食品その他多機能カラムでは精製が不 j 充分な試料に適用 ) 価格比較的安価比較的高価操作簡易複数工程が必要総アフラトキシン試験法に用いられる測定方法定量は HPLC- 蛍光検出器で行います (Ex365 nm, Em450 nm) ただしアフラトキシン B1,G1 は蛍光が弱いためトリフルオロ酢酸 (TFA) を用いた誘導体化処理が必要となります確認 ( 定量も可能 ) として LC/MS,LC/MS(/MS) も用いる事ができますまた TFA 誘導体化法のほかにフォトケミカルリアクターによる誘導体化法や電気化学的誘導体化法も応用可能であるとされています 1

多機能カラムInertSep VRAによるアフラトキシン前処理例食品分析用多機能カートリッジ ( クリーンアップカートリッジ )InertSep VRA シリーズはカビ毒などのクリーンアップに有効です通液性が良好でハンドリング操作が行い易いのが特長です一般的な穀類は VRA-1 油分の多い豆類などは逆相強化型の VRA-3 が適しています穀類豆類種実類 50 g ホモジナイズ

3 多機能カラムInertSep VRAによるアフラトキシン前処理例食品分析用多機能カートリッジ ( クリーンアップカートリッジ )InertSep VRA シリーズはカビ毒などのクリーンアップに有効です通液性が良好でハンドリング操作が行い易いのが特長です一般的な穀類は VRA-1 油分の多い豆類などは逆相強化型の VRA-3 が適しています穀類豆類種実類 50 g ホモジナイズろ過アセトニトリル / 水 (9:1) 200 ml 5 ml 分取 InertSep VRA-1 処理 Step1 抽出液負荷 Step2 最初の溶出液 2.0 ml を採る ( 約 1.0 ml/min) * 溶媒除去 ( 窒素気流 45 ) * 溶媒除去用の濃縮乾固処理用ユニットを用意しています 6 ページを参照してください Step1 誘導体化溶解 HPLC- 蛍光検出器 Step2 トリフルオロ酢酸 0.1 ml 添加密栓して激しく撹拌室温暗所で 15 分放置アセトニトリル / 水 (1:9) 0.9 ml 回収率 (%) G1 B1 G2 B2 玄米による添加回収試験回収率例 mv min 玄米を VRA-1 で処理した分析例アフラトキシン用多機能カラム品名充填材入数サイズ適用 Cat.No. 価格 InertSep VRA-1 逆相 +イオン交換 30 個 6 ml アフラトキシン農薬等 ,000 InertSep VRA-3 VRA-1 逆相強化型 30 個 6 ml アフラトキシン農薬等 ,000 Romer 社製アフラトキシン用多機能カラム品名充填材入数サイズ適用 Cat.No. 価格 MultiSep #226 AflaZon+ 多機能 25 個 6 ml アフラトキシンゼアラレノン ,000 MultiSep #228 AflaPat 多機能 25 個 6 ml アフラトキシンパツリン ,000 Multisep TM は Romer Labs Inc. の登録商品です 2

4 Romer 社カビ毒用イムノアフィニティカラム (IAC) の前処理例香辛料のように前処理が困難な試料に対してはイムノアフィニティカラムを用いた前処理が有効です多機能型ミニカラムに比べ洗浄溶出の工程は増えますが非常に選択性のあるカビ毒クリーンアップが可能です香辛料加工食品多機能カラムでは精製不充分な試料 50.0 g ホモジナイズろ過 NaCl 5 g 水 / メタノール (1:4) 200 ml Crude extract Rinse Analyte,retain on the column 10 ml 分取水で 50 ml に希釈 AflaStar TM R ( 旧名称 Fit3) 処理 Step 1 PBS ( コンディショニング ) Step 2 抽出液 10.0 ml 負荷 ( 流速 1~2 ml/min) Step 3 水 10 ml ( 溶出液は捨てる ) Step 4 アセトニトリル 3 ml ( 溶出液を採る ) * 溶媒除去 ( 窒素気流 45 ) * 溶媒除去用の濃縮乾固処理用ユニットを用意しています 6 ページを参照してください Step 1 Step 2 Step 3 Step 4 誘導体化溶解 Impurities are washed from the column HPLC- 蛍光検出器 Analyteelutes from the column トリフルオロ酢酸 0.1 ml 添加密栓して激しく撹拌室温暗所で 15 分放置アセトニトリル / 水 (1:9) 0.9 ml Romer 社製イムノアフィニティカラム品名充填材入数サイズ適用型式 Cat.No. 価格 AflaStar R (Fit3) 冷 IAC 25 個 3 ml トータルアフラトキシン用 RA ,000 注 ) は冷蔵輸送品です別途冷蔵梱包費 1,000をいただきます注 2) 保存 :4~8 使用期限 : 製造から18ケ月 AflaStar TM R は Romer Labs Inc. の登録商品です 3

固相抽出用アクセサリー 1 自然落下処理などを行う際に初滴が落ちない場合は市販のルアー仕様注射筒を固相カートリッジアダプターを介してミニカラムに取り付け加圧通液を行います品名入数 Cat.No.

10 ml 以上の容量を持つリザーバーが必要です 1,3,6 ml 用アダプター付き 25 ml リザーバーはアダプターとリザーバーが一体になっているため使い勝手が良い製品です品名入数 Cat.No.

5 固相抽出用アクセサリー 1 自然落下処理などを行う際に初滴が落ちない場合は市販のルアー仕様注射筒を固相カートリッジアダプターを介してミニカラムに取り付け加圧通液を行います品名入数 Cat.No. 価格 InertSep カートリッジアダプター (1,3,6 ml 用 ) 12 個 , イムノアフィニティカラムは 3 ml カートリッジサイズの製品が多いため試料抽出液を流す際は 10 ml 以上の容量を持つリザーバーが必要です 1,3,6 ml 用アダプター付き 25 ml リザーバーはアダプターとリザーバーが一体になっているため使い勝手が良い製品です品名入数 Cat.No. 価格アダプター付リザーバー (1,3,6 ml 用 ) 12 個 ,000 3 ミニカラム処理において流速の影響は回収率や再現性に大きな影響を与えます流速を調整するためにルアーストップバルブが必要です品名入数 Cat.No. 価格ルアーストップバルブ PTFE 製 12 個 , 固相の処理を行う場合は専用の自然落下マニホールドや吸引マニホールドが便利です品名 Cat.No. 価格 GL-SPE 吸引マニホールドキット (12 検体用 ) 生産中止 SPE バキュームキット ,000 注 ) 自然落下マニホールドは 5 ページを参照してください 4 GL-SPE 吸引マニホールドキット SPE バキュームキット 4

カビ毒分析対応自然落下メソッド対応 GL-SPE 自然落下マニホールド特長シンプルなデザインの自然落下マニホールドですカビ毒の固相前処理に最適ですデリバリーチップを取りつけることで

試験管やナスフラスコも使用できます 4 ml バイアルトレー自然落下マニホールドの外観トレーと多機能カラム取り付けトイメージ品名入数 Cat.No.

15,000 GL-SPE 自然落下マニホールド用 200/300 mlナス型フラスコトレー 1 台 5010-50434 15,000 GL-SPE 自然落下ラックデリバリーチップ 24 本

6 カビ毒分析対応自然落下メソッド対応 GL-SPE 自然落下マニホールド特長シンプルなデザインの自然落下マニホールドですカビ毒の固相前処理に最適ですデリバリーチップを取りつけることで自然落下速度を改善できますルアーストップバルブを取り付けることで流速の調整が可能です 4 ml バイアルを受器などの最適なラックと合わせて利用できますエクステンションパネルを取り付けることで試験管やナスフラスコも使用できます 4 ml バイアルトレー自然落下マニホールドの外観トレーと多機能カラム取り付けトイメージ品名入数 Cat.No. 価格 GL-SPE 自然落下マニホールド 1 式 ,000 GL-SPE 自然落下マンホールド用 4 ml バイアルトレー 1 台 ,000 自然落下マニホールドオプション品品名入数 Cat.No. 価格 GL-SPE 自然落下マニホールドエクステンションパネル 2 枚 ,000 GL-SPE 自然落下マニホールド用 20 ml 濃縮管トレー 1 台 ,000 GL-SPE 自然落下マニホールド用 200/300 mlナス型フラスコトレー 1 台 ,000 GL-SPE 自然落下ラックデリバリーチップ 24 本 , 本 ,000 エクステンションパネル ( ) デリバリーチップ ( ) 20 ml 濃縮管用トレー SL-SPE 濃縮管 20 ml が 17 本設置可能別途エクステンションパネルが必要です ( ) ナスフラスコトレー 300 ml ナスフラスコが 6 個設置可能別途エクステンションパネルが必要です ( ) 5

消耗品濃縮ユニット窒素発生機の紹介 4 ml 誘導体化処理用バイアル PTFE/ ラバーセプタム付スクリューキャップイムノアフィニティカラム等で試料を処理した後は溶媒除去を行った後に誘導体化処理が必要になります不活性化処理済み 4 ml バイアルを用いることで一連の操作におけるアフラトキシンの損失が低減されます

価格不活性処理済みバイアル4 ml 褐色ラベル付 4 ml 100 本 1030-46616 7,800 不活性処理済みバイアル4 ml 褐色ラベルなし 4 ml 100 本 1030-46615 7,200 4mL バイアル対応ラバー /PTFE 穴なしキャップ - 100 個 1030-46547 3,100 HPLC

5 ml 100 本 1030-51019 3,600 2 ml 不活性化処理済みバイアル褐色ラベル付 2 ml 100 本 1030-46614 5,900 シリコン白 /PTFE 青キャップ ( 青 ) 一切込 - 100 個 1030-51228 5,300 4 ml 誘導体化処理用バイアル濃縮乾固処理用ユニット

価格リアクティーサーモ 1030-44010 180,000 L 型温度計 (0 ºC~200 ºC) 1030-44201 8,300 リアクティバップ ( 針 9 本プラグ9 個付 ) 1030-44014 86,000 交換用針プラグセット ( 針 9 本プラグ9 個 ) 1030-44013 15,000

7 消耗品濃縮ユニット窒素発生機の紹介 4 ml 誘導体化処理用バイアル PTFE/ ラバーセプタム付スクリューキャップイムノアフィニティカラム等で試料を処理した後は溶媒除去を行った後に誘導体化処理が必要になります不活性化処理済み 4 ml バイアルを用いることで一連の操作におけるアフラトキシンの損失が低減されます品名サイズ入数 Cat.No. 価格不活性処理済みバイアル4 ml 褐色ラベル付 4 ml 100 本 ,800 不活性処理済みバイアル4 ml 褐色ラベルなし 4 ml 100 本 ,200 4mL バイアル対応ラバー /PTFE 穴なしキャップ個 ,100 HPLC 用オートサンプラーバイアル低吸着の PP( ポリプロピレン ) 製バイアルを用意しました品名サイズ入数 Cat.No. 価格 PP 製バイアル透明メモリ付 1.5 ml 100 本 ,300 PP 製バイアル褐色メモリ付 1.5 ml 100 本 ,600 2 ml 不活性化処理済みバイアル褐色ラベル付 2 ml 100 本 ,900 シリコン白 /PTFE 青キャップ ( 青 ) 一切込個 ,300 4 ml 誘導体化処理用バイアル濃縮乾固処理用ユニット誘導体化試薬とクリーンアップ後のアフラトキシン抽出物を確実に反応させるためには抽出液中の水分の完全除去が重要です 4 ml バイアル専用アルミブロックを組み合わせた専用の濃縮乾固システムが便利ですリアクティサーモ Ⅲ リアクティーバップ Ⅲ 品名 Cat.No. 価格リアクティーサーモ ,000 L 型温度計 (0 ºC~200 ºC) ,300 リアクティバップ ( 針 9 本プラグ9 個付 ) ,000 交換用針プラグセット ( 針 9 本プラグ9 個 ) ,000 アトフラトキシン試験用アルミブロック AFT 型 (4 ml バイアル用 9 穴 ) お問合 * アフラトキシン試験用アルミブロックは特注となりますご注文の際は最寄りの支店または営業所までご連絡ください * 小型窒素ガス発生機ニトロミニニトロミニ NM910 は有機不純物 (VOC SVOC) 濃度を高純度窒素ガスボンベ並みに抑えた有機溶媒をパージするのに最適な装置です装置の幅は 200 mm とスリムでありまた各種溶媒回収装置と組み合わせることにより実験机上にコンパクトな窒素パージ式高速溶媒蒸発濃縮乾固システムを構築できますまた窒素ガスを利用するリアクティーバップリアクティサーモのガス供給源として便利です品名入数 Cat.No. 価格小型高純度窒素ガス発生機ニトロミニ NM910 1 台生産中止 6

8 その他のマイコトキシン前処理カラム類総アフラトキシン品名充填剤入数サイズ適用 Cat.No. 価格 MultiSep #226 AflaZon+ 多機能 25 本 6 ml アフラトキシンゼアラレノン ,000 MycoSep #226 多機能 25 本 - アフラトキシンゼアラレノン ,500 MultiSep #228 AflaPat 多機能 25 本 6 ml アフラトキシンパツリン ,000 MycoSep #228 多機能 25 本 - アフラトキシンパツリン ,000 Autoprep MF-A 1000 多機能 50 本 3 ml アフラトキシン ,000 アフラトキシン M 1 品名充填材入数サイズ適用 Cat.No. 価格 AflaStar M1 イムノアフィニティ 25 本 3 ml アフラトキシンM1 用 ,000 注 ) 冷は冷蔵輸送品です別途冷蔵梱包費 1,000 をいただきますトリコテセン系カビ毒品名充填材入数サイズ適用 Cat.No. 価格 MultiSep #227 Trich+ 多機能 25 本 6 ml トリコテセン系カビ毒 ,000 MycoSep #227 Trich+ 多機能 25 本 - トリコテセン系カビ毒 ,500 Autoprep MF-T 1500 多機能 25 本 6 ml トリコテセン系カビ毒 ,000 MultiSep #230 NIV 多機能 25 本 6 ml ニバレノール用 DONグリコシド用 ,000 MycoSep #230 NIV 多機能 25 本 - ニバレノール用 DONグリコシド用 ,000 DONStar R 冷イムノアフィニティ 25 本 3 ml デオキシニバレノール用 ,000 注 ) 冷は冷蔵輸送品です別途冷蔵梱包費 1,000 をいただきますオクラトキシン品名充填材入数サイズ適用 Cat.No. 価格 MultiSep #229 Ochra 多機能 25 本 6 ml オクラトキシン用 ,000 MycoSep #229 Ochra 多機能 25 本 - オクラトキシン用 ,000 OchraStar 冷イムノアフィニティ 25 本 3 ml オクラトキシン用 ,000 OchraStar Fit 冷イムノアフィニティ 25 本 1 ml オクラトキシン用生産中止注 ) 冷は冷蔵輸送品です別途冷蔵梱包費 1,000 をいただきますゼアラレノン品名充填材入数サイズ適用 Cat.No. 価格 MultiSep #226 AflaZon+ 多機能 25 本 6 ml アフラトキシンゼアラレノン ,000 ZearaStar イムノアフィニティ 25 本 3 ml ゼアラレノン ,000 フモニシン品名充填材入数サイズ適用 Cat.No. 価格 MultiSep #211 Fum 多機能 25 本 6 ml フモニシン ,000 FumoniStar イムノアフィニティ 25 本 3 ml フモニシン ,000 MycoSep TM AutoPrep AflaStar TM DONStar TM OchraStar TM ZearaStar TM FumoniStar TM は Romer Labs Inc. の登録商品です 7

9 その他のマイコトキシン前処理カラム類イムノクロマト法による検出法の紹介 AgraStrip Afla は競合イムノクロマト法を用いた簡易検出キットです食品等から抽出した試料液を抗アフラトキシン (AFL) 抗体 - 金コンプレックスと混合したのち試験紙に吸収させると試料液に含まれる AFL と結合しなかった (AFL 結合部位を持っている ) 抗 AFL 抗体 - 金コンプレックスのみが試験紙に固定された AFL-BSA 複合体と結合してラインを形成します ( テストライン ) 混合液を試験紙に吸収させる汚染度に応じた濃さのラインが形成される品名入数適用 Cat.No. 価格 Agrastrip 4 ppb 24 式アフラトキシン用 ,000 Agrastrip 10 ppb 24 式アフラトキシン用 ,000 Agrastrip 20 ppb 24 式アフラトキシン用 ,000 AgraStrip TM は Romer Labs Inc. の登録商品です 8

HPLC 用分析カラムの紹介 Inertsil ODS-3 は通知法に対応した TFA 誘導体化 - アフラトキシン測定に適した HPLC 用 ODS カラムですまた InertSutain C18 は確認試験としての LC/MS(/MS) にも適した最新の ODS カラムですアフラトキシン標準液の分析例 FLU 0 20 40 1 2 3 1.

10 HPLC 用分析カラムの紹介 Inertsil ODS-3 は通知法に対応した TFA 誘導体化 - アフラトキシン測定に適した HPLC 用 ODS カラムですまた InertSutain C18 は確認試験としての LC/MS(/MS) にも適した最新の ODS カラムですアフラトキシン標準液の分析例 FLU Aflatoxin G1 5 μg/l 2. Aflatoxin B1 5 μg/l 3. Aflatoxin G2 5 μg/l 4. Aflatoxin B2 5 μg/l 4 Conditions System Column Eluent Flow Rate Col.Temp. Detection Injection Vol. :GL-7400 HPLC system :InertSustain C18 (5 μm, mm I.D.) :A) CH 3 OH B) CH 3 CN C) H 2 O A / B / C = 30 / 10 / 60, v/v/v (Premix) :1.0 ml/min :40 :FL(Ex365 nm Em450 nm) :20 μl Time (min) 前処理済み試料の測定例 ( コーンフラワー添加濃度各 0.5 μg/l) FLU Aflatoxin G1 2. Aflatoxin B1 3. Aflatoxin G2 4. Aflatoxin B2 各 0.5 μg/l 標準試料各 0.5 μg/l 標準添加添加なし Conditions System Column Eluent Flow Rate Col.Temp. Detection Injection Vol. :GL-7400 HPLC system :InertSustain C18 (5 μm, mm I.D.) :A) CH 3 OH B) CH 3 CN C) H 2 O A / B / C = 30 / 10 / 60, v/v/v (Premix) :1.0 ml/min :40 :FL (Ex365 nm Em450 nm) :20 μl Time (min) 9

11 LC/MS/MS を使用した標準試料の分析例 Intensity, cps 標準試料 ( 各 0.5 μg/l) 1. Aflatoxin G2 2. Aflatoxin G1 3. Aflatoxin B2 4. Aflatoxin B Time(min) 3 4 Conditions System Column Eluent Flow Rate Col.Temp. Detection Injection Vol. :LC800 HPLC system :InertSustain C18 (3 μm, mm I.D.) :A) CH 3 OH B) 10 mm CH3COONH4 A / B = 40 / 60, v/v (Gradient mixer) :0.2 ml/min :40 :LC/MS/MS (4000 Q TRAP :ESI,Positive, MRM) :10 μl Inertsil ODS-3 強い保持力を有するODSカラムですアフラトキシン等をはじめ多くの化合物を分離測定することが可能です品名粒子径内径 (mm) 長さ (mm) Cat.No. 価格 ,000 3 μm , ,000 Inertsil ODS , ,000 5 μm , , ,000 InertSustain C18 高い不活性度と耐久性があり再現性も良好な最新の ODS カラムです品名粒子径内径 (mm) 長さ (mm) Cat.No. 価格 InertSustain C18 3 μm 5 μm , , , , , , , ,000 10

12 LC 関連情報固相抽出前処理関連情報 GC 関連情報 InertSustain, Inertsil, InertSep はジーエルサイエンス株式会社の日本における登録商標です AA PDF

Microsoft PowerPoint - MonoTowerカタログ_ 最終.ppt [互換モード]

Microsoft PowerPoint - MonoTowerカタログ_ 最終.ppt [互換モード] 次世代型シリカモノリスカートリッジカラム MonoTower TM C18 次世代型シリカモノリスカートリッジカラム MonoTower TM C18 MonoTower TM C18 モノリスカートリッジを連結することで高い理論段数を低圧力で実現粒子充填型 ODS カラム (3 μm, 250 3.0 mm I.D.) 15.5 MPa 分離不充分 (500 3.0 mm I.D.) 14.5