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えりかさくいし
5 years ago
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1 極性化合物の分離に! ILIC,C8 C8-SC の基礎と上手な使い方! 一般の C8 では分離が難しい極性化合物に適した ILIC とlanol ctivity Controlled C8 の活用法について説明いたしますいたします 7/8/ :-: - 会場於 : アパホテル & リゾート東京ベイ幕張ホールクロマニックテクノロジーズ Chromai Technologies Inc. TEL:

理論段数極性化合物分析のための [ Second Choice ] 分離ができない! さぁ困った! 次の手は? First Choice ( 測定対象 : 極性化合物 ) カラム C8 (DS), µm, x.6 mm i.d. モノファンクション型, フルエンドキャッピング移動相各メーカーの技術資料から類似化合物の条件検索 /C 溶解度試験 : 析出点より % 溶解し易い組成グラジエントができれば有機溶媒 % 8% 8%,min イオン性化合物の場合は mm リン酸緩衝液を添加酸 :p.

2 理論段数極性化合物分析のための [ Second Choice ] 分離ができない! さぁ困った! 次の手は? First Choice ( 測定対象 : 極性化合物 ) カラム C8 (DS), µm, x.6 mm i.d. モノファンクション型, フルエンドキャッピング移動相各メーカーの技術資料から類似化合物の条件検索 /C 溶解度試験 : 析出点より % 溶解し易い組成グラジエントができれば有機溶媒 % 8% 8%,min イオン性化合物の場合は mm リン酸緩衝液を添加酸 :p.: (K P ),, 塩基 :p6.8: (K P /a P =/) 試料移動相で溶解あるいは移動相で希釈.µm のメンブランフィルタでろ過後, µl 注入とりあえず, 分析をしてみたけど分離ができな ~ い!! 分離度が足らないカラムに保持されない共存成分と重なっている検出ができな ~ い!! 共存成分が重なっている検出器に応答しない ( ここでは省略 ) 分離の改善 Rs Rs = α=. α=. = = = = / TP column - 分離の改善の概念 α α + Rs α=. α=. = Rs = Rs ( α ) + : 理論段数,α: 分離係数 [α= / ],: 保持指数 [=(Tr-T )/T ] = = =..... α 粒子径, 移動相流速を変えてみると有機溶媒濃度を変えてみると µm µm =.79 Ethanol δ=., δ= δ:ildebrand の溶解パラメータ µm µm 8% Ethanol/ δ=.6 有機溶媒比率を下げると保持は大きくなる! ( 選択性が変化することもある ) µm 最高の理論段数が出る最適流速がある! 流速粒子径を小さくすると理論段数は高くなる! 7% Ethanol/ δ=. =

3 移動相溶媒の種類を変えてみると 6% -Propanol δ=. δ d = 6.87 Propanol δ =. δ d = 7., δ o =. 8% Methanol δ=. δ d = 6. Methanol δ =.9 δ d = 6., δ o = δ:ildebrand の溶解パラメータ δ d : 分散力ロンドン力の相互作用 δ o : 双極子配向力の相互作用有機溶媒種を変えると選択性が変化する! ピリジンのピーク形状 Column Column Column C Column D 溶出時間エンドキャッピングが悪いと塩基性化合物がテーリングする! ( 残存シラノールに吸着してテーリングするとされています ) Second Choice 逆相モードのままで選択性を大幅改善 Chromai Sunrise C8-SC 保持の小さい成分の分離の改善 ZIC -ILIC PLC Column a) b) c) エンドキャッピングの効果? フルエンドキャッピング DS 化のみシラノール有り DS 化後??? 処理シラノール有りカラム : C8 化シリカゲル C%=.8% 移動相 : % C / 流速 :. ml/min 温度 : ºC 試料 : = ウラシル = ピリジン = フェノールシラノール基の活性コントロール塩基性化合物の選択性の比較 Isolated lanol Vicinal lanol Geminal lanol lanol ctivity Controlled Technology 高吸着性シラノール疎水基 DS 化直後疎水基シロキサン結合に変換活性調節後 ) エンドキャッピング C8 ) シラノール活性調節 C8 Column size:.6x mm Mobile phase: /=C C/ mm PS p. Flow rate:. ml/min Temperature: ºC Sample: = uracil, = propranolol = nortriptyline = amitriptyline = toluene

4 シラノール活性の調節技術の効果の効果 Chromai では, 吸着活性の高いシラノールを選択的に低減させ, 有効なシラノールのみを残存させる技術を開発しましたこの技術の導入により高密度エンドキャッピングが可能となり, 塩基性化合物のピーク形状を大幅に改善させることができました -Sunrise C8 また, 活性調節後の高水和性シラノールをエンドキャッピングすることなく, 固定相中に残存させたことにより, 水素結合性 / イオン性相互作用がプラスされた今までにない逆相分離モードを創出することができました -Sunrise C8-SC Chromai Sunrise C8-SC 高純度シリカゲルにオクタデシルシランを結合後, シラノール活性調節処理を行い, エンドキャッピング処理を行わずにシラノールを残存させました細孔径 :nm: nm,, 比表面積 :m: /g, 炭素量 :% シラノール基に基づく相互作用 ( 水素結合 / イオン交換等 ) が加味されて分離が行われます酸性条件下ではイオン交換相互作用が強く働きますので, 緩衝液 / 塩濃度で分離の調節が可能ですイオン交換クロマトグラフィにおける保持カラムと溶離液の種類が決定されると,log ( 保持指数の対数 ) とlog [][ ( 溶離剤イオン濃度の対数 ) 間に直線関係があり, その傾きは,-z, /z です z z Vr log = log[ ] + log[ ] + log + log K z z V z : 溶離剤イオン,:, : 測定イオン, :の保持指数, Z, Z : 各イオンの電荷各,V r, V m : カラム内の樹脂体積と移動相体積, K : 選択係数 m 評価用化合物の化学構造と酸解離指数. uracil pka 9. C. toluene - C C. propranolol pka 9. C C C 上式は広濃度域で成立広濃度域で成立しないとされますがが, 実用使用濃度範囲範囲は桁以内ですのでので直線関係は成立成立します. ortriptyline pka 9.7. amitriptyline pka 9. 異なる緩衝液濃度でのクロマトグラム mm mm mm mm mm Column: Sunrise C8-SC µm,.6x mm Mobile phase: 7/=C C /acetate buffer (p.) Flow rate:. ml/min Temperature: C Sample: = uracil = toluene = propranolol = nortriptyline = amitriptyline 緩衝液濃度と保持指数との関係 log [ 保持指数 ] z z Vr log = log[ ] + log[ ] + log + log K z z V z Toluene (amitriptyline) amitriptyline nortriptyline propranolol log [ 緩衝液濃度 / mm] m,,, 8, 6,,, ( アミトリプチリン ) / TP/mm

5 異なる緩衝液 p における分離 p.6 p.6 p.8 p.97 p.9 p6.79 Column: Sunrise C8-SC µm,.6xmm Mobile phase: 7/=C C /mm acetate buffer Flow rate:. ml/min Temperature: C Sample: = uracil = toluene = propranolol = nortriptyline = amitriptyline 緩衝液 p と保持指数との関係 Capacity factor イオン交換能の増加シラノールの解離増加水素結合性? amitriptyline nortriptyline propranolol Toluene uffer p 8-キノリノール / カフェインの分離例核酸塩基類の分離例 ) Sunrise C8 ) Sunrise C8-SC Column size:.6x mm, µm Mobile phase: /9=C C/mM P Flow rate:. ml/min Sample: = 8-quinolinol (oxine) = caffeine C Column: Sunrise C8-SC, µm,.6 x mm Mobile phase: mm K P p. Flow rate:. ml/min Temperature: ºC Sample: = cytosine, = uracil, = thymidine, = thymine C * 極性 / 親水性化合物だけを保持できたら逆相モードと溶出順序が逆転できたら C8 に保持し難い親水性化合物の分離が可能に! 疎水性化合物の残存残存による性能が劣化性能が劣化がなくなる! それも, 単純な分配モードで分離ができたら水 - 有機溶媒系で親水性化合物の分離が可能に! イオン抑制のためにために強酸 / 強塩基塩基を使用しないでよい! イオンペア剤を使用しない使用しないので LC-MS と結合可能に! イオン交換のような煩雑な緩衝液調整から開放される! 親水性相互作用クロマトグラフィー ydrophilic Interaction Liquid Chromatography : ILIC ILIC 対象成分 / 親水性固定相間の親水性相互作用に基づいて分離されます ILICモードでは, 親水性の高い化合物ほど強く保持されます多くの場合, 溶出順序は逆相モード RPLC とは逆になります強く保持逆相型カラムでは保持され難く, ボイドボリューム近くに溶出する成分の分離にILICは最適です安定した水和特性を持ち, 保水性の高い充填剤が必要となります ILIC とRPLC によるペプチドの分離 Mobile phase: (ILIC) 6: = C C/ mm c (p 7) (RPLC) :9 = C C/ mm c (p 7) Sample: = Phe-Gly-Gly-Phe, = Leu-Gly-Gly, = Gly-Gly-Gly

ZIC -ILIC/pILIC の官能基構造 C C C C C S C スルホベタイン型官能基両性イオン荷電しかも中性安定安定で強い水和水和相を形成静電的相互作用が低い分子内塩を形成 S 塩基性ペプチドの保持 Column: ZIC -ILIC,, bare silica column,.6 mm i.d.

6 ZIC -ILIC/pILIC の官能基構造 C C C C C S C スルホベタイン型官能基両性イオン荷電しかも中性安定安定で強い水和水和相を形成静電的相互作用が低い分子内塩を形成 S 塩基性ペプチドの保持 Column: ZIC -ILIC,, bare silica column,.6 mm i.d. Mobile phase: % acetonitrile in C C ( mm, p 6.) Sample: bradyinin (pi ) 陽イオン交換相互作用が加味される Chaotropic order nion: TC >Cl > >Cl >acetate >F > S Cation: Ca + >Mg + >Li + >a +, K + > + > (C ) + ILIC における溶媒強度芳香族有機酸の分離例 Retention factor 6 C C のほうが強く保持 acetonitrile ILIC における溶媒強度 TF < acetone < acetonitrile < IP < ethanol < water Column: ZIC -pilic, x.6 mm i.d. Mobile phase: (left) 7: = acetonitrile/c C (7 mm, p 6.8) (right) 7: = acetonitrile/ C (7 mm, p 9.6) Sample: = gentisic acid, = protocatechuic acid, = isophthalic acid イオン化を高めると保持も分離も改善 methanol Concentration of organic solvent / % Column; ZIC -ILIC x.6 mm Mobile phase: mm formic acid Legend; (circles) cytosine (triangles) adenine 核酸塩基の分離例 Column: ZIC -ILIC x. mm, µm Eluent: 8% acetonitrile/% mm C C,. mm C C Flow rate:. ml/min, Detection: UV at nm Sample: = thymine, = uracil, = adenine, = guanine, = cytosine 極性化合物のための Second Choice First Choice はフルエンドキャップ型 C8 カラム First Trial Condition での分離結果を見て, 分離を改善まず,Chromai, Sunrise C8 でトライして下さい! Second Choice 選択性の異なる固定相の使用水素結合性 / イオン性相互作用による分離分離の改善特に塩基性薬物の分離改善には - Sunrise C8-SC!! Second Choice ILIC モードの使用 C8 に保持され難い高極性化合物の分離を改善極性化合物の分離改善には - ZIC -ILIC column!!

Microsoft PowerPoint - 薬学会2009新技術2シラノール基.ppt

Microsoft PowerPoint - 薬学会2009新技術2シラノール基.ppt シラノール基は塩基性化合物のテーリングの原因いや違う! クロマニックテクノロジーズ長江徳和日本薬学会 9 年会緒言緒言逆相型固定相中の残存シラノール基は, 吸着やピークテーリング等の原因であるとされている残存シラノール基に基づく主な相互作用は, 吸着, イオン交換, 水素結合であるこれらの二次効果相互作用を積極的に利用することで, 極性化合物に対して特異的な保持を示す新規な逆相固定相の創出が可能であると思われる