HPLC-MS よりマンゴ皮のポリフェノール含有量は果肉の方より高い (Barreto et al., 2008) マンゴ皮は植物科学原料 ( ポリフェノールカロチノイドビタミン E ビタミン C) として優れている抗酸化性を示している (Ajila, 2007) 今回の実験では ESR 法と

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みさえよどぎみ
5 years ago
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1 Antioxidant and antiproliferative activities of mango (Mangifera indica L.) flesh and peel 著者 : Hana Kim, Jeong Yong Moon, Hyeonji Kim, Dong-Sun Lee, Moonjae Cho, Hyung- Kyoon Choi, Young Suk Kim, Ashik Mosaddik, Somi Kim Cho 雑誌名 :Food Chemistry 121 (2010) 紹介者 : 馮一菁 2010/6/1( 火 ) Abstract 本研究ではマンゴ (Mangifera indica L.) の果肉と皮の抗酸化性および抗増殖性について調べたまたヒト肝臓がん由来の HepG2 細胞中の H2O2 による酸化ストレスについてマンゴエキスの保護効果について検討したマンゴの果肉および皮エキスのラジカル消去能を電子スピン共鳴 (ESR) 法より確認したその結果マンゴの皮エキスは果実の熟成を構わずに果肉の方より高いラジカル消去能 (DPPH and alkyl radical) を示しがん細胞の増殖抑制効果をもつことが分かった Introduction 食べ物に含まれているポリフェノール類は抗酸化性および抗癌性をもつため近年良く注目されている果物および野菜はポリフェノール類アニトシアニンカロチノイドトコフェロールなど抗酸化物を含まれていて特に果物の皮にポリフェノールフラボノイドアスコルビン酸など健康にいい成分が豊富に含まれている Mango (Mangifera indica L.) ウルシ科バナナパパイヤなどのような体表的な熱帯果実ビタミン A ビタミン C - カロテン葉酸が豊富に含まれている青いうちはビタミン C の含有量が多く季節性のある果物であるため 20% は加工されている ( デザートジュース缶詰めなど ) より熟すほど - カロテンの量が増える木の幹の皮葉果肉は様々な生理活性を過去の研究示している ( 抗酸化性フリーラジカル消去活性抗炎症性抗がん性 ) 1 皮主な副生産物汚染の原因となる

2 HPLC-MS よりマンゴ皮のポリフェノール含有量は果肉の方より高い (Barreto et al., 2008) マンゴ皮は植物科学原料 ( ポリフェノールカロチノイドビタミン E ビタミン C) として優れている抗酸化性を示している (Ajila, 2007) 今回の実験では ESR 法とセルベースアッセイよりマンゴの皮の抽出物の抗酸化性及び抗がん性について検討した補足 1 活性酸素 (O2 - HO -, H2O2, 1 O2, O3) 酸素分子が 1 電子還元されて生じるラジカルで活性化されたため反応性が高くなり無差別に相手を酸化する能力のある状態の酸素 3 O 2 e e +H 1 2 O 2 O 2 H 2 O 2 OH 活性酸素の生成機構ヒドロキシラジカルは核付近でも産生されるため DNA 構成分子と結合する反応が起こる分子構造が変化したんぱく質を作るための暗号情報が傷害を行けるため突然異変が起こったりがん細胞が産生される原因となる補足 2 抗酸化物質 : 酸化されやすい物質で活性酸素等によって生体が酸化されるよりも優先的に抗酸化物質が酸化されるつまり抗酸化物質それ自身が酸化されることで生体を酸化から防御してくれる Materials Mangos (Mangifera indica L. cv. Irwin): UMF (unripe mango flesh) UMP (unripe mango peel) jeju, Korea. RMF (ripe mango flesh) RMP (ripe mango peel) 2

3 Results and discussion マンゴエキスのフェノールとフラボノイド含有量測定フェノール量 Folin-Ciocalteu 法補足 : Folin-Ciocalteu 試薬 ( フェノール試薬 ): リンモリブデン酸とリンタングステン酸を酸性溶液に溶解した試薬アルカリ性でチロシントリプトファンシステインなどの還元性のある側鎖を持つアミノ酸と反応し青色を呈する (750nm) フラボノイド量 colorimetric assay(510nm で極大の吸収があるため ) マンゴ皮エキスに含まれているフェノールとフラボノイドの量が果肉の方より 3~6 倍高い H2O2 により攻撃された HepG2 細胞への保護効果マンゴエキス (UMP, UMF, RMP, RMF) が H2O2 より誘起された HepG2 細胞の攻撃への保護効果について測定された Fig.1 (A) Cultures were treated with the noted concentrations of mango extracts for 1h and then incubated with 200μM H2O2 for 2h. (B) Cultures treated with μM of the positive controls, quercetin and catechin, for 1h and then incubated with 200μM H2O2 for 2h. マンゴエキスを加えない場合 : 細胞生存率 50% UMP 50 μg/ml と RMP 200 μg/ml を加えた場合 (A): 細胞生存率 80% Catechin と Quercetin を加える場合も似たような結果を示した (B) 3

4 マンゴの皮エキス (UMP, RMP) は HepG2 細胞中の H2O2 による酸化ストレスについて保護効果を示すことが分かったマンゴエキスの DNA 損傷予防作用 Comet assay: 個々の細胞の DNA 損傷を直接検出する唯一の方法 % of tail DNA:DNA 損傷の指標 Fig.1 (C) Comet assay of H2O2-induced DNA damage in HepG2 cells. HepG2 細胞に 200 μg/ml H2O2 を入れる場合 : DNA 損傷 :60% UMP と RMP は H2O2 の DNA 損傷に保護作用を示す UMF と RMF は保護作用を持たないマンゴエキスのフリーラジカル消去作用ラジカル消去能測定電子スピン共鳴法 (ESR : Electron Spin Resonace) 室温の条件下で感度よく正確かつ精密に磁場内にある不対電子を検出する分光法の一種遷移金属イオンもしくは有機化合物のフリーラジカルの検出に用いられている 1 DPPH ラジカル消去能測定 N N O 2 N NO Fig. 2 (A) effects of ethanolic extracts of UMF, UMP, RMF, RMP, and catechin (CAT) on DPPH radical scavenging activity. NO 2 DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 安定なフリーラジカル食物のフリーラジカル消去能の測定によく使われている 4

5 UMP と RMP のラジカル消去能は溶液濃度に依存する濃度 50 μg/ml の場合は高いラジカル消去能 (92.57%, 81.86%) を示した UMF と RMF は高濃度 (1000 μg/ml) の場合で高いラジカル消去能を示しているが低濃度 (50 μg/ml) であまり検出されなかった 2 ヒドロキシラジカル消去能測定 H 3 C H 3 C N O H DMPO (5,5-dimethyl-1-pyrroline N-oxide) Fig. 2 (B) effects of ethanolic extracts of UMF, UMP, RMF, RMP, and catechin (CAT) on hydroxyl radical scavenging activity. マンゴエキス (500μg/ml) (91.05%, 88.86%, 91.61%, 89.61%) カテキン (1000μg/ml) (89.53%) マンゴエキスはカテキンより高いヒドロキシラジカル消去能を示した 3 アルキルラジカル消去能測定 Fig. 2 (C) effects of ethanolic extracts of UMF, UMP, RMF, UMP と RMP (200 μg/ml) 90.39% 86.95% UMF と RMF (200 μg/ml) 0% RMP, and catechin (CAT) on alkyl radical scavenging activity. DPPH ラジカル消去能の結果と一緒で UMP と RMP は高いラジカル消去能を示した 5

6 マンゴエキスの抗増殖性測定 AGS: 胃がん Hela: 子宮頚がん HepG2: 肝臓がんがん細胞にマンゴエキスを加えて 72 時間インキュベートさせた結果 UMP と RMP はがん細胞の生成に抑制作用を示すことが分かった Conclusion マンゴの皮により多いポリフェノールとフラボノイド類を含まれているマンゴ皮エキスは様々なラジカル (DPPH, hydroxyl, alkyl radical) 消去能を示しているマンゴ皮エキスは肝臓がん細胞の増殖について抑制作用を示しているいつもマンゴ製品の副産物だとみなされている皮はよい抗酸化性を示し将来抗癌性をもつポリフェノール原料として利用されると考えられている補足 :DPPH による退色反応からラジカル消去能の算出 DPPH と HPTH のメタノール溶液 (400μM, 100μM) を同体積に混合し 30 で 30 分インキュベートしてから UV 測定 OH H O HN NH S HPTH 5-(4-hydroxyphenyl)-2-thiohydantoin メタノール溶液で紫色消去されたラジカル量 DPPH の消去機構 DPPH (520 nm)+ar-oh DPPH:H (400 nm)+ar-o 消去される前のラジカル量 6 DPPH 反応溶液の UV-vis スペクトル

スライド 1

スライド 1 Detection of bound phenolic acids: prevention by ascorbic acid and ethylenediaminetetraacetic acid of degradation of phenolic acids during alkaline hydrolysis ( 結合フェノール酸の検出 : アルカリ加水分解中のアスコルビン酸と EDTA によるフェノール酸の劣化防止