カラム選択のてびき YMC カラム一覧 (HPLC SFC) 10,11 USP 一覧 12 カラム選択の手引き ( バイオクロマトグラフィー ) 13 分離モードによる比較ペプチドおよびタンパク質の逆相分離例カラム選択の手引き ( 低分子有機化合物 ) 21 アプリケー

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しおりかむら
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1 カラム選択のてびき YMC カラム一覧 (HPLC SFC), USP 一覧カラム選択の手引き ( バイオクロマトグラフィー ) 分離モードによる比較 6 ペプチドおよびタンパク質の逆相分離例 7 カラム選択の手引き ( 低分子有機化合物 ) アプリケーション ( 脂溶性ビタミン水溶性ビタミン ) アプリケーション ( 水溶性ビタミン有機酸アミノ酸 ) 逆相カラム選択ガイド主要市販逆相カラムの分離選択性比較 9

2 分析カラム分取カラム逆相系YMC カラム一覧 (HPLC, SFC) 製品名 USP CLASS o. 細孔径 (nm) 粒子径 (μm) C% シラノール処理使用 ph レンジ掲載ページ DS C8.9,, 68 7 YMC-Triart.. 66 C8 ExRS 8.9,, 7, 7 C Meteoric Core C8 BI 6.7 Pro C8,,, Pro シリーズ Hydrosphere C8,, 9, 9,, 67 Pro C8 RS 8, あり..,,,, 7 DS-A L,, 68,, 7 YMC-Pack DS-AM, , 7 7,,, DS-AQ 8, 9 69, DS-AL 7 なし, 7 DS-H J'sphere DS-M8 8 あり, DS-L8 8 9 YMC-Pack PolymerC8 6,.., DS 以外 C8 L7.9,, 7.. 7, 7 あり YMC-Triart Phenyl L.9,, , PFP L.9,, なし Meteoric Core C8 L Pro シリーズ YMC-Pack Pro C8 L7, Pro C L6, 7,,, C8 C L7, 7,,, 7 L6,,,, 7, 7 あり. 7., 7 TMS L,, 6, 7 7 Ph L,, 9 8, 9 7,, 7 C L, 7 PRTEI-RP L6. 7., 7 YMCbasic L7, 7 あり. 7. YMC Carotenoid L6,. 7. 7

3 分析カラム分取カラム順相, サイズ排除MIX キラル分離脂肪酸FCH L イオン交換カキラムイオンYMC-Triart Diol-HILIC L.9,, 担交体換Sブ系リッドカコア6 シェルカ汎ラ7 ム汎逆シリカ基材ノマイクロ脂ラム充材填剤分ムS ムバルク充填剤サクセサリー分取YMC-Pack CA& ラベル化試薬 6 システムキラフル7 分離S受託8 精製取扱9 製品イSIL 製品名充填USP 細孔径粒子径 C% シラノール使用 ph 掲載ページ剤CLASS o. (nm) (μm) 処理レンジカラム.. 8, 8 YMC-Pack. 7. SIL,,,, L, 76 SIL-6 6, 6 Diol-P L, 77,, C L, 7 Polyamine Ⅱ ラムカ 6, 7 77 ラムQA porous SP porous YMC-BioPro QA-F Dnonporous カ,.. SラムSP-F nonporous Diol-6 6, カラDiol- L, ムYMC-Pack L 順Diol- L9, LDiol-, C用カラムカ YMC-GPC Amylose-SA L99, Cellulose-SB,. 9. CHIRAL ART Cellulose-SC, 6 6 Amylose-C L, Cellulose-C L, EA (R), (S). 6., α-cd BR YMC CHIRAL アβ-CD BR. 6. 8, 9 YMC-Pack FA& ラベル化試薬 7 テム周辺機器Amylose-SA, Cellulose-SB, Alcyon SFC CSP Cellulose-SC, Amylose-C, Triart C8 あり Triart Diol なし Alcyon SFC Triart PFP なし C ありてびポリマー 7, 8 基γ-CD BR 分析用Cellulose-C, アキラル分離カラきム選択のラル分離用E C用カラム有機シリカハイ用分析用用8 分析用相系汎用9 分析用相系ナ肪酸分離用取用カラFC用カランプル前処理ロー反応シスンフォメーション

4 てびきカラム選択のCHIRAL ART Amylose-SA 6 USP 一覧 USP CLASS o. USP Description 官能基 YMC 製品掲載ページ YMC-Triart C YMC-Triart C8 ExRS 7, 7 Meteoric Core C Meteoric Core C8 BI 8 87 YMC-UltraHT Pro C8 9, 9 YMC-UltraHT Hydrosphere C8 9, 9 YMC-Pack Pro C L ctadecyl silane chemically bonded to porous or nonporous silica or ceramic micro-particles,. to µm in C8 Hydrosphere C8, diameter, or a monolithic rod. YMC-Pack Pro C8 RS, YMC-Pack DS-A, YMC-Pack DS-AM 6, 7 YMC-Pack DS-AQ 8, 9 YMC-Pack DS-AL, J'sphere DS-H8 J'sphere DS-M8, J'sphere DS-L8 L Porous silica particles,. to µm in diameter, or a YMC-Pack SIL SIL monolithic silica rod. YMC-Pack SIL-6, YMC-Triart C8 7, 7 ctylsilane chemically bonded to totally or superficially Meteoric Core C L7 porous silica particles,. to µm in diameter, or a C8 YMC-Pack Pro C8, monolithic silica rod. YMC-Pack C8, YMCbasic L8 An essentially monomolecular layer of aminopropylsilane chemically bonded to totally porous silica gel support,. H YMC-Pack H 8 to µm in diameter, or a monolithic silica rod. L itrile groups chemically bonded to porous silica particles,. to µm in diameter, or a monolithic silica rod. C YMC-Pack C, L Phenyl groups chemically bonded to porous silica particles, YMC-Triart Phenyl 76, 77 Phenyl. to µm in diameter, or a monolithic silica rod. YMC-Pack Ph 8, 9 L Trimethylsilane chemically bonded to porous silica particles, to µm in diameter. C YMC-Pack TMS 6, 7 YMC-Triart Diol-HILIC 8, 8 YMC-Pack Diol-P, Dihydroxypropane groups chemically bonded to porous YMC-Pack Diol-6 L silica or hybrid particles,. to µm in diameter, or a Diol monolithic silica rod. YMC-Pack Diol- 6 YMC-Pack Diol- YMC-Pack Diol- Butyl silane chemically bonded to totally porous or YMC-Pack Pro C, L6 superficially porous silica rod.silica particles,. to C YMC-Pack C, µm in diameter. YMC-Pack PRTEI-RP, L7 Porous silica particles, to µm in diameter. SIL YMC-Pack SIL-HG 9, 9 Packing having the capacity to separate dextrans by YMC-Pack Diol-6 L molecular size over a range of, to, Da. It is YMC-Pack Diol- Diol spherical, silica-based, and processed to provide ph YMC-Pack Diol- 6 stability. YMC-Pack Diol- L セルロース誘導体 Cellulose tris-,-dimethylphenylcarbamate coated (Cellulose tris-,- CHIRAL ART Cellulose-C porous silica particles, to µm in diameter. dimethylphenylcarbamate 6 coated) L Pentafluorophenyl groups chemically bonded to silica particles by a propyl spacer,. to µm in diameter. PFP YMC-Triart PFP 78 8 アミロース誘導体 L Amylose tris-,-dimethylphenylcarbamate-coated, (Amylose tris-,- CHIRAL ART Amylose-C porous, spherical, silica partilces, to µm in diameter. dimethylphenylcarbamate 6 coated) Packing for the size-exclusion separations of proteins YMC-Pack Diol-6 L9 (separation by molecular weight) over the range of to YMC-Pack Diol- Diol 7, kda. The packing is spherical. to µm, silica YMC-Pack Diol- 6 or hybrid packing with a hydrophilic coating. YMC-Pack Diol- L6 C silane bonded phase on a fully porous spherical silica, to µm in diameter. C YMC Carotenoid L99 アミロース誘導体 Amylose tris-(,-dimethylphenylcarbamate), immobilized (Amylose tris-,- on porous, spherical, silica partilces, to µm in dimethylphenylcarbamate diameter. coated)

5 カラム選択の手引き ( バイオクロマトグラフィー ) てびカラきム選択のキラル分離剤用イオン交体換SE C用カラム有機シリカハムイコア6 ムシェル汎用7 分析用Sカ汎ラ用8 ム分析逆用相系カ汎ラ用9 ム分析順用相系ナノマイクムロ脂肪酸分離剤用分取用カラムSF C用カラムバルク充填剤サンプル前ー処理分取6 システムテフロ7 ー反応器シス受託8 精製取扱9 製品インフォメーションカラム充填カラム担ブリッドカラカラカラムDLC用カラカラム充填アクセサリム周辺機

6 てびきラム選択のサイズ排除逆相カ分離モードによる比較タンパク質の分離例ヒト血清中のタンパク質 Human serum イオン交換 IgG Albumin 8E Transferrin min Eluent : A) mm Tris-HCl(pH 8.6) B) mm Tris-HCl(pH 8.6)containing. M acl -%B(- min), -%B(- min) Flow rate :. ml/min Temperature : Detection :UV at 8 nm Injection : μl( μl/ml) サイズ排除 866A Albumin Transferrin IgG 6 min Eluent :. M KHP-KHP(pH 7.)containing. M acl Flow rate :. ml/min Temperature :ambient( ) Detection :UV at 8 nm Injection : μl( μl/ml) ヒト血清をイオン交換モードおよびサイズ排除 (SEC) モードで分離していますイオン交換モードでは電荷の違いにより分離されるのに対してサイズ排除モードでは分子量の違いにより分離されるので両者分離パターンが異なっていますモノクローナル抗体 Mouse monoclonal IgG anti-human IgG(Purified by DEAE chromatography, containing a) イオン交換 a Mouse monoclonal IgG (Anti-human IgG) P8A Eluent : A) mm Tris-HCl(pH 8.) B) mm Tris-HCl(pH 8.)containing. M acl -%B(-8 min) Flow rate :. ml/min Temperature : Detection :UV at nm Injection : μl(. mg/ml) min P8A Mouse monoclonal IgG (Anti-human IgG) a min Eluent :. M KHP-KHP(pH 7.) Flow rate :.7 ml/min Temperature :ambient( ) Detection :UV at nm Injection : μl(. mg/ml) 抗ヒトモノクローナル抗体の分離例ですサイズ排除モードではほぼ単一ピークになっているのに対してイオン交換モードではアイソフォームに由来すると考えられる複数のピークが認められます. Rabbit IgG. Mouse IgG Fc fragment サイズ排除 IgG Fc フラグメント Mouse IgG Fc fragment(prepared from normal serum) Mouse IgG Fc fragment R86D min R869B min Eluent :. M KHP-KHP(pH 6.9)containing. M acl Flow rate :. ml/min Temperature :ambient(7 ) Detection :UV at nm Injection : μl(. mg/ml) Eluent : A)water/TFA(/.) B)acetonitrile/TFA(/.) -%B(- min) Flow rate :. ml/min Temperature :7 Detection :UV at nm Injection : μl(. mg/ml) サイズ排除カラムは IgG 全分子とそのフラグメントのように分子量に差があるものの分離に有用です一方逆相カラムでは分子量が大きい IgG 全分子の分離は困難ですが Fc フラグメントのような分子量万以下のフラグメントの分離には有効です

タンパク質の分離例 BSA のペプチドマッピング Tryptic digest of BSA イオン交換 6 サイズ排除 8B 6 min 86L * 6 min 逆相 88B * MW 6 min * undigested BSA * Eluent : A) mm Tris-HCl(pH 8.6) B) mm Tris-HCl(pH 8.6)containing.

7 タンパク質の分離例 BSA のペプチドマッピング Tryptic digest of BSA イオン交換 6 サイズ排除 8B 6 min 86L * 6 min 逆相 88B * MW 6 min * undigested BSA * Eluent : A) mm Tris-HCl(pH 8.6) B) mm Tris-HCl(pH 8.6)containing. M acl -%B(- min), -6%B(-6 min) Flow rate :. ml/min Temperature : Detection :UV at nm Injection : μl タンパク質ペプチド較正曲線. Myoglobin (MW 7,). Insulin (Bovine) (MW,7). eurotensin (MW,67). Tetraglycine (MW 6). Glycine (MW 7) Eluent :. M KHP-KHP(pH 7.) containing. M acl/acetonitrile(7/) Flow rate :.7 ml/min Temperature :ambient( ) Detection :UV at nm Injection : μl Eluent : A)water/TFA(/.) B)acetonitrile/TFA(/.) -%B(- min), -%B(- min), %B(-6 min) Flow rate :. ml/min Temperature :7 Detection :UV at nm Injection : μl BSA(MW 66,) のトリプシン消化物を種類の分離モードで分離していますサイズ排除のクロマトグラムからこの試料中には分子量が前後から, 程度のものまで幅広い分子量のフラグメントが存在していることが分かります一方イオン交換や逆相は各成分の構造の違いによる分離能に優れ非常に多くのピークが検出できています糖鎖の分離例ピリジルアミノ (PA) 化糖 Pyridylamino(PA)-Sugar chains 逆相 G967A min Eluent :methanol/ mm HHP(/9) Flow rate :. ml/min Temperature :7 Detection :FLS at Ex. nm, Em. nm Injection : μl(. pmol/ml) Sample : PA-Sugar Chain Series, manufactured by TAKARA BI IC. G96A 糖タンパク質などの糖鎖解析で多用されるピリジルアミノ (PA) 化糖の逆相 HILIC 両モードでの分離例を示していますこのようなモードが異なる分離法を組み合わせる二次元 HPLC は糖鎖解析に有用です HILIC min Eluent :methanol/ mm HHP(8/) Flow rate :. ml/min Temperature :7 Detection :FLS at Ex. nm, Em. nm Injection : μl(. pmol/ml) Sample : PA-Sugar Chain Series, manufactured by TAKARA BI IC. てびカラきム選択のキラル分離剤用イオン交体換SE C用カラム有機シリカハムイコア6 ムシェル汎用7 分析用Sカ汎ラ用8 ム分析逆用相系カ汎ラ用9 ム分析順用相系ナノマイクムロ脂肪酸分離剤用分取用カラムSF C用カラムバルク充填剤サンプル前ー処理分取6 システムテフロ7 ー反応器シス受託8 精製取扱9 製品インフォメーションカラム充填カラム担ブリッドカラカラカラムDLC用カラカラム充填アクセサリム周辺機

8 てびきカラム選択の分離モードによる比較核酸の分離例 DA フラグメント kb DA ladder(7-,6 bp) イオン交換 8G min Eluent : A) mm Tris-HCl(pH 8.)containing.7 M acl B) mm Tris-HCl(pH 8.)containing. M acl -%B(- min) Flow rate :. ml/min Temperature : Detection :UV at 6 nm Injection : μl DA フラグメントの分離例です高分離能を有する YMC-BioPro QA-F の mm 長カラムは核酸の高分離分析に最適ですプラスミド pbr の制限酵素 Hae Ⅲ 分解物 Plasmid pbr restriction fragments イオン交換 Plasmid pbr Hae III digest (8-87 bp) 86F Plasmid pbr (,6 bp) min Eluent : A) mm Tris-HCl(pH 8.) B) mm Tris-HCl(pH 8.)containing. M acl 7-8%B(- min), 8%B(- min) Flow rate :. ml/min Temperature : Detection :UV at 6 nm Injection : μl サイズ排除 Plasmid pbr (,6 bp) Plasmid pbr Hae III digest (8-87 bp) P867A min Eluent :. M KHP-KHP(pH 7.)containing. M acl Flow rate :.7 ml/min Temperature :ambient( ) Detection :UV at 6 nm Injection : μl プラスミド DA の制限酵素断片で 8-87 bp のサイズのフラグメントをイオン交換モードおよびサイズ排除 (SEC) モードで分離しています個々のフラグメントの同定など高い分離能が必要な場合はイオン交換カラムが適しています一方分子量による分離にはサイズ排除カラムが有用ですオリゴヌクレオチド (mira) ligonucleotide(mira) Eluent : A) mm DBAA*(pH 7.) 逆相 UV YMCri rt C8. I.D. -pugg AGU GUG ACA AUG GUG UUG- ( nt, MW 689.) -pugg AGU GUG ACA AUG GUG UUG U- ( nt, MW 796.) nt nt B) mm DBAA*(pH 7.)/acetonitrile(/) 6-7%B(- min) Flow rate :. ml/min Temperature : Detection :UV at 6 nm and ESI-negative mode Injection : μl ( nmol/ml) Instrument : LC)Shimadzu Prominence MS)Shimadzu LCMS * di-n-butylamine-acetic acid MS min MIC (m/z 7., m/z 798.) nt nt min FA Courtesy of M.Yamada, SHIMADZU CRPRATI オリゴヌクレオチドの逆相 LC/MS 分離例です親水性化合物の分離にも適した Triart C8はオリゴヌクレオチドの分離にも適しており鎖長残基違いのオリゴヌクレオチドの分離も可能です 6

9 ペプチドおよびタンパク質の逆相分離例逆相カラム選択の目安タンパク質およびペプチドを分離する際分離対象化合物の分子量を目安にカラムの選定を行います右表に示すように分子量が約, 以下の小さいペプチドに関しては C8, nm が約, から, までのタンパク質およびペプチドに関しては C8, nm が約, 以上のタンパク質に関しては C, nm がそれぞれ適したカラムになりますまた分子量のほかに化合物の疎水性の大きさ官能基の種類などが分離に影響をおよぼすこともありますのでのカラムで目的の分離が得られない場合は表中の矢印を参考に最適化を行ってくださいまた表中の C8 C8 C のほかに選択性の異なる PRTEI-RP および C タイプなどもあります核酸オリゴヌクレオチドなどを分離する場合もタンパク質ペプチドに準じて分子量に応じたカラムを選択しますペプチド (MW 7 -,6) の分離例優れたピーク形状 6 min 7 A8B 6 min. BAM-P (MW,). [D-Ala,Met ]-Enkephalinamide (MW 87). α-endorphin (MW,76). Met-Enkephalin (MW 7). [D-Ala,Met ]-Enkephalin (MW 88) 6. γ-endorphin (MW,899) 7. β-endorphin (MW,6) Eluent : A)water/TFA(/.) B)acetonitrile/TFA(/.) -%B(- min), %B(- min) Flow rate :. ml/min Temperature :7 Detection :UV at nm 分子量, 程度以下のペプチド分離には低分子化合物に用いられるような C8, nm などの汎用カラムが適しています特に塩基性ペプチドの場合には高度にエンドキャッピングされた Triart C8 や Pro シリーズカラムが有効です上図に示すように他社 DS カラムの Brand E は塩基性ペプチドである 7 のピークがテイリングしていますそれに対し Hydrosphere C8 は良好な分離とピーク形状を示していますペプチドおよびタンパク質 (MW, - 7,) の分離例細孔径および官能基の違いによる分離への影響 C8, nm C8, nm 6 6 C8, nm 76.D 8.D min C8, nm C, nm 分子量, から 7, のペプチドおよびタンパク質について細孔径と官能基が各々異なるカラムによる分離の比較を示します上図に示すように充填剤の細孔径および官能基のどちらかが最適化されていない場合でもピークのブロードニングや化合物同士または不純物ピークとの分離が悪くなるなどの現象が生じています一方上の逆相カラム選択の目安の表に示すように目的の化合物の分子量に対して最適なカラム (C8, nm) を用いることでシャープなピーク形状と良好な分離が得られています 7 AD, D min 試料の官能基 C8 C8 C カキ分子量細孔径ラム充填剤 nm カイラ, ム担 nm 体S, nm, 6 79.D 7.D min. Cytochrome c (MW,). Insulin (Bovine) (MW,7). Amyloid β-protein (MW,). Lysozyme (MW,). α-lactalbumin (MW,) 6. Myoglobin (MW 7,) Column : YMC-Pack μm.6 mmi.d. Eluent : A)water/TFA(/.) B)acetonitrile/TFA(/.) -6%B(- min) Flow rate :. ml/min Temperature :7 Detection :UV at nm てびカラきム選択のラル分離用オン交換E C用カラム有機シリカハムイコア6 ムシェル汎用7 分析用Sカ汎ラ用8 ム分析逆用相系カ汎ラ用9 ム分析順用相系ナノマイクムロ脂肪酸分離剤用分取用カラムSF C用カラムバルク充填剤サンプル前ー処理分取6 システムテフロ7 ー反応器シス受託8 精製取扱9 製品インフォメーションブリッドカラカラカラムDLC用カラカラム充填アクセサリム周辺機7

10 てびきカラム選択の8.D ペプチドおよびタンパク質の逆相分離例タンパク質 (MW 66, - 96,) の分離例移動相の違いによる分離への影響 (C, nm).d min. BSA (MW 66,). Conalbumin (MW 77,). Lipoxidase (MW 96,) Column : YMC-Pack C( μm, nm).6 mmi.d. Eluent : -7%B(- min), 7%B(- min) Flow rate :. ml/min Temperature :7 Detection :UV at nm C, nm のカラムを用いた高分子タンパク質の分離において移動相に使用する有機溶媒の違いが分離パターンにおよぼす影響を示しますタンパク質やペプチドを分離する際の移動相は TFA を含むアセトニトリルと水のグラジエント溶出を行うのが一般的ですしかし上図ののピークのようにアセトニトリルと水の系では分離困難なものが - プロパノールなど種類の異なる有機溶媒を添加することで選択性が変わり分離可能となる場合もあります細孔径および官能基の違いによる分離への影響 C, nm 7.D C, nm 7.D 8 97.D min C, nm 97.D 6 min. BSA (MW 66,). Conalbumin (MW 77,). Lipoxidase (MW 96,) Column Eluent : μm,.6 mmi.d. : A)water/TFA(/.) B)acetonitrile/-propanol/TFA(//.) -7%B(- min), 7%B(- min) :. ml/min Flow rate Temperature :7 Detection :UV at nm C8, nm 78.D C8, nm 8 6 min 8 6 min 細孔径および官能基の違いによるタンパク質の分離への影響を示します図に示すように分離対象化合物の分子量 66,から 96,のような高分子タンパク質の分離においては細孔径が小さくなるにつれピークがブロードになり分離が悪くなっていますまた充填剤の官能基について C 8 C8 と側鎖が長くなり疎水性が大きくなるにつれて分離が悪くなっていますこのように試料の分子サイズに対して充填剤の細孔径や官能基が適切でない場合ピーク形状の悪化が生じてしまいます分子量, ~, 程度のタンパク質の分離には細孔径が大きく官能基の疎水性が小さい C, nmのカラムが適しています 8

11 カキラム充填剤カイオン交換S ッドカコア6 シェル汎7 DS汎ラ8 ム逆相系カ汎ラ9 ム順相系LナC 脂ム充填剤分ムS ムバペプチドタンパク質の高温条件での高分離分析ペプチドタンパク質の分離最適化のポイントの資料をご用意しておりペプチドタンパク質の分離におけるカラム温度の効果ますお問い合わせください. β-lactoglobulin A 8,.8.8 *peak width = W.h average ラムCondition A (MW -8,) Condition B (MW,-,7) 担体 Peak capacity Peak capacity MPa = MPa = 67 (,6-,7 psi) (,7-, psi) ブリ C, ラムカラム F8B F6B min* min* カラムPeak capacity Peak capacity MPa = MPa = 7 (,9-,68 psi) (,97-, psi) カ 7 C F8A F6A min* min* 用カAnalytes MW Peak width / ラ½(min) Column : YMC-Triart C8(.9 µm, nm),. mmi.d. ム 7 Eluent :A)water/TFA(/.) カラCondition A B) acetonitrile/tfa(/.)- condition A. xytocin,7.7. B) acetonitrile/-propanol/tfa(//.)- condition B. Leu-Enkephalin 6.. Gradient : -8%B(- min)- condition A -6%B(- min)- condition B. β-endorphin,6.6 Flow rate :. ml/min. Insulin,7. Detection :UV at nm Injection : µl( µg/ml)- condition A. β-lactoglobulin A 8,.. µl( µg/ml)- condition B Condition B System :Agilent SL. Lysozyme,.69.. α-chymotrypsinogen,7.8.9 PC (peak capacity) = + (gradient time/peak width*) 分子量 (MW) が異なるペプチドタンパク質の分離を.% TFAを含む移動相条件下にてと7 で比較しています分子量が大きいペプチドタンパク質の分離には移動相への -プロパノールの添加がピーク形状の改善に有効ですが分子量が, 以上の場合においてはブロードなピークとなっています (condition B 上図 ) と比較して 7 の高温条件では分離選択性の変化やピーク形状の改善により分離度が向上しこの効果は特に分子量が大きい場合に顕著です一般的に大きい分子は小さい分子よりも拡散速度が遅いためピークがブロードになる傾向があります高温条件では移動相の粘度の低下と物質移動速度の上昇によりピーク形状が改善されますペプチドタンパク質の分離においてカラム温度の変更は分離度の向上に有効ですてびカラきム選択のラル分離用E C用カラム有機シリカハイ用分析用用分析用用分析用ノマイクロ肪酸分離用取用カラFC用カラルク充填剤サンプル前ー処理分取6 システムテフロ7 ー反応器シス受託8 精製取扱9 製品インフォメーションアクセサリム周辺機9

12 ペプチドおよびタンパク質の逆相分離例高温条件および UHPLC 用.9 µm カラムの連結による分離度の向上ペプチドタンパク質の高温条件での高分離分析ペプチドタンパク質の分離最適化のポイントの資料をご用意しておりますお問い合わせください C Peak capacity = 6.9 µm,. mmi.d. min gradient MPa (6,7-7, psi) P7A 6 8 min 7 C Peak capacity =.9 µm,. mmi.d. min gradient MPa (,-, psi) min P78A 6 8 min Two coupled.9 µm,. mmi.d. min gradient MPa (8,-8,9 psi) Peak capacity = 6 9 min P77A min Column :YMC-Triart C8(.9 µm, nm) Eluent : A)water/TFA(/.) B)acetonitrile/TFA(/.8) -%B(- min)for a single column -%B(- min)for two coupled columns Flow rate :. ml/min Detection :UV at nm Injection : µl for a single column µl for two coupled columns Sample :Tryptic digest of Bovine Hemoglobin System :Agilent 9 ヘモグロビンのトリプシン消化物の分離においてカラム温度を 7 に上げることでピークキャパシティ ( 分離可能ピーク数 ) が% 向上しています粒子径.9 µm 長さ mmのtriart C8カラムを本連結することで分離は劇的に向上していますまた高温条件のため総カラム長 mmながら多くのuhplc 用システムの耐圧より十分に低圧力で分析可能ですこのような手法はペプチドマッピングなど高分解能が要求される分離に有効です

13 カラム選択の手引き ( 低分子有機化合物 ) てびカラきム選択のキラル分離剤用イオン交体換SE C用カラム有機シリカハムイコア6 ムシェル汎用7 分析用Sカ汎ラ用8 ム分析逆用相系カ汎ラ用9 ム分析順用相系ナノマイクムロ脂肪酸分離剤用分取用カラムSF C用カラムバルク充填剤サンプル前ー処理分取6 システムテフロ7 ー反応器シス受託8 精製取扱9 製品インフォメーションカラム充填カラム担ブリッドカラカラカラムDLC用カラカラム充填アクセサリム周辺機

14 てびき H H H P H C H H カラム選択の* ph value of mm buffer solution アプリケーション ( 脂溶性ビタミン水溶性ビタミン ) 逆相ビタミン D 構造の近い化合物同士の分離逆相水溶性ビタミンイオンペア試薬を用いて水比率の高い移動相で分離 min 6 7 Column : YMC-Pack DS-AL( μm, nm).6 mmi.d. Eluent :acetonitrile/water(9/) Flow rate :. ml/min Temperature : Detection :UV at 6 nm Injection : μl(. mg/ml). Thiamine HCl (Vitamin B). Pyridoxine HCl (Vitamin B6). icotinamide. Cyanocobalamin (Vitamin B). L-Ascorbic acid -glucoside 6. L-Ascorbic acid (Vitamin C) 7. Erythorbic acid 8. Riboflavin (Vitamin B) 9. icotinic acid Column : YMC-Triart C8 ( μm, nm).6 mmi.d. Eluent : phosphate buffer /acetonitrile(9/) Dissolve. g KHP in 8 ml water add 6 ml % TBA H adjust ph. by % HP add water to make ml Flow rate :.8 ml/min Temperature : Detection :UV at 6 nm Injection : μl ( μg/ml).. 8 Ergocalciferol (Vitamin D) Cholecalciferol (Vitamin D) 9 min (P89C) (RD) 順相ビタミン E( トコフェロール ) トコフェロール同族体の分離 min. CH CH HC CH CH CH CH H CH α-tocopherol. H. HC H CH CH CH CH CH CH CH CH β-tocopherol CH CH CH CH γ-tocopherol CH. CH CH CH H CH CH CH -Tocopherol Column : YMC-Pack SIL( μm, nm).6 mmi.d. Eluent :n-hexane/-propanol/acetic acid(/6/) Flow rate :. ml/min Temperature: Detection :FLS at Ex 98 nm, Em nm Injection : μl( μg/ml) HILIC 水溶性ビタミン HILIC モードで分離 min*.... H. 6. H H H H H H H H H H H H Caffein H icotinamide H HCl Pyridoxine hydrochloride Riboflavin rotic acid H H H H (S977A) H H H - H H icotinic acid H H H H H H H Co + H L-Ascorbic acid --α-d-glucopyranosyl -L-ascorbic acid (Ascorbic acid -glucoside) + S Thiamine hydrochloride Erythorbic acid D-Isoascorbic acid Cyanocobalamin (FA) Column : YMC-Triart Diol-HILIC ( μm, nm). mmi.d. Eluent : A) acetonitrile/water (9/)containing mm HCH-HCH( p H. 6 )* B) acetonitrile/water (/)containing mm HCH-HCH( p H. 6 )* -7%B(- min) Flow rate :. ml/min Temperature : Detection :UV at nm Injection : μl ( μg/ml) H H Cl - HCl H H

15 アプリケーション ( 水溶性ビタミン有機酸アミノ酸 ) HILIC ビタミン C( アスコルビン酸 ) HILIC モードで分離. icotinic acid. Erythorbic acid. L-Ascorbic acid min Column : YMC-Pack Polyamine Ⅱ.6 mmi.d. Eluent :acetonitrile/ mm HHP(7/) Flow rate :. ml/min Temperature : Detection :UV at nm Injection : μl (. ~. mg/ml) HILIC アミノ酸 HILIC モードでアミノ酸の一斉分析も可能 pa * * * * ** min Alanine (Ala) カキラム充填剤カイラム担体Sブリッドカラムコ6 汎ラ7 ムDSカ汎ラム逆カラム順LC 用カラムカ脂ラム充填剤分アクセサリー分テム 7 周辺機器受(F68A) (UA) 逆相有機酸水 % 移動相で分離. xalic acid. Tartaric acid. Glycolic acid,. Formic acid. L-Malic acid 6. Malonic acid 7. Lactic acid 8. Acetic acid 9. Maleic acid カ 6. Succinic acid ラ. Fumaric acid ム8 9. Acrylic acid. Citric acid. Propionic acid カ7 6 8 min (A976A) (UQ) Column : YMC-Triart C8 ( μm, nm). mmi.d. Eluent : mm phosphoric acid Flow rate :. ml/min Temperature :7 Detection :UV at nm Injection : μl (. ~. mg/ml) 逆相アミノ酸水比率の高い移動相で疎水性のアミノ酸を分離 (JP 条件 ) Standard solution* (. mg/ml L-Valine,.9 mg/ml L-Isoleucine,.8 mg/ml L-Leucine) System suitability Result requirement Resolution (, )..68.% Relative standard deviation of the retention time.%.% (each of the peaks).% 6 min... CH H CH H C CH H C CH H C CH H H H C H H H H L-Valine L-Isoleucine L-Leucine Phenylalanine (Phe) Tryptophan (Trp) Leucine (Leu) Isoleucine (Ile) Methionine (Met) Tyrosine (Tyr) Valine (Val) Cysteine HCl (Cys) Proline (Pro) Threonine (Thr) γ-aminobutyric acid (GABA) Serine (Ser) Glycine (Gly) Asparagine (Asn) Glutamine (Gln) Citrulline (Cit) Glutamic acid (Glu) Histidine (His) Aspartic acid (Asp) Arginine HCl (Arg) Lysine (Lys) rnithine HCl (rn) *Chloride ion contained in the sample solution **Sodium ion contained in the sample solution Column : YMC-Triart Diol-HILIC( μm, nm).6 mmi.d. Eluent :A) mm HCH-HCH(pH.6) B)acetonitrile 8-8%B(- min), 8-68%B(- min) Flow rate :. ml/min Temperature : Detection :Corona CAD (Charged Aerosol Detector) Injection : μl(. mg/ml) Corona and CAD are trademarks of Thermo Fisher Scientific. Column : YMC-Triart C8 ( µm, nm).6 mmi.d. Eluent : phosphate buffer(ph.8)* /acetonitrile(97/) * Dissolve. g of ahp H in ml of water and adjust ph.8 with HP Flow rate :.9 ml/min(adjust the flow rate so that the retention time of L-Valine is about. min) Temperature : Detection :UV at nm Injection : µl (The Japanese Pharmacopoeia 7th; Identification) * Standard solution was prepared from L-Valine, L-Isoleucine and L-Leucine supplied as a reagent for laboratory use. てびカラきム選択のラル分離用オン交換E C用カラム有機シリカハイアシェル用分析用用8 分析用相系汎用9 分析用相系ナノマイクロ肪酸分離用取用カラムSF C用カラムバルク充填剤サンプル前処理取6 システムフロー反応シス託8 精製取扱9 製品インフォメーション

てびきカラム選択の逆相カラム選択ガイド主要市販逆相カラムの分離選択性比較.7. Pro C α...9.

16 てびきカラム選択の逆相カラム選択ガイド主要市販逆相カラムの分離選択性比較.7. Pro C α Hypersil GLD Meteoric Core C8 Hydrosphere C8 CAPCELL PAK C8 AQ Pro C8 Gemini C8 Unison UK-C8 Develosil C-UG Atlantis dc8 TSKgel DS-8Ts Pro C8 Develosil DS-MG CAPCELL PAK C8 MGIII CAPCELL PAK C8 MGII Gemini-X C8 Luna C8() Sunfire C8 Inertsil DS- XTerra MS C8 XBridge C8 Eternity-C8 Mightysil RP-8 L-column DS Triart C8 Triart C8 Symmetry C8 TSKgel DS-S ZRBAX Extend-C8 Meteoric Core C8 ZRBAX SB-C8 Atlantis T CAPCELL PAK C8 MG Inertsil DS- Cadenza CD-C8 L-column DS CAPCELL PAK C8 ACR InertSustain C8 Develosil DS-SR Pro C8 RS. Triart C8 ExRS Eluent: methanol/water (8/) [Amylbenzene] methanol/water (/7) [Caffeine, Benzene] (S8A)

untitled

untitled (F76A) .% TFA/acetonitrile TFA ph acetonitrile -propanol TFA Triart YMC-Triart C8 / C8 YMC-Triart C8 / C8 C8 C8 ( ).9 µm 3 µm µm nm C8 % C8 7% ph - 7 for ph -7 for ph 7- YMC-Triart % of initial retention